阅读说明：本技术 一种微生物消毒菌剂及其制备方法和应用 (Microbial disinfectant, and preparation method and application thereof ) 是由 郑梅清 冯鹏 于 2020-06-30 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种微生物消毒菌剂及其制备方法和应用,1)将产酶溶杆菌C3菌种接种于LB试管斜面内,培养活化；2)从斜面中挑取一环C3菌株,转接到装有LB培养液的三角锥瓶中,培养得到活化种子液；3)将发酵培养基装入种子罐中,并接入活化种子液进培养,得到种子罐培养菌种；4)将发酵培养基装入种子罐中,将种子罐培养菌种接入发酵罐内进行发酵,5)将获得的发酵液离心获得上清液,然后脱色,得到微生物消毒剂。本发明的消毒菌剂可用于治疗和预防人体表面感染,消毒菌剂可直接用棉球涂抹感染处,或稀释后浸泡感染处消毒,涂抹或浸泡人体健康表面进行预防感染。该消毒菌剂除了可避免伤口感染外,还对皮癣、脚臭、狐臭、灰指甲等有显著效果。(The invention discloses a microbial disinfectant, a preparation method and application thereof, 1) lysobacter enzymogenes C3 strain is inoculated in an LB test tube inclined plane for culture and activation; 2) picking a ring of C3 strain from the inclined plane, transferring the strain into a triangular conical flask filled with LB culture solution, and culturing to obtain activated seed solution; 3) loading the fermentation medium into a seeding tank, and adding activated seed liquid for culturing to obtain a seeding tank culture strain; 4) loading the fermentation medium into a seed tank, inoculating a seed tank culture strain into a fermentation tank for fermentation, and 5) centrifuging the obtained fermentation liquor to obtain a supernatant, and then decolorizing to obtain the microbial disinfectant. The disinfectant can be used for treating and preventing the infection on the surface of a human body, and can be directly smeared on the infected part by using a cotton ball or soaked in the infected part for disinfection after being diluted, and smeared or soaked on the healthy surface of the human body to prevent the infection. The disinfectant can avoid wound infection, and has remarkable effects on tinea, foot odor, bromhidrosis, onychomycosis, etc.)

一种微生物消毒菌剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于抗菌技术领域，具体涉及一种微生物消毒菌剂及其制备方法和应用。

背景技术

消毒剂是指用于杀灭传播媒介上病原微生物，使其达到无害化要求的制剂，它在防病中的主要作用是将病原微生物消灭于人体之外，切断传染病的传播途径，达到控制传染病的目的。消毒是预防感染发生与传播的重要措施之一。

在生活中，时常需要对局部体表进行消毒操作。在临床上，皮肤科的病人要经常使用消毒液对皮肤进行消毒，有时还要擦涂药水。因此研制安全有效的微生物消毒菌剂具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于预防和治疗人体体表感染的微生物消毒菌剂及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明采用产酶溶杆菌C3菌种（保藏于美国典型培养物保藏中心，保藏编号：ATCC29487）制备微生物消毒菌剂，包括以下步骤：

1）菌种活化

将-85℃至-80℃保存的产酶溶杆菌C3菌种接种于预先制备好的LB试管斜面内，置于恒温培养箱中培养活化；

2）种子培养

从活化斜面中挑取一环C3菌株，转接到装有50ml LB培养液的三角锥瓶中，27-28℃，230-240rpm培养48-52h，然后再按1%的接种量转接到装有100ml LB培养液的500ml三角锥瓶中，27-28℃，230-240rpm培养48-52h，得到活化种子液；

3）种子罐培养

将发酵培养基装入种子罐中，并接入发酵培养基体积1-10%的活化种子液进行种子罐培养，得到种子罐培养菌种；

4）发酵

将发酵培养基装入种子罐中，将种子罐培养菌种以发酵培养基体积1%-10%的接种量接入发酵罐内，26-28℃发酵，180-230rpm搅拌，通气量为1∶0.5-1（V/V·min），发酵48-52 h，放罐；

5）消毒菌剂制备

将步骤4）获得的发酵液离心获得上清液，然后脱色，得到微生物消毒剂。

步骤1）中，所述活化条件是在27℃-28℃恒温培养箱中培养48-52h。

步骤3）中，所述种子罐培养条件为温度27-28℃，通气量为1∶0.5-1（V/V·min），转速230-240rpm搅拌培养48h-52 h。

步骤3）和步骤4）所述的发酵培养基各组分及其质量百分比采用以下两种配方之一：

配方一：氯化钠0.7%、蛋白胨0.9%、麦芽汁0.7%、CaCl₂ 0.04%、氯化钡0.01%，余量为水，发酵培养基的pH为7.0-7.2。

配方二：玉米粉1.2%、豆饼粉1.1%、氯化钠0.9%、氯化钙0.04%、钼酸钠0.01%，余量为水。

步骤5）中，所述离心转速为3000-6000rpm，离心时间10-15min。

步骤5）中，所述脱色条件为：在上清液中添加其重量1.5-1.6%的粒状活性炭，脱色温度27℃、脱色时间1.2h、pH8.0。

本发明的消毒菌剂可用于治疗和预防人体表面感染，消毒菌剂可直接用棉球涂抹感染处，或稀释5-50倍后浸泡感染处消毒，甚至涂抹或浸泡人体健康表面进行预防感染。本发明的消毒菌剂除了可避免伤口感染外，还对皮癣、脚臭、狐臭、灰指甲等有显著效果。

具体实施方式

实施例1

一种微生物消毒菌剂的制备方法，包括以下步骤：

1）菌种活化

将-85℃保存的产酶溶杆菌C3菌种接种于预先制备好的LB试管斜面内，置于27℃恒温培养箱中培养48h活化；

2）种子培养

从活化斜面中挑取一环C3菌株，转接到装有50ml LB培养液的三角锥瓶中，27℃，230rpm培养52h，然后再按1%的接种量转接到装有100ml LB培养液的500ml三角锥瓶中，27℃，230rpm培养52h，得到活化种子液；

3）种子罐培养

将发酵培养基装入种子罐中，并接入发酵培养基体积5%的活化种子液进行种子罐培养，种子罐培养条件为温度27℃，通气量为1∶0.75（V/V·min），转速230rpm搅拌培养52 h，得到种子罐培养菌种；

所述的发酵培养基各组分及其质量百分比为采用以下配方：

氯化钠0.7%、蛋白胨0.9%、麦芽汁0.7%、CaCl₂ 0.04%、氯化钡0.01%，余量为水，发酵培养基的pH为7.0-7.2；

4）发酵

将发酵培养基装入种子罐中，将种子罐培养菌种以发酵培养基体积5%的接种量接入发酵罐内，26℃发酵，180rpm搅拌，通气量为1∶0.75（V/V·min），发酵52 h，放罐；

5）消毒菌剂制备

将步骤4）获得的发酵液在4500rpm下离心10min获得上清液，然后脱色，得到微生物消毒剂；脱色条件为：在上清液中添加其重量1.5%的粒状活性炭，脱色温度27℃、脱色时间1.2h、pH8.0；

6）消毒菌剂表面消毒应用

消毒菌剂可直接用棉球涂抹感染处，或稀释5-50倍后浸泡感染处消毒，甚至涂抹或浸泡人体健康表面进行预防感染，除了可避免伤口感染外，还对皮癣、脚臭、狐臭、灰指甲等有显著效果。

实施例2

一种微生物消毒菌剂的制备方法，包括以下步骤：

1）菌种活化

将 -80℃保存的产酶溶杆菌C3菌种接种于预先制备好的LB试管斜面内，置于28℃恒温培养箱中培养48h活化；

2）种子培养

从活化斜面中挑取一环C3菌株，转接到装有50ml LB培养液的三角锥瓶中， 28℃，240rpm培养48h，然后再按1%的接种量转接到装有100ml LB培养液的500ml三角锥瓶中，28℃，240rpm培养48h，得到活化种子液；

3）种子罐培养

将发酵培养基装入种子罐中，并接入发酵培养基体积1%的活化种子液进行种子罐培养，种子罐培养条件为温度28℃，通气量为1∶0.5（V/V·min），转速240rpm搅拌培养48h h，得到种子罐培养菌种；

所述的发酵培养基各组分及其质量百分比为采用以下配方：

玉米粉1.2%、豆饼粉1.1%、氯化钠0.9%、氯化钙0.04%、钼酸钠0.01%，余量为水。

4）发酵

将发酵培养基装入种子罐中，将种子罐培养菌种以发酵培养基体积1%的接种量接入发酵罐内，28℃发酵，230rpm搅拌，通气量为1∶0.5（V/V·min），发酵48h，放罐；

5）消毒菌剂制备

将步骤4）获得的发酵液在3000rpm下离心15min获得上清液，然后脱色，得到微生物消毒剂；脱色条件为：在上清液中添加其重量1.6%的粒状活性炭，脱色温度27℃、脱色时间1.2h、pH8.0；

6）消毒菌剂表面消毒应用

消毒菌剂可直接用棉球涂抹感染处，或稀释5-50倍后浸泡感染处消毒，甚至涂抹或浸泡人体健康表面进行预防感染。除了可避免伤口感染外，还对皮癣、脚臭、狐臭、灰指甲等有显著效果。

实施例3

一种微生物消毒菌剂的制备方法，包括以下步骤：

1）菌种活化

将-85℃保存的产酶溶杆菌C3菌种接种于预先制备好的LB试管斜面内，置于27℃恒温培养箱中培养48h活化；

2）种子培养

从活化斜面中挑取一环C3菌株，转接到装有50ml LB培养液的三角锥瓶中，27℃，230rpm培养48h，然后再按1%的接种量转接到装有100ml LB培养液的500ml三角锥瓶中，27℃，230rpm培养48h，得到活化种子液；

3）种子罐培养

将发酵培养基装入种子罐中，并接入发酵培养基体积10%的活化种子液进行种子罐培养，种子罐培养条件为温度27.5℃，通气量为1∶1（V/V·min），转速230rpm搅拌培养48h，得到种子罐培养菌种；

所述的发酵培养基各组分及其质量百分比为采用以下配方：

氯化钠0.7%、蛋白胨0.9%、麦芽汁0.7%、CaCl₂ 0.04%、氯化钡0.01%，余量为水，发酵培养基的pH为7.0-7.2；

4）发酵

将发酵培养基装入种子罐中，将种子罐培养菌种以发酵培养基体积10%的接种量接入发酵罐内，27℃发酵，200rpm搅拌，通气量为1∶1（V/V·min），发酵48 h，放罐；

5）消毒菌剂制备

将步骤4）获得的发酵液在6000rpm下离心10min获得上清液，然后脱色，得到微生物消毒剂；脱色条件为：在上清液中添加其重量1.55%的粒状活性炭，脱色温度27℃、脱色时间1.2h、pH8.0；

6）消毒菌剂表面消毒应用

消毒菌剂可直接用棉球涂抹感染处，或稀释5-50倍后浸泡感染处消毒，甚至涂抹或浸泡人体健康表面进行预防感染。除了可避免伤口感染外，还对皮癣、脚臭、狐臭、灰指甲等有显著效果。