阅读说明：本技术 一个具有逆转肿瘤多药耐药活性的新骨架环脂肽化合物、其制备方法及用途 (Novel skeleton cyclic lipopeptide compound with tumor multidrug resistance reversing activity, preparation method and application thereof ) 是由 岳建民 楼丽广 刘翠萍 谢成英 纪开龙 赵金鑫 于 2019-03-12 设计创作，主要内容包括：本发明涉及从楝科<Image he="69" wi="51" file="DDA0001992691840000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>木属植物香港<Image he="65" wi="52" file="DDA0001992691840000012.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>木中提取分离得到的一个能够逆转肿瘤细胞耐药活性的新骨架环脂肽化合物。该化合物结构新颖,能显著提高化疗药物对多药耐药肿瘤细胞的增殖抑制活性。本发明涉及该化合物的提取分离制备方法,同时还涉及其用于制备治疗某些多药耐药肿瘤药物的用途。(The present invention relates to the family Meliaceae Hong Kong of woody plant A new skeleton cyclic lipopeptide compound capable of reversing the drug resistance activity of tumor cells is extracted and separated from wood. The compound has novel structure, and can remarkably improve the proliferation inhibition activity of the chemotherapeutic drug on multidrug resistant tumor cells. The invention relates to a method for extracting, separating and preparing the compound, and also relates to the application of the compound in preparing a medicine for treating certain diseasesThe application of the multi-drug resistant tumor drugs.)

具体实施方式

以下通过具体实施例来进一步说明本发明化合物的制备步骤和药理实验过程。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而不用于限定本发明的范围，本领域的技术人员可以对此作出种种修改和变化，在不背离本发明的精神和范围的情况下，所附的权利要求书覆盖本发明范围内的所有这些修改。

实施例1本发明中化合物的制备

干燥的香港木树皮粉末(6kg)用95％乙醇室温提取3次，每次7天，蒸去乙醇得800g浸膏，浸膏用乙酸乙酯和水萃取分配，有机相蒸干后得128g粗提物，该粗提物采用D101大孔吸附树脂依次用体积分数30％、50％、80％、90％的乙醇水溶液梯度洗脱，分别得到四个洗脱组分F1(30％)、F2(50％)、F3(80％)和F4(90％)，收集80％乙醇水溶液的洗脱组分F3(84g)。洗脱组分F3(84g)进行MCI柱层析(甲醇/水(v/v)：依次从1/1、7/3至9/1梯度洗脱)，收集甲醇/水体积比为7/3的洗脱组分进行硅胶柱层析(石油醚/丙酮(v/v)：依次从50/1、20/1、10/1、2/1、1/1至1/3梯度洗脱)，收集石油醚/丙酮体积比为20/1的洗脱组分进行反相RP-18柱层析(甲醇/水(v/v):依次从7/3、8/2至9/1梯度洗脱)纯化分离，最后收集甲醇/水体积比为7/3的洗脱组分得到主要成分的混合物，该混合物经静置析出沉淀，得到进一步纯化的化合物H-1(50mg)。

化合物的部分理化数据如下：

化合物H-1：分子式：C₂₄H₄₅NO₄，分子量：411，白色无定形粉末；[α]_D ²⁵＝-42.7(c＝0.2in MeOH)；IR(KBr):ν_max＝3365cm^-1(O-H),3311cm^-1(N-H),1732,1649cm^-1(C＝O)；UV/Vis(EtOH):λ_max(logε)＝220(3.92)nm；LRESI(±)MS:m/z 845.6[2M+Na]⁺；HRESI(-)MS:m/z434.3256[M+Na]⁺(calcd for C₂₄H₄₅NO₄Na,434.3246).

实施例2本发明中化合物的体外免疫抑制活性测试

实验原理：(1)耐药肿瘤细胞膜具有高表达的P-gp，它是能使药物发生外排作用的一种ABC转运蛋白。当药物进入细胞后与P-gp结合，P-gp利用水解ATP的能量激活药泵，将结构不同的药物和输水化合物泵出细胞，从而使肿瘤细胞产生耐药性，因此P-gp的表达量可作为评价耐药肿瘤细胞增殖能力的一种指标。(2)磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B,SRB)是一种粉红色阴离子染料，可特异性地与细胞内P-gp蛋白的碱性氨基酸结合，在540nm波长下产生吸收峰，吸光值与细胞量成线性正相关，用于细胞活力的定量检测。

耐药肿瘤细胞毒性评价：使用P-gp高表达的耐药肿瘤细胞MCF7/ADR(来源于中国医学科学院血液学研究所)、K562/ADR(来源于法国南特大学医学院)、KBV200(来源于中山大学肿瘤防治中心)进行实验；将处于对数生长期的细胞接种于96孔培养板，过夜培养后加入化合物H-1(10μM)和浓度梯度稀释的长春新碱、紫杉醇、阿霉素，每个浓度设3个复孔(给药孔)，同时设相应浓度的溶媒对照(对照孔)。肿瘤细胞在37℃、5％CO₂条件下培养72小时。细胞用SRB室温中染色，最后加入Tris溶液溶解，在酶标仪510nm波长下测定OD值，利用公式：抑制率＝(OD值_对照孔-OD值_给药孔)/OD值_对照孔×100％计算细胞生长抑制率，并根据各浓度抑制率，利用非线性回归方法计算三种化疗药物(长春新碱、紫杉醇、阿霉素)以及分别与化合物H-1组合药物的半数抑制浓度IC₅₀。

表1.本发明化合物H-1与化疗药物合用对耐药肿瘤细胞增殖影响的测试结果

注：H-1作用浓度为10μM，单用时对细胞增殖没有明显抑制活性；^a为增效倍数。

从测试结果(表1所示)可看出，化合物H-1能够显著提高化疗药物对P-gp高表达耐药肿瘤细胞KBV200、MDR/ADR、K562/ADR的增殖抑制活性，而单独使用时未发现明显抑制作用。所以该化合物在制备治疗某些多药耐药肿瘤药物中具有很好的开发前景，有望成为一种新型的逆转肿瘤多药耐药活性制剂。