阅读说明：本技术 一种测定衣藻低温荧光光谱的生物稳定溶剂 (Biostable solvent for measuring low-temperature fluorescence spectrum of chlamydomonas ) 是由 于倩倩 于 2020-03-31 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种测定衣藻荧光光谱生物缓冲试剂。由以下重量份的原料制成：N-(羟甲基)甲基甘氨酸1-2份,三羟甲基氨基甲烷0.5-1.5份,丙三醇40-60份,氢氧化钠0.5-1份,水40-50份。本发明可以保持衣藻细胞形态,维持衣藻生理状态不变,避免衣藻培养液因低温冷冻固化膨胀造成的样品通透性差后果,荧光信号强。(The invention relates to a biological buffer reagent for measuring fluorescence spectrum of chlamydomonas. The feed is prepared from the following raw materials in parts by weight: 1-2 parts of N- (hydroxymethyl) methylglycine, 0.5-1.5 parts of tris (hydroxymethyl) aminomethane, 40-60 parts of glycerol, 0.5-1 part of sodium hydroxide and 40-50 parts of water. The invention can keep the cell shape of the chlamydomonas, keep the physiological state of the chlamydomonas unchanged, avoid the result of poor sample permeability caused by low-temperature freezing solidification expansion of the chlamydomonas culture solution and have strong fluorescence signals.)

一种测定衣藻低温荧光光谱的生物稳定溶剂

技术领域

本发明涉及一种测定衣藻低温荧光光谱的生物稳定溶剂。

背景技术

叶绿体是绿色植物进行光合作用的重要场所，在叶绿体中，光能被吸收、传递，并最终转化为化学能，这一过程需要光系统II(PSII)、细胞色素b6f、

光系统I(PSI)、ATP合酶四个超分子复合物协同作用。光合作用线性电子传递过程的顺利进行需要两个光系统的电子传递速率协调一致。然而，由于PSI和PSII吸收特性的差异和一天中不同时刻到达光合机构的太阳光光质的自然变化，两个光系统的光能吸收及激发往往是不均衡的。植物要想适应复杂光环境，就需要平衡激发能在两个光系统之间的分配以避免光系统因过度激发而损伤，而状态转换是光合机构维持两个光系统之间的光能均衡分配、反应中心叶绿素分子均衡激发的一种重要的短期调节机制。状态转换是植物光能捕获的快速调节方式之一，可以在几分钟到几十分钟内完成，只涉及捕光天线相对位置的变化，不涉及捕光天线丰度的变化。

77K低温荧光是指在零下196度的温度条件下观测到的叶绿素荧光，这样的低温条件避免了与温度有关的酶反应和电子传递对荧光测量的影响，因此只有原初光化学反应的变化才能被反映出来，一般用于两个光状态之间的状态转化研究。衣藻(Chlamydomonas)是单细胞、带鞭毛的真核水生生物，隶属于绿藻门团藻目衣藻属，体内含有一个占细胞总体积近70％的大型杯状叶绿体。细胞结构较为简单，是研究状态转换机制的模式生物，但是细胞稳定性差，易失水缩水，改变细胞形态，从而不能真实的反映出衣藻实时的生理生化状态。

生物缓冲剂在测定样品中就发挥了很重要的作用，它能够保持衣藻细胞形态稳定，维持衣藻细胞的生理生化状态，避免样品在低温环境中固化膨胀后通透性变差、荧光信号强度低等情况发生，可以更好的研究衣藻如何在短时间内调兵遣将，安排不同的捕光天线结合在适宜的位置，以达到激发能在两个光系统之间的平衡。

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种测定衣藻低温荧光光谱的生物缓冲试剂。本发明可以避免衣藻样品在低温液氮中，固化膨胀后通透性变差情况发生，维持细胞形态，保持衣藻实时的生理生化状态。

本发明中的测定衣藻低温荧光的生物缓冲试剂的配制方法包括以下步骤：

N-(羟甲基)甲基甘氨酸1-2份，三羟甲基氨基甲烷0.5-1.5份，丙三醇40-60 份，氢氧化钠0.5-1份，水40-50份。

优选的，所述衣藻低温荧光生物缓冲剂，由以下重量份的原料制成：

N-(羟甲基)甲基甘氨酸1.4份，三羟甲基氨基甲烷1份，丙三醇50份，氢氧化钠0.6份，水45份。

本发明的第二方面，提供上述制剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)称取适量N-(羟甲基)甲基甘氨酸，三羟甲基氨基甲烷，加入蒸馏水搅拌溶解；

(2)在步骤(1)制备的混合液中加入丙三醇搅拌均匀；

(3)在步骤(2)制备的混合液中，加入氢氧化钠，调节PH值至7.0。

本发明的第三方面，提供上述制剂在衣藻低温荧光光谱测定中的应用。

本发明的第四方面，提供一种衣藻低温荧光光谱的方法，包括以下步骤：

将上述制剂按样品比为1:5-15进行样品配制。

优选的，上述方法中，所述制剂的用量样品比为1:10。

本发明的有益效果：

本发明可以保持衣藻细胞形态，维持衣藻生理状态不变，避免衣藻培养液因固化膨胀造成的样品通透性差后果，荧光信号强。

附图说明

图1为采用本发明方法测得的实例77K低温荧光光谱图；

图2为对比例77K低温荧光光谱图。

实例1衣藻低温荧光光谱样品配制

1.原料组成

N-(羟甲基)甲基甘氨酸1.4份，三羟甲基氨基甲烷1份，丙三醇50份，氢氧化钠0.6份，水45份。

2.制备方法

(1)称取适量N-(羟甲基)甲基甘氨酸，三羟甲基氨基甲烷，加入蒸馏水搅拌溶解；

(2)在步骤(1)制备的混合液中加入丙三醇搅拌均匀；

(3)在步骤(2)制备的混合液中，加入氢氧化钠，调节PH值至7.0。

3.衣藻样品配制

取适量衣藻液体，加入10倍体积的生物缓冲液至无荧光吸收的玻璃管中，混合均匀。

4.样品测定

将衣藻样品放入77k低温荧光光谱仪中，测定。

5.测定结果如图1所示。

对比例1

1.原料组成

N-(羟甲基)甲基甘氨酸3.4份，三羟甲基氨基甲烷3份，丙三醇40份，氢氧化钠0.6份，水50份。

2.制备方法

(1)称取适量N-(羟甲基)甲基甘氨酸，三羟甲基氨基甲烷，加入蒸馏水搅拌溶解；

(2)在步骤(1)制备的混合液中加入丙三醇搅拌均匀；

(3)在步骤(2)制备的混合液中，加入氢氧化钠，调节PH值至7.0。

3.衣藻样品配制

取同一衣藻液体，加入10倍体积的生物缓冲液至无荧光吸收的玻璃管中，混合均匀。

4.样品测定

将衣藻样品放入77k低温荧光光谱仪中，测定。

5.测定结果如图2所示。

通过实验1和对比例1的低温荧光色谱对比来看，本发明实施例制备的制剂能够显著改善样品的通透性，荧光强度，峰型曲线流畅，杂峰减少。