阅读说明：本技术 一种用于迟滞早期帕金森发展进程的药物组合物 (Pharmaceutical composition for delaying early Parkinson development process ) 是由 沈洁 沈艳 于 2020-07-02 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种包含NMN的药物组合物及其制备方法,用于迟滞早期帕金森病的发展进程。NMN对迟滞PD模型小鼠早期帕金森发展进程有一定的作用效力,且呈现剂量依赖性,不如药物组合物的迟滞效果,在相同用药时长时,组合物对迟滞PD模型小鼠早期帕金森发展效果显著优于NMN。组合物对迟滞PD模型小鼠早期帕金森发展进程呈时间依赖性,用药时间越长,迟滞效果越好,但是治疗效果不及预防效果。(The invention provides a pharmaceutical composition containing NMN and a preparation method thereof, which are used for delaying the development process of early-stage Parkinson's disease. The NMN has certain effect efficacy on the delayed PD model mouse early-stage Parkinson development process, presents dose dependence, is not as good as the delayed effect of a pharmaceutical composition, and has a remarkably better effect on the delayed PD model mouse early-stage Parkinson development than the NMN when the dosage is the same. The composition is time-dependent on the early Parkinson development process of the delayed PD model mouse, the longer the administration time is, the better the delayed effect is, but the treatment effect is not as good as the prevention effect.)

一种用于迟滞早期帕金森发展进程的药物组合物

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体而言，本发明提供一种用于迟滞早期帕金森发展进程的药物组合物。

背景技术

帕金森病(Parkinson，s disease，PD)是一种老年常见的慢性进展性神经系统变性终身性疾病,其病例特点是黑质-纹状体通路DA能神经元变化、缺失，导致中脑黑质多巴胺递质含量明显减少。氧化应激损伤被认为是帕金森发病的重要原因之一，其致病机理是：正常生物体内存在着自由基清除系统，在脑内主要有超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和还原型谷胱甘肽等，能及时地将多余的自由基清除出去，避免脑内细胞受其损伤。在正常情况下，自由基的产生和清除处于平衡状态，一旦平衡被打破，自由基的产生会增多或者清除能力会减弱，其结果导致自由基的毒性作用则占优势地位，引发细胞和机体损伤，从而诱发帕金森。

研究发现，NMN可以提高神经细胞存活率，减少细胞凋亡，恢复NPD+和ATP水平，抑制细胞凋亡，抵御机体氧化应激损伤，改善线粒体抑制剂诱导的能量代谢障碍，是治疗帕金森的潜在临床药物。然而其高昂的制造成本和超高的用药浓度限制了NMN治疗PD的临床推广和应用，因此降低制造成本或者降低用药浓度，成为将NMN用于PD治疗的关键。

发明内容

本发明提供一种包含NMN的药物组合物，用于迟滞早期帕金森病的发展进程。本发明还提供一种用于迟滞早期帕金森病的发展进程的NMN药物组合物的制备方法。

本发明提供的药物组合物包含NMN和高山火绒草提取物。药物组合物是指用于配制成药物的具有医疗活性的组合物，除医疗活性组合物外，还包括适量药学上可接受的辅料。

更进一步的，本发明的药物组合物中，NMN：高山火绒草提取物的质量比为1-10：40-100，优选为2-5:50-80，更为优选为1：20。

当采用高山火绒草鲜草或植物细胞培养物作为提取原料，优选包括如下步骤的提取方法：

1)向提取原料中加入有机试剂并混合均匀；

2)对混合产物进行超声破壁处理；

3)对破壁处理产物进行高温水浸提；

4)对浸提产物进行固液分离并保留液体；

5)对分离所得液体进行浓缩后冻干即得高山火绒草提取物。

作为优选的，高山火绒草的提取原料是高山火绒草植物细胞培养物。

更进一步的，在称取配方量的NMN与高山火绒草提取物均匀混合即得药物组合物。

更进一步的，在药物组合中加入适量的药学上可接受的辅料并制剂成型即得用于迟滞早期帕金森发展进程的药物。

在药物组合物的制备工艺中，优选包括如下过程的制备方法：

1)向1份质量的高山火绒草鲜草粉末或鲜高山火绒草细胞培养物中加入2倍体积的低级醇后(料液比1:2(m/v))混合均匀；

2)混合产物在25-30℃的条件下200-300W超声破壁处理10-30min；

3)向超声破壁处理产物中加入5-10倍体积的纯水，在80-120℃的条件下浸提1-2h；

4)浸提产物用4000-10000g离心进行固液分离并保留液体；

5)对分离所得液体进行浓缩后并冻干即得高山火绒草提取物；

6)称取配方量的NMN,与高山火绒草提取物等比倍比混合即得药物组合物；

7)在药物组合物中加入适量的药学上可接受的辅料并制剂成型即得用于迟滞早期帕金森发展进程的药物。

作为优选的，在药物组合物的制备工艺中的低级醇是指乙醇或丁二醇，更优选为乙醇。

作为优选的，在药物组合物的制备工艺中的浓缩是指减压浓缩。

在本发明中，术语“药学上可接受的辅料”包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂等，它们与药物活性成分相容。运用药学上可接受的辅料制备药物制剂对本领域普通技术人员来说是公知的。

本发明的药物组合物包含本发明NMN和高山火绒草提取物组合物作为活性成分，将该组合物和药学上可接受的辅剂(如本领域普通技术人员所熟知的载体、赋形剂、稀释剂等)组合在一起，配制成各种制剂，优选为固体制剂和液体制剂，如片剂、丸剂、胶囊、粉剂、混悬剂、颗粒剂、糖浆剂、乳液剂、悬浮液等剂型以及各种缓释剂型，优选以口服给药形式。

本发明的药物组合物用于迟滞早期帕金森病发展进程的药物。

本案发明人发现，高山火绒草提取物中咖啡酰奎宁酸类物质的含量会显著影响药物组合物的效果，而咖啡酰奎宁酸类物质容易在高山火绒草炮制(冻融或烘干)的过程中损失，唯有使用高山火绒草鲜草或细胞培养物作为提取原料时，才能保证药物组合物的效能。咖啡酰奎宁酸类物质可能是提高大脑内胆碱的传递的主要成分，其与NMN合用，能显著降低NMN在迟滞早期帕金森发展进程的药物的用药浓度并提升NMN的作用效力。

具体实施方式

以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。

实施例1高山火绒草提取物的制备

准确称量高山火绒草植物细胞培养物1000g(含水率90％以上)，充分悬混后，以料液比1:2(m/v)加入95％浓度的乙醇2000mL，搅拌混合后，超声处理15min(超声功率：300w，超声温度：25℃)；向超声破壁处理产物中加入8L纯水，在80-120℃的条件下高温浸提1.5h；浸提产物10000g离心10min取上清，上清液经减压浓缩后冻干即得高山火绒草提取物。

实施例2药物组合物的制备

准确称量4g NMN与80g高山火绒草提取物等比倍比混合均匀后，即得药物组合物。

实施例3MPTP模型小鼠行为学测试

实验材料：

1)实验动物：

8周龄C57BL/6雄性小鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，自由进食饮水，动物房12h光暗交替，平均温度25℃暂养。

2)主要仪器：

自制小鼠爬杆、悬挂仓。

3)主要试剂：

MPTP：Sigma

4)药物：

NMN:邦泰生物工程(深圳)有限公司；

药物组合物：按照实施例2自制。

实验方法：

1)小鼠PD模型建立：

利用爬杆法筛选小鼠：暂养一周后开始造模，造模前对小鼠进行爬杆训练，先引导小鼠在15s内由杆顶爬至杆底，每天每只小鼠训练4次，一周后进行测定，选用四肢并用且一次顺利从杆上爬下的小鼠进行造模。

MPTP模型建立：用生理盐水溶解MPTP，以30㎎/kg/d皮下注射，每周两次，持续5周。模型空白组给予300微升/只的生理盐水皮下注射，注射时程同模型组。

2)动物分组及处理：

将80只筛选合格的造模小鼠，随机分成10组，每组8只。

药物组合物一组：造模小鼠暂养至十周龄，将药物组合物(以NMN质量300ng/只/天计)溶于0.5ml生理盐水，每日连续灌胃15周后开始造模，造模期间仍每天持续灌胃，至小鼠四十周龄；

药物组合物二组：造模小鼠暂养至十五周龄，将药物组合物(以NMN质量300ng/只/天计)溶于0.5ml生理盐水，每日连续灌胃10周后开始造模，造模期间持续灌胃，至小鼠四十周龄；

药物组合物三组：造模小鼠暂养至二十周龄，将药物组合物(以NMN质量300ng/只/天计)溶于0.5ml生理盐水，每日连续灌胃5周后开始造模，造模期间持续灌胃，至小鼠四十周龄；

药物组合物四组：造模小鼠暂养至二十五周龄，将药物组合物(以NMN质量300ng/只/天计)溶于0.5ml生理盐水，每日连续灌胃并同时开始造模，造模期间持续灌胃，至小鼠四十周龄；

药物组合物五组：造模小鼠暂养至二十五周龄，开始造模，5周后，将药物组合物(以NMN质量300ng/只/天计)溶于0.5ml生理盐水，每日连续灌胃，至小鼠四十周龄；

药物组合物六组：造模小鼠暂养至二十五周龄，开始造模，10周后，将药物组合物(以NMN质量300ng/只/天计)溶于0.5ml生理盐水，每日连续灌胃，至小鼠四十周龄；

药物组合物对照组：造模小鼠暂养至二十五周龄，开始造模，造模完成后，每日灌胃0.5ml生理盐水，至小鼠四十周龄；

NMN对照一组：造模小鼠暂养至十周龄，将NMN(30ng/只/天计)溶于0.5ml生理盐水，每日连续灌胃15周后开始造模，造模期间仍每天持续灌胃，至小鼠四十周龄；

NMN对照二组：造模小鼠暂养至十周龄，将NMN(300ng/只/天计)溶于0.5ml生理盐水，每日连续灌胃15周后开始造模，造模期间仍每天持续灌胃，至小鼠四十周龄；

对照组：自小鼠二十五周龄开始，每日灌胃0.5ml生理盐水，至小鼠四十周龄。

3)爬杆实验

自制约高60cm、直径1.2cm的金属杆，外面覆以纱布避免小鼠打滑，自39周龄开始进行爬杆训练，先引导小鼠从杆顶爬到杆底，每只每天训练4次，一周后进行爬杆测试。测试时，持小鼠尾部，将其头向下置于杆顶，每只受试小鼠测试5次，每次间隔1min，按照以下标准评分，计算平均值。

表1 PD小鼠爬杆测试评分标准

表2 PD小鼠爬杆测试成绩

组别	平均成绩(分)
		药物组合物一组	1.103
药物组合物二组	1.323
		药物组合物三组	1.872
药物组合物四组	2.579
		药物组合物五组	4.113
药物组合物六组	4.038
		药物组合物对照组	4.192
NMN对照一组	4.006
		NMN对照二组	2.906
对照组	0.576

4)悬挂实验

自制玻璃悬挂仓，在长宽高分别为50cm╳40cm╳30cm的玻璃缸开口端面，向下开设深度为1cm，直径为1.5cm的U型槽，在相对应的U型槽放置一直径为1.2cm的金属杆，玻璃缸开口端面加盖。

测试时，受试小鼠悬挂于金属杆上，记录悬挂开始至掉落的时长，按下述标准评分：

表3 PD小鼠悬挂测试评分标准

分值	评分标准
		0	0-4s
1	5-9s
		2	10-14s
3	15-19s
		4	20-24s
5	25-29s
		6	≥30s

表4 PD小鼠爬悬挂测试成绩

组别	平均成绩(分)
		药物组合物一组	4.661
药物组合物二组	4.537
		药物组合物三组	3.992
药物组合物四组	3.138
		药物组合物五组	2.685
药物组合物六组	2.937
		药物组合物对照组	0.384
NMN对照一组	0.545
		NMN对照二组	2.997
对照组	5.394

在爬杆实验测试和悬挂试验测试中，各受试组小鼠的测试成绩的变化趋势一致。NMN对迟滞PD模型小鼠早期帕金森发展进程有一定的作用效力，且呈现剂量依赖性，不如药物组合物的迟滞效果，在相同用药时长时，组合物对迟滞PD模型小鼠早期帕金森发展效果显著优于NMN。组合物对迟滞PD模型小鼠早期帕金森发展进程呈时间依赖性，用药时间越长，迟滞效果越好，但是治疗效果不及预防效果。

上述实施例是发明的最优实施例，在本发明技术方案中关于药物组方配比的范围内所制备的组合物，均具有近似的技术功效。本领域技术人员在本发明技术思想的指导下，通过简单的技术替换实现近似技术效果的技术方案，应均属于本发明的保护范围。