阅读说明：本技术 一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品的制备方法 (Preparation method of phenylephrine hydrochloride impurity standard ) 是由 蔡锦镇 于 2020-07-01 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品的制备方法,先将盐酸去氧肾上腺素原料药置于光照条件下,使其产生杂质,然后采用制备色谱法获得色谱纯目标杂质；再在酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH存在的条件下,以硝基甲烷和间羟基苯甲醛为原料反应得到浓缩物；最后将浓缩物利用异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液进行重结晶,并在重结晶过程中加入碱中和的色谱纯目标杂质,成盐后获得一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品(杂质A),产品收率和纯度高,满足药物杂质标准品要求。(The invention provides a preparation method of phenylephrine hydrochloride impurity standard, which comprises the steps of putting phenylephrine hydrochloride raw material medicine under the illumination condition to generate impurities, and then obtaining chromatographically pure target impurities by adopting a preparation chromatography; reacting nitromethane and m-hydroxybenzaldehyde as raw materials in the presence of ketoreductase KRED and reduced coenzyme II NADPH to obtain a concentrate; and finally, recrystallizing the concentrate by using an isopropanol-n-propyl acetate-acetonitrile mixed solution, adding alkali-neutralized chromatographic pure target impurities in the recrystallization process, and salifying to obtain the phenylephrine hydrochloride impurity standard (impurity A), wherein the product yield and purity are high, and the requirements of the pharmaceutical impurity standard are met.)

一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品的制备方法

技术领域

本发明涉及制药技术领域，特别是涉及一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品的制备方法。

背景技术

盐酸去氧肾上腺素用于防治脊椎麻醉、全身麻醉、应用氯丙嗪等原因引起的低血压，也用于室上性心动过速和散瞳检查等。盐酸去氧肾上腺素是一种α-肾上腺素受体激动药，直接作用于受体的拟交感胺类药，但有时也间接通过促进去氧肾上腺素自贮存部位释放而生效，其作用与去氧肾上腺素相似，但较弱而持久，毒性较小。临床上通常在感染中毒性及过敏性休克、室上性心动加速等方面使用，具有良好的有效性和安全性，具有非常好的临床使用前景。盐酸去氧肾上腺素的结构式如下：

。

为确保药物的安全性，降低不良反应，需要对药物的杂质进行有效检测和控制。在对盐酸去氧肾上腺素药物质量研究中发现的杂质包括杂质A、杂质C、杂质D、杂质E等，其中杂质A是去甲苯福林盐酸盐，该杂质是盐酸去氧肾上腺素原料及其制剂在合成、贮存过程中非常容易产生的降解杂质，其结构式如下：

。

专利CN100361962C公开了去甲苯福林盐酸盐的制备方法，是以间羟基苯甲醛为原料，以甲醇钠或氢氧化钾为碱，将其与硝基甲烷进行加成反应，然后进行催化氢化反应，以还原硝基，最后进行盐酸化而得。在进行药物质量检测过程中，需要高纯度的杂质作为对照品，用于控制可能含有该杂质的药物的质量。该专利中公开的方法获得的去甲苯福林盐酸盐纯度低，无法满足药物杂质标准品的要求，整体收率也偏低。

发明内容

本发明的目的就是要提供一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品的制备方法，提高产品收率和纯度，满足药物杂质标准品要求。

为实现上述目的，本发明是通过如下方案实现的：

一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品的制备方法，具体步骤如下：

（1）先将盐酸去氧肾上腺素原料药置于光照条件下，使其产生杂质，然后采用制备色谱法经两次制备，获得色谱纯目标杂质；

（2）然后在酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH存在的条件下，以硝基甲烷和间羟基苯甲醛为原料反应得到浅黄色油状物，接着将浅黄色油状物经催化氢化反应，过滤浓缩得到浓缩物；

（3）再将浓缩物加入体积比1：0.5～0.6：0.08～0.1异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液中，加热搅拌溶解，接着加入碱中和的色谱纯目标杂质，静置析晶，过滤，减压干燥得到固体，最后将固体溶于干燥乙酸乙酯中通入干燥氯化氢气体，成盐，即得所述的一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品。

优选的，步骤（1）中，光照条件如下：350～380nm波长光照射8～10小时。

优选的，步骤（1）中，制备色谱法的仪器条件如下：汉邦科技NP2000，色谱柱kromasil C18 10μm 21.2×250mm，检测波长为273nm，流速为30mL/min，流动相为体积比0.1：45：55：0.2的冰醋酸-甲醇-乙腈-水。

优选的，步骤（1）中，两次制备的具体方法如下：

（A）第一次制备：先将去氧肾上腺素原料药利用体积比1：8～9乙腈-乙酸正丙酯溶解，然后注入色谱仪，收集相对保留时间为1处的峰相对应的洗脱液，旋蒸除去溶剂，得到油状物；

（B）第二次制备：再将油状物利用体积比1：8～9乙腈-乙酸正丙酯混合液溶解，再次注入色谱仪，收集相对保留时间为1处的峰相对应的洗脱液，旋蒸除去溶剂，得到浓缩物，然后将浓缩物利用体积比1：2～3乙腈-乙酸正丙酯混合液溶解，静置析晶，过滤，即得所述的色谱纯目标杂质。

进一步优选的，步骤（B）中，静置析晶时间为5～6小时。

优选的，步骤（2）的具体方法如下：

（2-1）先在0℃条件下将甲醇钠缓慢滴入硝基甲烷中，保温搅拌30～40分钟，加入酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH，再缓慢滴加间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液，搅拌反应，加入饱和氯化铵溶液终止反应，后处理，得到浅黄色油状物；

（2-2）接着将浅黄色油状物超声波分散于甲醇中，加入钯炭催化剂，催化氢化，过滤浓缩得到浓缩物。

进一步优选的，甲醇钠、硝基甲烷、酮基还原酶KRED、还原型辅酶Ⅱ NADPH、间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液、甲醇、钯炭催化剂的质量比为150：10：0.2：0.005：10：3：4，其中，间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液是将间羟基苯甲醛溶于10倍重量的硝基甲烷中而得。

进一步优选的，甲醇钠是将金属钠加入0℃甲醇中，搅拌至溶解即得，其中，金属钠与甲醇的质量体积比为150mg：1mL。

进一步优选的，搅拌反应的工艺条件为：25℃搅拌反应10～12小时。

进一步优选的，步骤（2-1）中，后处理的具体方法是：用乙酸乙酯萃取反应液，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩。

进一步优选的，步骤（2-2）中，钯炭催化剂的负载量为10%。

进一步优选的，步骤（2-2）中，催化氢化的工艺条件为：在25℃和1个标准大气压的氢气下搅拌10～20小时。

进一步优选的，步骤（2-2）中，过滤采用硅藻土过滤。

优选的，步骤（3）中，浓缩物与异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液、碱中和的色谱纯目标杂质的质量体积比为1g：6～7mL：0.03～0.05g。

优选的，步骤（3）中，加热搅拌溶解的温度为80～85℃，静置析晶时间为6～8小时。

优选的，步骤（3）中，碱中和的色谱纯目标杂质是向色谱纯目标杂质滴加质量浓度20～30%碳酸钠水溶液，直至中性，高纯水洗涤，即得碱中和的色谱纯目标杂质。

本发明的有益效果是：

本发明先将盐酸去氧肾上腺素原料药置于光照条件下，使其产生杂质，然后采用制备色谱法获得色谱纯目标杂质；再在酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH存在的条件下，以硝基甲烷和间羟基苯甲醛为原料反应得到浓缩物；最后将浓缩物利用异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液进行重结晶，并在重结晶过程中加入碱中和的色谱纯目标杂质，成盐后获得一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品（杂质A），产品收率和纯度高，满足药物杂质标准品要求。

本发明采用制备色谱法获得色谱纯目标杂质，在重结晶过程中加入少量色谱纯目标杂质，作为晶核，避免其他杂质成为晶核并被包裹在内进而影响产品纯度。申请人通过溶剂筛选，使用特定配比的异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液作为结晶溶剂，大大提高了产品纯度。

在硝基甲烷和间羟基苯甲醛为原料反应体系中，加入了酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH，联合起到抗氧化作用，避免反应过程中氧化产生其他杂质，影响产品纯度。反应获得的浅黄色油状物不需要柱层析分离，仅通过简单后处理后就进入下一部反应，大大减少了产物损失，提高产品收率，同时结合后续重结晶的特殊处理，保证产品纯度。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明涉及的盐酸去氧肾上腺素原料药，购自尚科生物医药（上海）有限公司。

实施例1

一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品的制备方法，具体步骤如下：

（1）先将盐酸去氧肾上腺素原料药置于光照条件下，使其产生杂质，然后采用制备色谱法经两次制备，获得色谱纯目标杂质；

（2）然后在酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH存在的条件下，以硝基甲烷和间羟基苯甲醛为原料反应得到浅黄色油状物，接着将浅黄色油状物经催化氢化反应，过滤浓缩得到浓缩物；

（3）再将浓缩物加入体积比1：0.5： 0.1异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液中，加热搅拌溶解，接着加入碱中和的色谱纯目标杂质，静置析晶，过滤，减压干燥得到固体，最后将固体溶于干燥乙酸乙酯中通入干燥氯化氢气体，成盐，即得所述的一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品。

核磁共振氢谱数据：¹H NMR（400MHz，CDCl₃）：δ（ppm）3.65（1H，醇羟基），5.11（2H，氨基），5.35（1H，酚羟基），5.64（1H，烷基氢），6.88-7.28（4H，苯环）。

步骤（1）中，光照条件如下：350nm波长光照射10小时。

步骤（1）中，制备色谱法的仪器条件如下：汉邦科技NP2000，色谱柱kromasil C1810μm 21.2×250mm，检测波长为273nm，流速为30mL/min，流动相为体积比0.1：45：55：0.2的冰醋酸-甲醇-乙腈-水。

步骤（1）中，两次制备的具体方法如下：

（A）第一次制备：先将去氧肾上腺素原料药利用体积比1：8乙腈-乙酸正丙酯溶解，然后注入色谱仪，收集相对保留时间为1处的峰相对应的洗脱液，旋蒸除去溶剂，得到油状物；

（B）第二次制备：再将油状物利用体积比1： 9乙腈-乙酸正丙酯混合液溶解，再次注入色谱仪，收集相对保留时间为1处的峰相对应的洗脱液，旋蒸除去溶剂，得到浓缩物，然后将浓缩物利用体积比1：2乙腈-乙酸正丙酯混合液溶解，静置析晶，过滤，即得所述的色谱纯目标杂质。

步骤（B）中，静置析晶时间为6小时。

步骤（2）的具体方法如下：

（2-1）先在0℃条件下将甲醇钠缓慢滴入硝基甲烷中，保温搅拌30分钟，加入酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH，再缓慢滴加间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液，搅拌反应，加入饱和氯化铵溶液终止反应，后处理，得到浅黄色油状物；

（2-2）接着将浅黄色油状物超声波分散于甲醇中，加入钯炭催化剂，催化氢化，过滤浓缩得到浓缩物。

甲醇钠、硝基甲烷、酮基还原酶KRED、还原型辅酶Ⅱ NADPH、间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液、甲醇、钯炭催化剂的质量比为150：10：0.2：0.005：10：3：4，其中，间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液是将间羟基苯甲醛溶于10倍重量的硝基甲烷中而得。

甲醇钠是将金属钠加入0℃甲醇中，搅拌至溶解即得，其中，金属钠与甲醇的质量体积比为150mg：1mL。

搅拌反应的工艺条件为：25℃搅拌反应12小时。

步骤（2-1）中，后处理的具体方法是：用乙酸乙酯萃取反应液，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩。

步骤（2-2）中，钯炭催化剂的负载量为10%。

步骤（2-2）中，催化氢化的工艺条件为：在25℃和1个标准大气压的氢气下搅拌10小时。

步骤（2-2）中，过滤采用硅藻土过滤。

步骤（3）中，浓缩物与异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液、碱中和的色谱纯目标杂质的质量体积比为1g： 7mL：0.03g。

步骤（3）中，加热搅拌溶解的温度为85℃，静置析晶时间为6小时。

步骤（3）中，碱中和的色谱纯目标杂质是向色谱纯目标杂质滴加质量浓度30%碳酸钠水溶液，直至中性，高纯水洗涤，即得碱中和的色谱纯目标杂质。

实施例2

一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品的制备方法，具体步骤如下：

（1）先将盐酸去氧肾上腺素原料药置于光照条件下，使其产生杂质，然后采用制备色谱法经两次制备，获得色谱纯目标杂质；

（2）然后在酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH存在的条件下，以硝基甲烷和间羟基苯甲醛为原料反应得到浅黄色油状物，接着将浅黄色油状物经催化氢化反应，过滤浓缩得到浓缩物；

（3）再将浓缩物加入体积比1： 0.6：0.08异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液中，加热搅拌溶解，接着加入碱中和的色谱纯目标杂质，静置析晶，过滤，减压干燥得到固体，最后将固体溶于干燥乙酸乙酯中通入干燥氯化氢气体，成盐，即得所述的一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品。

步骤（1）中，光照条件如下： 380nm波长光照射8小时。

步骤（1）中，制备色谱法的仪器条件如下：汉邦科技NP2000，色谱柱kromasil C1810μm 21.2×250mm，检测波长为273nm，流速为30mL/min，流动相为体积比0.1：45：55：0.2的冰醋酸-甲醇-乙腈-水。

步骤（1）中，两次制备的具体方法如下：

（A）第一次制备：先将去氧肾上腺素原料药利用体积比1： 9乙腈-乙酸正丙酯溶解，然后注入色谱仪，收集相对保留时间为1处的峰相对应的洗脱液，旋蒸除去溶剂，得到油状物；

（B）第二次制备：再将油状物利用体积比1：8乙腈-乙酸正丙酯混合液溶解，再次注入色谱仪，收集相对保留时间为1处的峰相对应的洗脱液，旋蒸除去溶剂，得到浓缩物，然后将浓缩物利用体积比1： 3乙腈-乙酸正丙酯混合液溶解，静置析晶，过滤，即得所述的色谱纯目标杂质。

步骤（B）中，静置析晶时间为5小时。

步骤（2）的具体方法如下：

（2-1）先在0℃条件下将甲醇钠缓慢滴入硝基甲烷中，保温搅拌40分钟，加入酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH，再缓慢滴加间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液，搅拌反应，加入饱和氯化铵溶液终止反应，后处理，得到浅黄色油状物；

（2-2）接着将浅黄色油状物超声波分散于甲醇中，加入钯炭催化剂，催化氢化，过滤浓缩得到浓缩物。

甲醇钠、硝基甲烷、酮基还原酶KRED、还原型辅酶Ⅱ NADPH、间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液、甲醇、钯炭催化剂的质量比为150：10：0.2：0.005：10：3：4，其中，间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液是将间羟基苯甲醛溶于10倍重量的硝基甲烷中而得。

甲醇钠是将金属钠加入0℃甲醇中，搅拌至溶解即得，其中，金属钠与甲醇的质量体积比为150mg：1mL。

搅拌反应的工艺条件为：25℃搅拌反应10小时。

步骤（2-1）中，后处理的具体方法是：用乙酸乙酯萃取反应液，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩。

步骤（2-2）中，钯炭催化剂的负载量为10%。

步骤（2-2）中，催化氢化的工艺条件为：在25℃和1个标准大气压的氢气下搅拌20小时。

步骤（2-2）中，过滤采用硅藻土过滤。

步骤（3）中，浓缩物与异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液、碱中和的色谱纯目标杂质的质量体积比为1g：6mL： 0.05g。

步骤（3）中，加热搅拌溶解的温度为80℃，静置析晶时间为8小时。

步骤（3）中，碱中和的色谱纯目标杂质是向色谱纯目标杂质滴加质量浓度20%碳酸钠水溶液，直至中性，高纯水洗涤，即得碱中和的色谱纯目标杂质。

实施例3

一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品的制备方法，具体步骤如下：

（1）先将盐酸去氧肾上腺素原料药置于光照条件下，使其产生杂质，然后采用制备色谱法经两次制备，获得色谱纯目标杂质；

（2）然后在酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH存在的条件下，以硝基甲烷和间羟基苯甲醛为原料反应得到浅黄色油状物，接着将浅黄色油状物经催化氢化反应，过滤浓缩得到浓缩物；

（3）再将浓缩物加入体积比1：0.55：0.09异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液中，加热搅拌溶解，接着加入碱中和的色谱纯目标杂质，静置析晶，过滤，减压干燥得到固体，最后将固体溶于干燥乙酸乙酯中通入干燥氯化氢气体，成盐，即得所述的一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品。

步骤（1）中，光照条件如下：360nm波长光照射9小时。

步骤（1）中，制备色谱法的仪器条件如下：汉邦科技NP2000，色谱柱kromasil C1810μm 21.2×250mm，检测波长为273nm，流速为30mL/min，流动相为体积比0.1：45：55：0.2的冰醋酸-甲醇-乙腈-水。

步骤（1）中，两次制备的具体方法如下：

（A）第一次制备：先将去氧肾上腺素原料药利用体积比1：8.5乙腈-乙酸正丙酯溶解，然后注入色谱仪，收集相对保留时间为1处的峰相对应的洗脱液，旋蒸除去溶剂，得到油状物；

（B）第二次制备：再将油状物利用体积比1：8.5乙腈-乙酸正丙酯混合液溶解，再次注入色谱仪，收集相对保留时间为1处的峰相对应的洗脱液，旋蒸除去溶剂，得到浓缩物，然后将浓缩物利用体积比1：2.5乙腈-乙酸正丙酯混合液溶解，静置析晶，过滤，即得所述的色谱纯目标杂质。

步骤（B）中，静置析晶时间为5.5小时。

步骤（2）的具体方法如下：

（2-1）先在0℃条件下将甲醇钠缓慢滴入硝基甲烷中，保温搅拌35分钟，加入酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH，再缓慢滴加间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液，搅拌反应，加入饱和氯化铵溶液终止反应，后处理，得到浅黄色油状物；

（2-2）接着将浅黄色油状物超声波分散于甲醇中，加入钯炭催化剂，催化氢化，过滤浓缩得到浓缩物。

甲醇钠、硝基甲烷、酮基还原酶KRED、还原型辅酶Ⅱ NADPH、间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液、甲醇、钯炭催化剂的质量比为150：10：0.2：0.005：10：3：4，其中，间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液是将间羟基苯甲醛溶于10倍重量的硝基甲烷中而得。

甲醇钠是将金属钠加入0℃甲醇中，搅拌至溶解即得，其中，金属钠与甲醇的质量体积比为150mg：1mL。

搅拌反应的工艺条件为：25℃搅拌反应11小时。

步骤（2-1）中，后处理的具体方法是：用乙酸乙酯萃取反应液，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩。

步骤（2-2）中，钯炭催化剂的负载量为10%。

步骤（2-2）中，催化氢化的工艺条件为：在25℃和1个标准大气压的氢气下搅拌15小时。

步骤（2-2）中，过滤采用硅藻土过滤。

步骤（3）中，浓缩物与异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液、碱中和的色谱纯目标杂质的质量体积比为1g：6.5mL：0.04g。

步骤（3）中，加热搅拌溶解的温度为82℃，静置析晶时间为7小时。

步骤（3）中，碱中和的色谱纯目标杂质是向色谱纯目标杂质滴加质量浓度25%碳酸钠水溶液，直至中性，高纯水洗涤，即得碱中和的色谱纯目标杂质。

对比例1

一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品的制备方法，具体步骤如下：

（1）先将盐酸去氧肾上腺素原料药置于光照条件下，使其产生杂质，然后采用制备色谱法经两次制备，获得色谱纯目标杂质；

（2）然后在酮基还原酶KRED存在的条件下，以硝基甲烷和间羟基苯甲醛为原料反应得到浅黄色油状物，接着将浅黄色油状物经催化氢化反应，过滤浓缩得到浓缩物；

（3）再将浓缩物加入体积比1：0.5： 0.1异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液中，加热搅拌溶解，接着加入碱中和的色谱纯目标杂质，静置析晶，过滤，减压干燥得到固体，最后将固体溶于干燥乙酸乙酯中通入干燥氯化氢气体，成盐，即得所述的一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品。

步骤（1）中，光照条件如下：350nm波长光照射10小时。

步骤（1）中，制备色谱法的仪器条件如下：汉邦科技NP2000，色谱柱kromasil C1810μm 21.2×250mm，检测波长为273nm，流速为30mL/min，流动相为体积比0.1：45：55：0.2的冰醋酸-甲醇-乙腈-水。

步骤（1）中，两次制备的具体方法如下：

（A）第一次制备：先将去氧肾上腺素原料药利用体积比1：8乙腈-乙酸正丙酯溶解，然后注入色谱仪，收集相对保留时间为1处的峰相对应的洗脱液，旋蒸除去溶剂，得到油状物；

（B）第二次制备：再将油状物利用体积比1： 9乙腈-乙酸正丙酯混合液溶解，再次注入色谱仪，收集相对保留时间为1处的峰相对应的洗脱液，旋蒸除去溶剂，得到浓缩物，然后将浓缩物利用体积比1：2乙腈-乙酸正丙酯混合液溶解，静置析晶，过滤，即得所述的色谱纯目标杂质。

步骤（B）中，静置析晶时间为6小时。

步骤（2）的具体方法如下：

（2-1）先在0℃条件下将甲醇钠缓慢滴入硝基甲烷中，保温搅拌30分钟，加入酮基还原酶KRED，再缓慢滴加间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液，搅拌反应，加入饱和氯化铵溶液终止反应，后处理，得到浅黄色油状物；

（2-2）接着将浅黄色油状物超声波分散于甲醇中，加入钯炭催化剂，催化氢化，过滤浓缩得到浓缩物。

甲醇钠、硝基甲烷、酮基还原酶KRED、间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液、甲醇、钯炭催化剂的质量比为150：10：0.2：10：3：4，其中，间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液是将间羟基苯甲醛溶于10倍重量的硝基甲烷中而得。

甲醇钠是将金属钠加入0℃甲醇中，搅拌至溶解即得，其中，金属钠与甲醇的质量体积比为150mg：1mL。

搅拌反应的工艺条件为：25℃搅拌反应12小时。

步骤（2-1）中，后处理的具体方法是：用乙酸乙酯萃取反应液，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩。

步骤（2-2）中，钯炭催化剂的负载量为10%。

步骤（2-2）中，催化氢化的工艺条件为：在25℃和1个标准大气压的氢气下搅拌10小时。

步骤（2-2）中，过滤采用硅藻土过滤。

步骤（3）中，浓缩物与异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液、碱中和的色谱纯目标杂质的质量体积比为1g： 7mL：0.03g。

步骤（3）中，加热搅拌溶解的温度为85℃，静置析晶时间为6小时。

步骤（3）中，碱中和的色谱纯目标杂质是向色谱纯目标杂质滴加质量浓度30%碳酸钠水溶液，直至中性，高纯水洗涤，即得碱中和的色谱纯目标杂质。

对比例2

一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品的制备方法，具体步骤如下：

（1）然后在酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH存在的条件下，以硝基甲烷和间羟基苯甲醛为原料反应得到浅黄色油状物，接着将浅黄色油状物经催化氢化反应，过滤浓缩得到浓缩物；

（2）再将浓缩物加入体积比1：0.5： 0.1异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液中，加热搅拌溶解，静置析晶，过滤，减压干燥得到固体，最后将固体溶于干燥乙酸乙酯中通入干燥氯化氢气体，成盐，即得所述的一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品。

步骤（1）的具体方法如下：

（1-1）先在0℃条件下将甲醇钠缓慢滴入硝基甲烷中，保温搅拌30分钟，加入酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH，再缓慢滴加间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液，搅拌反应，加入饱和氯化铵溶液终止反应，后处理，得到浅黄色油状物；

（1-2）接着将浅黄色油状物超声波分散于甲醇中，加入钯炭催化剂，催化氢化，过滤浓缩得到浓缩物。

甲醇钠、硝基甲烷、酮基还原酶KRED、还原型辅酶Ⅱ NADPH、间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液、甲醇、钯炭催化剂的质量比为150：10：0.2：0.005：10：3：4，其中，间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液是将间羟基苯甲醛溶于10倍重量的硝基甲烷中而得。

甲醇钠是将金属钠加入0℃甲醇中，搅拌至溶解即得，其中，金属钠与甲醇的质量体积比为150mg：1mL。

搅拌反应的工艺条件为：25℃搅拌反应12小时。

步骤（1-1）中，后处理的具体方法是：用乙酸乙酯萃取反应液，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩。

步骤（1-2）中，钯炭催化剂的负载量为10%。

步骤（1-2）中，催化氢化的工艺条件为：在25℃和1个标准大气压的氢气下搅拌10小时。

步骤（1-2）中，过滤采用硅藻土过滤。

步骤（2）中，浓缩物与异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液的质量体积比为1g：7mL。

步骤（2）中，加热搅拌溶解的温度为85℃，静置析晶时间为6小时。

对比例3

一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品的制备方法，具体步骤如下：

（1）先将盐酸去氧肾上腺素原料药置于光照条件下，使其产生杂质，然后采用制备色谱法经两次制备，获得色谱纯目标杂质；

（2）然后在酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH存在的条件下，以硝基甲烷和间羟基苯甲醛为原料反应得到浅黄色油状物，接着将浅黄色油状物经催化氢化反应，过滤浓缩得到浓缩物；

（3）再将浓缩物加入体积比1：0.5： 0.2异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液中，加热搅拌溶解，接着加入碱中和的色谱纯目标杂质，静置析晶，过滤，减压干燥得到固体，最后将固体溶于干燥乙酸乙酯中通入干燥氯化氢气体，成盐，即得所述的一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品。

步骤（1）中，光照条件如下：350nm波长光照射10小时。

步骤（1）中，制备色谱法的仪器条件如下：汉邦科技NP2000，色谱柱kromasil C1810μm 21.2×250mm，检测波长为273nm，流速为30mL/min，流动相为体积比0.1：45：55：0.2的冰醋酸-甲醇-乙腈-水。

步骤（1）中，两次制备的具体方法如下：

（A）第一次制备：先将去氧肾上腺素原料药利用体积比1：8乙腈-乙酸正丙酯溶解，然后注入色谱仪，收集相对保留时间为1处的峰相对应的洗脱液，旋蒸除去溶剂，得到油状物；

（B）第二次制备：再将油状物利用体积比1： 9乙腈-乙酸正丙酯混合液溶解，再次注入色谱仪，收集相对保留时间为1处的峰相对应的洗脱液，旋蒸除去溶剂，得到浓缩物，然后将浓缩物利用体积比1：2乙腈-乙酸正丙酯混合液溶解，静置析晶，过滤，即得所述的色谱纯目标杂质。

步骤（B）中，静置析晶时间为6小时。

步骤（2）的具体方法如下：

（2-1）先在0℃条件下将甲醇钠缓慢滴入硝基甲烷中，保温搅拌30分钟，加入酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH，再缓慢滴加间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液，搅拌反应，加入饱和氯化铵溶液终止反应，后处理，得到浅黄色油状物；

（2-2）接着将浅黄色油状物超声波分散于甲醇中，加入钯炭催化剂，催化氢化，过滤浓缩得到浓缩物。

甲醇钠、硝基甲烷、酮基还原酶KRED、还原型辅酶Ⅱ NADPH、间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液、甲醇、钯炭催化剂的质量比为150：10：0.2：0.005：10：3：4，其中，间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液是将间羟基苯甲醛溶于10倍重量的硝基甲烷中而得。

甲醇钠是将金属钠加入0℃甲醇中，搅拌至溶解即得，其中，金属钠与甲醇的质量体积比为150mg：1mL。

搅拌反应的工艺条件为：25℃搅拌反应12小时。

步骤（2-1）中，后处理的具体方法是：用乙酸乙酯萃取反应液，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩。

步骤（2-2）中，钯炭催化剂的负载量为10%。

步骤（2-2）中，催化氢化的工艺条件为：在25℃和1个标准大气压的氢气下搅拌10小时。

步骤（2-2）中，过滤采用硅藻土过滤。

步骤（3）中，浓缩物与异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液、碱中和的色谱纯目标杂质的质量体积比为1g： 7mL：0.03g。

步骤（3）中，加热搅拌溶解的温度为85℃，静置析晶时间为6小时。

步骤（3）中，碱中和的色谱纯目标杂质是向色谱纯目标杂质滴加质量浓度30%碳酸钠水溶液，直至中性，高纯水洗涤，即得碱中和的色谱纯目标杂质。

对比例4

一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品的制备方法，具体步骤如下：

（1）先将盐酸去氧肾上腺素原料药置于光照条件下，使其产生杂质，然后采用制备色谱法经两次制备，获得色谱纯目标杂质；

（2）然后在酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH存在的条件下，以硝基甲烷和间羟基苯甲醛为原料反应得到浅黄色油状物，接着将浅黄色油状物经催化氢化反应，过滤浓缩得到浓缩物；

（3）再将浓缩物加入体积比1：0.5异丙醇-乙酸正丙酯混合溶液中，加热搅拌溶解，接着加入碱中和的色谱纯目标杂质，静置析晶，过滤，减压干燥得到固体，最后将固体溶于干燥乙酸乙酯中通入干燥氯化氢气体，成盐，即得所述的一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品。

步骤（1）中，光照条件如下：350nm波长光照射10小时。

步骤（1）中，制备色谱法的仪器条件如下：汉邦科技NP2000，色谱柱kromasil C1810μm 21.2×250mm，检测波长为273nm，流速为30mL/min，流动相为体积比0.1：45：55：0.2的冰醋酸-甲醇-乙腈-水。

步骤（1）中，两次制备的具体方法如下：

（A）第一次制备：先将去氧肾上腺素原料药利用体积比1：8乙腈-乙酸正丙酯溶解，然后注入色谱仪，收集相对保留时间为1处的峰相对应的洗脱液，旋蒸除去溶剂，得到油状物；

（B）第二次制备：再将油状物利用体积比1： 9乙腈-乙酸正丙酯混合液溶解，再次注入色谱仪，收集相对保留时间为1处的峰相对应的洗脱液，旋蒸除去溶剂，得到浓缩物，然后将浓缩物利用体积比1：2乙腈-乙酸正丙酯混合液溶解，静置析晶，过滤，即得所述的色谱纯目标杂质。

步骤（B）中，静置析晶时间为6小时。

步骤（2）的具体方法如下：

（2-1）先在0℃条件下将甲醇钠缓慢滴入硝基甲烷中，保温搅拌30分钟，加入酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH，再缓慢滴加间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液，搅拌反应，加入饱和氯化铵溶液终止反应，后处理，得到浅黄色油状物；

（2-2）接着将浅黄色油状物超声波分散于甲醇中，加入钯炭催化剂，催化氢化，过滤浓缩得到浓缩物。

甲醇钠、硝基甲烷、酮基还原酶KRED、还原型辅酶Ⅱ NADPH、间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液、甲醇、钯炭催化剂的质量比为150：10：0.2：0.005：10：3：4，其中，间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液是将间羟基苯甲醛溶于10倍重量的硝基甲烷中而得。

甲醇钠是将金属钠加入0℃甲醇中，搅拌至溶解即得，其中，金属钠与甲醇的质量体积比为150mg：1mL。

搅拌反应的工艺条件为：25℃搅拌反应12小时。

步骤（2-1）中，后处理的具体方法是：用乙酸乙酯萃取反应液，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩。

步骤（2-2）中，钯炭催化剂的负载量为10%。

步骤（2-2）中，催化氢化的工艺条件为：在25℃和1个标准大气压的氢气下搅拌10小时。

步骤（2-2）中，过滤采用硅藻土过滤。

步骤（3）中，浓缩物与异丙醇-乙酸正丙酯混合溶液、碱中和的色谱纯目标杂质的质量体积比为1g： 7mL：0.03g。

步骤（3）中，加热搅拌溶解的温度为85℃，静置析晶时间为6小时。

步骤（3）中，碱中和的色谱纯目标杂质是向色谱纯目标杂质滴加质量浓度30%碳酸钠水溶液，直至中性，高纯水洗涤，即得碱中和的色谱纯目标杂质。

对比例5

一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品的制备方法，具体步骤如下：

（1）先将盐酸去氧肾上腺素原料药置于光照条件下，使其产生杂质，然后采用制备色谱法经两次制备，获得色谱纯目标杂质；

（2）然后在酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH存在的条件下，以硝基甲烷和间羟基苯甲醛为原料反应得到浅黄色油状物，柱层析提纯得到浅黄色固体，接着将浅黄色固体经催化氢化反应，过滤浓缩得到浓缩物；

（3）再将浓缩物加入体积比1：0.5： 0.1异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液中，加热搅拌溶解，接着加入碱中和的色谱纯目标杂质，静置析晶，过滤，减压干燥得到固体，最后将固体溶于干燥乙酸乙酯中通入干燥氯化氢气体，成盐，即得所述的一种盐酸去氧肾上腺素杂质标准品。

核磁共振氢谱数据：¹H NMR（400MHz，CDCl₃）：δ（ppm）3.65（1H，醇羟基），5.11（2H，氨基），5.35（1H，酚羟基），5.64（1H，烷基氢），6.88-7.28（4H，苯环）。

步骤（1）中，光照条件如下：350nm波长光照射10小时。

步骤（1）中，制备色谱法的仪器条件如下：汉邦科技NP2000，色谱柱kromasil C1810μm 21.2×250mm，检测波长为273nm，流速为30mL/min，流动相为体积比0.1：45：55：0.2的冰醋酸-甲醇-乙腈-水。

步骤（1）中，两次制备的具体方法如下：

（A）第一次制备：先将去氧肾上腺素原料药利用体积比1：8乙腈-乙酸正丙酯溶解，然后注入色谱仪，收集相对保留时间为1处的峰相对应的洗脱液，旋蒸除去溶剂，得到油状物；

（B）第二次制备：再将油状物利用体积比1： 9乙腈-乙酸正丙酯混合液溶解，再次注入色谱仪，收集相对保留时间为1处的峰相对应的洗脱液，旋蒸除去溶剂，得到浓缩物，然后将浓缩物利用体积比1：2乙腈-乙酸正丙酯混合液溶解，静置析晶，过滤，即得所述的色谱纯目标杂质。

步骤（B）中，静置析晶时间为6小时。

步骤（2）的具体方法如下：

（2-1）先在0℃条件下将甲醇钠缓慢滴入硝基甲烷中，保温搅拌30分钟，加入酮基还原酶KRED和还原型辅酶Ⅱ NADPH，再缓慢滴加间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液，搅拌反应，加入饱和氯化铵溶液终止反应，后处理，得到浅黄色油状物，柱层析提纯得到浅黄色固体；

（2-2）接着将浅黄色固体超声波分散于甲醇中，加入钯炭催化剂，催化氢化，过滤浓缩得到浓缩物。

甲醇钠、硝基甲烷、酮基还原酶KRED、还原型辅酶Ⅱ NADPH、间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液、甲醇、钯炭催化剂的质量比为150：10：0.2：0.005：10：3：4，其中，间羟基苯甲醛的硝基甲烷溶液是将间羟基苯甲醛溶于10倍重量的硝基甲烷中而得。

甲醇钠是将金属钠加入0℃甲醇中，搅拌至溶解即得，其中，金属钠与甲醇的质量体积比为150mg：1mL。

搅拌反应的工艺条件为：25℃搅拌反应12小时。

步骤（2-1）中，后处理的具体方法是：用乙酸乙酯萃取反应液，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩。

步骤（2-2）中，柱层析提纯的具体方法是：硅胶柱层析，洗脱剂为体积比3：2的石油醚-乙酸乙酯混合液。

步骤（2-2）中，钯炭催化剂的负载量为10%。

步骤（2-2）中，催化氢化的工艺条件为：在25℃和1个标准大气压的氢气下搅拌10小时。

步骤（2-2）中，过滤采用硅藻土过滤。

步骤（3）中，浓缩物与异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液、碱中和的色谱纯目标杂质的质量体积比为1g： 7mL：0.03g。

步骤（3）中，加热搅拌溶解的温度为85℃，静置析晶时间为6小时。

步骤（3）中，碱中和的色谱纯目标杂质是向色谱纯目标杂质滴加质量浓度30%碳酸钠水溶液，直至中性，高纯水洗涤，即得碱中和的色谱纯目标杂质。

试验例

考察实施例1～3和对比例5的产品收率，结果见表1。

表1. 产品收率比较

	收率（%）
		实施例1	95.8
实施例2	95.9
		实施例3	96.1
对比例5	86.9

对实施例1～3和对比例1～4所得产品进行含量标定，结果见表2。标定结果=色谱纯度-干燥失重-炽灼残渣。

色谱条件：汉邦科技NP2000，色谱柱kromasil C18 10μm 21.2×250mm，检测波长为273nm，流速为30mL/min，流动相为体积比0.1：45：55：0.2的冰醋酸-甲醇-乙腈-水。

表2. 含量标定

	干燥失重（%）	炽灼残渣（%）	色谱纯度（%）	标定结果（%）
					实施例1	0.08	0.12	99.95	99.75
实施例2	0.09	0.11	99.96	99.76
					实施例3	0.08	0.11	99.97	99.78
对比例1	0.10	0.13	97.56	97.33
					对比例2	0.11	0.14	97.02	96.77
对比例3	0.09	0.12	98.01	97.80
					对比例4	0.12	0.13	98.10	97.85

由表1和表2可知，实施例1～3的制备方法可以高收率获得高纯度的去氧肾上腺素杂质标准品，满足药物杂质研究要求。

对比例1在步骤（2）中省略还原型辅酶Ⅱ NADPH，对比例2在步骤（3）中略去色谱纯目标杂质的加入，对比例3在步骤（3）中，用体积比1：0.5： 0.2异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液（增加混合溶液中乙腈用量）替换体积比1：0.5： 0.1异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液，对比例4在步骤（3）中，用体积比1：0.5异丙醇-乙酸正丙酯混合溶液（略去乙腈）替换体积比1：0.5： 0.1异丙醇-乙酸正丙酯-乙腈混合溶液，均会导致其他杂质的产生或掺入，影响产品纯度。

对比例5在步骤（2）中，浅黄色油状物经柱层析纯化得到浅黄色固体，再继续进行下一步反应，导致物料损失，影响产品收率。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。