阅读说明：本技术 昆布提取物的应用 (Application of thallus laminariae extract ) 是由 刘玉亮 邓静 于 2020-06-19 设计创作，主要内容包括：本发明属于化妆品技术领域,具体涉及一种昆布提取物的应用。一种昆布提取物的应用,昆布提取物采用如下方法制备得到：步骤1)去除昆布中的水分；步骤2)用有机试剂浸提并抽滤后,得到浸提液；步骤3)浓缩浸提液,除去沉淀得到滤液；滤液为昆布提取物的粗品；应用为昆布提取物在皮肤外用剂中的应用。本发明的昆布提取物应用于皮肤外用剂中,与普通的昆布提取物相比,在护肤品和化妆品中的稳定性提高。(The invention belongs to the technical field of cosmetics, and particularly relates to an application of a kelp extract. The application of the kelp extract comprises the following steps: step 1) removing water in the kelp; step 2), leaching with an organic reagent and carrying out suction filtration to obtain a leaching solution; step 3), concentrating the leaching liquor, and removing precipitates to obtain a filtrate; the filtrate is crude product of thallus laminariae extract; the application is the application of thallus laminariae extract in skin external preparation. The laminaria extract of the invention is applied to skin external preparations, and has improved stability in skin care products and cosmetics compared with the conventional laminaria extract.)

昆布提取物的应用

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种昆布提取物的应用。

背景技术

近代细胞生物学和分子生物学的研究认为，肌肤衰老既是人类基因新陈代谢的必然，又受外源性的损伤影响其衰老速度。外源性损伤包括环境辐射、空气污染、饮食质量、疲劳程度等。

目前，自由基学说理论作为延缓肌肤衰老的理论得到了广泛认同，即：人体天然抗自由基的能力不断下降，人的细胞会衰老，皮肤会变粗糙。消除人体过多的自由基主要是通过抗氧化作用。人体内95％以上自由基是氧自由基，抗氧化就是抑制自由基的氧化反应。活性氧自由基是在体内生理代谢过程中产生的，在正常情况下，人体内具有能够维持氧化与抗氧化之间平衡状态的抗氧化防御系统，用以减缓活性氧及自由基的产生。但是环境中的紫外辐射、空气污染与化学物质等的环境污染物会刺激人体不断产生自由基，大量产生的自由基会导致皮肤的抗氧化防御能力降低，造成皮肤的伤害，出现暗纹、细纹、皱纹等皮肤老化现象。

UV暴露引起的光老化会引起皮肤弹性蛋白酶的活性增加。弹性蛋白酶分布于多种组织和细胞中，弹性蛋白酶活性增加可导致皮肤弹性纤维的水解，从而加速真皮内胶原蛋白和弹性蛋白的分解，使皮肤失去弹性，出现皱纹等皮肤老化现象。

皮肤弹性还与皮肤水分含量关系密切，当角质层富含水分时，皮肤弹性较好，角质层变干可导致皮肤弹性下降，皮肤出现干燥、紧绷和开裂等现象。保湿类成分具有保持皮肤水分，延缓、阻止水分挥发的作用，对维护和修复皮肤屏障功能，减少皮肤出现有重要意义，来源于天然植物的具有保湿滋润作用的物质或组合物具有安全性高，成本低廉等优点，可以广泛应用于化妆品中。

另外，昆布(拉丁名：Ecklonia kurome Okam)亦称“黑菜”、“鹅掌菜”、“五掌菜”等。褐藻纲，翅藻科。生于较冷的海洋中，多附生于大干潮线以下1～3米深处的岩礁上。分布山东，辽宁一带沿海地区。《海药本草》中记载：“其草顺流而生，出新罗者，叶细，黄黑色，胡人搓之为索，阴干，从舶上来中国。”《本草纲目》中列入草部水草类，具有消痰软坚散结，利水消肿的功效，是一种具有很高药用价值的海藻。

发明内容

本发明针对人类皮肤老化，皮肤弹性下降，容易出现干燥、紧绷和开裂等的技术问题，目的在于提供一种昆布提取物的应用。

一种昆布提取物的应用，所述昆布提取物采用如下方法制备得到：

步骤1)去除昆布中的水分；

步骤2)用有机试剂浸提并抽滤后，得到浸提液；

步骤3)浓缩所述浸提液，除去沉淀得到滤液；所述滤液为昆布提取物的粗品；

其特征在于：所述应用为昆布提取物在皮肤外用剂中的应用。

进一步包括如下步骤：

步骤4)将所述滤液进行低温结晶并过滤，得到的结晶为昆布油溶性提取物；

步骤5)步骤4)过滤后得到的滤液采用脂溶性溶剂进行萃取，得到脂溶性溶剂层；

步骤6)所述脂溶性溶剂层进行低温结晶，析出黄绿色固体，即为昆布水溶性提取物；

所述昆布提取物为昆布油溶性提取物、或者昆布水溶性提取物、或者为昆布油溶性提取物和昆布水溶性提取物的混合物。

步骤1)中，先将昆布在-80℃～-5℃进行冻结10～15天，再在室温条件下进行空气解冻，然后将所述昆布于500～8000rpm下离心去除昆布中的水分；并重复该步骤1～4次；

步骤2)将有机试剂加入到所述昆布中，避光浸提1～24小时后抽滤，得到浸提液，将所述昆布反复浸提直至所述浸提液为无色，合并所述浸提液；所述有机试剂为丙酮、甲醇或60～99V/V％的乙醇水溶液；

步骤3)将所述浸提液于15～40℃所述昆布提取物进行浓缩，直至溶液中出现大量沉淀，过滤除去沉淀得滤液；

步骤4)将所述滤液于4～30℃低温下结晶5～72小时，并过滤，得到的结晶为为昆布油溶性提取物；

步骤5)在步骤4)过滤后得到的所述滤液采用脂溶性溶剂进行多次萃取直至脂溶性溶剂层无色，合并多次萃取所得的脂溶性溶剂层；所述脂溶性溶剂为二氯甲烷、正己烷和环己烷中的一种或多种；

步骤6)将所述脂溶性溶剂层进行0～30℃低温浓缩，直至溶液中析出黄绿色固体，即为昆布水溶性提取物。

所述昆布提取物作为天然来源的抗氧化剂和/或保湿剂在皮肤外用剂中的应用。

所述昆布提取物在皮肤外用剂中的含量为0.0005wt％～20wt％，优选为0.001wt％～5wt％。

所述皮肤外用剂为化妆水、精华液、乳霜或乳液。

所述应用为昆布提取物作为抗氧化剂、弹性纤维水解抑制剂、增强皮肤屏障功能剂在皮肤外用剂中的应用。

所述昆布提取物在所述抗氧化剂或所述弹性纤维水解抑制剂中的浓度较佳地为1μg/mL～500μg/mL，更佳地为100μg/mL。

所述昆布提取物在所述增强皮肤屏障功能剂中的浓度较佳地为1μg/mL～500μg/mL，更佳地为100μg/mL。

本发明的积极进步效果在于：本发明采用的制备方法制备得到的昆布提取物，同时含有昆布的水溶性成分和油溶性成分的提取物，作为天然来源的抗氧化剂和保湿剂，其在制备护肤品和化妆品中的应用主要是应用于皮肤外用剂、抗氧化剂、弹性纤维水解抑制剂和增强皮肤屏障功能中，与普通的昆布提取物相比，在护肤品和化妆品中的稳定性提高。且本发明的昆布提取物与其他物质复配，可调节皮肤抗氧化能力和皮肤保湿能力。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面进一步阐述本发明。

一种昆布提取物的应用，昆布提取物采用如下方法制备得到：

步骤1)去除昆布中的水分。

优选的，先将昆布在温度为-80℃～-5℃的条件下进行冻结，冷冻10天～15天后取出，在室温条件下进行空气解冻，直至昆布中心温度达到0～2℃后即完成冻融过程，将昆布放入离心机，于转速为500rpm～8000rpm的条件下离心5分钟～15分钟去除水分，并重复该步骤1～4次。

步骤2)用有机试剂浸提并抽滤后，得到浸提液。

优选的，将有机试剂加入到昆布中，避光浸提1小时～24小时后抽滤，得到浸提液，将昆布反复浸提直至浸提液为无色，合并浸提液。

其中，有机试剂为丙酮、甲醇或60V/V％～99V/V％的乙醇水溶液。

步骤3)浓缩浸提液，除去沉淀得到滤液；滤液为昆布提取物的粗品。

优选的，将浸提液于15℃～40℃条件下进行浓缩，直至溶液中出现沉淀，过滤除去沉淀得滤液。

步骤4)将滤液进行低温结晶并过滤，得到的结晶为昆布油溶性提取物。

优选的，将滤液于4℃～30℃低温结晶5小时～72小时，并过滤，得到的结晶为为昆布油溶性提取物。

步骤5)步骤4)过滤后得到的滤液采用脂溶性溶剂进行萃取，得到脂溶性溶剂层。

优选的，在步骤4)过滤后得到的滤液采用脂溶性溶剂进行多次萃取直至脂溶性溶剂层无色，合并多次萃取所得的脂溶性溶剂层；

其中，脂溶性溶剂为二氯甲烷、正己烷和环己烷中的一种或多种。

步骤6)脂溶性溶剂层进行低温结晶，析出黄绿色固体，即为昆布水溶性提取物。

优选的，将脂溶性溶剂层进行0～30℃低温浓缩，直至溶液中析出黄绿色固体，即为昆布水溶性提取物。

应用为昆布提取物在皮肤外用剂中的应用。

昆布提取物为昆布提取物的粗品、或者昆布油溶性提取物、或者昆布水溶性提取物、或者为昆布油溶性提取物和昆布水溶性提取物的混合物。

昆布提取物作为天然来源的抗氧化剂和/或保湿剂在皮肤外用剂中的应用。昆布提取物在皮肤外用剂中的含量为0.0005wt％～20wt％，优选为0.001wt％～5wt％。皮肤外用剂为化妆水、精华液、乳霜或乳液。

应用为昆布提取物作为抗氧化剂、弹性纤维水解抑制剂、增强皮肤屏障功能剂在皮肤外用剂中的应用。昆布提取物在抗氧化剂或弹性纤维水解抑制剂中的浓度较佳地为1μg/mL～500μg/mL，更佳地为100μg/mL。昆布提取物在增强皮肤屏障功能剂中的浓度较佳地为1μg/mL～500μg/mL，更佳地为100μg/mL。

实施例1，昆布提取物的制备

将新鲜昆布在温度为-40℃的条件下进行冻结，冷冻12天后取出，在室温条件下进行空气解冻直至昆布中心温度达到0℃；将昆布放入离心机，于转速为5000rpm的条件下离心7min去除水分；通过反复冻融和离心3次，控制昆布水分含量为70％。称取100g昆布放入1000mL三角烧杯中，加入85％(V/V)乙醇水溶液500mL，用保鲜膜封住三角烧杯口，避光浸提1小时，过滤。继续向上述浸提处理的昆布中再次加入85％(V/V)乙醇水溶液500mL，用保鲜膜封住三角烧杯口，避光浸提1小时，过滤，合并滤液。滤液于40℃下浓缩，浓缩时当溶液中逐步出现大量沉淀，滤过；取上述滤液继续于40℃下浓缩，直至溶液中析出红色固体，将滤液于5℃低温结晶5h，过滤得红色固体，即为昆布油溶性提取物。再向上述滤液中加入一定量二氯甲烷进行萃取，直至二氯甲烷层液体无色；将二氯甲烷30℃浓缩，直至溶液中有黄绿色固体析出，即为昆布水溶性提取物。混合昆布油溶性提取物和昆布水溶性提取物，得到昆布提取物。

实施例2，昆布提取物DPPH法清除自由基活性检测

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH)是一种稳定的氮中心有机自由基，其乙醇溶液呈深紫色，约在517nm左右有强吸收；当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使DPPH吸收减弱，逐渐消失。DPPH乙醇溶液褪色程度与其接受的电子数呈定量关系，因此可用分光光度计进行快速定量分析，检测自由基清除情况，评价抗氧化剂清除自由基能力。

DPPH乙醇溶液的配制：准确称量6mg DPPH，用95％乙醇溶解并定容于50mL容量瓶中，超声辅助溶解。使用时再用95％乙醇稀释四倍，得到浓度为3mg/100mL(76μM)的DPPH乙醇溶液，避光保存(0～4℃)。

待测样品预处理：将实施例1制备得到的昆布提取物、抗坏血酸标准品溶解于去离子水，并用去离子水稀释到适合的浓度备用。

实验步骤：将待测样品溶液2mL加入试管中，之后加入2mL DPPH乙醇溶液，混匀。室温下避光在黑暗处反应30min，在525nm处测定吸光度Abs；除样品组外，分别设样品溶剂对照组，空白对照组和溶剂对照组(DPPH的溶剂)，阳性对照组为抗坏血酸组。

清除率I(％)＝[1-(T-T0)/(C-C0)]×100％

式中：

T0：待测样品液加等体积95％乙醇的吸光度(样品溶剂对照组)；

T：待测样品液加等体积DPPH溶液的吸光度(样品组)；

C0：蒸馏水加等体积95％乙醇的吸光度(溶剂对照组)；

C：蒸馏水加等体积DPPH溶液的吸光度(空白对照组)。

表1清除自由基作用的测定结果

由表1可知，昆布提取物具有清除DPPH自由基的作用。相比于空白对照组，昆布提取物组自由基清除率为84％。因此，昆布提取物具有较强的清除自由基的能力。

实施例3，昆布提取物ABTS清除能力检测

将ABTS(2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐)溶解(+H₂O)至终浓度为7mmol/L，过硫酸钾配制成2.45mmol/L，将二者溶液1：1混合，放置于黑暗，室温条件下搅拌16h；而后将ABTS混合溶液用PBS溶液(PH＝7.0)稀释到其吸光值(于734nm处测)为0.70±0.02；昆布提取物用石油醚/乙醇(1∶1)稀释至不同浓度，分别为1.5μg/mL，3μg/mL，6μg/mL，13μg/mL，25μg/mL，50μg/mL，100μg/mL；最后将上述不同浓度的样品加入到ABTS混合溶液中，其样品与ABTS混合溶液比例为1∶20，混合后于室温下孵育6min，于734nm处测定吸光值。

计算公式：ABTS清除率(％)＝(1-A1/A0)×100％

式中：

A1：ABTS混合溶液的吸光值

A0：ABTS混合溶液中加入样品后测定的吸光值。

表2 ABTS清除能力的测定结果

由表2可知，昆布提取物具有较强的清除ABTS的能力，其清除率均在80％以上，其清除率均在随着昆布浓度的增加而增加，且100μg/mL的昆布提取物对ABTS的清除率高达86.8％。因此，昆布提取物具有较强的清除ABTS的能力。

实施例4，昆布提取物弹性蛋白酶活性抑制率的检测

实验步骤：在96孔板中加入10μL样品溶液和130μL含有1.015mM反应底物Succ-Ala-Ala-Ala-p-硝基酰替苯胺的0.1M Tris-HCl缓冲溶液(pH8.0)，在25℃下温育5分钟，加入15μL弹性蛋白酶溶液(0.5U/mL)，继续在25℃下温育30min，然后用酶标仪测定410nm波长的吸光度A410，样品溶液包括实施例1制备得到的昆布提取物配制的溶液和Elastatinal溶液(均以去离子稀释到合适的浓度)，其中Elastatinal溶液(弹性蛋白酶抑制剂，外购)是作为阳性对照组。用去离子水替换样品水溶液，作为参比溶液同样测定吸光度。

弹性蛋白酶活性抑制率计算公式为：抑制率(％)＝(A0-(A410-B))/A0×100％

其中:

A0：参比溶液的吸光度

A410：是样品溶液的吸光度

B：样品空白溶液的吸光度。

表3弹性蛋白酶活性抑制的测定结果

由表3可知，昆布提取物具有抑制弹性蛋白酶的作用，昆布提取物弹性蛋白酶抑制率为42％。

实施例5，昆布提取物的保湿活性测定(体外称重法)

测试样品：取上述实施例1中的昆布提取物，用去离子水配制成5％(w/v)溶液。

对照样品：去离子水、5％甘油。

测试方法：用体外称重保湿法测定其保湿活性，选用同一规格的载玻片，在上面贴一层医用透气胶带，室温条件下吸取各测试样品50μL，均匀涂敷在透气胶带上，然后置于相对湿度为60％(醋酸钾饱和溶液)的干燥器中干燥，24小时后称量样品质量的减少，平行测定三次，取平均值，计算出样品的保湿率。

保湿率(％)＝放置24小时后的样品质量/放置前的样品质量*100％

表4保湿活性测定的结果

由表4可见，昆布提取物与甘油相比，在相同的条件下，保湿效果优于甘油。因此，昆布提取物具有较强的保湿能力。

实施例6，含有昆布提取物的皮肤外用剂

取实施例1中制备得到的昆布提取物，用于皮肤外用剂的制备。皮肤外用剂优选为化妆品组合物，例如化妆水、精华液、乳霜等。昆布提取物在皮肤外用剂中的重量百分比是0.001-20，优选1-20。以下是昆布提取物在皮肤外用剂中的具体应用的实施例。以下各表中“-”表示无添加。

实施例7：含有昆布提取物的化妆水

取实施例1制备的昆布提取物，用于制备化妆水，含有昆布提取物的化妆水含有的组分如表5所示。

表5

实施例8：含有昆布提取物的精华液

取实施例1制备的昆布提取物，用于制备具有抗氧化和保湿作用的精华，含有昆布提取物的精华液含有的组分如表6所示。

表6

实施例9：含有昆布提取物的乳液/霜

取实施例1制备的昆布提取物，用于制备具有抗氧化和保湿作用的乳液/霜，含有昆布提取物的乳液/霜含有的组分如表7所示。

表7

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。