一种黄体酮温敏凝胶注射液及其制备方法
阅读说明：本技术 一种黄体酮温敏凝胶注射液及其制备方法 (Progesterone thermo-sensitive gel injection and its preparation method ) 是由 王咏 魏白 肖杨会 于 2021-07-01 设计创作，主要内容包括：本发明属于妇科药物制备领域,具体涉及更具体的说是涉及一种黄体酮温敏凝胶注射液及其制备方法,包括将黄体酮包合在环糊精的空腔中形成复合物并溶解在水中澄清,然后将复合物与温敏凝胶(即泊洛沙姆或者壳聚糖/羧甲基壳聚糖/甘油磷酸钠体系水凝胶)混合,使复合物嵌入到温敏凝胶中,即得黄体酮温敏凝胶注射液。本发明可有效解决黄体酮口服生物利用度低、注射患者顺应性差等缺点,有明显的临床使用优势,又可以在注射后缓慢释放,维持体内有效药物浓度。(The invention belongs to the field of preparation of gynecological drugs, and particularly relates to progesterone temperature-sensitive gel injection and a preparation method thereof. The invention can effectively solve the defects of low oral bioavailability of the progesterone, poor compliance of an injection patient and the like, has obvious clinical use advantages, and can be slowly released after injection to maintain the effective medicine concentration in vivo.)
技术领域
本发明属于药物制备领域，具体涉及一种妇产科药物制备，更具体的说是涉及一种黄体酮温敏凝胶注射液及其制备方法。
背景技术
黄体酮是调节女性生殖系统的重要成分，主要作用于子宫、卵巢及其乳房和中枢神经系统(CNS)，女性在月经周期和妊娠期间的黄体期，体内的黄体酮血液浓度很高。在非怀孕期和妊娠早期，黄体酮产生于黄体，在妊娠后期产生于胎盘中。内源性黄体酮可使子宫内膜从增生期转化为分泌期，维持正常的生理变化。
目前在临床使用的剂型有胶囊剂、油注射液、阴道栓剂、阴道凝胶剂。但是肝脏的首过效应，黄体酮口服生物利用度低，又有注射液注射后会引起疼痛、局部红肿、硬结等症状，栓剂、凝胶剂在阴道易流出造成剂量无法准确控制。同时在欧洲上市的黄体酮注射液虽然为水溶液，但无法达到缓慢释放的效果。
环糊精能在分子空穴内包合大小和形状与其空穴相适应的有机、无机乃至气体分子，形成单分子包合物，因此多用于制备环糊精包合物。环糊精包合物是指药物分子被包含或嵌入环糊精的筒状结构内形成的超微粒分散物。药物制成环糊精包合物后，具有以下优点：(1)改善药物的溶解性能；(2)提高药物的稳定性；(3)改善药物的吸收和提高生物利用度；(4)降低药物的毒副作用和刺激性等。
泊洛沙姆是最常用的制备温敏型原位凝胶的高分子，泊洛沙姆是最常用的制备温敏型原位凝胶的高分子材料。它是由聚氧乙烯(PEO)和聚氧丙烯(PPO)构成的ABA型嵌段共聚物，其水溶液具有受热反向胶凝的性质。
壳聚糖/羧甲基壳聚糖/甘油磷酸钠体系水凝胶，材料可生物降解性，在室温下为液体，37℃下可快速凝胶化具有温敏性，常用于药物控释系统。
目前报道的相关文献有：公开号为CN107441061A、公开日为2017.12.08的发明提供了一种黄体酮缓释纳米粒，采用PEG包埋黄体酮的办法以实现缓释目的。又如公开号为CN106727288A、公开日2017.5.31的发明提供了一种水溶性黄体酮注射液，采用羟丙基-β-环糊精和氨丁三醇作为协同增溶剂，以实现降低羟丙基-β-环糊精用量的目的。但是这些报道与本发明存在实质性不同。
发明内容
针对上述现有技术存在的问题和不足，本发明的目的是解决黄体酮水溶性差、口服生物利用度低、常规油注射液刺激性较大等问题，并实现可控制黄体酮从凝胶中缓慢释放，以达到缓控释效果。
本发明的目的是通过以下技术方案得以实施的：
本发明首先提供了一种黄体酮温敏凝胶注射液，由如下质量百分比计的组合物制备获得：
组合物1：
或组合物2：
发明人研究发现，将黄体酮包合在环糊精的空腔中形成复合物并溶解在水中澄清，然后将复合物与温敏凝胶(即泊洛沙姆或者壳聚糖/羧甲基壳聚糖/甘油磷酸钠体系水凝胶)混合，使复合物嵌入到温敏凝胶中，从而可增加载药量，实验显示局部注射刺激性小，注射后可持续释放达到缓释控制效果。本发明兼具水针的特性又具有温敏凝胶的优点。所制产品在室温下为液体，相对于油注射液黏度低，同时不使用成分复杂的植物油作为溶剂，可有效控制刺激性，温敏凝胶体系在体温条件下会形成半固体，固定在注射部位缓慢释放，可达到缓慢释放效果，有利于在体内维持药物浓度。
作为优选，本发明中，所述的壳聚糖/羧甲基壳聚糖/甘油磷酸钠混合物按照2:1:1比例配比，按照如下方法准备好备用：
取适量壳聚糖溶解在0.1mol/L的盐酸溶液(注射用水配制)中，配制成2％的壳聚糖溶液，备用；
取适量羧甲基壳聚糖溶解在注射用水中，配制成2％的羧甲基壳聚糖溶液，备用；
取适量甘油磷酸钠溶解在注射用水中，配制成60％的甘油磷酸钠溶液，备用，
按壳聚糖：羧甲基壳聚糖：甘油磷酸钠比例为2:1:1，取上述各溶液按比例混合配制即得壳聚糖/羧甲基壳聚糖/甘油磷酸钠混合物。
本发明还提供了上述的一种黄体酮温敏凝胶注射液的制备方法，包括如下步骤：
(1)将羟丙基-β-环糊精溶解在部分处方量热水中，得到羟丙基-β-环糊精水溶液，
(2)将黄体酮加入到步骤(1)得到的羟丙基-β-环糊精水溶液中，保持温度并持续搅拌至溶液澄清，
(3)将温敏凝胶基质泊洛沙姆或壳聚糖/羧甲基壳聚糖/甘油磷酸钠混合物加入到剩余部分处方量水中，持续搅拌至溶液澄清，
(4)将步骤(2)溶液降温至室温后加入到步骤(3)凝胶溶液中，搅拌均匀，即得黄体酮温敏凝胶注射液。
作为优选，本发明中，所述的步骤(1)中热水的温度为70℃-90℃，搅拌转速20-200rpm。
作为优选，本发明中，所述的步骤(2)中保持温度在70℃-90℃之间，搅拌的速度为200-800rpm。
作为优选，本发明中，所述的步骤(3)中搅拌的速度为200-800rpm。
作为优选，本发明中，所述的步骤(4)中搅拌的速度为100-700rpm。
本发明的制备方法操作简单，容易实现工业化大生产，可以使原料药黄体酮的羟丙基-β-环糊精复合物更均匀的嵌入壳聚糖/羧甲基壳聚糖/甘油磷酸钠体系水凝胶聚合物的三维结构中，达到生物黏附和缓释结果。本发明的混悬凝胶的聚合物可快速溶胀、原料药含量均匀度可控制，同时体外溶出与原研药物一致。
与现有技术相比，本发明有以下优点：
目前欧洲上市的黄体酮注射液虽然为水溶液，但无法达到缓慢释放的效果，本发明将黄体酮制备成注射温敏型凝胶，既可以绕过首过效应，又可以在注射后缓慢释放，维持体内有效药物浓度。
本发明将黄体酮的羟丙基-β-环糊精复合物嵌入至温敏凝胶中，能有效解决黄体酮口服生物利用度低、注射患者顺应性差等缺点，有明显的临床使用优势。
附图说明
图1是对比实施例1释放度曲线图。
图2是本发明实施例1释放度曲线图。
图3是本发明实施例2释放度曲线图。
图4是本发明实施例3释放度曲线图。
图5是本发明实施例4释放度曲线图。
图6是本发明实施例5释放度曲线图。
图7是本发明实施例6释放度曲线图。
具体实施方式
下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。
在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
一点说明：
所述的壳聚糖/羧甲基壳聚糖/甘油磷酸钠混合物，按照如下方法准备好备用：取适量壳聚糖溶解在0.1mol/L的盐酸溶液(注射用水配制)中，配制成2％的壳聚糖溶液，备用；取适量羧甲基壳聚糖溶解在注射用水中，配制成2％的羧甲基壳聚糖溶液，备用；取适量甘油磷酸钠溶解在注射用水中，配制成60％的甘油磷酸钠溶液，备用，
按壳聚糖：羧甲基壳聚糖：甘油磷酸钠比例为2:1:1，取上述各溶液按比例混合配制即得壳聚糖/羧甲基壳聚糖/甘油磷酸钠混合物。
对比实施例1
处方(质量百分比计)：
黄体酮 2％
羟丙基-β-环糊精 10％
纯化水 88％。
制备过程：
(1)将羟丙基-β-环糊精溶解在部分处方量热水中，温度在70℃-90℃范围内，
(2)将黄体酮加入至步骤(1)得到的羟丙基-β-环糊精水溶液中，保持温度并持续搅拌至溶液澄清，搅拌的速度为300rpm，即得黄体酮羟丙基-β-环糊精注射液。
评价过程：
(1)凝胶化温度
试管直立置于恒温水浴中，每隔约30s将试管45°倾斜，并观察液面是否随试管倾斜，当观察到液面不随着试管倾斜45°而倾斜，则再恒温约30s后，将试管取出并完全倒置，若15s内试管内溶液不再流动，则定义该溶液已凝胶固化。记录水浴温度。
(2)释放度
体外药物释放实验，将一定量载药凝胶小心地从试管中移至一端已封口的透析袋中，PBS(pH 7.4)淋洗试管，淋洗液转入透析袋中，并扎紧另一端封口。将透析袋放入转蓝中，以PBS(pH 7.4)-甲醇溶液(80:20)为溶出介质，在转速为100rpm，温度为(37±0.5)℃下进行溶出实验。定时取样5mL，并及时补充37℃的PBS(pH 7.4)-甲醇溶液(80:20)5mL。考察样品12小时内在接收池的释放情况。
评价结果见附图1和表1。
实施例1
处方(质量百分比计)：
制备过程：
1)将羟丙基-β-环糊精溶解在部分处方量热水中，温度70℃-90℃，搅拌速度50rpm。
2)将黄体酮加入至步骤1)得到的羟丙基-β-环糊精水溶液中，保持温度70-90℃并持续搅拌至溶液澄清，搅拌速度200rpm。
3)将温敏凝胶基质泊洛沙姆加入到剩余部分处方量水中，持续搅拌至溶液澄清，搅拌速度200rpm。
4)将步骤2)溶液降温至室温后加入至步骤3)凝胶中，搅拌均匀，搅拌速度100rpm，即得黄体酮温敏凝胶注射液。
评价方法同对比实施例1，评价结果见表1和附图2。
实施例2
处方(质量百分比计)：
制备过程：
1)将羟丙基-β-环糊精溶解在部分处方量热水中，温度70℃-90℃，搅拌速度200rpm。
2)将黄体酮加入至步骤1)得到的羟丙基-β-环糊精水溶液中，保持温度70-90℃并持续搅拌至溶液澄清，搅拌速度500rpm。
3)将温敏凝胶基质泊洛沙姆加入到剩余部分处方量水中，持续搅拌至溶液澄清，搅拌速度500rpm。
4)将步骤2)溶液降温至室温后加入至步骤3)凝胶中，搅拌均匀，搅拌速度700rpm，即得黄体酮温敏凝胶注射液。
评价方法同对比实施例1，评价结果见表1和附图3。
实施例3
处方(质量百分比计)：
制备过程：
1)将羟丙基-β-环糊精溶解在部分处方量热水中，温度70℃-90℃，搅拌速度20rpm。
2)将黄体酮加入至步骤1)得到的羟丙基-β-环糊精水溶液中，保持温度70-90℃并持续搅拌至溶液澄清，搅拌速度300rpm。
3)将温敏凝胶基质泊洛沙姆加入到剩余部分处方量水中，持续搅拌至溶液澄清，搅拌速度300rpm。
4)将步骤2)溶液降温至室温后加入至步骤3)凝胶中，搅拌均匀，搅拌速度200rpm，即得黄体酮温敏凝胶注射液。
评价方法同对比实施例1，评价结果见表1和附图4。
实施例4
处方(质量百分比计)：
制备过程：
1)将羟丙基-β-环糊精溶解在部分处方量热水中，温度70℃-90℃，搅拌速度100rpm。
2)将黄体酮加入至步骤1)得到的羟丙基-β-环糊精水溶液中，保持温度70-90℃并持续搅拌至溶液澄清，搅拌速度800rpm。
3)将温敏凝胶基质泊洛沙姆加入到剩余部分处方量水中，持续搅拌至溶液澄清，搅拌速度800rpm。
4)将步骤2)溶液降温至室温后加入至步骤3)凝胶中，搅拌均匀，搅拌速度300rpm，即得黄体酮温敏凝胶注射液。
评价方法同对比实施例1，评价结果见表1和附图5。
实施例5
处方(质量百分比计)：
制备过程：
1)将羟丙基-β-环糊精溶解在部分处方量热水中，温度70℃-90℃，搅拌速度150rpm。
2)将黄体酮加入至步骤1)得到的羟丙基-β-环糊精水溶液中，保持温度70-90℃并持续搅拌至溶液澄清，搅拌速度400rpm。
3)将温敏凝胶基质泊洛沙姆加入到剩余部分处方量水中，持续搅拌至溶液澄清，搅拌速度400rpm。
4)将步骤2)溶液降温至室温后加入至步骤3)凝胶中，搅拌均匀，搅拌速度250rpm，即得黄体酮温敏凝胶注射液。
评价方法同对比实施例1，评价结果见表1和附图6。
实施例6
处方(质量百分比计)：
制备过程：
1)将羟丙基-β-环糊精溶解在部分处方量热水中，温度70℃-90℃，搅拌速度180rpm。
2)将黄体酮加入至步骤1)得到的羟丙基-β-环糊精水溶液中，保持温度70-90℃并持续搅拌至溶液澄清，搅拌速度600rpm。
3)将温敏凝胶基质泊洛沙姆加入到剩余部分处方量水中，持续搅拌至溶液澄清，搅拌速度600rpm。
4)将步骤2)溶液降温至室温后加入至步骤3)凝胶中，搅拌均匀，搅拌速度200rpm，即得黄体酮温敏凝胶注射液。
评价方法同对比实施例1，评价结果见表1和附图7。
表1凝胶化实验
25℃
32℃
35℃
对比实施例1
×
×
×
实施例1
×
×
√
实施例2
×
×
√
实施例3
×
×
√
实施例4
×
×
√
实施例5
×
×
√
实施例6
×
×
√
注：“×”表示不凝胶，“√”表示形成凝胶。
从表1和说明书附图1-7的结果表明：
按照本发明的处方组成及制备方法，将黄体酮原料药包合到羟丙基-β-环糊精的空腔内再嵌入到温敏凝胶中，既可保证黄体酮在体系中占比2％，常温下为液体，生理温度下为凝胶，又可使体系中的黄体酮在12小时内缓慢释放。经检测，实施例1～6成凝胶温度均大于32℃，各组均有显著缓控释效果。
本发明中黄体酮温敏凝胶注射液刺激性试验：
采用后侧股肌肌肉注射给药方式，样品选择黄体酮注射液、生理盐水、黄体酮温敏凝胶注射液。取雄性新西兰白色家兔9只，体重2-5kg，随机分成3组，每组3只。第一组给生理盐水，第二组给发明中制备的黄体酮温敏凝胶注射液，第三组给市售黄体酮油注射液。给药量1ml/只，注射速度1ml/min，每日一次，连续给药5天，五天后观察动物是否有躁动反应，观察注射部位有无变化。
表2不同黄体酮注射液刺激性试验结果
由以上结果可知，采用本发明的黄体酮温敏凝胶注射液刺激性明显小于市售黄体酮油注射液，仅在5天时略差于对照生理盐水组。由此可推断在注射本发明的黄体酮温敏凝胶时，患者的红肿、疼痛等刺激性的不良反应也将明显改善。