一种具有ido抑制活性的缓释片及其制备方法和应用
阅读说明：本技术 一种具有ido抑制活性的缓释片及其制备方法和应用 (Sustained-release tablet with IDO inhibitory activity and preparation method and application thereof ) 是由 霍志强 黄巧萍 王永广 唐睿 姜玉岗 戴信敏 于 2021-06-17 设计创作，主要内容包括：本发明属于药物领域,尤其涉及一种具有IDO抑制活性的缓释片及其制备方法和应用,所述缓释片包括如下质量百分含量的成分：活性成分10％～20％；缓释骨架材料20％～40％；填充剂30％～60％；崩解剂5％～10％；粘合剂2％～10％；润滑剂0.5％～10％。本发明提供的具有IDO抑制活性的缓释片可以在体内以一定的浓度作用较长的时间,维持血药浓度平稳,延长有效抗肿瘤维持时间,在不同环境中释放特性稳定、释放完全,生物利用度高。(The invention belongs to the field of medicines, and particularly relates to a sustained-release tablet with IDO inhibitory activity, a preparation method and an application thereof, wherein the sustained-release tablet comprises the following components in percentage by mass: 10 to 20 percent of active component; 20-40% of slow-release framework material; 30 to 60 percent of filling agent; 5 to 10 percent of disintegrating agent; 2 to 10 percent of adhesive; 0.5 to 10 percent of lubricant. The sustained release tablet with IDO inhibitory activity provided by the invention can act for a long time at a certain concentration in vivo, maintain the blood concentration stably, prolong the effective anti-tumor maintenance time, and has stable release characteristics, complete release and high bioavailability in different environments.)
技术领域
本发明属于药物领域，具体涉及一种具有IDO抑制活性的缓释片及其制备方法和应用。
背景技术
吲哚2,3-双加氧酶(IDO)是细胞内一种含亚铁血红素单体蛋白，于1967年首次被发现。在肿瘤患者的细胞中，IDO介导的色氨酸(Tryptophan,Trp)-犬尿氨酸(Kynurenine,Kyn)代谢途径参与了肿瘤免疫逃逸，而IDO作为诱导肿瘤微环境免疫耐受也产生重要的作用。IDO过度表达，会导致局部色氨酸的耗竭，而色氨酸的耗竭又会导致对色氨酸高度敏感，且在人体免疫系统中执行重要功能的T细胞死亡，用不含色氨酸的培养基培养模拟体内色氨酸缺乏环境，发现小鼠初始T细胞经刺激活化后能表达早期细胞激活信号，但不能表达晚期细胞激活信号，T细胞停止在G1期中期，最终不能分化为细胞毒性效应T细胞，此外，IDO能分化为细胞毒性效应T细胞，IDO可以诱导在肿瘤细胞免疫中发挥主要作用的Th1细胞的调亡，因此，通过抑制IDO，可以恢复人体的免疫系统，从而识别、清除外来的入侵者，如肿瘤细胞、病毒等。
具有式A结构的化合物是一种新型的IDO抑制剂，式中R1为F，R2为CH3，R3为H，R4选自H、CH3、CH2CH3或CH(CH3)2，R5为H，R6、R7代表F、Cl、N(CH3)2或连接成环的有2个O作为杂原子的五元环，R6、R7可以相同或者不同，所述化合物可以通过抑制IDO活性，从而提高免疫系统能力而增强抗肿瘤活性。
所述具有式A结构的化合物需要在体内以一定的浓度作用较长的时间才会起到良好的治疗效果。同时，该化合物具有一定的毒性，一次性摄入较大的量有可能导致明显的毒副作用，因此，为了使该化合物在治疗过程中保持一定浓度，缓释剂型是一种很好的解决方案，但目前现有技术中尚无该化合物的缓释剂型。
发明内容
针对现有技术中存在的上述不足，本发明的目的在于提供一种具有IDO抑制活性的缓释片及其制备方法和应用，所述具有IDO抑制活性的缓释片可以在体内以一定的浓度作用较长的时间，维持血药浓度平稳，延长有效抗肿瘤维持时间，在不同环境中释放特性稳定、释放完全，生物利用度高。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
第一方面，本发明提供了一种具有IDO抑制活性的缓释片，以所述具有IDO抑制活性的缓释片的总质量为100％计，所述具有IDO抑制活性的缓释片包括如下质量百分含量的成分：
所述活性成分为具有式A结构的化合物或其药学上可接受的盐：
式中：
R1为F，R2为CH3，R3为H，R4选自H、CH3、CH2CH3或CH(CH3)2，R5为H，R6、R7代表F、Cl、N(CH3)2或连接成环的有2个O作为杂原子的五元环，R6、R7可以相同或者不同；
所述缓释骨架材料为聚乙烯醇、山嵛酸甘油酯和卡拉胶的混合物，所述聚乙烯醇、山嵛酸甘油酯和卡拉胶的质量比为(2～5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)。
优选的是，所述活性成分为式(1)-(13)所示的化合物中的至少一种：
上述任一方案中优选的是，所述填充剂为淀粉、微晶纤维素、甘露醇、乳糖中的至少一种。
上述任一方案中优选的是，所述崩解剂为羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、低取代羟丙基纤维素中的至少一种。
上述任一方案中优选的是，所述粘合剂为羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素、聚维酮、预胶化淀粉、明胶中的至少一种。
上述任一方案中优选的是，所述润滑剂为硬脂富马酸钠、硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉中的至少一种。
本发明提供的具有IDO抑制活性的缓释片可以在体内以一定的浓度作用较长的时间，可以减少服药次数，维持血药浓度平稳，延长有效抗肿瘤维持时间，在不同环境中释放特性稳定、释放完全(生物利用度高)、在体内和体外均具有良好缓释效果。
第二方面，本发明提供了一种根据第一方面所述的具有IDO抑制活性的缓释片的制备方法，包括如下步骤：
按配方量称取活性成分、缓释骨架材料、填充剂、崩解剂、粘合剂和润滑剂；
将所述活性成分、缓释骨架材料、填充剂、崩解剂和粘合剂混合均匀，得到第一混合物，通过干法制粒，筛整粒，得到干颗粒；
将所述干颗粒与所述润滑剂混合均匀，压片，得到具有IDO抑制活性的缓释片。
优选的是，在得到具有IDO抑制活性的缓释片步骤后，还包括：
对所述具有IDO抑制活性的缓释片包膜成衣。
本发明提供的具有IDO抑制活性的缓释片的制备方法，采用干法制粒后再制片工艺，重现性好，工艺操作简单，无需特殊处理生产设备，中间物料稳定性好、流动性和可压性好、含量均匀性好，完全满足压片的要求，同时制得的片剂表面平整美观。
第三方面，本发明提供了一种根据第一方面所述的具有IDO抑制活性的缓释片在制备用于预防和/或治疗肿瘤疾病药物中的用途。
附图说明
图1为本发明实施例1所得缓释片在动物体内血药浓度曲线图。
具体实施方式
为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的实验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；以下实施例中所用的原材料、仪器和设备等，均可通过市场购买获得或者可通过现有方法获得；所述实验试剂用量，如无特殊说明，均为常规实验操作中试剂用量；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
第一方面，本发明实施例提供了一种具有IDO抑制活性的缓释片，以所述具有IDO抑制活性的缓释片的总质量为100％计，所述具有IDO抑制活性的缓释片包括如下质量百分含量的成分：
所述活性成分为具有式A结构的化合物或其药学上可接受的盐：
式中：
R1为F，R2为CH3，R3为H，R4选自H、CH3、CH2CH3或CH(CH3)2，R5为H，R6、R7代表F、Cl、N(CH3)2或连接成环的有2个O作为杂原子的五元环，R6、R7可以相同或者不同；
所述缓释骨架材料为聚乙烯醇、山嵛酸甘油酯和卡拉胶的混合物，所述聚乙烯醇、山嵛酸甘油酯和卡拉胶的质量比为(2～5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)。
当活性成分含量较低时，缓释片释放缓慢，很有可能在8～12小时内无法释放完全，影响缓释片的生物利用度；当活性成分含量过高时，缓释片释放较快，容易出现突释的现象，只有活性成分含量在10％～20％范围内时，缓释片释放特性稳定，可以在体内以一定的浓度作用较长的时间。
现有技术中通常采用的骨架材料可分为三类：(1)溶蚀性骨架材料；(2)亲水性骨架材料；(3)不溶性骨架材料。在不同环境中，骨架材料可能对具有IDO抑制活性的缓释片释放效率有影响，造成不同人群在使用此种缓释药物时缓释药效不一致的问题，使用某些骨架材料虽然可以达到缓释的目的，但却不能解决不同环境下缓释效果不稳定的问题。
本发明通过大量的试验发现，由聚乙烯醇、山嵛酸甘油酯和卡拉胶按照质量比为(2～5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)复合在一起作为具有IDO抑制活性的缓释片的缓释骨架材料，能够确保具有IDO抑制活性的缓释片在不同环境中释放特性稳定、释放完全(生物利用度高)、在体内和体外均具有良好缓释效果。
所述聚乙烯醇、山嵛酸甘油酯和卡拉胶的质量比为(2～5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)，例如聚乙烯醇、山嵛酸甘油酯和卡拉胶的质量比可以为2:1:1、3:1:1、4:1:1或5:1:1等。
本发明实施例提供的具有IDO抑制活性的缓释片可以在体内以一定的浓度作用较长的时间，可以减少服药次数，维持血药浓度平稳，延长有效抗肿瘤维持时间，在不同环境中释放特性稳定、释放完全(生物利用度高)、在体内和体外均具有良好缓释效果。
进一步地，所述活性成分为式(1)-(13)所示的化合物中的至少一种：
进一步地，所述填充剂为淀粉、微晶纤维素、甘露醇、乳糖中的至少一种，填充剂的选择对缓释片的释放特性有较大地影响，优选地，所述填充剂为乳糖，当所述填充剂为乳糖时，具有IDO抑制活性的缓释片释放最完全，生物利用度最高，在8～12小时内，释放度可高达99.7％。
进一步地，所述崩解剂为羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、低取代羟丙基纤维素中的至少一种。
进一步地，所述粘合剂为羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素、聚维酮、预胶化淀粉、明胶中的至少一种。
进一步地，所述润滑剂为硬脂富马酸钠、硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉中的至少一种。
第二方面，本发明实施例提供了一种根据第一方面所述的具有IDO抑制活性的缓释片的制备方法，包括如下步骤：
(1)按配方量称取活性成分、缓释骨架材料、填充剂、崩解剂、粘合剂和润滑剂；
(2)将所述活性成分、缓释骨架材料、填充剂、崩解剂和粘合剂混合均匀，得到第一混合物，通过干法制粒，筛整粒，得到干颗粒；
(3)将所述干颗粒与所述润滑剂混合均匀，压片，得到具有IDO抑制活性的缓释片。
本发明提供的具有IDO抑制活性的缓释片的制备方法，采用干法制粒后再制片工艺，重现性好，工艺操作简单，无需特殊处理生产设备，中间物料稳定性好、流动性和可压性好、含量均匀性好，完全满足压片的要求，同时制得的片剂表面平整美观。如果采用湿法制粒后再压片的方法得到的缓释片，重现性不好，不同批次的缓释片的缓释效果差距较大。
进一步地，在得到具有IDO抑制活性的缓释片步骤后，还包括对所述具有IDO抑制活性的缓释片包膜成衣。
第三方面，本发明实施例提供了一种根据第一方面所述的具有IDO抑制活性的缓释片在制备用于预防和/或治疗肿瘤疾病药物中的用途。
本发明先后进行过多次试验，现举一部分试验结果作为参考对发明进行进一步详细描述，下面结合具体实施例进行详细说明。
按照专利号为2019100215788公开的制备方法制备下述实施例和对比例中的活性成分。
实施例1～实施例6提供的具有IDO抑制活性的缓释片包括如表1所示质量的成分(按1000片计)。
表1
实施例1
本实施例提供的具有IDO抑制活性的缓释片成分含量如表1所示，所述缓释片的活性成分为3N-(4-氯苯基)-2-(6-氟-9-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-4-基)丙酰胺，化学结构如式(2)所示。
制备方法：
(1)将活性成分、粘度为17～30mpas的聚乙烯醇、山嵛酸甘油酯、卡拉胶、乳糖、羧甲基淀粉钠、羟丙甲纤维素和硬脂酸镁分别经过粉碎处理，再过100目筛，所得细粉备用。
(2)称取处方量的活性成分、粘度为17～30mpas的聚乙烯醇、山嵛酸甘油酯、卡拉胶、乳糖、羧甲基淀粉钠和羟丙甲纤维素在三维混合机中混合均匀，混合时间为30min，得到第一混合物。
(3)将所述第一混合物加入干法制粒机进行制粒，制得的物料过8～30目筛粉碎整粒，将整粒后的干颗粒与处方量的硬脂酸镁混合均匀，得到第二混合物，调节压片机压片速度至适宜，片剂硬度为5～8kg，将所述第二混合物进行压片，并对片重、硬度、脆碎度等进行跟踪测量以保证片剂要求的相应指标在可控范围内，得到具有IDO抑制活性的缓释片。
(4)用欧巴代II(薄膜包衣材料)配制成适宜固含量的包衣液，对步骤(3)制得的具有IDO抑制活性的缓释片进行包衣，控制包衣增重3％。
实施例2
本实施例提供的具有IDO抑制活性的缓释片成分含量如表1所示，所述缓释片的活性成分为N-(苯并[d][1,3]二氧环戊烷-5-基)-2-(6-氟-9-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-4-基)-3-甲基丁酰胺，化学结构如式(10)所示。
制备方法：
(1)与实施例1步骤(1)基本相同，不同的是，过80目筛。
(2)～(3)与实施例1步骤(2)～(3)完全相同。
(4)与实施例1步骤(4)基本相同，不同的是，控制包衣增重4％。
实施例3
本实施例提供的具有IDO抑制活性的缓释片成分含量如表1所示，所述缓释片的活性成分为N-(4-(二甲基氨基)苯基)-2-(6-氟-9-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-4-基)丙酰胺，化学结构如式(4)所示。
制备方法：
(1)与实施例1步骤(1)完全相同。
(2)与实施例1步骤(2)基本相同，不同的是混合时间为20min。
(3)～(4)与实施例1步骤(3)～(4)完全相同。
实施例4
本实施例提供的具有IDO抑制活性的缓释片成分含量如表1所示，所述缓释片的活性成分为N-(苯并[d][1,3]二氧环戊烷-5-基)-2-(6-氟-9-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-4-基)丙酰胺，化学结构如式(5)所示。
制备方法：
(1)与实施例1步骤(1)完全相同。
(2)与实施例1步骤(2)基本相同，不同的是混合时间为40min。
(3)～(4)与实施例1步骤(3)～(4)完全相同。
实施例5
本实施例提供的具有IDO抑制活性的缓释片成分含量如表1所示，所述缓释片的活性成分为3N-(4-氯苯基)-2-(6-氟-9-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-4-基)丙酰胺，化学结构如式(2)所示。
制备方法：
与实施例1制备方法完全相同。
实施例6
本实施例提供的具有IDO抑制活性的缓释片成分含量如表1所示，所述缓释片的活性成分为3N-(4-氯苯基)-2-(6-氟-9-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-4-基)丙酰胺，化学结构如式(2)所示。
制备方法：
与实施例1制备方法完全相同。
对比例1
处方：与实施例1处方基本相同，不同的是将160g乳糖替换为160g微晶纤维素。
制备方法：
同实施例1制备方法。
对比例2
处方：与实施例1处方基本相同，不同的是，缓释骨架材料仅为卡拉胶120g。
制备方法：
同实施例1制备方法。
实验例1本发明具有IDO抑制活性的缓释片的体外释放度实验
一、实验样品：
1、供试制剂：实施例1～6和对比例1～2所制备的缓释片。
2、活性成分对照品：按照专利号为2019100215788公开的制备方法制备，供含量测定用。
二、实验内容：
分别以pH1.2、pH6.8和水作为溶出介质，模拟体内胃肠道环境试验，测定供试制剂在3种释放介质(pH1.2、pH6.8、水介质)中的释放度。
三、实验方法
1.释放度测定
分别取供试制剂，照中国药典2020年版第二法，采用溶出度测定法(附录ⅩC第二法(桨法))的装置分别以pH1.2、pH6.8、水介质900mL为溶出介质，转速50r/min，依法操作，在2h、4h、6h、8h、10h、12h取样1.5mL作为供试品溶液，同时补加等量同温释放介质。
另精密称取活性成分对照品适量，加溶出介质溶解并定量稀释制成1mL约含200μg的溶液，作为活性成分对照品溶液。
按照下述中的色谱条件下方法进样测定，计算每片在不同时间的释放量。
2.色谱条件
色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸将磷酸二氢钾溶液调节pH值至4.2)(甲醇和磷酸二氢钾溶液的体积比是60∶40)为流动相，流速为1mL/min，检测波长为334nm，柱温25℃，进样量5μL。
分别精密吸取活性成分对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
3.释放介质
pH1.2介质为pH1.2的盐酸溶液；pH6.8介质为pH为6.8磷酸盐缓冲液；水。
四、实验结果
供试制剂在3种介质中的释放情况见表2～表4[注：各取样时间点的释放度以活性成分累积释放量与每片活性成分标示量的比值(％)表示]，表2为供试制剂在pH1.2介质的释放度对比情况，表3为供试制剂在pH6.8介质的释放度对比情况，表4为供试制剂在水介质的释放度对比情况。
表2
时间
2h
4h
6h
8h
10h
12h
实施例1
29.8
50.4
71.8
87.6
95.2
99.3
实施例2
30.5
51.2
72.4
88.3
96.1
99.6
实施例3
30.1
49.8
71.5
89.2
95.8
99.4
实施例4
30.7
51.9
73.2
87.9
96.4
99.7
实施例5
20.6
46.3
67.5
82.1
89.2
91.5
实施例6
36.1
62.8
87.3
96.2
99.3
99.5
对比例1
23.1
47.2
68.4
85.6
91.2
95.6
对比例2
25.8
48.2
69.4
83.2
92.4
96.5
表3
时间
2h
4h
6h
8h
10h
12h
实施例1
27.9
49.8
70.7
85.8
94.8
98.3
实施例2
29.4
48.6
71.5
87.7
95.8
98.6
实施例3
28.6
48.5
70.1
88.1
94.9
97.9
实施例4
29.4
50.2
71.1
86.7
96.1
99.2
实施例5
18.2
44.8
66.8
80.2
87.9
89.8
实施例6
34.9
61.9
86.1
95.8
98.7
98.9
对比例1
23.9
45.8
68.2
83.8
89.7
94.8
对比例2
18.7
35.9
48.3
55.8
59.7
62.5
表4
由表2～4可知，(1)实施例1～6提供的缓释片在不同介质中缓慢释放药物，说明本发明提供的缓释片释放平稳持续且同一规格的缓释片缓释特征基本一致，表明本发明提供的缓释片在不同环境下缓释效果稳定。对比例2提供的缓释片在不同介质中虽然也能缓慢释放药物，但缓释特征不一致，相差较大。(2)实施例1～6提供的缓释片在不同介质中12小时时间点释放度均超过85％，尤其是实施例1～实施例4提供的缓释片在12小时时间点释放度均超过95％，表明本发明提供的缓释片在不同环境下释放完全，生物利用度高。(3)对比例1将缓释片处方中的乳糖替换为微晶纤维素，释放度略有下降，表明以乳糖作为填充剂可以提高活性成分的释放度，进而提高生物利用度。(4)由实施例1～6可知，规格较低的缓释片释放缓慢，规格较高的缓释片释放较快。本发明经过大量试验，发现规格(以活性成分计)在30～50mg范围内的不同缓释片释放速度比较接近。
实验例2具有IDO抑制活性的缓释片的药代动力学试验
选用10只新西兰白兔，雄雌各半，禁食12h过夜，每只于第2日早晨空腹服具有IDO抑制活性的缓释片(实施例1所得缓释片)40mg(以活性成分计)，于给药后各灌水50mL，在给药后0.5、1、2、4、6、8、10、12于前肢股静脉取血，血样分别置涂有肝素的5mL具塞离心管中，于4000r/min离心20min，取上层血浆于-20℃冰箱中保存备用。采用高效液相色谱法测定给药后血浆中活性成分的浓度，得到血药浓度时间曲线如图1所示。
由图1可知，本发明提供的具有IDO抑制活性的缓释片有效地延迟了活性成分的达峰时间(Tmax)，能缓慢达到有效血药浓度，能够达到长时间维持有效的目的。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
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