阅读说明：本技术 一种包括枸骨提取物的用于预防或治疗炎症的组合物以及其用途 (A composition comprising Chinese holly extract for preventing or treating inflammation and its application ) 是由 尹锡均 金旻智 郑秀敬 姜承贤 朴明三 于 2019-09-19 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种包括枸骨提取物的用于预防或治疗炎症的组合物以及用于预防、改善或治疗个体炎症的方法。根据本发明的一方面,枸骨提取物具有优异的改善皮肤炎症或皮肤刺激的效果,因此可以应用于如化妆品、食品、药物组合物等多种领域。(The present invention relates to a composition for preventing or treating inflammation comprising a Chinese holly extract and a method for preventing, ameliorating or treating inflammation in a subject. According to an aspect of the present invention, the extract of Chinese holly has an excellent effect of improving skin inflammation or skin irritation, and thus can be applied to various fields such as cosmetics, foods, pharmaceutical compositions, and the like.)

一种包括枸骨提取物的用于预防或治疗炎症的组合物以及其 用途

相关申请的交叉引用

本申请要求于2019年02月28日提交的韩国专利申请No.10-2019-0023533的优先权和权益，其通过引用合并于此用于所有目的，如同在此完全阐述一样。

技术领域

本发明涉及一种包括枸骨提取物的用于预防或治疗炎症的组合物以及用于预防、改善或治疗个体炎症的方法。

背景技术

炎症现象导致多种类型的多形核白细胞(PMNs)和免疫物质大量增加，并且这些增加的细胞可以通过分泌作为各种炎性细胞产物的蛋白酶和细胞因子等来进行治疗和防御。然而，这种作用可能对邻近的组织细胞和非细胞成分造成有害的损害。因此，在适当的条件下经过炎症初始状态后恢复正常功能，但如果刺激炎症的刺激物不消除或继续产生，最终会导致慢性炎症，从而引起更严重的组织损伤。

与炎症相关的典型皮肤问题的形态包括特应性和痤疮，其中对特应性的描述如下。称为“特应性皮炎”或“特应性湿疹”的皮肤疾病是通常在婴儿和儿童中发生的慢性和复发性疾病，并且严重瘙痒(瘙痒症，pruritus)和皮肤湿疹等症状由于各种原因导致恶化、缓解、复发等的恶性循环持续。特应性皮炎的临床症状的直接原因是对过敏原的皮肤防御功能和皮肤保护功能的减弱或皮肤免疫反应的过敏。第一个原因是角质形成细胞的功能异常，即皮肤角质层的结构缺陷导致皮肤保湿功能和皮肤屏障功能降低，并在正常皮肤中难以渗透的细菌和外来物质侵入皮肤以容易引发刺激和过敏反应。第二个原因是皮肤免疫反应的过敏，当特应性皮炎发生时出现的几种免疫异常包括免疫球蛋白(IgE)的合成增加、免疫球蛋白对各种抗原的增加、B淋巴细胞和单核细胞中IgE受体的表达增加、由肥大细胞/嗜碱性粒细胞引起的组胺分泌增加、迟发型过敏反应增加、嗜酸性粒细胞(eosinophil)的增加、由2型T淋巴细胞(Th2lymphocyte)引起的白细胞介素IL-4、IL-5和IL-13的分泌增加、由1型T淋巴细胞引起的干扰素INF-γ的分泌减少等。另外，由免疫反应的过敏引起的多种炎性反应细胞因子中的一部分导致角质形成细胞的功能异常，因为皮肤屏障的功能异常诱导炎症反应且诱导的炎症反应再次诱导皮肤屏障的功能异常，所以其循环过程会加剧特应性皮炎。另一方面，抗炎作用是防御炎症的机制，炎症是一种保护身体免受对组织有害或可能对组织有害的因素的影响的局部生理反应。当这些炎症现象过度诱导时，作为炎性细胞产物的蛋白酶破坏细胞和***，***的受损降低皮肤弹性并促进皮肤老化，从而健康的皮肤无法维持。

另一方面，枸骨(Ilex cornuta)是属于冬青科(Aquifoliaceae)的双子叶植物，其高达4至5米。叶子是厚椭圆形的六角形，先端具有刺齿，红色的果实从9月到10月成熟。生长于韩国的边山半岛南部、莞岛和济州岛。在韩医学中，叶子和果实供药用。叶子具有祛风、强壮等的效果，果实具有强精的效果并有助于血液循环(“对身体有益的山野草”，2009年11月15日，NEXUS Co.，Ltd.)。然而，尚未报道枸骨对皮肤抗炎症和敏感性改善的影响。

发明内容

本发明的一方面提供一种包括枸骨(Ilex cornuta)提取物作为有效成分的用于预防、改善或治疗皮肤炎症或皮肤刺激的组合物。

本发明的另一方面提供一种用于预防、改善或治疗个体的皮肤炎症或皮肤刺激的方法，所述方法包括将枸骨提取物以有效预防、改善或治疗皮肤炎症或皮肤刺激的量施用于个体的步骤。

本发明的另一方面提供一种包括枸骨提取物的组合物在制备用于预防或治疗皮肤炎症的化妆品中的用途。

本发明的另一方面提供一种包括枸骨提取物的组合物在制备用于预防或治疗皮肤炎症的药物中的用途。

本发明的一方面提供一种包括枸骨提取物作为有效成分的用于预防或改善皮肤炎症或皮肤刺激的组合物。

在本发明的一方面，枸骨提取物具有优异的抑制由刺激、皮肤刺激引起的炎性细胞因子、炎性趋化因子和胸腺基质淋巴生成素(TSLP，Thymic Stromal Lymphopoietin)的表达的效果，因此可用于预防、改善或缓解皮肤炎症或皮肤刺激。

术语“预防、改善或治疗皮肤炎症”与“抗炎症”可互换使用，可以指缓解免疫反应以抑制NO产生、炎性细胞因子，炎性趋化因子或TSLP表达的作用。

所述组合物在通过抗炎症效果来预防、改善或治疗特应性皮炎、瘙痒、发红、红斑、湿疹、脂溢性皮炎、牛皮癣和痤疮的方面具有优异效果。

术语“包括作为有效成分”是指将枸骨提取物以具有改善皮肤炎症和缓解刺激效果的量添加于本发明的组合物，也是指为了药物传递和稳定化等，添加各种成分作为副成分并将其制剂成(formulation)多种形态。

术语“改善”可以指状况的缓解或至少减小与治疗相关的参数如症状程度的所有动作。

术语“预防”是指通过施用包括所述枸骨提取物的组合物来抑制或延迟皮肤炎症或皮肤刺激症状而接近于正常对照组的任何行为。

术语“治疗”是指通过施用包括所述枸骨提取物的组合物来使所述皮肤炎症或皮肤刺激症状与正常对照组相同或相似地好转、或有益改变的任何行为。

具有预防和改善皮肤炎症或皮肤刺激的活性的枸骨提取物可以从天然、杂种和变种植物的多种器官中提取，例如，不仅可以从根、茎、叶、花、果体、果皮中提取，还可以从植物组织培养物中提取，最优选从枸骨叶中提取。

术语“枸骨”是属于冬青科(Aquifoliaceae)的双子叶植物，其高达4至5米。叶子是厚椭圆形的六角形，先端具有刺齿，红色的果实从9月到10月成熟。生长于韩国的边山半岛南部、莞岛和济州岛。在韩医学中，叶子和果实供药用。据报道，叶子具有祛风、强壮等的效果，果实具有强精的效果并有助于血液循环。根据本发明一方面，枸骨可以是在莞岛生长的枸骨(Ilex x wandoensis)。

所述枸骨提取物可以是用提取溶剂提取的溶剂提取物、通过将馏分溶剂添加于用提取溶剂提取制备的提取物而获得的馏分，或通过色谱法在所述馏分中获得的提纯物。

所述提取溶剂可以是可用于提取天然物的水、有机溶剂或其混合物。所述提取溶剂可以是水、C1至C6的醇或其混合物，例如水或乙醇。

所述枸骨提取物可以通过用于生产植物提取物的常规方法来制备。更具体地，所述枸骨提取物的制备可以通过向粉碎已除去杂质的枸骨干燥物而获得的粉碎物加入提取溶剂并将其提取的方法来进行。使用所述溶剂的提取方法可以是冷浸提取方法、热浸提取方法、回流提取方法或超声波粉碎提取方法。所述提取物可以通过将所述枸骨在溶剂中进行孵育以从溶剂中提取活性成分而获得。所述孵育可以在4℃至回流温度、4℃至100℃、4℃至80℃、4℃至60℃、4℃至50℃、4℃至40℃、4℃至35℃、4℃至30℃、4℃至25℃或室温下进行。所述孵育可以在足以从溶剂中提取活性成分的时间内进行。所述时间可以是1小时至2周、1小时至1周、1小时至5天、1小时至3天、12小时至5天、12小时至3天、12小时至2天、24小时至5天或者24小时至3天。

所述组合物可以是通过减少胸腺基质淋巴生成素(TSLP)、炎性细胞因子和炎性趋化因子的表达来抑制炎症反应的组合物。

所述组合物可以是通过减少因刺激而增加的TSLP、炎性细胞因子和炎性趋化因子的表达来缓解皮肤刺激的组合物。

根据一具体实施例的组合物可以包括有效量的所述提取物或包括所述提取物作为有效成分。所述有效量可以根据个体来适当选择。所述有效量可以根据包括以下项的因素以及在生理至医学领域中熟知的其他因素来决定：疾病至疾病状况的严重程度、个体的年龄、体重、健康、性别、个体的对提取物的敏感度、施用时间、施用途径和排出比率、施用期间、与所述组合物混合或同时使用的其他组合物。

根据一具体实施例的用于预防、改善或治疗皮肤刺激的组合物进一步可以包括在化妆品学上、食物学上或药学上可接受的赋形剂或载体。所述载体可以是赋形剂、崩解剂、结合剂、润滑剂或其组合。所述赋形剂可以是微晶纤维素、乳糖、低取代羟基纤维素或其组合。所述崩解剂可以是淀粉乙醇酸钠、无水磷酸氢钙或其组合。所述结合剂可以是聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素、羟丙基纤维素或其组合。所述润滑剂可以是硬脂酸镁、二氧化硅、滑石或其组合。

所述组合物的制剂类型可以是非口服施用剂型。非口服施用剂型可以是注射剂或皮肤外用剂。皮肤外用剂可以是乳膏、凝胶、软膏、皮肤乳化剂、皮肤悬浮液、经皮传递性贴片、含药绷带、乳液或其组合。

所述皮肤外用剂可以根据需要适当混合通常用于化妆品或药物等的皮肤外用剂的成分，例如，水性成分、油性成分、粉末成分、醇类、保湿剂、增稠剂、紫外线吸收剂、美白剂、防腐剂、抗氧化剂、表面活性剂、香料、着色剂以及各种皮肤营养剂等。

所述皮肤外用剂可以适当混合乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸三钠、柠檬酸钠、多聚磷酸钠、偏磷酸钠、葡萄糖酸等的金属螯合剂、咖啡因、单宁、戊脉安、甘草提取物、光甘草定、大蓟果实的热水提取物、各种生药、生育酚乙酸酯、甘草酸、氨甲环酸及其衍生物或其盐等药剂、维生素C、抗坏血酸磷酸酯镁、抗坏血酸葡糖苷、熊果苷、曲酸、葡萄糖、果糖及海藻糖等的糖类。

根据一具体实施例的组合物可以是化妆品组合物。在这种情况下，提取物可制备为包括以下的剂型：化妆水(润肤液)、柔肤水、爽肤水、收敛剂(Astringent)、乳液、牛奶润肤露(milk lotion)、保湿乳液、营养液、按摩霜、营养霜、保湿霜、手霜、粉底、精华、营养精华、膜、肥皂、洁面泡沫、洁面乳、洁面霜、身体乳液、身体清洁液、悬浮液、凝胶、粉末、粘膏(paste)、面膜或片装面膜或喷雾组合物。

另外，可以如液相、霜相、粘膏相和固相等的各种形式应用。可根据本领域常规方法制备此类剂型的组合物。所述化妆品组合物可以进一步包括保存剂、稳定剂、表面活性剂、溶剂、保湿剂、润肤剂、紫外线吸收剂、防腐剂、杀菌剂、抗氧化剂、pH调节剂、有机和无机颜料、香料、冷感剂或止汗剂。在不损害本发明的目的和效果的范围内，本领域技术人员可以容易地选择诸如上述保湿剂等的附加成分的混合量，该混合量可以是基于组合物的总重量的0.001％至5％，具体而言，0.01％至5％。

根据一具体实施例的组合物可以是食品组合物。在这种情况下，所述组成物可以制备成本领域已知的常规保健食品的剂型。所述食品组合物可以制备为如散剂、颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、悬浮液、油剂、糖浆剂、浸渍剂、液剂、萃取剂等的一般剂型，并制备为肉类、香肠、面包、巧克力、糖果类、零食类、饼干类、比萨饼、拉面、其他面类、口香糖类、果冻、包括冰淇淋类的乳制品、各种汤、饮料、茶、饮剂、酒精饮料和维生素复合物的等任意的保健食品形式。为了将所述保健食品制成制剂，可以使用食物学上可接受的载体或添加剂，并且本领域已知可以使用的任何载体或添加剂可以用于制备想要制备的制剂。作为所述添加剂，可以含有各种营养剂、维生素、电解质、调味剂、着色剂、果胶酸及其盐、藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇、用于碳酸饮料的碳酸化剂等。此外，所述添加剂可以含有用于制备天然果汁、果汁饮料和蔬菜饮料的果肉。

这些添加剂成分可以单独使用或组合使用，添加剂的比例可以为基于组合物的总重量的0.001％至5％，具体地，0.01％至5％。

所述食品组合物中的所述提取物的含量可以根据使用目的(预防或改善)来适当地决定。通常，可以包括食品总重量的0.01重量百分比至15重量百分比，当作为饮料制造时，以100mL为基准，可以含有0.02g至10g的比例，具体地，0.3g至1g的比例。

所述饮料可以进一步包括所述提取物之外的其他成分，并且可以进一步包括通常用于饮料的各种香料或天然碳水化合物等。所述天然碳水化合物可以含有如单糖类(例如葡萄糖、果糖等)、二糖类(例如麦芽糖、蔗糖等)、多糖类(例如糊精、环式糊精等)的常规糖以及木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇等的糖醇。另外，香料可以含有天然香料(例如:奇异果甜蛋白(Thaumatin)、甜叶菊提取物等)及合成香料(例如:糖精、阿斯巴甜等)。所述天然碳水化合物的比例通常为每100mL饮料约1g至20g，具体地，约5g至12g。

根据一具体实施例的组合物可以是药物组合物。具体而言，所述药物组合物可以是用于预防或治疗皮肤疾病的药物组合物。所述皮肤疾病可以是皮肤炎症疾病或由皮肤刺激引起的疾病。

所述皮肤炎症疾病可以是指因皮肤刺激和免疫刺激引起的所有疾病。例如，所述皮肤炎症疾病可以包括但不限于特应性皮炎、瘙痒、发红、红斑、湿疹、脂溢性皮炎、牛皮癣和痤疮等。根据一具体实施例的药物组合物可以通过保持皮肤水分、防止皮肤水分损失、增强皮肤屏障和抗炎症等效果来预防或治疗皮肤炎症疾病。

所述皮肤屏障功能损伤可以指由于皮肤屏障功能的下降或损伤而在皮肤上出现的所有变化。例如，所述皮肤屏障功能损伤可以包括皮肤皱纹增加、干燥、皮肤炎、特应性皮肤炎、过敏性皮肤炎、痤疮等，但不限于此。根据一具体实施例的药物组合物可以通过提高经皮水分丢失的回收率来预防或治疗对皮肤屏障功能的损害。

所述皮肤老化可以指随着年龄的增长在皮肤上出现的所有有形和无形的变化。例如，所述皮肤老化可以包括皮肤皱纹增加、干燥、伤口愈合能力下降、皮肤免疫功能下降，但不限于此。根据一具体实施例的药物组合物可以通过增强皮肤屏障、保持皮肤水分和防止皮肤水分损失等效果来预防或治疗皮肤老化。

本发明另一方面提供一种包括将所述组合物施用于个体的步骤的用于舒缓个体皮肤的方法。所述组合物与上述相同。

具体地，所述方法可以是改善或治疗个体炎症的方法、改善或治疗个体皮肤刺激的方法。

术语“施用的”、″导入的″及“移植的”可互换使用，并可以指实现根据一具体实施例的组合物的至所需的部位的至少部分局部化的方法或根据路径的至个体内的根据一具体实施例的组合物的布置。根据一具体实施例的组合物的提取物或提取物成分的至少一部分可通过任何传送至活体中的期望位置的合适途径来施用。

施用是可通过本领域已知的任何方法来执行。施用可以通过例如静脉内、肌肉内、口服、经皮(transdermal)、粘膜、鼻内(intranasal)、气管内或皮下施用的途径，以任何方式直接向个体执行。所述施用可以对全身或局部执行。

所述个体可以是哺乳动物，例如:人、牛、马、猪、狗、绵羊、山羊或猫。所述个体可以是需要舒缓皮肤，例如需要治疗抗炎症和特应性皮炎的的个体。

所述施用可以是每天将枸骨提取物按照以下量施用于个体：0.1mg至1000mg，例如0.1mg至500mg、0.1mg至100mg、0.1mg至50mg、0.1mg至25mg、1mg至1000mg、1mg至500mg、1mg至100mg、1mg至50mg、1mg至25mg、5mg至1000mg、5mg至500mg、5mg至100mg、5mg至50mg、5mg至25mg、10mg至1000mg、10mg至500mg、10mg至100mg、10mg至50mg，或10mg至25mg。然而，施用量可以根据诸如制剂方法、施用方法、患者的年龄、体重、性别、病理状况、饮食、施用时间、施用途径、***速度及反应灵敏性等的因素来不同地处方，本领域技术人员将理解，可以考虑这些因素以适当调整施用量。施用次数可以是每天1次或在临床上可接受的副作用范围内2次或以上，关于施用部位，可以在一处或两处以上施用，并且每天或每2天至5天为间隔的总施用天数可以是在一次治疗时1天至30天。如有需要，可在适当的时间后重复相同的治疗。对于除人以外的动物，可以以每kg的施用量与人相同的施用量来施用，或者以目标动物与人的器官(心脏等)的体积比(例如，平均值)等换算所述施用量的量来施用。

附图说明

被包括以提供对本发明的进一步理解并且被并入且构成本说明书的一部分的附图例示本发明的示例性实施例，并且与说明书一起用于解释本发明构思。

图1为显示根据枸骨叶(a)、茎(b)、根(c)的乙醇提取物的人角质形成细胞中TSLPmRNA表达变化的实时PCR测量结果的图表(对-对照组##:p＜0.01；对+对照组**:p＜0.01，*:p＜0.05)。

图2为显示根据枸骨叶、茎、根的乙醇提取物(10ppm)的人角质形成细胞中MDCmRNA表达变化的实时PCR测量结果的图表(对-对照组##:p＜0.01；对+对照组**:p＜0.01，*:p＜0.05)。

图3为显示根据枸骨叶、茎、根的乙醇提取物(10ppm)的人角质形成细胞中TARCmRNA表达变化的实时PCR测量结果的图表(对-对照组##:p＜0.01；对+对照组**:p＜0.01，*:p＜0.05)。

图4为显示根据枸骨叶、茎、根的乙醇提取物(10ppm)的人角质形成细胞中TARC蛋白质表达变化的ELISA测量结果的图表(对-对照组##:p＜0.01；对+对照组**:p＜0.01)。

图5为显示根据枸骨叶、茎、根的乙醇提取物(10ppm)的人角质形成细胞中IL-6mRNA表达变化的实时PCR测量结果的图表(对-对照组##:p＜0.01；对+对照组**:p＜0.01)。

图6为显示根据枸骨叶、茎、根的乙醇提取物(10ppm)的人角质形成细胞中IL-8mRNA表达变化的实时PCR测量结果的图表(对-对照组##:p＜0.01；对+对照组**:p＜0.01)。

具体实施方式

在下文中，将通过实施例更详细地描述本发明。然而，这些实施例是为了描述本发明，本发明的范围不限于这些实施例。

实施例1：制备枸骨提取物

在本实施例中，枸骨(Ilex cornuta,Ilex x wandoensis)购自京东市场(韩国首尔)。将购买的枸骨的叶、茎和根干燥并粉碎，将70％(v/v)乙醇100ml添加于每10g的粉末，然后在室温下静置1天。将通过用滤纸过滤溶液而获得的滤液(filtrate)在40℃至60℃下进行减压浓缩，从此得到提取物3.7g(以下称为“乙醇提取物”)。

实验例1：评估胸腺基质淋巴生成素(TSLP)的抑制性能

1.1、培养作为人皮肤角质形成细胞株的HaCaT细胞

将作为人角质形成细胞的HaCaT购自韩国细胞株银行，并在含有10％胎牛血清(FBS)和抗生素的DMEM培养基中培养。使用75T烧瓶和6孔板作为培养容器，并在提供5％二氧化碳的37℃培养箱中进行培养。培养基每3至4天更换一次，当细胞过量增殖时，进行传代培养。将HaCaT以5x10⁵/孔分株，并在培养24小时后，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤。将洗完的HaCaT以10μg/ml的Poly I：C和10ng/ml的IL-4添加于每个孔不含FBS的DMEM培养基，将枸骨叶、茎、根的乙醇提取物分别稀释至终浓度0.1ppm、1ppm和10ppm，然后添加于每个孔中并培养。

1.2、测量TSLP的表达变化

TSLP被归类为顶级细胞因子，其启动被认为是特应性皮炎原因的2型辅助T细胞介导的免疫偏离。与Poly I：C/IL-4一起培养4小时后，在HaCaT细胞合成cDNA，将合成的cDNA用作模板并使用赛博格林(SYBR Green master mix)和引物进行实时聚合酶链反应(real-time PCR)，从而测量TSLP的基因表达水平。作为阳性对照组，***(Dex)用-浓度处理。以通过Ct(阈值循环)方法来补正内部对照基因β-肌动蛋白的相对值进行比较。

用于本发明实施例的引物序列示于下表1中。

【表1】

图1为显示根据枸骨叶(a)、茎(b)、根(c)的乙醇提取物的人角质形成细胞中TSLPmRNA表达变化的实时PCR测量结果的图表(对-对照组##:p＜0.01；对+对照组**:p＜0.01，*:p＜0.05)。

(-)：阴性对照组；(+)：PolyI：C和IL-4处理组；Dex：作为阳性对照组的***处理组；0.1：枸骨提取物。

如图1所示，与未用poly I：C和IL-4处理的HaCaT细胞相比，用poly I：C和IL-4处理的HaCaT细胞(+)中TSLP的表达相当增加。通过枸骨提取物的处理，TSLP mRNA的表达浓度依赖性地减少。尤其，确认了TSLP的表达通过枸骨提取物1ppm或其以上的处理来减少至用作为阳性对照组的***处理的HaCaT细胞相似的水平。

实验例2：评估炎性趋化因子的抑制性能

为了评估枸骨提取物的炎性趋化因子抑制性能，以与实验例1.1相同的方法测量作为炎性趋化因子的巨噬细胞诱导的趋化因子(MDC)和胸腺和活化调节的趋化因子(TARC)的表达变化。TARC也称为趋化因子(C-C基序)配体17(CCL17)。

图2为显示根据枸骨叶、茎、根的乙醇提取物(10ppm)的人角质形成细胞中MDCmRNA表达变化的实时PCR测量结果的图表(对-对照组##:p＜0.01；对+对照组**:p＜0.01，*:p＜0.05)。

图3为显示根据枸骨叶、茎、根的乙醇提取物(10ppm)的人角质形成细胞中TARCmRNA表达变化的实时PCR测量结果的图表(对-对照组##:p＜0.01；对+对照组**:p＜0.01，*:p＜0.05)。

如图2和图3所示，确认了通过poly I:C和IL-4的处理来增加的MDC和TARC的mRNA表达通过枸骨的叶、茎、根乙醇提取物的处理显著减少。

(-)：阴性对照组；(+)：PolyI：C和IL-4处理组；Dex：作为阳性对照组的***处理组。

另外，使用ELISA试剂盒测量趋化因子表达的变化。将HaCaT(5x10⁵/孔)细胞在FBSDMEM培养基中培养24小时，然后在不含有FB的DMEM中同时处理枸骨叶、茎、根提取物和polyI:C 10μg/ml及IL-4 10ng/ml，并进一步培养72小时。然后使用人CCL17/TARC ELISA试剂盒(R&D公司)定量每个孔的上清液。

图4为显示根据枸骨叶、茎、根的乙醇提取物(10ppm)的人角质形成细胞中TARC蛋白质表达变化的ELISA测量结果的图表(对-对照组##:p＜0.01；对+对照组**:p＜0.01)。

实验例3：评估炎性细胞因子的抑制性能

为了评估枸骨提取物的炎性细胞因子抑制性能，以与实验例1.1相同的方法测量作为炎性细胞因子的IL-6和IL-8的表达变化。

图5为显示根据枸骨叶、茎、根的乙醇提取物(10ppm)的人角质形成细胞中IL-6mRNA表达变化的实时PCR测量结果的图表(对-对照组##:p＜0.01；对+对照组**:p＜0.01)。

图6为显示根据枸骨叶、茎、根的乙醇提取物(10ppm)的人角质形成细胞中IL-8mRNA表达变化的实时PCR测量结果的图表(对-对照组##:p＜0.01；对+对照组**:p＜0.01)。

如图5和图6所示，确认了通过poly I:C和IL-4的处理来增加的IL-6和IL-8的mRNA表达通过枸骨的叶、茎、根乙醇提取物的处理相当减少。尤其，确认了与其他部位相比IL-8的mRNA表达通过枸骨叶的乙醇提取物的处理而显着减少。

因此，由于枸骨叶、茎、根的乙醇提取物通过抑制TSLP、炎症趋化因子和炎性细胞因子的表达来显示优异的炎症抑制和刺激缓解的效果，所以具有预防、改善或治疗由特应性皮炎、瘙痒等炎症引起的疾病的效能。

剂型例1：制备霜剂

根据表2中所示的组成成分和组成比以常规方法制备包括枸骨提取物的霜剂。

【表2】

剂型例2：制备乳液剂根据表3中所示的组成成分和组成比以常规方法制备包括枸骨提取物的乳液剂。

【表3】

根据本发明的一方面，枸骨提取物具有优异的改善皮肤炎症或皮肤刺激的效果，因此可以应用于如化妆品、食品、药物组合物等多种领域。

虽然已在此描述了某些示例性实施例和实施方式，但是根据该描述，其它实施例和修改将是明显的。因此，本发明构思不限于这些实施例，而是限于所附权利要求的更宽范围，并且对于本领域普通技术人员来说，各种显而易见的修改和等同布置将是明显的。

<110> 科丝美诗株式会社

<120> 一种包括枸骨提取物的用于预防或治疗炎症的组合物以及其用途

<130> PX059089

<150> KR 10-2019-0023533

<151> 2019-02-28

<160> 12

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TSLP正向引物

<400> 1

gctatctggt gcccaggcta t 21

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> TSLP反向引物

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cgacgccaca atccttgtaa t 21

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> TARC正向引物

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cttctctgca gcacatcc 18

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> TARC反向引物

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aagacctctc aaggctttg 19

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223> MDC正向引物

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<213> 人工序列

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gcagggaggg aggcagagga 20

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tacccccagg agaagattcc 20

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<213> 人工序列

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ttttctgcca gtgcctcttt 20

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<213> 人工序列

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<223> IL-8正向引物

<400> 9

ccaacacaga aattattgta aagc 24

<210> 10

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> IL-8反向引物

<400> 10

tgaattctca gccctcttca a 21

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> β肌动蛋白正向引物

<400> 11

ggccatctct tgctcgaagt 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> β肌动蛋白反向引物

<400> 12

gacaccttca acaccccagc 20