一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素及其制备方法
阅读说明：本技术 一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素及其制备方法 (Medicine-food homologous enzyme suitable for patients with hyperuricemia or gout and preparation method thereof ) 是由 唐美荣 于 2020-07-29 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素及其制备方法,本发明以乌鞘蛇、阿胶、桔梗、余甘子、葛根、布渣叶、荜茇、郁李仁等为原料制成酵素产品,所有原料均在卫健委公布的药食同源名单中列出,可日常食用,没有毒副作用,有效控制高尿酸血症或痛风患者血尿酸等指标水平,具有良好的保健效果。(The invention provides a medicinal and edible enzyme suitable for patients with hyperuricemia or gout and a preparation method thereof.)
技术领域
本发明涉及酵素制备技术领域，特别地，涉及一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素及其制备方法。
背景技术
高尿酸血症是以体内嘌呤代谢紊乱、尿酸生成增加及(或)尿酸***减少，使得尿酸在体内沉积为特征的疾病，严重时可造成病理生理的改变，引发痛风和尿酸性肾病等。因内源性嘌呤代谢产生的尿酸水平基本恒定，故体内尿酸水平主要受外界摄入富含嘌呤或核酸蛋白食物的影响。国内诊断标准为男性血尿酸﹥417μmol/L(7.0mg/ml)，女性血尿酸﹥357μmol/L(6.0mg/ml)时则称为高尿酸血症。近年来，随着人民生活水平的提高和饮食结构的改变，我国高尿酸血症的患病率有非常明显的上升趋势。
痛风是单钠尿酸盐沉积于骨关节、肾脏和皮下等部位，引发的急、慢性炎症和组织损伤，与嘌呤代谢紊乱及(或)尿酸***减少所致的高尿酸血症直接相关，属于代谢性风湿病范畴。其临床特点是由高尿酸血症、尿酸盐沉积所导致的反复发作的急、慢性关节炎和软组织损伤,尿酸性肾结石所导致的痛风性肾病。痛风发病的关键生化基础是高尿酸血症，研究表明约有5～10％的高尿酸血症会发展为痛风，且沿海、发达地区痛风患病率高于内陆地区，男性高于女性。
目前不仅是高尿酸血症和痛风的患病率在逐年上升，患病年龄也趋于年轻化，应该引起人们的关注。但是，高尿酸症状和痛风关节炎痛症没有任何一种根治方法，只能缓解急性病发痛苦。现有技术中，治疗痛风主要有西药、中药、针灸，中药汤剂、中成药、痛风茶等。西药，痛风患者主要有口服抗生素、消炎痛、秋水仙碱、别嘌醇之类的镇痛类药物、消炎类药物和***类药物，起到暂时缓解疼痛的作用，但同时也会产生容易败胃伤肝肾的副作用。中药治疗痛风是以清热利湿、活血通络、利尿排酸为指导原则，但辨症施治、辨症用药要求较高、难度大。辨症施治痛风的药方使用各有不同，使用的普遍性较低。同时，中药汤剂还服用过程也存在煎煮麻烦的弊端；中成药虽然使用方便，但由于不能辨症用药，造成最后效果的确定性不强、难以普及的弊病。针灸，技术比较高超的针灸师，可以很好治疗痛风，而且没有副作用，治疗后的稳定性也比较好，但针灸治疗的技术要求比较高，治疗时间也比较长。
在痛风的各种诱发因素中，饮食因素占首位，因此通过合理膳食营养干预来缓解高尿酸血症和痛风患者的临床症状，保障机体营养、提高患者生活质量，具有非常重大的意义。
发明内容
本发明目的在于提供一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素及其制备方法，有效控制高尿酸血症或痛风患者血尿酸等指标水平，可日常食用。
为实现上述目的，本发明提供了一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素的制备方法，以重量份计，具体步骤如下：
(1)先将100份桔梗、30～40份余甘子、20～25份葛根、10～15份布渣叶、8～10份荜茇和5～8份郁李仁各自粉碎成粉并混合，得到混合粉，然后将混合粉利用乙醇、乙酸异丙酯、水以体积比10～12：3～4：100混合而成的混合溶剂进行提取，得到提取液，复合酶酶解，浓缩得浓缩液；
(2)再将70～80份乌鞘蛇、5～8份阿胶各自粉碎成粉，倒入120～150份水中，研磨，蛋白酶酶解，接入米曲霉，第一次发酵，得中间发酵物；
(3)然后向中间发酵物中加入步骤(1)所得浓缩液，搅拌混匀，接入嗜热链球菌，第二次发酵，再接入米曲霉，第三次发酵，离心取上清，喷雾干燥，即得所述的一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素；
其中，以重量份计，所述复合酶包含：风味蛋白酶1份，纤维素酶0.5～0.8份，木质素酶0.3～0.4份，淀粉酶0.3～0.4份，***糖苷酶0.2～0.3份，木糖糖苷酶0.1～0.2份。
优选的，各原料各自粉碎至100～200目。
优选的，步骤(1)中，所述混合溶剂是将乙醇和乙酸异丙酯加入水中，超声波振荡均匀而得。
优选的，步骤(1)中，采用闪式破碎提取器进行破碎提取，提取电压为150～200V，提取时间为5～8分钟。
优选的，步骤(1)中，复合酶的用量为桔梗重量的0.003～0.005倍，酶解的工艺条件为：pH＝5～6，温度50～55℃，酶解时间3～5小时。
优选的，步骤(1)中，采用低温冷冻浓缩，具体温度条件为：-30～-35℃。
优选的，步骤(2)中，采用风味蛋白酶进行蛋白酶酶解，具体条件为：pH＝5～6，温度45～50℃，酶解时间2～3小时。
优选的，步骤(2)中，米曲霉的接种量为4～8％，第一次发酵的工艺条件为：30～35℃发酵8～10小时。
优选的，步骤(3)中，嗜热链球菌的接种量为2～3％，第二次发酵的工艺条件为：40～42℃发酵3～4小时。
优选的，步骤(3)中，米曲霉的接种量为6～8％，第三次发酵的工艺条件为：30～35℃发酵6～8天。
优选的，步骤(3)中，采用封闭循环式喷雾干燥法进行干燥，具体工艺条件如下：将用于干燥的氮气加热至150～180℃，出风温度设置为100～120℃，其中，氮气的压力为0.6～0.8MPa，流量为50～60m3/h。
利用上述制备方法得到的一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素。
本发明具有以下有益效果：
本发明以乌鞘蛇、阿胶、桔梗、余甘子、葛根、布渣叶、荜茇、郁李仁等为原料制成酵素产品，所有原料均在卫健委公布的药食同源名单中列出，可日常食用，没有毒副作用，有效控制高尿酸血症或痛风患者血尿酸等指标水平，具有良好的保健效果。本发明所得药食同源酵素中含有生物碱、黄酮、小分子肽等，一方面这些成分单独使用具有一定的降尿酸作用，另一方面，小分子肽能够载着生物碱和黄酮快速进入血液，抑制嘌呤合成，从而进一步增强降尿酸作用。
乌鞘蛇和阿胶含有丰富的蛋白质，经酶解、发酵处理，降解为小分子肽或氨基酸，它们可以经过肠道毛细血管直接吸收，转运全身起效，可以控制嘌呤合成的PRPP酰胺转移酶，从而抑制嘌呤的合成抑制嘌呤代谢。小分子肽或氨基酸可以干扰黄嘌呤氧化酶等嘌呤转化为尿酸的酶，从而控制体内尿酸含量。
桔梗、郁李仁含有丰富的黄酮，余甘子、葛根、荜茇含有丰富的生物碱，布渣叶含有封堵的生物碱和黄酮，其中，生物碱可以特异性结合尿酸形成复合物，能抑制嘌呤合成和嘌呤代谢，减少体内尿酸含量而消除尿酸；黄酮是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，阻止核酸的氧化，起到降低嘌呤含量的作用；可以降低血糖和甘油三酯，降低毛细血管脆性，增加通透性可以减轻肾脏细胞压力，透过更多尿酸。同时可以稳定肾蛋白小管，有利于肾脏代谢尿酸。
桔梗、余甘子、葛根、布渣叶、荜茇、郁李仁制成混合粉后利用乙醇、乙酸异丙酯、水的混合溶剂进行提取，其中水的极性最大，乙醇次之，乙酸异丙酯极性最小，通过三者搭配，有利于这些原料中有效成分的溶出(有效成分极性差异大，既有极性较大的季铵型生物碱、黄酮醇等，又有极性较小的脂肪胺类生物碱、异黄酮等，依据相似相溶原理，极性最大的水有利于极性较大的季铵型生物碱、黄酮醇等的溶出，极性最小的乙酸异丙酯有利于极性较小的脂肪胺类生物碱、异黄酮等的溶出，通过溶剂组合促使不同极性的有效成分溶出)。风味蛋白酶、纤维素酶、木质素酶、淀粉酶、***糖苷酶、木糖糖苷酶等组成的复合酶酶解，可以降解原料中的蛋白质、纤维素、木质素、淀粉、糖等，生成小分子肽、氨基酸、寡糖等，有利于降低血尿酸水平。
之所以将原料分成两部分分别进行处理，是因为乌鞘蛇和阿胶均为动物源原料，含有大量的蛋白质，直接提取有困难，也不能产生降低血尿酸水平的有益物质(大分子蛋白质降解生成的小分子肽、氨基酸等)。乌鞘蛇和阿胶经蛋白酶酶解后降解一部分大分子蛋白质，接入米曲霉，借助米曲霉的发酵产蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶等，对乌鞘蛇和阿胶中成分进一步降解。然后加入桔梗等酶解发酵生成的浓缩液，接入嗜热链球菌进行第二次发酵产乳酸，少量乳酸有助于吸收和代谢外源核苷和嘌呤碱，而且发酵过程中有利于大分子蛋白质的进一步降解，从而生成前述有益的小分子肽或氨基酸。最后接入米曲霉进行第三次发酵，借助米曲霉的发酵产蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶等，进行更为彻底的降解，产生有益于降低血尿酸水平的小分子物质。
除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面将对本发明作进一步详细的说明。
具体实施方式
以下对本发明的实施例进行详细说明，但是本发明可以根据权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。
实施例1：
一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素的制备方法，以重量份计，具体步骤如下：
(1)先将100份桔梗、30份余甘子、25份葛根、10份布渣叶、10份荜茇和5份郁李仁各自粉碎成粉并混合，得到混合粉，然后将混合粉利用乙醇、乙酸异丙酯、水以体积比12：3：100混合而成的混合溶剂进行提取，得到提取液，复合酶酶解，浓缩得浓缩液；
(2)再将80份乌鞘蛇、5份阿胶各自粉碎成粉，倒入150份水中，研磨，蛋白酶酶解，接入米曲霉，第一次发酵，得中间发酵物；
(3)然后向中间发酵物中加入步骤(1)所得浓缩液，搅拌混匀，接入嗜热链球菌，第二次发酵，再接入米曲霉，第三次发酵，离心取上清，喷雾干燥，即得所述的一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素；
其中，以重量份计，所述复合酶包含：风味蛋白酶1份，纤维素酶0.5份，木质素酶0.4份，淀粉酶0.3份，***糖苷酶0.3份，木糖糖苷酶0.1份。
各原料各自粉碎至200目。
步骤(1)中，所述混合溶剂是将乙醇和乙酸异丙酯加入水中，超声波振荡均匀而得。
步骤(1)中，采用闪式破碎提取器进行破碎提取，提取电压为150V，提取时间为8分钟。
步骤(1)中，复合酶的用量为桔梗重量的0.003倍，酶解的工艺条件为：pH＝6，温度50℃，酶解时间5小时。
步骤(1)中，采用低温冷冻浓缩，具体温度条件为：-30℃。
步骤(2)中，采用风味蛋白酶进行蛋白酶酶解，具体条件为：pH＝6，温度45℃，酶解时间3小时。
步骤(2)中，米曲霉的接种量为4％，第一次发酵的工艺条件为：35℃发酵8小时。
步骤(3)中，嗜热链球菌的接种量为3％，第二次发酵的工艺条件为：40℃发酵4小时。
步骤(3)中，米曲霉的接种量为6％，第三次发酵的工艺条件为：35℃发酵6天。
步骤(3)中，采用封闭循环式喷雾干燥法进行干燥，具体工艺条件如下：将用于干燥的氮气加热至180℃，出风温度设置为100℃，其中，氮气的压力为0.8MPa，流量为50m3/h。
实施例2：
一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素的制备方法，以重量份计，具体步骤如下：
(1)先将100份桔梗、40份余甘子、20份葛根、15份布渣叶、8份荜茇和8份郁李仁各自粉碎成粉并混合，得到混合粉，然后将混合粉利用乙醇、乙酸异丙酯、水以体积比10：4：100混合而成的混合溶剂进行提取，得到提取液，复合酶酶解，浓缩得浓缩液；
(2)再将70份乌鞘蛇、8份阿胶各自粉碎成粉，倒入120份水中，研磨，蛋白酶酶解，接入米曲霉，第一次发酵，得中间发酵物；
(3)然后向中间发酵物中加入步骤(1)所得浓缩液，搅拌混匀，接入嗜热链球菌，第二次发酵，再接入米曲霉，第三次发酵，离心取上清，喷雾干燥，即得所述的一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素；
其中，以重量份计，所述复合酶包含：风味蛋白酶1份，纤维素酶0.8份，木质素酶0.3份，淀粉酶0.4份，***糖苷酶0.2份，木糖糖苷酶0.2份。
各原料各自粉碎至100目。
步骤(1)中，所述混合溶剂是将乙醇和乙酸异丙酯加入水中，超声波振荡均匀而得。
步骤(1)中，采用闪式破碎提取器进行破碎提取，提取电压为200V，提取时间为5分钟。
步骤(1)中，复合酶的用量为桔梗重量的0.005倍，酶解的工艺条件为：pH＝5，温度55℃，酶解时间3小时。
步骤(1)中，采用低温冷冻浓缩，具体温度条件为：-35℃。
步骤(2)中，采用风味蛋白酶进行蛋白酶酶解，具体条件为：pH＝5，温度50℃，酶解时间2小时。
步骤(2)中，米曲霉的接种量为8％，第一次发酵的工艺条件为：30℃发酵10小时。
步骤(3)中，嗜热链球菌的接种量为2％，第二次发酵的工艺条件为：42℃发酵3小时。
步骤(3)中，米曲霉的接种量为8％，第三次发酵的工艺条件为：30℃发酵8天。
步骤(3)中，采用封闭循环式喷雾干燥法进行干燥，具体工艺条件如下：将用于干燥的氮气加热至150℃，出风温度设置为120℃，其中，氮气的压力为0.6MPa，流量为60m3/h。
实施例3：
一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素的制备方法，以重量份计，具体步骤如下：
(1)先将100份桔梗、35份余甘子、22份葛根、13份布渣叶、9份荜茇和7份郁李仁各自粉碎成粉并混合，得到混合粉，然后将混合粉利用乙醇、乙酸异丙酯、水以体积比11：3.5：100混合而成的混合溶剂进行提取，得到提取液，复合酶酶解，浓缩得浓缩液；
(2)再将75份乌鞘蛇、6份阿胶各自粉碎成粉，倒入130份水中，研磨，蛋白酶酶解，接入米曲霉，第一次发酵，得中间发酵物；
(3)然后向中间发酵物中加入步骤(1)所得浓缩液，搅拌混匀，接入嗜热链球菌，第二次发酵，再接入米曲霉，第三次发酵，离心取上清，喷雾干燥，即得所述的一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素；
其中，以重量份计，所述复合酶包含：风味蛋白酶1份，纤维素酶0.6份，木质素酶0.35份，淀粉酶0.35份，***糖苷酶0.25份，木糖糖苷酶0.15份。
各原料各自粉碎至200目。
步骤(1)中，所述混合溶剂是将乙醇和乙酸异丙酯加入水中，超声波振荡均匀而得。
步骤(1)中，采用闪式破碎提取器进行破碎提取，提取电压为180V，提取时间为7分钟。
步骤(1)中，复合酶的用量为桔梗重量的0.004倍，酶解的工艺条件为：pH＝5，温度52℃，酶解时间4小时。
步骤(1)中，采用低温冷冻浓缩，具体温度条件为：-32℃。
步骤(2)中，采用风味蛋白酶进行蛋白酶酶解，具体条件为：pH＝5.5，温度48℃，酶解时间2.5小时。
步骤(2)中，米曲霉的接种量为6％，第一次发酵的工艺条件为：32℃发酵9小时。
步骤(3)中，嗜热链球菌的接种量为2.5％，第二次发酵的工艺条件为：41℃发酵3.5小时。
步骤(3)中，米曲霉的接种量为7％，第三次发酵的工艺条件为：32℃发酵7天。
步骤(3)中，采用封闭循环式喷雾干燥法进行干燥，具体工艺条件如下：将用于干燥的氮气加热至160℃，出风温度设置为110℃，其中，氮气的压力为0.7MPa，流量为55m3/h。
对比例1
一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素的制备方法，以重量份计，具体步骤如下：
(1)先将100份桔梗、30份余甘子、25份葛根、10份布渣叶、10份荜茇和5份郁李仁、80份乌鞘蛇、5份阿胶各自粉碎成粉并混合，得到混合粉，倒入150份水中，研磨，复合酶酶解，接入米曲霉，第一次发酵，得中间发酵物；
(2)然后接入嗜热链球菌，第二次发酵，再接入米曲霉，第三次发酵，离心取上清，喷雾干燥，即得所述的一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素；
其中，以重量份计，所述复合酶包含：风味蛋白酶1份，纤维素酶0.5份，木质素酶0.4份，淀粉酶0.3份，***糖苷酶0.3份，木糖糖苷酶0.1份。
各原料各自粉碎至200目。
步骤(1)中，复合酶的用量为桔梗重量的0.003倍，酶解的工艺条件为：pH＝6，温度50℃，酶解时间5小时。
步骤(1)中，米曲霉的接种量为4％，第一次发酵的工艺条件为：35℃发酵8小时。
步骤(2)中，嗜热链球菌的接种量为3％，第二次发酵的工艺条件为：40℃发酵4小时。
步骤(2)中，米曲霉的接种量为6％，第三次发酵的工艺条件为：35℃发酵6天。
步骤(2)中，采用封闭循环式喷雾干燥法进行干燥，具体工艺条件如下：将用于干燥的氮气加热至180℃，出风温度设置为100℃，其中，氮气的压力为0.8MPa，流量为50m3/h。
其余同实施例1。
对比例2
在步骤(1)中略去布渣叶；
其余同实施例1。
对比例3
在步骤(2)中略去阿胶；
其余同实施例1。
对比例4
一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素的制备方法，以重量份计，具体步骤如下：
(1)先将100份桔梗、30份余甘子、25份葛根、10份布渣叶、10份荜茇和5份郁李仁各自粉碎成粉并混合，得到混合粉，然后将混合粉利用乙醇、乙酸异丙酯、水以体积比12：3：100混合而成的混合溶剂进行提取，得到提取液，复合酶酶解，浓缩得浓缩液；
(2)再将80份乌鞘蛇、5份阿胶各自粉碎成粉，倒入150份水中，研磨，蛋白酶酶解，接入米曲霉，第一次发酵，得中间发酵物；
(3)然后向中间发酵物中加入步骤(1)所得浓缩液，搅拌混匀，接入嗜热链球菌和米曲霉，第二次发酵，离心取上清，喷雾干燥，即得所述的一种适用于高尿酸血症或痛风患者的药食同源酵素；
其中，以重量份计，所述复合酶包含：风味蛋白酶1份，纤维素酶0.5份，木质素酶0.4份，淀粉酶0.3份，***糖苷酶0.3份，木糖糖苷酶0.1份。
各原料各自粉碎至200目。
步骤(1)中，所述混合溶剂是将乙醇和乙酸异丙酯加入水中，超声波振荡均匀而得。
步骤(1)中，采用闪式破碎提取器进行破碎提取，提取电压为150V，提取时间为8分钟。
步骤(1)中，复合酶的用量为桔梗重量的0.003倍，酶解的工艺条件为：pH＝6，温度50℃，酶解时间5小时。
步骤(1)中，采用低温冷冻浓缩，具体温度条件为：-30℃。
步骤(2)中，采用风味蛋白酶进行蛋白酶酶解，具体条件为：pH＝6，温度45℃，酶解时间3小时。
步骤(2)中，米曲霉的接种量为4％，第一次发酵的工艺条件为：35℃发酵8小时。
步骤(3)中，嗜热链球菌的接种量为3％，米曲霉的接种量为6％，第二次发酵的工艺条件为：40℃发酵6天。
步骤(3)中，采用封闭循环式喷雾干燥法进行干燥，具体工艺条件如下：将用于干燥的氮气加热至180℃，出风温度设置为100℃，其中，氮气的压力为0.8MPa，流量为50m3/h。
对比例5
复合酶中略去木糖糖苷酶；
其余同实施例1。
试验例
取雄性小鼠(BALB/c小鼠，(20±2)g)200只，随机分为10组，每组20只。用蒸馏水溶解实施例1～3或对比例1～5所得酵素，得到酵素水，蒸馏水的用量为酵素的5倍。除对照组外，每组均以酵母30g/kg灌胃，连续一周。从第3天开始，其中两组作为对照组和模型组，小鼠每天上午8点灌胃生理盐水；剩余的8组分别在每天上午8点灌胃所得酵素水，连续给药5天，根据每次给药前的小鼠体重计算给药容积(灌胃量为0.2ml/10g)。末次给药1天后，从小鼠尾静脉采血，室温下放置1小时后以3000r/min离心10min，取血清，用尿酸试剂盒(磷钨酸法)测定血尿酸值。
并用尿素试剂盒、肌酐试剂盒和RT-9600半自动生化分析仪测定血清尿素氮(BUN)和肌酐水平。男性血尿酸﹥417μmol/L(7.0mg/ml)，女性血尿酸﹥357μmol/L(6.0mg/ml)
实验结果见表1。
表1.实验结果
血清尿酸(μmol/L)
血清尿素氮(mmol/L)
血清肌酐(肝脏，μmol/L)
对照组
58.95
6.03
33.46
模型组
162.35
10.56
230.77
实施例1
60.31
6.95
36.25
实施例2
60.25
6.93
36.07
实施例3
60.04
6.89
35.95
对比例1
80.04
8.03
45.06
对比例2
73.28
7.88
40.12
对比例3
72.36
7.67
39.85
对比例4
82.59
8.45
46.73
对比例5
65.22
6.52
35.67
由表1可知，实施例1～3所得尿素可以有效降低血清尿酸、血清尿素氮和血清肌酐水平，适合高尿酸血症或痛风患者食用。
对比例1各原料不分成两部分处理，直接混合一并处理，高蛋白含量的乌鞘蛇、阿胶无法充分降解，影响酵素的保健效果；对比例2在步骤(1)中略去布渣叶，对比例3在步骤(2)中略去阿胶，酵素的保健效果均明显变差，说明各原料协同促进血尿酸等指标的降低；对比例4在步骤(3)中，同时接入嗜热链球菌和米曲霉，产乳酸过多，不利于血尿酸等指标的降低；对比例5的复合酶中略去木糖糖苷酶，血尿酸等指标略高，说明糖苷酶的配合有利于血尿酸等指标的降低。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。