阅读说明：本技术 一种增强免疫力的中药组合物及其制备方法和应用 (Traditional Chinese medicine composition for enhancing immunity and preparation method and application thereof ) 是由 高益槐 李存勇 邱安东 梁秀 何红萍 郑春源 于 2020-08-26 设计创作，主要内容包括：本发明涉及中药组合物技术领域,尤其涉及一种增强免疫力的中药组合物及其制备方法和应用。将人参加入其重量的4～8倍的质量浓度为70％的乙醇醇提得到人参三萜皂苷液和人参药渣渣；将人参渣加入人参重量的8～12倍体积的水浸提得到人参多糖液；将人参三萜皂苷液和人参多糖液分别浓缩成浸膏之后,混合并加入羧甲基茯苓多糖和制得所述增强免疫力的中药组合物。本发明的制备方法,由于将人参依次经过醇提和水提分别得到人参三萜皂苷液和人参多糖液,其可以在不影响人参药性和药效的前提下,依然遵循中药君臣配伍原则,充分发挥中药药效。能有效防治环磷酰胺所致的免疫低下,并通过碳粒廓清法和耳肿胀法研究九仙草复方对小鼠免疫功能的影响。(The invention relates to the technical field of traditional Chinese medicine compositions, in particular to a traditional Chinese medicine composition for enhancing immunity and a preparation method and application thereof. Adding ethanol with the mass concentration of 70% 4-8 times of the weight of ginseng into the ginseng, and performing alcohol extraction to obtain a ginseng triterpenoid saponin solution and ginseng dregs; adding water with the volume being 8-12 times of the weight of the ginseng into the ginseng residue to extract to obtain ginseng polysaccharide liquid; after the ginseng triterpenoid saponin liquid and the ginseng polysaccharide liquid are respectively concentrated into extractum, the extractum is mixed and added with the carboxymethyl pachyman to prepare the traditional Chinese medicine composition for enhancing the immunity. According to the preparation method, the ginseng is subjected to alcohol extraction and water extraction in sequence to obtain the ginseng triterpenoid saponin liquid and the ginseng polysaccharide liquid respectively, so that the compatibility principle of monarch and minister medicines of the traditional Chinese medicine can be still followed on the premise of not influencing the medicine property and the medicine effect of the ginseng, and the medicine effect of the traditional Chinese medicine is fully exerted. Can effectively prevent and treat hypoimmunity caused by cyclophosphamide, and researches the influence of the compound of the nine immortals on the immune function of mice by a carbon particle outline cleaning method and an ear swelling method.)

一种增强免疫力的中药组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及中药组合物技术领域，尤其涉及一种增强免疫力的中药组合物及其制备方法和应用。

背景技术

增强免疫力是通过外来干预手段，增强人体免疫力的方式。免疫力是机体自身的防御机制，是机体识别和消灭外来侵入的异物、损伤的生理反应，可通过多种方式来增强免疫力。而动物模型则常用于药理药效及新药筛选的研究，更准确地观察模型的实验结果，并与人类疾病进行比较研究，有助于更方便、更有效地认识疾病和药物效果。本研究以环磷酰胺为造模剂建立一套小鼠免疫功能低下的模型。

茯苓，为多孔菌科真菌茯苓Poriacocos(Schw.)Wolf的干燥菌核，是中药“四君八珍”之一，可作为一种重要的君药在相应疗效的配方中发挥精髓作用。《药典2015》中显示，茯苓具有利水渗湿及健脾宁心之功效，在临床上可用于治疗水肿尿少、痰饮眩悸、脾虚食少、便溏泄泻、心神不安和惊悸失眠等症。人参可大补元气、复脉固脱、补脾益肺及治虚羸。

在专利号为CN100534474C中，公开了一种具有增强免疫功效的组合物及其制备方法，其将茯苓多糖经水或水醇混合液浸提后依次经过碱化和氯乙酸取代反应得到的羧甲基茯苓多糖和人参干燥粉、和枸杞干燥醇析沉淀物混合得到组合物。但是，由于人参未经过提取处理降低了药效。茯苓进行了碱液提取、或醇提取的方法，通过离心分离碱化液的方法，羧甲基反应是在上清液的碱化液中进行，采用两步法制备羧甲基茯苓多糖，存在离心分离碱液，再羧甲基化的繁琐步骤。

发明内容

(一)要解决的技术问题

鉴于现有技术的上述缺点、不足，本发明提供一种增强免疫力的中药组合物的制备方法，遵循中药君臣配伍原则，充分发挥中药药效。

相应的，本发明还提供上述制备方法得到的增强免疫力的中药组合物和应用。

(二)技术方案

为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：

本发明提供一种增强免疫力的中药组合物，其包括以下重量份的组分：羧甲基茯苓多糖1～5份、人参1～15份。

可选地，各组分按重量份分别为：羧甲基茯苓多糖5份、人参15份。

本发明还一种增强免疫力的中药组合物的制备方法，其包括以下步骤：

S1人参提取物的提取：

S11将人参加入其重量的4～8倍的质量浓度为70％的乙醇醇提得到人参三萜皂苷液和人参渣；

S12将人参渣加入步骤S11中人参重量的8～12倍体积的水浸提得到人参多糖液；

S2将人参三萜皂苷液和人参多糖液分别浓缩成浸膏之后，混合并加入羧甲基茯苓多糖制得所述增强免疫力的中药组合物。

可选地，步骤S11中的乙醇醇提的时间为0.5～1.5h，步骤S12中的水浸提的时间为0.5～1.5h。

可选地，羧甲基茯苓多糖的制备包括以下步骤：

将茯苓在氢氧化钠溶液中浸提后加入乙醇醇提7～12h后，加入氢氧化钠碱化反应后，加入氯乙酸进行羧甲基化反应得到羧甲基茯苓多糖。

可选地，碱化的时间为6～8h，羧甲基化反应的时间为10～14h。

本发明还提供上述中药组合物在在增强免疫力的食品、药品、保健品中的应用。

(三)有益效果

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1.本发明增强免疫力的中药组合物，通过羧甲基茯苓多糖和人参的配伍的协同作用使其具有较强的免疫力。

2.本发明的增强免疫力的中药组合物的制备方法，由于将人参依次经过醇提和水提分别得到人参三萜皂苷液和人参多糖液，相对于现有技术而言，其可以在不影响人参药性和药效的前提下，依然遵循中药君臣配伍原则，充分发挥中药药效。能有效防治环磷酰胺所致的免疫低下，并通过碳粒廓清法和耳肿胀法研究九仙草复方对小鼠免疫功能的影响。结果表明，九仙草复方对环磷酰胺所致小鼠免疫低下有保护作用。为临床防治急性肾损伤提供了一种新的用药选择和建议。本发明中药组合物羧甲基茯苓多糖组合物在给药剂量为5-8g/kg/d时能对小鼠肾损伤发挥显著的治疗作用，并根据成人用剂量换算(成人体重按60kg计)。本发明所述每单位制剂对应成人每天给药剂量。

其中，本发明采用制备后的羧甲基茯苓多糖进行配料，在配比上更容易操作。

其中，在羧甲基茯苓多糖的制备方法中，采用茯苓粉一步法制备羧甲基茯苓多糖，在制备过程中无须离心分离碱化后的茯苓多糖，进而在碱化的基础上，直接加入乙醇到碱化液，再引入氯乙酸的方法在一个体系中完成了茯苓多糖的碱化和羧甲基化，其操作简单，实用性更强，更适合于工业化生产和操作。

附图说明

图1是羧甲基茯苓多糖组合物对DNFB所致的小鼠迟发超敏反应的影响；

图2是羧甲基茯苓多糖组合物对小鼠吞噬功能的影响(n＝10)。

具体实施方式

为了更好的解释本发明，以便于理解，下面通过具体实施方式，对本发明作详细描述。

本发明实施例提出的一种增强免疫力的中药组合物，其包括以下重量份的组分：羧甲基茯苓多糖1～5份、人参1～15份。

通过羧甲基茯苓多糖和人参的配伍的协同作用使其具有较强的免疫力。

各组分按重量份优选为：羧甲基茯苓多糖5份、人参15份。

本发明实施例提出的一种增强免疫力的中药组合物的制备方法，其解决了羧甲基茯苓多糖和人参的组合药效不高的问题，或人参提取物得率不高或者破坏人参提取物从而破坏人参的药性的技术问题。其通过以下的制备方法实现：将人参加入其重量的4～8倍的质量浓度为70％的乙醇醇提得到人参三萜皂苷液和人参渣；将人参渣加入水浸提得到人参多糖液；将人参三萜皂苷液和人参多糖液分别浓缩成浸膏之后，混合并加入羧甲基茯苓多糖制得增强免疫力的中药组合物。

将人参依次经过醇提和水提分别得到人参三萜皂苷液和人参多糖液，药性不破坏，人参三萜皂苷液和人参多糖液先浓缩成浸膏后与羧甲基茯苓多糖可以按君臣佐使的原则进行配伍。相对于人参粉与羧甲基茯苓多糖，其以更少的原料药量达到更好的效果。提高了药材的生物利用度，缩小的服用体积，避免了人参药材的资源浪费。

其中，人参的乙醇醇提的时间为0.5～1.5h，人参渣的水浸提的时间为0.5～1.5h。

为提高羧甲基茯苓多糖的得率，羧甲基茯苓多糖的制备包括以下步骤：将茯苓在氢氧化钠溶液中浸提后加入乙醇醇提7～12h后，加入氢氧化钠碱化反应后，加入氯乙酸进行羧甲基化反应得到羧甲基茯苓多糖。

碱化的时间为6～8h，羧甲基化反应的时间为10～14h。

其中，具体的：

茯苓粉：选取茯苓药材粉碎过100目筛，得茯苓粉；

初步碱浸提：取茯苓粉，在快速搅拌下加入质量浓度为3％氢氧化钠溶液，其中，茯苓粉与氢氧化钠溶液的按重量体积比为：2～3g∶1～2ml；混合后，充分搅拌均匀，并在转速为145r/min下持续振摇6～8h得到第一碱化液；其中，第一碱化液中主要的成分为碱化后的茯苓多糖。

乙醇醇提：在上述快速搅拌下往第一碱化液中加入质量浓度为95％乙醇，充分搅拌均匀，静置过夜持续7～12h得到乙醇醇提液；其中，碱化液与乙醇的体积比为3～5∶4～6。

碱化反应：氢氧化钠与乙醇醇提液按重量体积比20～40％加入到乙醇醇提液中进行碱化反应，持续6～8h得到第二碱化液；

羧甲基化反应：在45～55℃下，向第二碱化液中加入氯乙酸，氯乙酸和第二碱化液按质量体积比为1∶3，充分搅拌均匀，并持续振摇，振摇速率为160r/min，振摇时间为10～14h得到羧甲基化产物；

将羧甲基化产物依次经过质量浓度为80％、90％乙醇液醇析洗涤，干燥至完全，粉碎过筛得到羧甲基茯苓多糖粉。

本发明采用制备后的羧甲基茯苓多糖进行配料，在配比上更容易操作。在羧甲基茯苓多糖的制备方法中，采用茯苓粉一步法制备羧甲基茯苓多糖，在制备过程中无须离心分离碱化后的茯苓多糖，进而在碱化的基础上，直接加入乙醇到碱化液，再引入氯乙酸的方法在一个体系中完成了茯苓多糖的碱化和羧甲基化，其操作简单，实用性更强，更适合于工业化生产和操作。

本实施方式还提供上述任一项增强免疫力的中药组合物的制备方法得到的中药组合物。所得到的中药组合物具有很强的增强免疫力的效果。

本实施方式还提供上述中药组合物在在增强免疫力的食品、药品、保健品中的应用。

本实施方式中的中药组合物由于其具有较强的增强免疫力作用，因此可以直接作为药品使用。又由于制备过程中不引入有毒物质，又去除了人参和茯苓中的有毒物质，其可应用到食品中和保健品中。

本实施方式中的中药组合物可以治疗免疫功能低下的疾病，特别是指环磷酰胺所致免疫力低下引发的并发症。

为了更好的理解上述技术方案，下面将参照附图更详细地描述本发明的示例性实施例。虽然附图中显示了本发明的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更清楚、透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。

本发明实施例中，所采用的药品与试剂如下：

DNFB：Sigma；墨汁：曹素功，20181102；环磷酰胺一水合物：麦克林，批号C10478483。

人参购自宝参堂中药材批发部，鉴定后确定符合2015年版《中国药典》一部的有关规定。

仪器：SYNERGY 2多功能酶标仪、METTLER TOLEDO ME204电子天平、压片器。

实施例1

增强免疫力的中药组合物的制备方法，

S1人参提取物的提取：

将人参加入其重量的6倍的质量浓度为70％的乙醇醇提1h得到人参三萜皂苷液和人参渣；

将人参渣加入水浸提1h得到人参多糖液；

S2羧甲基茯苓多糖的制备：

茯苓粉：选取茯苓药材粉碎过100目筛，得茯苓粉；

初步碱浸提：取茯苓粉，在快速搅拌下加入质量浓度为3％氢氧化钠溶液，其中，茯苓粉与氢氧化钠溶液的按重量体积比为：2.1g∶1ml；混合后，充分搅拌均匀，并在转速为145r/min下持续振摇6.5h得到第一碱化液；

乙醇醇提：在上述快速搅拌下往第一碱化液中加入质量浓度为95％乙醇，充分搅拌均匀，静置过夜持续10h得到乙醇醇提液；其中，碱化液与乙醇的体积比为4∶5。

碱化反应：氢氧化钠与乙醇醇提液按重量体积比30％加入到乙醇醇提液中进行碱化反应，持续7h得到第二碱化液；

羧甲基化反应：在53℃下，向第二碱化液中加入氯乙酸，氯乙酸和第二碱化液按质量体积比为1∶3，充分搅拌均匀，并持续振摇，振摇速率为160r/min，振摇时间为12h得到羧甲基化产物；

将羧甲基化产物依次经过质量浓度为80％、90％乙醇液醇析洗涤，干燥至完全，粉碎过筛得到羧甲基茯苓多糖粉；

S3将人参三萜皂苷液和人参多糖液分别浓缩成浸膏之后，混合并加入羧甲基茯苓多糖粉制得增强免疫力的中药组合物。

其中，步骤S3中，按重量份羧甲基茯苓多糖为1份，人参三萜皂苷液和人参多糖液为3份的干人参药材制备得到。

本实施例所得到的中药组合物为液体制剂。

本实施例中的羧甲基茯苓多糖粉中的羧甲基茯苓多糖得率达到91.2％。

实施例2

增强免疫力的中药组合物的制备方法，

S1人参提取物的提取：

将人参加入其重量的4倍的质量浓度为70％的乙醇醇提1.5h得到人参三萜皂苷液和人参渣；

将人参渣加入水浸提0.5h得到人参多糖液；

S2羧甲基茯苓多糖的制备：

茯苓粉：选取茯苓药材粉碎过100目筛，得茯苓粉；

初步碱浸提：取茯苓粉，在快速搅拌下加入质量浓度为3％氢氧化钠溶液，其中，茯苓粉与氢氧化钠溶液的按重量体积比为：3g∶1ml；混合后，充分搅拌均匀，并在转速为145r/min下持续振摇8h得到第一碱化液。

乙醇醇提：在上述快速搅拌下往第一碱化液中加入质量浓度为95％乙醇，充分搅拌均匀，静置过夜持续7h得到乙醇醇提液；其中，碱化液与乙醇的体积比为5∶4。

碱化反应：氢氧化钠与乙醇醇提液按重量体积比40％加入到乙醇醇提液中进行碱化反应，持续6h得到第二碱化液；

羧甲基化反应：在55℃下，向第二碱化液中加入氯乙酸，氯乙酸和第二碱化液按质量体积比为1∶3，充分搅拌均匀，并持续振摇，振摇速率为160r/min，振摇时间为10h得到羧甲基化产物；

将羧甲基化产物依次经过质量浓度为80％、90％乙醇液醇析洗涤，干燥至完全，粉碎过筛得到羧甲基茯苓多糖粉；

S3将人参三萜皂苷液和人参多糖液分别浓缩成浸膏之后，混合并加入羧甲基茯苓多糖粉制得增强免疫力的中药组合物。

其中，步骤S3中，按重量份羧甲基茯苓多糖为5份，人参三萜皂苷液和人参多糖液为1份的干人参药材制备得到。

本实施例所得到的中药组合物为液体制剂。

本实施例中的羧甲基茯苓多糖粉中的羧甲基茯苓多糖得率达到80％。

实施例3

增强免疫力的中药组合物的制备方法，

S1人参提取物的提取：

将人参加入其重量的8倍的质量浓度为70％的乙醇醇提0.5h得到人参三萜皂苷液和人参渣；

将人参渣加入水浸提1.5h得到人参多糖液；

S2羧甲基茯苓多糖的制备：

茯苓粉：选取茯苓药材粉碎过100目筛，得茯苓粉；

初步碱浸提：取茯苓粉，在快速搅拌下加入质量浓度为3％氢氧化钠溶液，其中，茯苓粉与氢氧化钠溶液的按重量体积比为：2g∶2ml；混合后，充分搅拌均匀，并在转速为145r/min下持续振摇6h得到第一碱化液；

乙醇醇提：在上述快速搅拌下往第一碱化液中加入质量浓度为95％乙醇，充分搅拌均匀，静置过夜持续12h得到乙醇醇提液；其中，碱化液与乙醇的体积比为3∶6。

碱化反应：氢氧化钠与乙醇醇提液按重量体积比200％加入到乙醇醇提液中进行碱化反应，持续8h得到第二碱化液；

羧甲基化反应：在45℃下，向第二碱化液中加入氯乙酸，氯乙酸和第二碱化液按质量体积比为1∶3，充分搅拌均匀，并持续振摇，振摇速率为160r/min，振摇时间为14h得到羧甲基化产物；

将羧甲基化产物依次经过质量浓度为80％、90％乙醇液醇析洗涤，干燥至完全，粉碎过筛得到羧甲基茯苓多糖粉；

S3将人参三萜皂苷液和人参多糖液分别浓缩成浸膏之后，混合并加入羧甲基茯苓多糖粉制得增强免疫力的中药组合物。

其中，步骤S3中，按重量份羧甲基茯苓多糖为1份，人参三萜皂苷液和人参多糖液为15份的干人参药材制备得到。

本实施例所得到的中药组合物为液体制剂。

本实施例中的羧甲基茯苓多糖粉中的羧甲基茯苓多糖得率达到85％。

实施例4

提高免疫力的保健品，其由增强免疫力的中药组合物、维生素C、多肽、水、葡萄糖按重量比为5∶2∶15∶1得到的液体制剂。

其中，经过试验表明：增强免疫力的中药组合物和多肽类物质之间在增强免疫力方面具有协同作用。

实施例5

本发明中药组合物对DNFB所致的小鼠迟发超敏反应的影响取昆明小鼠60只，雄性，随机分组，每组10只，即：正常对照组(Control)、模型对照组(Model)、参芪扶正颗粒(阳性药组/Positive)、1#复方组(R1)、2#复方组(实施例1得到的中药组合物，R2)和3#复方组(R3)。除了正常对照组和模型组外，其他各组分别灌胃相应药物30天。在灌胃第25天时，向除了对照组外的其余各组通过腹腔注射50mg/kg环磷酰胺开始造模，连续注射5天。在造模第一天给药后2h，于小鼠腹部去毛处涂抹1％DNFB50μL致敏，末次给药后于小鼠右耳前后两面涂抹1％DNFB共10μL进行攻击，16h后脱颈处死小鼠，沿耳廓基线剪下双耳，用8mm直径打孔器分别在左右耳的同一部位打下圆耳片并称重，以左右耳重量之差表示迟发型超敏反应的程度。另取胸腺和脾脏称重，计算脏器系数。

对各组小鼠右-左耳片重量差值进行单因素方差分析，与模型组相比，实施例1得到的中药组合物组(R2)和正常对照组(Control)组差异显著(P＜0.05，具有统计学意义。结果见图1。

实施例6

本发明中药组合物对小鼠吞噬功能的影响

取昆明小鼠36只，雄性，随机分组，每组6只，即：正常对照组(Control)、模型对照组(Model)、参芪扶正颗粒(阳性药组/Positive)、1#复方组(R1)、2#复方组(实施例1得到的中药组合物，R2)和3#复方组(R3)。除了正常对照组和模型组外，其他各组分别灌胃相应药物30天。在灌胃第25天时，向除了对照组外的其余各组通过腹腔注射50mg/kg环磷酰胺开始造模，连续注射5天。末次给药后，于小鼠眼眶注射稀释4倍的墨汁0.1mL/10g，于注入后2、10min，分别取血20μL，立刻注入到2ml的0.1％碳酸钠溶液中，并吹打均匀，于分光光度计上680nm处比色。取血完毕的小鼠脱颈处死，解剖取肝脏及脾脏并分别称重。按下式计算吞噬指数K值，并计算吞噬系数α值：K＝(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1)

α＝体重×/(肝重+脾重)

对各组吞噬系数值进行单因素方差分析，与模型组相比，中药组合物组(R2)和Control组差异显著(P＜0.05)，具有统计学意义。结果见图2。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。