阅读说明：本技术 一种大熊猫尿液激素的校正方法 (Correction method of panda urine hormone ) 是由 黄河 侯蓉 张志和 胡贤彪 张东升 王成东 兰景超 黄祥明 于 2020-07-10 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种大熊猫尿液激素的校正方法,所述校正方法包括如下步骤：采集大熊猫尿液；测定大熊猫尿液中的原始激素浓度以及尿比重；按照校正结果＝原始激素浓度/Lg尿比重/500000对原始激素浓度进行校正,得到校正结果；本发明对大熊猫尿液测定的尿比重值直接采用函数转换后进行激素尿比重校正,消除了平均尿比重值存在的代表性不足的问题,且无需事先对特定大熊猫进行尿液采集和计算平均尿比重值,只需对具体尿液进行尿比重测定后,运用公式直接校正激素水平,该校正方法操作简单,校正快捷且准确性好。(The invention discloses a correction method of panda urine hormone, which comprises the following steps: collecting panda urine; measuring the original hormone concentration and the urine specific gravity of the panda urine; correcting the original hormone concentration according to the correction result, namely the original hormone concentration/Lg urine specific gravity/500000 to obtain a correction result; the invention directly adopts function conversion to the urine specific gravity value measured by the panda urine and then carries out hormone urine specific gravity correction, eliminates the problem of insufficient representativeness existing in the average urine specific gravity value, does not need to carry out urine collection and calculation on the average urine specific gravity value in advance, only needs to carry out urine specific gravity measurement on specific pandas and then directly corrects the hormone level by using a formula, and the correction method has simple operation, quick correction and good accuracy.)

一种大熊猫尿液激素的校正方法

技术领域

本发明涉及大熊猫尿液激素校正技术领域，具体涉及一种大熊猫尿液激素的校正方法。

背景技术

尿液中物质的浓度受到饮水、尿量、食物等因素的影响，为了消除这种影响，可通过收集对象24h尿液法、流速校正法、肌酐校正法和比重校正法进行校正，但收集对象24h尿液法和流速校正法存在操作不方便，故较少采用。

在圈养大熊猫管理中，通过检测相应个体大熊猫不同时间段尿液样品中***、孕激素等生殖激素水平，对比分析各时间段***、孕激素等相关激素的变化，从而判断对应大熊猫是否发情以及发情所处阶段，进而在管理中制定具体饲养、繁殖管理等实施方案。但是，大熊猫尿液中激素浓度受到以上所述因素的影响，为使各个不同浓度尿液中激素水平具有对比分析性，在实际激素测定中通过肌酐校正激素水平，根据经过肌酐校正后的激素结果比对分析对应大熊猫不同时间点尿液中***与孕激素等的变化情况。

肌酐校正大熊猫尿液激素结果在大熊猫管理上发挥了很大的作用，并广泛的运用到大熊猫核心种群管理单位；但是，中国内外大熊猫饲养展出等机构由于饲养大熊猫数量少，通常2～4只，并未设置对应的检测部门进行大熊猫尿液肌酐测定；另一方面，在测定肌酐所需的化学试剂中包含：苦味酸，即三硝基苯酚，该物质是需当地的公安部门特殊批准才能购买和运输的易燃易爆试剂；另一种是氢氧化钠，为强碱，除了科研需求，一般大熊猫饲养展出等机构不购置此类化学试剂；因此，在每年大熊猫繁殖季节，成都大熊猫繁育研究基地会派遣激素测定人员前往中国内外大熊猫饲养展出机构进行激素测定。但是，携带苦味酸等测定肌酐试剂却受限。为此，在大熊猫尿液激素肌酐校正上，国内相关大熊猫饲养机构只能求助于当地高校或医院，由于高校或医院距离饲养机构通常较远，送样花费大量时间，或是高校与医院工作人员由于工作安排不能及时对尿液肌酐含量进行检测，造成大熊猫激素校正结果不能及时获得。

目前，Jella Wauters(2018)报道采用尿比重法校正大熊猫尿液激素水平，校正公式为：激素尿比重校正结果＝原始激素浓度×[(平均尿比重值-1.000)/(目标样品尿比重值-1.000)]，平均尿比重值指对特定大熊猫个体采集不少于30个尿液样品检测后计算得到的尿比重平均值。该公式中，对于特定大熊猫个体进行激素尿比重校正之前，需获得该个体以往尿液平均尿比重值。由于大熊猫采食(如不同季节采食不同种类竹子及竹子的不同部位如竹杆、竹叶和竹笋)、发情期与休情期运动量及生理变化、饮水情况等均会影响大熊猫尿液浓度和排尿量，因此报道中即使采集不少于30尿液样品进行检测计算的尿比重平均值不足以代表特定个体大熊猫各个季节、各种生理状况等真实的平均尿比重值。若需获得具有代表性的平均尿比重值，需对特定大熊猫不同年份季节，采食不同食物，不同生理状态情况等进行尿液采集和测定计算平均尿比重值，这将对大熊猫个体进行长期的尿液采集和尿比重检测。同时，在大熊猫管理中，往往需对特定个体临时进行检测和校正激素水平，对于事先没有进行尿液样品采集和计算平均尿比重值的大熊猫个体，将无法采用该激素校正公式。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提供一种大熊猫尿液激素的校正方法，该校正方法操作简单，校正快捷且准确性好。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明第一方面提供一种大熊猫尿液激素的校正方法，该校正方法包括如下步骤：

(a)采集大熊猫尿液；

(b)测定大熊猫尿液中的原始激素浓度以及尿比重；

(c)按照校正结果＝原始激素浓度/Lg尿比重/500000对原始激素浓度进行校正，得到校正结果。

本发明对大熊猫尿液测定的尿比重值直接采用函数转换后进行激素尿比重校正，消除了平均尿比重值存在的代表性不足的问题，且无需事先对特定大熊猫进行尿液采集和计算平均尿比重值，只需对具体尿液进行尿比重测定后，运用公式直接校正激素水平，该校正方法操作简单，校正快捷且准确性好；具体地，本发明校正方法与肌酐校正法对***校正结果相关性r＝0.968，对孕激素校正结果相关性r＝0.98。

本发明中校正结果＝原始激素浓度/Lg尿比重/500000具体是：校正结果＝原始激素浓度除以Lg尿比重，再除以500000；其中Lg尿比重为以10为底尿比重值的对数。

优选地，所述激素为***和/或孕激素。

本发明对尿比重的测定方法不作严格限制，可以根据实际需要选择本领域尿比重的常规测定方法，优选地，所述尿比重的测定方法为比重计法或干化学试纸条法。

更优选地，所述比重计法测定所述尿比重包括：

对尿比重计先进行检验校正，再测定大熊猫尿液的尿比重，测定结束后，对尿比重计进行清洗。

通过先对尿比重计进行检验校正，能够保障尿比重值测定结果的准确性，进而更好的保障尿液激素校正的准确性。

优选地，所述检验校正包括：

在尿比重计的样品槽中添加去离子水，待尿比重计读书固定为1.000时，吸出样品槽中的去离子水。

优选地，所述清洗采用的清洗液为去离子水，并清洗至加入去离子水后尿比重计读书固定为1.000。

在本发明中对大熊猫尿液中原始激素浓度的测定方法不作严格限制，可以采用本领域尿液中激素的常规测定方法，例如，可以采用酶联免疫吸附测定法测定大熊猫尿液中激素的含量；具体地，可以采用专利申请号为CN201310092282.8的中国专利申请

具体实施方式

中公开的大熊猫尿液中原始孕激素含量的检测方法；可以采用专利申请号为201310092471.5的中国专利申请具体实施方式中公开的大熊猫尿液中原始***含量的检测方法。

优选地，所述大熊猫尿液采集方法如下：

对兽舍地面进行清洁、拖干；

将大熊猫置于兽舍内，一旦大熊猫排出小便，采用注射器采集尿液，装入冷冻管并立即放入冰箱冷冻或冷藏。

通过上述方法进行大熊猫尿液采集，能够避免大熊猫被污染，以及尿液长时间暴露在空气中影响尿液中各物质含量。

本发明的有益效果体现在：

本发明对大熊猫尿液测定的尿比重值直接采用函数转换后进行激素尿比重校正，消除了平均尿比重值存在的代表性不足的问题，且无需事先对特定大熊猫进行尿液采集和计算平均尿比重值，只需对具体尿液进行尿比重测定后，运用公式直接校正激素水平，该校正方法操作简单，校正快捷且准确性好；具体地，本发明校正方法与肌酐校正法对***校正结果相关性r＝0.968，对孕激素校正结果相关性r＝0.98。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。在所有附图中，类似的元件或部分一般由类似的附图标记标识。附图中，各元件或部分并不一定按照实际的比例绘制。

图1为本发明实验例中采用肌酐校正法和尿比重校正法对大熊猫尿液中***校正结果的相关性分析；

图2为本发明实验例中采用肌酐校正法和尿比重校正法对大熊猫尿液中孕激素校正结果的相关性分析。

具体实施方式

下面将结合附图对本发明技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。

需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。

实施例1

本实施例为一种大熊猫尿液***的校正方法，该校正方法包括如下步骤：

(a)对兽舍地面进行清洁、拖干；将大熊猫置于兽舍内，一旦大熊猫排出小便，采用注射器采集尿液，装入冷冻管并立即放入冰箱冷藏；

(b)采用申请号为201310092471.5的专利申请中具体实施方式中公开的大熊猫尿液中原始***浓度检测方法检测大熊猫尿液中的原始***浓度；以及采用尿比重计(型号为PAL-10S，品牌ATAGO)测定大熊猫尿液的尿比重；

(c)按照校正结果＝原始***浓度/Lg尿比重/500000对原始***浓度进行校正，得到***校正结果。

实施例2

本实施例为一种大熊猫尿液孕激素的校正方法，该校正方法包括如下步骤：

(a)对兽舍地面进行清洁、拖干；将大熊猫置于兽舍内，一旦大熊猫排出小便，采用注射器采集尿液，装入冷冻管并立即放入冰箱冷藏；

(b)采用申请号为CN201310092282.8的专利申请具体实施方式中公开的大熊猫尿液中原始孕激素浓度的检测方法检测大熊猫尿液中原始孕激素浓度；以及采用尿比重计(型号为PAL-10S，品牌ATAGO)测定大熊猫尿液的尿比重；

(c)按照校正结果＝原始孕激素浓度/Lg尿比重/500000对原始孕激素浓度进行校正，得到孕激素校正结果。

对照例1

本对照例为一种大熊猫尿液***的校正方法，该校正方法包括如下步骤：

(a)对兽舍地面进行清洁、拖干；将大熊猫置于兽舍内，一旦大熊猫排出小便，采用注射器采集尿液，装入冷冻管并立即放入冰箱冷藏；

(b)采用申请号为201310092471.5的专利申请中具体实施方式中公开的大熊猫尿液中原始***浓度检测方法检测大熊猫尿液中的原始***浓度；并采用申请号为201310092471.5的专利申请中具体实施方式中公开的大熊猫尿液中肌酐浓度的检测方法检测大熊猫尿液中的肌酐浓度；

(c)按照校正结果＝原始***浓度/肌酐浓度，对原始***进行校正，得到***校正结果。

对照例2

本对照例为一种大熊猫尿液孕激素的校正方法，该校正方法包括如下步骤：

(a)对兽舍地面进行清洁、拖干；将大熊猫置于兽舍内，一旦大熊猫排出小便，采用注射器采集尿液，装入冷冻管并立即放入冰箱冷藏；

(b)采用申请号为CN201310092282.8的专利申请具体实施方式中公开的大熊猫尿液中原始孕激素浓度的检测方法检测大熊猫尿液中原始孕激素浓度；并采用申请号为CN201310092282.8的专利申请中具体实施方式中公开的大熊猫尿液中肌酐浓度的检测方法检测大熊猫尿液中的肌酐浓度；；

(c)按照校正结果＝原始孕激素浓度/肌酐浓度，对原始孕激素进行校正，得到孕激素校正结果。

实验例

在成都大熊猫繁育研究基地内采集大熊猫萌萌发情期不同时间段的尿液，并分别采用实施例1～2和对照例1～2中的校正方法(既采用肌酐校正法和尿比重校正法)分别对大熊猫尿液中***和孕激素值进行校正，校正结果如下表1所示；

表1不同校正方法对激素的校正结果

对***和孕激素的肌酐校正法和尿比重校正法结果进行相关性分析；分析结果如图1、图2所示，图中，Ec/USG指采用本申请方法进行同一大熊猫萌萌尿液***尿比重校正结果；Ec/Cr指采用肌酐法进行同一大熊猫萌萌尿液***肌酐校正结果；Pg/USG指采用本申请方法进行同一大熊猫萌萌尿液孕激素尿比重校正结果；Pg/Cr指采用肌酐法进行同一大熊猫萌萌尿液孕激素肌酐校正结果；

由图1可知，本申请尿比重校正法与肌酐校正法对***校正结果相关性系数r＝0.968；可见，本申请尿比重校正法与肌酐校正法相关程度好，本申请尿比重校正法对***具有较高的准确性。

由图2可知，本申请尿比重校正法与肌酐校正法对孕激素校正结果相关性系数r＝0.98；可见，本申请尿比重校正法与肌酐校正法相关程度好，本申请尿比重校正法对孕激素具有较高的准确性。

以上仅是申请人大量研究中的部分实验结果，但已经可以说明：

本发明对大熊猫尿液测定的尿比重值直接采用函数转换后进行激素尿比重校正，消除了平均尿比重值存在的代表性不足的问题，且无需事先对特定大熊猫进行尿液采集和计算平均尿比重值，只需对具体尿液进行尿比重测定后，运用公式直接校正激素水平，该校正方法操作简单，校正快捷且准确性好。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求和说明书的范围当中。