阅读说明：本技术 多肽及其在抗肾小球基底膜病中的用途 (Polypeptide and application thereof in resisting glomerular basement membrane disease ) 是由 赵明辉 崔昭 贾晓玉 史悦 于 2019-04-18 设计创作，主要内容包括：本公开提供了经修饰的多肽,其能够用于有效预防和治疗抗肾小球基底膜(抗GBM)病。本公开还提供了编码上述多肽的核苷酸序列和载体,包含多肽或载体的组合物,以及其在预防和治疗抗GBM病中的用途。(The present disclosure provides modified polypeptides that can be used for effective prevention and treatment of anti-glomerular basement membrane (anti-GBM) diseases. The disclosure also provides nucleotide sequences and vectors encoding the polypeptides, compositions comprising the polypeptides or vectors, and uses thereof in the prevention and treatment of anti-GBM disease.)

多肽及其在抗肾小球基底膜病中的用途

技术领域

本公开涉及免疫治疗领域。具体而言，本公开涉及一种经修饰的多肽及其在预防和治疗抗肾小球基底膜(抗GBM)病中的用途。

技术背景

抗肾小球基底膜(anti-glomerular basement membrane,抗GBM)病是以循环中出现抗GBM抗体和/或抗体在脏器中沉积为特征的一组自身免疫性疾病。肾脏受累多表现为新月体性肾炎，起病急、进展快，短期内即可发展至终末期肾脏病，是预后最差的肾小球肾炎。肺脏受累多表现为肺出血，甚至是致死性的大咯血，属于内科的危急重症。目前该病尚缺乏特异的治疗方案。此外，血浆置换和免疫抑制剂作为现有的治疗手段也存在诸多问题：前者只能清除循环中的自身抗体、且费用昂贵，而后者又可导致严重的不良反应。因此，对于抗GBM病的新的且有效的治疗方案，本领域中存在迫切需要。

由于能够调节和恢复免疫稳态，肽免疫疗法已经作为一些自身免疫疾病的潜在干预措施进行了研究(Larche M and Wraith DC.,Peptide-based therapeutic vaccinesfor allergic and autoimmune diseases.Nat Med.2005；11(4s):S69；mith EL andPeakman M.,Peptide Immunotherapy for Type 1Diabetes-Clinical Advances.FrontImmunol.2018；9:392)。例如，在多发性硬化症，1型糖尿病和乳糜泻等自身免疫性疾病的临床试验中已经采用了几种来源于自身抗原的肽(Smith EL and Peakman M.,如上文)，揭示了肽免疫疗法在治疗自身免疫性疾病中的潜在应用价值。

前期的研究表明，位于肾小球基底膜中的IV型胶原α3链(α3(IV)NC1)上第127-148位氨基酸的肽段α3-P14(α3_127-148:TDIPPCPHGWISLWKGFSFIMF)包括由抗GBM病患者的T细胞识别的抗原表位，并与抗GBM病的发生密切相关(Hu SY,et al.The pathogenicity of Tcell epitopes on human Goodpasture antigen and its critical amino acidmotif.J Cell Mol Med.2017；21(9):2117-2128)。

发明内容

本发明人令人惊讶的发现，通过将α3-P14肽(α3_127-148:TDIPPCPHGWISLWKGFSFIMF；SEQ ID NO:1)或其包含由T细胞识别的核心表位CPHGWISLWKGF(SEQ ID NO:2)的片段中α3肽链的第137位的异亮氨酸(I)替换为其它类型的氨基酸，例如亲水性氨基酸，得到的经修饰的肽能够用于有效预防和治疗抗GBM病。

相应的，在一方面，本公开涉及一种多肽，所述多肽具有以下氨基酸序列：

a.TDIPPCPHGWXSLWKGFSFIMF(SEQ ID NO:3)；或

b.TDIPPCPHGWXSLWKGFSFIMF(SEQ ID NO:3)的片段，所述片段包含CPHGWXSLWKGF(SEQ ID NO:4)，

其中X为除疏水性氨基酸以外的任何氨基酸。

术语“多肽”、“肽”和“蛋白”在本文中可互换使用，指代氨基酸残基的多聚物，并且不限制产物的最小长度。因此，上述术语包含肽、寡肽、多肽、二聚体(异源和同源)，多聚体(异源和同源)等等。该术语还包括多肽的表达后修饰，例如糖基化、乙酰化、磷酸化等。

本文所用“氨基酸”是指20种天然存在的氨基酸和非天然的氨基酸类似物。氨基酸在本文中可以通过其公知的三字母符号或IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的单字母符号来指代。根据其侧链性质，氨基酸可以分为不同的组，包括：

碱性氨基酸：精氨酸(R)、赖氨酸(K)和组氨酸(H)；

酸性氨基酸：谷氨酸(E)和天冬氨酸(D)；

亲水性氨基酸：甘氨酸(G)、天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、半胱氨酸(C)和酪氨酸(Y)；

疏水性氨基酸：丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、苯丙氨酸(F)、色氨酸(W)、甲硫氨酸(M)和脯氨酸(P)。

在本公开的多肽的序列中，X可以是除疏水性氨基酸(即A、V、L、I、F、W、M和P)以外的任何氨基酸。在一些实施方案中，X为碱性氨基酸，例如选自R、K和H；在另一些实施方案中，X为酸性氨基酸，例如选自E和D；在一些实施方案中，X为亲水性氨基酸，例如选自G、N、Q、S、T、C和Y。在优选的实施方案中，X为S，即所述多肽具有氨基酸序列TDIPPCPHGWSSLWKGFSFIMF(SEQ ID NO:5)，或TDIPPCPHGWSSLWKGFSFIMF(SEQ ID NO:5)的片段，所述片段包含CPHGWSSLWKGF(SEQ ID NO:6)。

本公开的多肽可以具有如TDIPPCPHGWXSLWKGFSFIMF(SEQ ID NO:3)的片段所示的氨基酸序列，只要该片段包含核心表位CPHGWXSLWKGF(SEQ ID NO:4)。所述片段例如，在TDIPPCPHGWXSLWKGFSFIMF(SEQ ID NO:3)的序列内，在CPHGWXSLWKGF(SEQ ID NO:4)的一端或两端延伸一个或几个氨基酸所得的序列。

上述片段可以具有不同的长度。一般而言，T细胞表位可以分为两种，其中CD8+T细胞识别的表位通常含有8-10个氨基酸，而由CD4+T细胞识别的表位通常含有13-17个氨基酸。相应的，在一些实施方案中，本公开的多肽具有TDIPPCPHGWXSLWKGFSFIMF(SEQ ID NO:3)的片段所示的氨基酸序列，所述片段包含CPHGWXSLWKGF(SEQ ID NO:4)，其中所述片段包含至少13个氨基酸，例如至少15个氨基酸或至少17个氨基酸。例如，所述片段长度可以是13、14、15、16、17、18、19、20或21个氨基酸。

在一个方面，本公开涉及编码上述任何多肽的核苷酸序列。在本文中，术语“核苷酸序列”、“多核苷酸”和“核酸”可以替换使用，并且指单链或双链形式的脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)，或DNA或RNA的组合及其聚合物。术语“核酸”包括但不限于基因、cDNA或mRNA。在一个实施方案中，核酸分子是合成的(例如，化学合成的或人工的)或重组的。

术语“编码序列”意指编码蛋白质或多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由开放读码框决定，该开放读码框从起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可以来自基因组DNA，或是人工合成的DNA，或其组合。

由于遗传密码子的简并，若干核酸可以编码具有同一氨基酸序列的多肽。例如，密码子GCA、GCC、GCG和GCU都编码氨基酸丙氨酸。因此，在每个被密码子确定为丙氨酸的位置，所述密码子可以被替换为编码丙氨酸的任意其它密码子，而不改变编码的多肽。本领域普通技术人员将认识可以对核酸中的密码子进行修改，而不改变其编码的蛋白质或多肽的氨基酸序列。

在另一个方面，本公开涉及包含本公开的核苷酸序列的载体。在一些实施方案中，所述载体为表达载体。术语“载体”是指可以在宿主细胞中自主复制的载体，其优选为多拷贝载体。载体可以具有用于表达引入的基因的启动子和/或终止子。载体可以是例如源自细菌质粒的载体，病毒载体，源自酵母质粒的载体，源自噬菌体的载体，粘粒，噬菌粒等。术语“表达载体”是指使得蛋白质或多肽能够在细胞中表达的载体，并通常为包括编码蛋白质或多肽的多核苷酸并且可操作地连接至表达控制序列的直链或环状DNA分子。

术语“表达控制序列”意指对于表达编码的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。每个表达控制序列对于编码该多肽的多核苷酸来说可以是天然的(即来自相同基因)或外源的(即来自不同基因)，或相对于彼此是天然的或外源的。此类表达控制序列包括但不限于前导子、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列和转录终止子。一般而言，表达控制序列至少包括启动子，转录和翻译终止信号。

在一个方面，本公开涉及一种组合物，所述组合物包括本公开的任何多肽或载体，以及任选的一种或多种药学上可接受的媒介物、赋形剂和/或稀释剂。短语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断的范围内适合用于与人和动物的组织接触而没有过度毒性、刺激性、变应性应答或其它问题或并发症，与合理的益处/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。如本文中所用，短语“药学上可接受的媒介物、赋形剂和/或稀释剂”是指药学上可接受的材料、组合物或媒介物，如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂、介质、包封材料、制造助剂或溶剂包封材料，其维持本公开的多肽或载体的稳定性、溶解度或活性。

在一些实施方案中，所述组合物用于预防用途，例如用于施用至有风险患抗GBM病的患者以预防抗GBM病的发生。在另一些实施方案中，所述组合物用于治疗用途，例如用于施用至患有抗GBM病的患者以治疗已经存在的抗GBM病。

在一些实施方案中，所述组合物还包含一种或多种另外的抗GBM病治疗剂，例如免疫抑制剂。

在另一个方面，本公开涉及一种预防或治疗受试者中的抗GBM病的方法，所述方法包括对所述受试者施用本公开的多肽、载体或组合物的步骤。在一些实施方案中，所述方法还包括对所述受试者施用一种或多种另外的抗GBM病治疗，例如血浆置换和免疫抑制剂。

在一个方面，本公开涉及本公开的多肽、载体或组合物用于预防或治疗受试者中的抗GBM病中的用途。在一些实施方案中，本公开的多肽、载体或组合物用于与一种或多种另外的抗GBM病治疗例如血浆置换和免疫抑制剂组合使用。

在另一个方面，本公开涉及本公开的多肽、载体或组合物在制备用于预防或治疗受试者中的抗GBM病的药物中的用途。在一些实施方案中，所述药物还包含一种或多种另外的抗GBM病治疗剂，例如免疫抑制剂。

附图说明

图1显示了α1-P14和α3-P14多肽，以及设计的m-P14多肽的序列和同源性比对。

图2显示了利用蛋白对接软件Rossetta对α3-P14多肽和m-P14多肽与HLA-DRB1*1501分子的结合进行建模的结果。

图3显示了α1-P14、α3-P14和m-P14多肽在免疫动物以诱导抗GBM疾病中的效果。图3A显示了采用ELISA的方法检测免疫后各组动物中针对相应抗原的循环抗体的水平；图3B-图3D分别显示了各组动物中的24小时蛋白尿水平、BUN水平和血肌酐水平；图3E-图3H显示了各组动物的肾脏组织中病理性IgG沉积和肾脏损伤的结果；图3M显示了各组动物的组织中新月体形成的百分比。

图4显示了通过使用α3-P14多肽在动物中诱导抗GMB病，并检测m-P14多肽对疾病的预防和治疗效果的实验方案的示意图。

图5显示了m-P14多肽对α3-P14多肽诱导的抗GBM病的预防效果。图5A显示了α3-P14多肽免疫后，各组动物中针对α3-P14多肽的循环抗体的水平；图5B显示了各组动物的组织中新月体形成的百分比；图5C-图5E分别显示了各组动物中的24小时蛋白尿水平、BUN水平和血肌酐水平；图5F-图5I显示了各组动物的肾脏组织中病理性IgG沉积和肾脏损伤的结果。

图6显示了m-P14多肽对α3-P14多肽诱导的抗GBM病的治疗效果。图6A显示了各组动物的组织中新月体形成的百分比；图6B-图6D分别显示了各组动物中的24小时蛋白尿水平、BUN水平和血肌酐水平；图6E-图6G显示了各组动物的肾脏组织中病理性IgG沉积和肾脏损伤的结果。

图7显示了各组动物的循环中和肾脏洗脱的抗α3-NC1抗体的水平。图7A和图7B分别显示了疾病组、预防组和阴性对照组动物的循环中和肾脏洗脱的抗α3-NC1抗体的水平；图7C和图7D分别显示了疾病组、治疗组和阴性对照组动物的循环中和肾脏洗脱的抗α3-NC1抗体的水平。

具体实施方式

实施例1.多肽的设计和合成

核心表位的确定

研究表明，α3-P14肽段(α3_127-148:TDIPPCPHGWISLWKGFSFIMF；SEQ ID NO:1)包括由T细胞识别的抗原表位，并与抗GBM病的发生密切相关(Hu SY,et al.,见上文)。使用α3-P14肽免疫动物能够诱发抗GBM病，而对α3-P14肽中与致病性相关的关键氨基酸鉴定的结果表明，当将α3-P14肽中第136位的色氨酸(W136)、第137位的异亮氨酸(I137)、第139位的亮氨酸(L139)、第140位的色氨酸(W140)或第143位的苯丙氨酸(F143)进行突变后，免疫动物不再发病。可见，由上述氨基酸组成的基序WIxLWxxF是α3-P14肽诱发抗GBM病的关键氨基酸基序。

此外，还鉴定了α3-P14肽段中与HLA-DRB1*1501分子(其是在抗GBM病中素因性的HLA等位基因)结合的关键位点(Xie LJ,et al.The susceptible HLA class II allelesand their presenting epitope(s)in Goodpasture′s disease.Immunology.2017；151(4):395-404)，其中由第132、136、141和142位的氨基酸构成的基序CxxxWxxxxKG对于与HLA-DRB1*1501分子结合并从而被呈递给T细胞是重要的。

从上述结果分析可知，α3-P14肽中第132位氨基酸至第142位氨基酸的片段CPHGWISLWKGF(SEQ ID NO:2)是由T细胞识别并诱发自身免疫应答的核心表位。

多肽序列的同源比对和分子建模

人基底膜IV型胶原共有5条α链组成(分别命名为α1-5链)。除α3和α5链外，其它链均不具有致病性，但其在氨基酸序列上具有高度同源性。为了设计能够阻断针对α3-P14肽的T细胞应答，从而对抗GBM病具有预防和治疗效果的经修饰的多肽，需要在尽可能保持α3-P14肽的原有序列以使机体更好地对其耐受的情况下，对α3-P14肽的核心表位中的氨基酸进行突变以消除其肽致病性。采取的策略包括将α3-P14肽的核心表位序列与非致病性的α1链中的相应序列(α1-P14:TQIPPCPSGWSSLWIGYSFVMH；SEQ ID NO:7)进行比对，并将其中具有不同氨基酸残基的位置选择为潜在的突变位点。结果显示，两者在第134位、第137位及第143位处的氨基酸存在不同(α3-H134/α1-S137、α3-I137/α1-S137、α3-F143/α1-Y143；图1)。

由于在体内α3-P14肽与HLA-DRB1*1501分子结合并被呈递给T细胞，进一步对α3-P14肽与HLA-DRB1*1501之间的相互作用进行了研究。利用蛋白对接软件Rossetta进行建模的结果发现，HLA-DRB1*1501分子的结合口袋基本由疏水性氨基酸围绕，而α3-P14肽第137位的异亮氨酸(I)同样为疏水性氨基酸，能够很好地结合到HLA-DRB1*1501分子的结合口袋1中(图2A)。而在α1链中，第137位的氨基酸为丝氨酸(S)，其是一种亲水性氨基酸。

基于上述同源性比对和分子建模的结果，推测当将α3-P14肽中第137位的I(I137)突变为除疏水性氨基酸以外的其它类型的氨基酸例如亲水性氨基酸时，能够改变其与HLA分子和TCR的结合。在本实施例中，将I137替换为上述α1链中的相应氨基酸S，设计了经修饰的多肽m-P14：TDIPPCPHGWSSLWKGFSFIMF(SEQ ID NO:5；图1)。通过进行分子建模发现，m-P14肽中第137位的S与HLA-DRB1*1501分子的结合口袋周围的疏水性环境不相容，导致其弹出结合口袋(图2B)。

多肽的合成、纯化和鉴定

多肽的合成采用F-moc法，在自动多肽合成仪上完成(北京中科亚光公司)，并通过HPLC纯化。质谱分析确定其序列正确。所有实验用的肽段纯度均在98％以上。

实施例2.多肽的致病性研究

首先研究了经修饰的m-P14多肽对于抗GBM病的致病性。参考先前的抗GBM病大鼠动物模型的建立方法(Hu SY et al.J.Cell.Mol.Med.Vol 21,No 9,2017pp.2117-2128)，检测α3-P14多肽和m-P14多肽在免疫动物后是否能诱导抗GBM病。简言之，使用在完全弗氏佐剂(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO,USA)中乳化的α1-P14、α3-P14或m-P14多肽免疫WistarKyoto(WKY)大鼠(雌性、4周龄，每组n＝6)。采用单次后脚垫注射进行免疫，注射的多肽剂量为200μg/kg。阴性对照组仅注射PBS。在免疫前以及免疫后每周收集血尿样本。免疫后第6周结束时处死动物，收集肾脏组织进行病理观察。

结果显示，在免疫后两周，所有免疫组动物中产生针对相应免疫原的抗体(ELISA方法，图3A)。α1-P14和m-P14多肽免疫组动物的蛋白尿(图3B)、尿素氮(BUN，图3C)和血肌酐(图3D)水平与阴性对照组相似，而α3-P14多肽免疫组动物显示显著升高的尿蛋白、尿素氮和血肌酐水平(图3B-图3D)。肾脏组织病理观察结果显示，使用α3-P14多肽免疫的动物肾脏组织中存在明显的病理性IgG沉积(图3E上图，使用FITC-缀合的抗大鼠Ig染色)和肾脏损伤(图3E下图)，而α1-P14和m-P14多肽免疫组(图3F和3G)以及阴性对照组(图3H)没有观察到IgG沉积和肾脏损伤的现象。此外，α3-P14多肽免疫动物显示典型的新月体形成，而α1-P14和m-P14多肽免疫的动物中没有出现新月体形成(图3M)。

上述结果表明，将α3-P14多肽的核心表位中第137位的氨基酸替换为S，能够消除其诱导抗GBM病的致病性。

实施例3.m-P14多肽预防和治疗抗GBM病的效果

本实施例研究m-P14多肽在预防和治疗抗GBM病中的效果。

实验设计

所有WKY大鼠均采用单次后脚垫注射α3-P14多肽(第0天)以诱导抗GBM病，其剂量为皮下注射200μg/kg。免疫后，将大鼠分为预防组(从第0天开始治疗)、治疗组(实验大鼠出现抗GBM病的血尿/蛋白尿症状后开始治疗)、疾病组(免疫后无干预)，并同时设置阴性对照组(仅注射PBS)，每组6只动物。具体实验流程参见图4。

预防组：按m-P14多肽的给药剂量分为高剂量组(30mg/kg/次)和低剂量组(10mg/kg/次)。m-P14多肽通过腹腔注射给药。免疫后的前两周，m-P14多肽每天给药一次，在接下来实验过程中隔日给药一次。

治疗组：检测大鼠出现血尿或蛋白尿症状后开始施用m-P14多肽(约在免疫后2周左右)。m-P14多肽通过腹腔注射每天给药一次，剂量为30mg/kg/次。

疾病组在α3-P14多肽免疫后不进行任何干预，而阴性对照组不进行免疫，并仅注射无菌PBS。免疫后每周收集大鼠的血尿标本，并于第42天处死大鼠，取肾脏观察其病理损伤。

m-P14可以阻断抗GBM病的发生

在两个m-P14多肽预防组中，观察到动物血清中针对α3-P14的抗体水平相比于疾病组从第3周开始明显降低(30mg/kg组：0.2±0.1对疾病组的1.3±0.1，P＝0.002；10mg/kg组：0.4±0.1对疾病组的1.3±0.1，P＝0.009；图5A)。其中在第4周，m-P14高剂量组相比于低剂量组更显著地降低动物血清中针对α3-P14的抗体水平(0.2±0.03对0.6±0.1,P＝0.026)。

此外，在两个预防组中，几乎没有观察到新月体的形成(30mg/kg组:0.5±0.4％对疾病组的68.8±15.4％，P＝0.002；10mg/kg组:6.3±5.6对疾病组的68.8±15.4％,P＝0.009；图5B)。两个预防组的尿蛋白(图5C)、尿素氮(图5D)和血肌酐(图5E)水平相比于疾病组显著降低并与阴性对照组相似。此外，在疾病组动物中观察到肾脏组织中明显的病理性IgG沉积(图5F)，而在两个预防组(图5G和图5H)以及阴性对照组(图5I)没有观察到IgG沉积。上述结果表明，m-P14多肽的预防性施用能够有效阻断和预防抗GBM病的发生。

治疗组m-P14显著减轻肾脏损伤

因为多数抗GBM病患者就诊时均已有肾脏损伤的表现，因此设计了治疗组，在大鼠出现抗GBM病的血尿或蛋白尿症状后(约在免疫后2周左右)再开始进行治疗干预。其具体治疗方案见以上实验设计小节。实验结果显示，m-P14治疗组的大鼠中新月体的形成的比例相比于疾病组显著下降(20.1±8.4对疾病组68.8±15.4％,P＝0.026；图6A)。其尿蛋白(图6B)、尿素氮(图6C)和血肌酐(图6D)水平相比于疾病组显著降低并与阴性对照组接近。

在肾脏组织的病理学观察方面，相比于疾病组(图6E)，m-P14治疗组肾脏IgG沉积的荧光强度显著减弱(图6F)并接近阴性对照组(图6G)，提示沉积的IgG抗体水平下降。上述结果表明，m-P14肽能够用于在抗GBM病发作后有效治疗疾病。

实施例4.m-P14多肽抑制由α3-P14多肽诱导的分子内表位扩展

在抗GBM病中，由线性多肽诱导的分子内表位扩展现象促进了该疾病的形成和发展。因此，进一步检测了m-P14多肽对α3-P14多肽诱导的分子内表位扩展的效果。结果表明，在α3-P14诱导的疾病组动物中，除了抗α3-P14多肽的抗体外，其循环和从肾脏洗脱的IgG中还可检测到针对α3(IV)NC1完整蛋白的抗体(图7A-图7D)，表明发生了从线性多肽α3-P14扩展到α3-NC1分子上的构象表位的分子内表位扩展现象。

然而，在上述预防组动物(30mg/kg组和10mg/kg组)中，循环和肾脏中检测到的抗α3-NC1抗体相比于疾病组动物显著降低(图7A和图7B)并与阴性对照组相似，表明在疾病发作前进行m-P14肽干预能够抑制α3-P14多肽诱导表位扩展现象。相似的，在治疗组动物中，循环和肾脏中检测到的抗α3-NC1抗体相比于疾病组动物也显著下降(图7C和图7D)，表明即便在已经形成抗GBM病的血尿或蛋白尿症状后，施用m-P14肽也能抑制表位扩展过程。

序列表

<110> 北京大学第一医院

<120> 多肽及其在抗肾小球基底膜病中的用途

<130> C19P3930

<160> 7

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> α3-P14肽

<400> 1

Thr Asp Ile Pro Pro Cys Pro His Gly Trp Ile Ser Leu Trp Lys Gly

1 5 10 15

Phe Ser Phe Ile Met Phe

20

<210> 2

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> α3-P14肽的核心表位

<400> 2

Cys Pro His Gly Trp Ile Ser Leu Trp Lys Gly Phe

1 5 10

<210> 3

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> Xaa 可以是除疏水性氨基酸以外的任何氨基酸

<400> 3

Thr Asp Ile Pro Pro Cys Pro His Gly Trp Xaa Ser Leu Trp Lys Gly

1 5 10 15

Phe Ser Phe Ile Met Phe

20

<210> 4

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa 可以是除疏水性氨基酸以外的任何氨基酸

<400> 4

Cys Pro His Gly Trp Xaa Ser Leu Trp Lys Gly Phe

1 5 10

<210> 5

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> m-P14肽

<400> 5

Thr Asp Ile Pro Pro Cys Pro His Gly Trp Ser Ser Leu Trp Lys Gly

1 5 10 15

Phe Ser Phe Ile Met Phe

20

<210> 6

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> m-P14肽的核心表位

<400> 6

Cys Pro His Gly Trp Ser Ser Leu Trp Lys Gly Phe

1 5 10

<210> 7

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> α1-P14肽

<400> 7

Thr Gln Ile Pro Pro Cys Pro Ser Gly Trp Ser Ser Leu Trp Ile Gly

1 5 10 15

Tyr Ser Phe Val Met His

20