阅读说明：本技术 一种用于ad治疗的nmn药物组合物 () 是由 沈洁 于 2020-07-02 设计创作，主要内容包括：一种药物组合物,由NMN、高山火绒草提取物以及药学上可接受的辅料组成,用于抑制AD发生发展进程中的氧化应激损伤。高山火绒草提取物能显著提高大脑内胆碱的传递,其与NMN合用,能显著降低NMN在AD治疗中的用药浓度,使利用NMN治疗AD的临床应用和推广成为可能。()

一种用于AD治疗的NMN药物组合物

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体而言，本发明提供一种用于AD治疗的含NMN的药物组合物，用于抑制AD发生发展进程中的氧化应激损伤。

背景技术

阿尔兹海默症(AD)是一种以记忆丢失和多种认知功能损伤为特征的复杂的多功能紊乱的精神疾病。现已开发用于治疗AD的几种治疗策略包括抗炎，抗氧化和抗淀粉样蛋白的方法。氧化应激是AD及其他形式痴呆发生发展进程中的一个重要因素。大量数据显示，自由基氧损伤，特别是神经元脂质体、蛋白以及核酸，在AD患者的大脑广泛存在。

研究发现，NMN能通过改善能量代谢，抑制氧化应激，改善了由Aβ1-42低聚体导致的阿尔茨海默病大鼠的认知和记忆功能，恢复了NAD+和ATP的水平，减少海马体内ROS的积累，被证实是用作AD治疗的潜在药物。然而其高昂的制造成本和超高的用药浓度(0.6-2g/人/天)限制了临床推广和应用，因此降低制造成本或者降低用药浓度，成为将NMN用于AD治疗的关键。

Ariane Hornick等研究发现高山火绒草提取物可以提高大脑内胆碱的传递，而胆碱是少数能穿过"脑血管屏障"的物质之一，提示其活性组分具有防治老年痴呆的作用。

发明内容

本发明提供一种包含NMN的药物组合物，用于抑制AD及其他形式痴呆发生发展进程中的氧化应激损伤。本发明还提供一种用于AD治疗的NMN药物组合物的制备方法。

本发明提供的药物组合物包含NMN和高山火绒草提取物。药物组合物是指用于配制成药物的具有医疗活性的组合物，除医疗活性组合物外，还包括适量药学上可接受的辅料。

更进一步的，本发明的药物组合物中，NMN：高山火绒草提取物的质量比为1-10：40-100，优选为2-5:50-80，更为优选为4：80。

当采用高山火绒草鲜草或植物细胞培养物作为提取原料，优选包括如下步骤的提取方法：

1)向提取原料中加入有机试剂并混合均匀；

2)对混合产物进行超声破壁处理；

3)对破壁处理产物进行高温水浸提；

4)对浸提产物进行固液分离并保留液体；

5)对分离所得液体进行浓缩后冻干即得高山火绒草提取物。

作为优选的，高山火绒草的提取原料是高山火绒草植物细胞培养物。

更进一步的，在称取配方量的NMN与高山火绒草提取物均匀混合即得药物组合物。

更进一步的，在药物组合中加入适量的药学上可接受的辅料并制剂成型即得用于AD治疗的NMN药物。

在药物组合物的制备工艺中，优选包括如下过程的制备方法：

1)向1份质量的高山火绒草鲜草粉末或鲜高山火绒草细胞培养物中加入2倍体积的低级醇后(料液比1:2(m/v))混合均匀；

2)混合产物在25-30℃的条件下200-300W超声破壁处理10-30min；

3)向超声破壁处理产物中加入5-10倍体积的纯水，在80-120℃的条件下浸提1-2h；

4)浸提产物用4000-10000g离心进行固液分离并保留液体；

5)对分离所得液体进行浓缩后并冻干即得高山火绒草提取物；

6)称取配方量的NMN,与高山火绒草提取物等比倍比混合即得药物组合物；

7)在药物组合物中加入适量的药学上可接受的辅料并制剂成型即得用于AD治疗的NMN药物。

作为优选的，在药物组合物的制备工艺中的低级醇是指乙醇或丁二醇，更优选为乙醇。

作为优选的，在药物组合物的制备工艺中的浓缩是指减压浓缩。

在本发明中，术语“药学上可接受的辅料”包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂等，它们与药物活性成分相容。运用药学上可接受的辅料制备药物制剂对本领域普通技术人员来说是公知的。

本发明的药物组合物包含本发明NMN和高山火绒草提取物组合物作为活性成分，将该组合物和药学上可接受的辅剂(如本领域普通技术人员所熟知的载体、赋形剂、稀释剂等)组合在一起，配制成各种制剂，优选为固体制剂和液体制剂，如片剂、丸剂、胶囊、粉剂、混悬剂、颗粒剂、糖浆剂、乳液剂、悬浮液等剂型以及各种缓释剂型，优选以口服给药形式。

本发明的药物组合物用于抑制AD发生发展进程中的氧化应激损伤。

本案发明人发现，高山火绒草提取物中咖啡酰奎宁酸类物质的含量会显著影响药物组合物的效果，而咖啡酰奎宁酸类物质容易在高山火绒草炮制(冻融或烘干)的过程中损失，唯有使用高山火绒草鲜草或细胞培养物作为提取原料时，才能保证药物组合物的效能。咖啡酰奎宁酸类物质可能是提高大脑内胆碱的传递的主要成分，其与NMN合用，能显著降低NMN在AD治疗中的用药浓度。

具体实施方式

以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。

实施例1高山火绒草提取物的制备

准确称量高山火绒草植物细胞培养物1000g(含水率90％以上)，充分悬混后，以料液比1:2(m/v)加入95％浓度的乙醇2000mL，搅拌混合后，超声处理15min(超声功率：300w，超声温度：25℃)；向超声破壁处理产物中加入8L纯水，在80-120℃的条件下高温浸提1.5h；浸提产物10000g离心10min取上清，上清液经减压浓缩后冻干即得高山火绒草提取物。

实施例2药物组合物的制备

准确称量4g NMN与80g高山火绒草提取物等比倍比混合均匀后，即得药物组合物。

实施例3药物组合物对Tg2576转基因小鼠的学习认知干预实验

实验材料：

1)实验动物：8周龄Tg2576转基因雄性小鼠48只，8周龄相同遗传背景C57BL/6J雄性小鼠8只，均购自赛业(苏州)生物科技有限公司，于我司清洁级动物房分组暂养。

2)试验药物：

本发明实施例2制备的药物组合物；

NMN:邦泰生物工程(深圳)有限公司。

3)主要实验仪器

Morris水迷宫系统(包括摄像和分析系统)购自上海软隆科技发展有限公司。

4)实验方法：

分组：

将48只Tg2576转基因雄性小鼠随机分为6组，提取物一组、提取物二组、药物组、NMN对照一组、NMN对照二组及空白对照组，每组8只；8只同品系C57BL/6J小鼠为对照组。

给药：

将小鼠正常喂养至12周龄(体重约20g/只)，用药实验组用药物组合物灌胃12周，空白对照组及对照组以同体积生理盐水灌胃12周，每日灌胃一次。具体分组及给药如下：

提取物一组：正常饲养至12周龄后，将高山火绒草提取物溶于生理盐水后，按6000ng/只/天每日连续灌胃12周；

提取物二组：正常饲养至12周龄后，将高山火绒草提取物溶于生理盐水后，按600mg/只/天每日连续灌胃12周；

药物组：正常饲养至12周龄后，将药物组合物(以NMN质量300ng/只/天计)溶于0.5ml生理盐水，每日连续灌胃12周；

NMN对照一组：正常饲养至12周龄后，将NMN溶于生理盐水，按300ng/只，每日连续灌胃12周(灌注药物体积0.5ml)；

NMN对照二组：正常饲养至12周龄后，将NMN溶于生理盐水，按3000ng/只，每日连续灌胃12周(灌注药物体积0.5ml)；

空白对照组：正常饲养至12周龄后，每日用0.5ml生理盐水灌胃，连续灌胃12周。

对照组：正常饲养至12周龄后，每日用0.5ml生理盐水灌胃，连续灌胃12周。

5)Morris水迷宫实验：

用药结束第二天开始Morris水迷宫定位巡航实验，巡航实验历时6天，其中训练5天，正式测试1天。在池壁上悬挂4个易于辨识的入水点标识，同时对应的将水池分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四个象限，在第Ⅲ象限内设置隐匿平台。小鼠训练第一天，隐匿平台露出水面1cm左右，并在其上端放置红色旗形标识便于受训小鼠识别并记忆；训练第二至五天，将隐匿平台置于水下1cm左右，并拆除其上端的旗形标识；小鼠每天逐一从每个象限入水点处各入水一次，由图像采集及处理系统记录小鼠航行轨迹、找到隐匿平台的时间(即逃避潜伏期)等；训练期间，若受训小鼠60s内未找到隐匿平台，则逃避潜伏期按60s计算，并人为引导小鼠至平台休息20s后捞出；第六天进行正式测试，测试方法与训练发放一致，并采集各项数据。

Morris水迷宫空间探索实验，在受试小鼠完成定位巡航试验次日进行。小鼠入水步骤不变，将位于第Ⅲ象限内的隐匿平台拆除，记录其在5min内在第Ⅲ象限内的滞留时长并计算穿台次数。

表1各组受试小鼠水迷宫巡航实验成绩

组别	第1天(s)	第2天(s)	第3天(s)	第4天(s)	第5天(s)	第6天(s)
							提取物一组	49.27	47.35	46.37	43.65	41.73	40.69
提取物二组	49.09	46.53	43.57	42.88	42.14	39.58
							药物组	50.02	47.61	42.52	35.16	30.19	28.24
NMN对照一组	49.07	47.61	43.57	41.36	40.19	39.64
							NMN对照二组	47.72	47.05	42.71	34.98	31.64	27.92
空白对照组	48.87	46.63	45.37	43.76	41.99	40.18
							对照组	48.93	46.03	41.67	34.24	30.43	28.46

表2用药后各组小鼠水迷宫探索实验成绩

在水迷宫巡航实验中，随着训练时间的延长，各受试组小鼠的平均逃避潜伏期时长均呈现缩短的趋势，说明巡航训练有效。训练第一天，各受试组小鼠的平均训练成绩差异不显著，从第四天开始，药物组、NMN对照二组和对照组小鼠的平均训练成绩相比于空白对照组差异显著，但提取物组与空白对照组差异不显著。第六天巡航测试时，药物组、NMN对照二组和对照组小鼠的平均训练成绩相比于空白对照组差异极显著，但提取物组与空白对照组仍然差异不显著。

在随后的水迷宫空间探索试验中，各受试组小鼠的成绩呈现与水迷宫巡航实验近似的效果。

通过以上实验说明，药物组合物和高用药浓度的NMN均能显著抑制AD发生发展进程中的氧化应激损伤，但是单独的高山火绒草提取物对于抑制AD发生发展进程中的氧化应激损伤效果不显著。

上述实施例是发明的最优实施例，在本发明技术方案中关于药物组方配比的范围内所制备的组合物，均具有近似的技术功效。本领域技术人员在本发明技术思想的指导下，通过简单的技术替换实现近似技术效果的技术方案，应均属于本发明的保护范围。