阅读说明：本技术 泽泻醇a的晶型及其制备方法和在医药上的应用 (Crystal form of alisol A, preparation method and medical application thereof ) 是由 程志红 宋定中 侯惠民 张贝贝 袁杰 赵静 王珂 于 2019-04-17 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种一种泽泻醇A的晶型及其制备方法和在医药上的应用,所述的泽泻醇A的晶型,X-射线衍射图谱在2θ值(±0.2)为7.281、10.579、12.213、13.736、14.721和17.464处具有特征峰。动物试验证明,本发明所述的泽泻醇A的晶型,可用于制备治疗高脂血症及动脉粥样硬化疾病的药物,其治疗效果优于无定型的泽泻醇A。本发明制备方法简单,溶解度大、溶解速率快、保存稳定性好的优点,可用于制备治疗高脂血症及动脉粥样硬化疾病的药物,其治疗效果优于无定型的泽泻醇A。(The invention discloses a crystal form of alisol A, a preparation method and medical application thereof, wherein the crystal form of alisol A has characteristic peaks at positions with 2 theta values (+ -0.2) of 7.281, 10.579, 12.213, 13.736, 14.721 and 17.464 in an X-ray diffraction pattern. Animal experiments prove that the crystal form of alisol A can be used for preparing medicines for treating hyperlipidemia and atherosclerosis, and the treatment effect of the crystal form is superior to that of amorphous alisol A. The invention has the advantages of simple preparation method, high solubility, high dissolution rate and good storage stability, can be used for preparing the medicine for treating hyperlipemia and atherosclerosis diseases, and has better treatment effect than amorphous alisol A.)

泽泻醇A的晶型及其制备方法和在医药上的应用

技术领域

本发明涉及一种泽泻醇A的晶型及其在医药上的应用。

背景技术

泽泻醇A结构如式Ⅰ所示，英文名称：alisol A，分子式：C₃₀H₅₀O₅。药理实验证明，本品能明显降低血脂水平，可用于制备降血脂药物。

中国专利CN201210520817，公开描述泽泻醇A在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用，动物试验证明，泽泻醇A对ApoE^-/-小鼠经高脂饲料喂养联合颈动脉损伤术造成的动脉粥样硬化模型具有显著的治疗效果。

中国专利CN201210473789，公开描述了泽泻醇A在制备防治肥胖病药物中的应用，动物试验证明，泽泻醇A对高脂饲料喂养建立的肥胖动物模型具有显著的治疗效果。

中国专利CN200510010827，公开描述了化合物泽泻醇A作为有效成分，其在制备抗乙型肝炎药物和抗乙型肝炎抑制剂药物中的应用。

药理研究表明，不同的晶型其溶解度、溶解速率、保存的稳定性会有差异，有的甚至会产生显著的改变。

为了进一步提高泽泻醇A的临床应用价值，研究开发一种新的泽泻醇A的晶型，将具有十分重要的临床应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种泽泻醇A的晶型及其制备方法和在医药上的应用，以满足临床应用的需要。

本发明所述的泽泻醇A的晶型，X-射线衍射图谱在2θ值(±0.2)为7.281、10.579、12.213、13.736、14.721和17.464处具有特征峰。

进一步，所述的晶型的X-射线衍射图谱还包括在2θ值(±0.2)为5.392、10.899、15.055、15.686、18.452、19.891、20.345、20.823、21.397、22.026、22.676、23.364、25.088、25.814、26.283、27.942、29.764、31.300、35.447、36.492、37.455、42.424和42.980处具有特征峰。

优选地，泽泻醇A晶型的粉末X-射线衍射图谱以2θ值、晶面间距d以及相对强度I(％)的晶型表达，如表1所示：

表1

所述的泽泻醇A的晶型的制备方法，包括如下步骤：

(1)将重量含量为95％的无定型泽泻醇A溶解于有机溶剂中，过滤，收集滤液；

(2)在2～8℃下静置20～28小时，收集固体，即为所述的泽泻醇A的晶型；

所述的有机溶剂选自体积浓度为50～70％的乙醇溶液、体积浓度为50～70％的甲醇水溶液、体积浓度为40～60％的异丙醇溶液、体积浓度为50～70％的乙腈水溶液或者为体积浓度25～35％的四氢呋喃溶液；

步骤(1)中，有机溶剂中，所述的泽泻醇A的含量为10～50g/L；

优选的，在步骤(2)中，加入水，混合，在2～8℃下静置20～28小时，收集固体；

水的加入重量为有机溶剂体积的0.2～2倍；

所述的无定型泽泻醇A可采用文献Chen.Pharm.Bull.18(7)：1347-1353报道的方法制备，或者采用商业化产品。

动物试验证明，本发明所述的泽泻醇A的晶型，可用于制备治疗高脂血症及动脉粥样硬化疾病的药物，其治疗效果优于无定型的泽泻醇A。

本发明的有益效果是，制备方法简单，溶解度大、溶解速率快、保存稳定性好的优点，可用于制备治疗高脂血症及动脉粥样硬化疾病的药物，其治疗效果优于无定型的泽泻醇A。

附图说明

图1为泽泻醇A的晶型的X-射线衍射图谱。

图2为晶型的差示扫描量热分析图。

图3为晶型的热重分析图。

图4为进行的溶出曲线图

具体实施方式

实施例1泽泻醇A晶型的制备

称取重量含量为95％的无定型泽泻醇A 5.0g，加入到80mL的无水乙醇中，超声使溶解，过滤，保留滤液；

取滤液，加入60mL的水，振荡均匀，室温下静置24小时，过滤，得到的固体，即为所述的泽泻醇A晶型。

实施例2泽泻醇A晶体的制备

称取重量含量为95％的无定型泽泻醇A 5.0g，加入到110mL的体积浓度为60％甲醇水溶液中，70℃水浴加热30min使溶解，过滤，取滤液，在室温条件下，静置24小时，待晶体析出，过滤，得到的固体，即为所述的泽泻醇A晶型。

实施例3泽泻醇A晶体的制备

称取重量含量为95％的无定型泽泻醇A 5.0g，加入到100mL的体积浓度为50％异丙醇水溶液中，70℃水浴加热30min使溶解，过滤，取滤液，在室温条件下静置24小时，待晶体析出，过滤，得到的固体，即为所述的泽泻醇A晶型。

实施例4泽泻醇A晶体的制备

称取重量含量为95％的无定型泽泻醇A 5.0g，加入120mL的体积浓度为60％乙腈水溶液中，超声10min使溶解，过滤，取滤液，4℃条件下静置24小时，待晶体析出，过滤，得到的固体即为所述的泽泻醇A晶型。

实施例5泽泻醇A晶体的制备

称取重量含量为95％的无定型泽泻醇A 5.0g，加入到90mL的体积浓度30％四氢呋喃水溶液中，超声10min使溶解，过滤，取滤液，2℃条件下静置24小时，待晶体析出，过滤，得到的固体即为此晶体化合物。

实施例6泽泻醇A晶体的粉末X衍射分析

上述实施例1制得的晶体化合物，在Bruker D8ADVANCE多晶X射线粉末衍射仪上采集。本发明所述的X射线粉末衍射的方法参数如下：

X射线发射参数：Cu-Ka；

电压：40仟伏；

电流：40毫安培；

发散狭缝：1.0毫米；

发散狭缝：0.4度；

扫描范围：连续扫描；

取样步长：0.02度；

扫描速度：8度/分钟；

其X射线粉末衍射如图1所示，在2θ值(±0.2)为7.279、10.578、12.215、13.732、14.722和17.466处具有特征峰。

实施例7泽泻醇A晶体的粉末X衍射分析

上述实施例2制得的晶体化合物，在Bruker D8ADVANCE多晶X射线粉末衍射仪上采集。本发明所述的X射线粉末衍射的方法参数如下：

X射线发射参数：Cu-Ka；

电压：40仟伏；

电流：40毫安培；

发散狭缝：1.0毫米；

发散狭缝：0.4度；

扫描范围：连续扫描；

取样步长：0.02度；

扫描速度：8度/分钟；

其X射线粉末衍射的2θ值(±0.2)为7.280、10.580、12.215、13.740、14.720和17.456处具有特征峰。

实施例8泽泻醇A晶体的粉末X衍射分析

上述实施例3制得的晶体化合物，在Bruker D8ADVANCE多晶X射线粉末衍射仪上采集。本发明所述的X射线粉末衍射的方法参数如下：

X射线发射参数：Cu-Ka；

电压：40仟伏；

电流：40毫安培；

发散狭缝：1.0毫米；

发散狭缝：0.4度；

扫描范围：连续扫描；

取样步长：0.02度；

扫描速度：8度/分钟；

其X射线粉末衍射的2θ值(±0.2)为7.285、10.577、12.213、13.742、14.718和17.463处具有特征峰。

实施例9泽泻醇A晶体的粉末X衍射分析

上述实施例4制得的晶体化合物，在Bruker D8ADVANCE多晶X射线粉末衍射仪上采集。本发明所述的X射线粉末衍射的方法参数如下：

X射线发射参数：Cu-Ka；

电压：40仟伏；

电流：40毫安培；

发散狭缝：1.0毫米；

发散狭缝：0.4度；

扫描范围：连续扫描；

取样步长：0.02度；

扫描速度：8度/分钟；

其X射线粉末衍射的2θ值(±0.2)为7.281、10.579、12.213、13.736、14.721和17.464处具有特征峰。

实施例10泽泻醇A晶体的粉末X衍射分析

上述实施例5制得的晶体化合物，在Bruker D8ADVANCE多晶X射线粉末衍射仪上采集。本发明所述的X射线粉末衍射的方法参数如下：

X射线发射参数：Cu-Ka；

电压：40仟伏；

电流：40毫安培；

发散狭缝：1.0毫米；

发散狭缝：0.4度；

扫描范围：连续扫描；

取样步长：0.02度；

扫描速度：8度/分钟；

其X射线粉末衍射的2θ值(±0.2)为7.283、10.572、12.215、13.734、14.720和17.465处具有特征峰。

实施例11泽泻醇A晶体的DSC分析

实施例1的泽泻醇A晶体在TA Q-2000差示扫描量热仪上采集DSC谱图。差示扫描热分析的方法参数如下：

温度范围/℃：30～300℃；

扫描速率/℃/分钟：10℃/分钟；

吹扫气体：氮气，50毫升/分钟。

其差示扫描量热分析(DSC)在86.66℃和178.63℃附近出现吸热峰，如图2所示。

实施例12泽泻醇A晶体的DSC分析

实施例2的泽泻醇A晶体在TA Q-2000差示扫描量热仪上采集DSC谱图。差示扫描热分析的方法参数如下：

温度范围/℃：30～300℃；

扫描速率/℃/分钟：10℃/分钟；

吹扫气体：氮气，50毫升/分钟。

其差示扫描量热分析(DSC)在86.56℃和178.65℃附近出现吸热峰。

实施例13泽泻醇A晶体的DSC分析

实施例3的泽泻醇A晶体在TA Q-2000差示扫描量热仪上采集DSC谱图。差示扫描热分析的方法参数如下：

温度范围/℃：30～300℃；

扫描速率/℃/分钟：10℃/分钟；

吹扫气体：氮气，50毫升/分钟。

其差示扫描量热分析(DSC)在86.63℃和178.58℃附近出现吸热峰。

实施例14泽泻醇A晶体的DSC分析

实施例4的泽泻醇A晶体在TA Q-2000差示扫描量热仪上采集DSC谱图。差示扫描热分析的方法参数如下：

温度范围/℃：30～300℃；

扫描速率/℃/分钟：10℃/分钟；

吹扫气体：氮气，50毫升/分钟。

其差示扫描量热分析(DSC)在86.67℃和178.64℃附近出现吸热峰。

实施例15泽泻醇A晶体的DSC分析

实施例5的泽泻醇A晶体在TA Q-2000差示扫描量热仪上采集DSC谱图。差示扫描热分析的方法参数如下：

温度范围/℃：30～300℃；

扫描速率/℃/分钟：10℃/分钟；

吹扫气体：氮气，50毫升/分钟。

其差示扫描量热分析(DSC)在86.60℃和178.68℃附近出现吸热峰。

实施例16泽泻醇A晶体的热重分析

实施例4所得泽泻醇A晶体在TA Q-500热重分析仪上进行热重分析。热重分析的方法参数如下：

温度范围/℃：30～350℃；

扫描速率/℃/分钟：10℃/分钟；

吹扫气体：氮气，40毫升/分钟。

保护气体：氮气，60毫升/分钟

其热重分析图显示其加热至100℃时失重3.150％，其加热至150℃时失重5.435％，如图3所示。

实施例17HPLC法测定泽泻醇A晶体主成分的纯度

采用HPLC技术检测其纯度，岛津20A系列HPLC色谱仪，采用50％乙腈水为流动相，流速1.3ml/min，检测波长208nm，取实施例1制得的泽泻醇A晶溶液20μl进样分析，面积归一化法计算纯度，结果制得的晶型纯度为99.3％。

实施例18泽泻醇A晶体与无定型粉末的熔点分析、DSC分析及溶解度和稳定性比较

实施例4制得的泽泻醇A晶体在25℃下测定泽泻醇A在不同pH水溶液中的表观溶解度，结果见下表2。

表2泽泻醇A晶型在不同pH下的溶解度

测定37℃纯水中泽泻醇A晶体的溶解速率

照溶出度测定法(中国药典2015年版四部0931溶出度与释放度测定法的第一法)，以醋酸盐缓冲液(pH 5.5)为溶出介质，转速为100r·min，依法操作，在5、10、20、30、45min时，分别取溶液1mL，滤过，取20μL注入到HPLC中，测定不同时间的溶出量。溶出度结果见图4。

泽泻醇A无定型粉末和泽泻醇A晶体的影响因素试验

1、试验目的考察泽泻醇A晶体和无定型两种状态在高温、高湿以及强光照条件下，其性状、水分和主成分含量的变化情况。

2、试验条件高温试验为60℃，高湿试验为相对湿度90％±5％，强光照试验为4500±500LX照度下放置10天。于第5天、第10天取样，测定主成分含量、水分，并记录供试品外观的变化。

3、样品泽泻醇A无定型粉末和泽泻醇A晶体。

4、试验方法按《中国药典》2015年版四部通则9001“原料药物与制剂稳定性试验指导原则”中影响因素试验方法进行。泽泻醇A的无定型粉末或晶体均匀铺展于培养皿中，厚度不超过5mm，分别开口置于高温、高湿以及强光照条件下，考察样品在0、5、10天的稳定性。

5、结果泽泻醇A晶体及无定型粉末在高温、高湿及强光照条件下，主成分泽泻含量测定、水分及性状描述结果见表3～表5。

如表3所示，60℃下放置10天，泽泻醇A无定型粉末和晶型的样品性状均变化不显著，二者含水量经有少量降低，与高温条件下失水有关；泽泻醇A无定型粉末主成分含量变化率仅为-1.30％；泽泻醇A晶体主成分的含量变化为0.01％，说明在60℃下10天，泽泻醇A晶体更稳定。

表3泽泻醇A影响因素(60℃高温)试验报告

注：A为泽泻醇A。

如表4所示，在高湿条件下(90％±5％)放置10天，泽泻醇A无定型粉末和晶型的样品性状均变化不显著，泽泻醇A无定型粉末的含水量由1.39％升至3.67％；泽泻醇A晶体的含水量由1.40％升高到1.79％，说明湿度增加，含水量增加，但无定型粉末更易吸水。泽泻醇A无定型粉末主成分含量变化仅为-2.5％；泽泻醇A晶体主成分的含量变化为-0.01％，说明在高湿条件下，泽泻醇A晶体更稳定。

表4泽泻醇A晶体及无定型粉末在相对湿度90％±5％下的稳定性

注：A为泽泻醇A

如表5所示，在强光照下放置10天，泽泻醇A无定型粉末主成分含量变化率为-6.0％；泽泻醇A晶体主成分的含量变化为-0.01％，说明在强光照条件下，泽泻醇A晶体更稳定。

表5泽泻醇A无定型粉末及晶体在照度4500±500LX下的稳定性

注：A为泽泻醇A；

实施例11泽泻醇A晶体与无定型粉末的小鼠降脂药效试验

高脂饲料喂养雄性C57小鼠，经过6周建立高脂血症模型，高、低剂量的泽泻醇A无定型粉末和高低剂量的泽泻醇A晶体均匀颗粒(过80目筛)，均匀混入高脂饲料中，经口给药干预12周，C57小鼠血清TC、TG、LDL-C均显著低于模型对照组，HDL-C水平较模型对照组明显升高。泽泻醇A晶体显著降低高脂饲料喂养的C57小鼠血清TC、TG和LDL-C，升高HDL-C，显示其全面的降脂作用，且作用强度呈剂量依赖性，在相同剂量下，泽泻醇A晶体的降脂效果优于泽泻醇A无定型粉末。结果见表6。

表6C57小鼠高脂造模6周，给药12周，各组动物主要血脂水平测定结果(n＝8)

注：NC：正常对照组；HF：高脂模型对照组；HF+P-LOW：高脂模型+泽泻醇A无定型粉末低剂量给药组；HF+P-High：高脂模型+泽泻醇A无定型粉末高剂量给药组；HF+C-Low：高脂模型+泽泻醇A晶体低剂量给药组；HF+C-High：高脂模型+泽泻醇A晶体高剂量给药组。与正常对照组相比较，+P<0.01；与模型对照组相比较，#P<0.05，##P<0.01；与HF+P-Low组相比较，*P<0.01；与HF+P-High组相比较，▲P<0.05。