阅读说明：本技术 一种快速去除皱纹使皮肤年轻化的混合物料的制备方法 (Preparation method of mixed material for rapidly removing wrinkles and rejuvenating skin ) 是由 朱瑜 于 2020-07-16 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种快速去除皱纹使皮肤年轻化的混合物料的制备方法,所述方法包括以下步骤：将外基质蛋白的编码基因克隆插入质粒pET-32a(+)中；通过CaCl2转化法转化至感受态细胞大肠杆菌细胞BL21(DE3)中；获得包含该重组质粒的基因工程菌；发酵及菌体收集：选取所述步骤S3中获得的阳性基因工程菌克隆,置于培养基中培养至菌体达目标浓度,然后收集菌体；纯化与透析：将所述步骤S4中收集到的菌体去除杂质后,进行蛋白纯化操作,再进行蛋白透析操作,即获得所述混合物料。本发明有益效果在于,遗传背景清楚、繁殖快、成本低、表达量高、表达产物容易纯化、稳定性好、抗污染能力强等。(The invention discloses a preparation method of a mixed material for rapidly removing wrinkles and rejuvenating skin, which comprises the following steps: cloning and inserting the coding gene of the outer matrix protein into a plasmid pET-32a (+); transforming into competent cell Escherichia coli cell BL21(DE3) by CaCl2 transformation method; obtaining genetically engineered bacteria containing the recombinant plasmid; fermentation and thallus collection: selecting the positive genetic engineering bacterium clone obtained in the step S3, placing the positive genetic engineering bacterium clone in a culture medium for culturing until the bacterium reaches the target concentration, and then collecting the bacterium; purification and dialysis: and (4) removing impurities from the thallus collected in the step S4, performing protein purification operation, and performing protein dialysis operation to obtain the mixed material. The invention has the advantages of clear genetic background, quick propagation, low cost, high expression quantity, easy purification of expression products, good stability, strong pollution resistance and the like.)

一种快速去除皱纹使皮肤年轻化的混合物料的制备方法

技术领域

本发明属于重组蛋白表达领域，尤其涉及一种快速去除皱纹使皮肤年轻化的混合物料的制备方法。

背景技术

胶原蛋白广泛分布于多细胞动物的体内。一直以来，人们以为胶原只是作为一种支持组织蛋白而起作用。近年来，有关胶原的研究日渐增多，因其良好的生物学特性和弱的抗原性，经特殊处理后，可用于烧伤、创伤、美容、矫形、组织修复、创面止血等医药卫生领域，在这方面的研究已取得了可喜的成果。因此需要研究利用基因工程菌的相关技术研发所合成的重组蛋白。

发明内容

本发明的主要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种快速去除皱纹使皮肤年轻化的混合物料的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种快速去除皱纹使皮肤年轻化的混合物料的制备方法，所述方法包括以下步骤：

S1将外基质蛋白的编码基因克隆***质粒pET-32a(+)中；

S2通过CaCl2转化法转化至感受态细胞大肠杆菌细胞BL21(DE3)中；

S3获得包含该重组质粒的基因工程菌；

S4发酵及菌体收集：选取所述步骤S3中获得的阳性基因工程菌克隆，置于培养基中培养至菌体达目标浓度，然后收集菌体；

S5纯化与透析：将所述步骤S4中收集到的菌体去除杂质后，进行蛋白纯化操作，再进行蛋白透析操作，即获得所述混合物料。

优选的，所述外基质蛋白包括I型胶原蛋白、IV型胶原蛋白、纤连蛋白。

本发明还提供一种制备获得的混合物料在护肤品领域的应用。

本发明有益效果在于，遗传背景清楚、繁殖快、成本低、表达量高、表达产物容易纯化、稳定性好、抗污染能力强等。

具体实施方式

以下将对本发明作进一步的描述，需要说明的是，以下实施例以本技术方案为前提，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围并不限于本实施例。

本发明为一种快速去除皱纹使皮肤年轻化的混合物料的制备方法，所述方法包括以下步骤：

S1将外基质蛋白的编码基因克隆***质粒pET-32a(+)中；

S2通过CaCl2转化法转化至感受态细胞大肠杆菌细胞BL21(DE3)中；

S3获得包含该重组质粒的基因工程菌；

S4发酵及菌体收集：选取所述步骤S3中获得的阳性基因工程菌克隆，置于培养基中培养至菌体达目标浓度，然后收集菌体；

S5纯化与透析：将所述步骤S4中收集到的菌体去除杂质后，进行蛋白纯化操作，再进行蛋白透析操作，即获得所述混合物料。

优选的，所述外基质蛋白包括I型胶原蛋白、IV型胶原蛋白、纤连蛋白。

本发明还提供一种制备获得的混合物料在护肤品领域的应用。

对于本领域的技术人员来说，可以根据以上的技术方案和构思，给出各种相应的改变和变形，而所有的这些改变和变形，都应该包括在本发明权利要求的保护范围之内。