阅读说明：本技术 乌苯美司醋酸盐单晶及其制备方法和应用 (Ubenimex acetate monocrystal and preparation method and application thereof ) 是由 吴子强 刘东华 于玉根 陈其阳 袁文 雷光华 于 2020-06-03 设计创作，主要内容包括：本发明提供了乌苯美司醋酸盐单晶及其制备方法,该单晶体纯度高,能够用于进行X射线单晶衍射确定乌苯美司原料药的绝对构型,且溶解性好,能够用于制备乌苯美司醋酸盐药物组合物,具有临床使用价值。本发明提供的乌苯美司醋酸盐单晶的制备方法析晶时间短,能够制备得到稳定均匀的乌苯美司醋酸盐单晶。(The ubenimex acetate single crystal and the preparation method thereof provided by the invention have the advantages that the purity of the single crystal is high, the single crystal can be used for determining the absolute configuration of ubenimex raw material medicines by X-ray single crystal diffraction, the solubility is good, the single crystal can be used for preparing ubenimex acetate pharmaceutical compositions, and the clinical use value is high. The preparation method of the ubenimex acetate single crystal provided by the invention is short in crystallization time, and can be used for preparing the stable and uniform ubenimex acetate single crystal.)

乌苯美司醋酸盐单晶及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及药物合成领域，具体来说，本发明涉及醋酸乌苯美司的单晶及其制备方法和应用。

背景技术

乌苯美司是从链霉菌属的培养液中分离所得的化合物，可竞争性地抑制氨肽酶B(aminopeptidase B)及亮氨酸肽酶(leucineaminopeptidase)，增强T细胞的功能，使NK细胞的杀伤活力增强，且可使集落刺激因子合成增加而刺激骨髓细胞的再生及分化。乌苯美司具有增强免疫的功能，是临床上唯一的CD13拮抗剂，可全面阻击多种肿瘤细胞的发生和发展，从而抑制肿瘤转移和复发，抑制肿瘤新生血管形成及肿瘤细胞增生，促进肿瘤细胞凋亡，可配合化疗、放疗及联合应用于白血病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合症及造血干细胞移植后，以及其它实体瘤患者；以及肺癌、胃癌、鼻咽癌、肝癌、食道癌、肠癌、乳腺癌、黑色素细胞瘤、膀胱癌、阴茎癌等其它实体瘤患者，各种因素引起的免疫功能低下，且能有效改善患者的生活质量。

乌苯美司的醋酸盐分子式C₁₆H₂₄N₇O₄·HOAC，结构式为：

乌苯美司的结构式含有三个手性中心，在对化学合成制备得到的乌苯美司原料药进行结构确证时确定其绝对构型时，首选单晶X射线衍射法，但首先需制备待测化合物的单晶以供测试。现有技术US4786754有公开乌苯美司α、β晶型,US4786754公开了γ晶型，CN108892625A公开了一种乌苯美司γ晶型的制备方法，CN 106631880 B公开了一种乌苯美司δ晶型及其制备方法，CN 103910648 B公开了一种盐酸乌苯美司的晶型，但根据上述技术所公开晶型的制备方法及所采用的晶型检测法为X射线粉末衍射法可知，它们制备得到的乌苯美司或盐酸乌苯美司的晶体非单晶体，晶型样品为多晶体。因此，制备乌苯美司原料药时，为了确保制备得到的乌苯美司具有正确的立体构型，有必要研究制备出乌苯美司的单晶通过X射线单晶衍射确定其绝对构型。

发明内容

本发明提供了一种乌苯美司醋酸盐的单晶及其制备方法，采用将乌苯美司在冰醋酸中溶解后加低极性有机溶剂缓慢析晶的方法制备，所需析晶时间短，制备得到的单晶纯度高，内部微粒分布均匀，稳定性较好。

本发明提供的乌苯美司醋酸盐单晶，其特征在于所述单晶为斜方晶系，其晶轴 晶面间夹角α/°＝90，β/°＝90，γ/°＝90，单位晶格面积V＝2024.63(6)，单位晶格中的分子数Z＝4，密度d＝1.209。

本发明提供的乌苯美司醋酸盐单晶是在采用有关乌苯美司晶型的现有技术无法制备得到单晶体的情况下发现的。在采用加热溶解后缓慢挥发法制备乌苯美司单晶时，采用水溶解后加甲醇/乙醇/丙酮稀释成不同浓度的溶液后静置析晶，或甲醇溶解后加不同有机溶剂(乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、异丙醇、丙酮等)稀释成不同浓度的溶液后静置析晶，都无法制备出乌苯美司的单晶。尝试将乌苯美司成盐后培养单晶，将乌苯美司分别在盐酸、柠檬酸、酒石酸、醋酸等常用酸中溶解后，加有机溶剂析晶。结果显示，盐酸溶解无法得到单晶，柠檬酸和酒石酸仅能得到极少量的单晶，仅在醋酸中溶解能够析晶培养得到粒度分布均匀且纯度高的单晶体。

所述乌苯美司醋酸盐单晶的制备方法为将乌苯美司在冰醋酸中室温下溶解，缓慢加入低极性溶剂，加热50～80℃搅拌均匀至溶液澄清，趁热过滤，滤液密封室温静置放置0.5小时～5小时，得到无色块状单晶体。

所述低级性溶剂选自二氯甲烷、正己烷、丙酮、戊酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸异丙酯中一种或其中酮类和酯类的混合溶剂，优选丙酮、乙酸乙酯或两者混合，最优选乙酸乙酯。

所述乌苯美司的重量(g)与冰醋酸(ml)的体积比为1:2～10，所述冰醋酸与低极性溶剂体体积比为1:1～10；低级性溶剂为酮类和酯类混合溶剂时，酮类和酯类溶剂的体积比为1:1～10。

将乌苯美司0.5g溶解在5mL冰醋酸中，采用不同低极性溶剂析晶制备单晶的工艺参数及结果见下表：

上述低极性溶剂均能制备得到单晶。在显微镜下，采用乙酸乙酯作为析晶溶剂时得到的单晶最均匀，因此，优选乌苯美司醋酸盐单晶的制备方法为：将乌苯美司0.5g在5ml冰醋酸中室温下搅拌溶解，然后慢慢加入25ml乙酸乙酯，水浴加热至50℃搅拌均匀，趁热过滤，滤液密封，室温静置放置0.5小时，过滤得到无色块状晶体。

本发明的乌苯美司醋酸盐单晶可用来制备药物组合物，所述的药物组合物为口服制剂，可以为片剂或胶囊剂。所述药物组合物由乌苯美司醋酸盐单晶、填充剂、崩解剂、润滑剂等药学上可接受的辅料制备而成。

本发明所述的由乌苯美司醋酸盐单晶制备的药物组合物中，乌苯美司醋酸盐含量为45～180mg，优选为119.5mg；填充剂为乳糖、微晶纤维素或甘露醇，优选乳糖和微晶纤维素，其中醋酸乌苯美司与填充剂的重量比为1:1～30；所述崩解剂选自羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、预胶化淀粉、交联羧甲基纤维素纳和低取代羟丙基纤维素中至少一种，优选羧甲基淀粉钠，崩解剂与乌苯美司醋酸盐的比例为1～3:1；所述润滑剂优选硬脂酸镁和/或微粉硅胶，润滑剂的含量为乌苯美司醋酸盐与填充剂重量之和的1～2％。

采用湿法制粒的方法制备还需加粘合剂，所述粘合剂选自羟丙甲纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠，优选羧甲基淀粉钠。

本发明提供的乌苯美司醋酸盐药物组合物溶出度好，生物利用度高，适合应用于增强免疫功能，抗癌化疗、放疗的辅助治疗，老年性免疫功能缺陷等。

本发明是在研究乌苯美司绝对构型制备乌苯美司单晶样品时制备出乌苯美司醋酸盐单晶，该单晶体纯度高，能够用于进行X射线单晶衍射确定乌苯美司原料药的绝对构型，且溶解性好，能够用于制备乌苯美司醋酸盐药物组合物，具有临床使用价值。本发明提供的乌苯美司醋酸盐单晶的制备方法析晶时间短，能够制备得到稳定均匀的乌苯美司醋酸盐单晶。

下面结合说明书附图和

具体实施方式

对本发明做进一步说明。

说明书附图

附图1乌苯美司醋酸盐单晶的X射线单晶衍射空间结构图

具体实施方式

实施例1乌苯美司醋酸盐单晶的制备

称取乌苯美司0.5g，加入圆底烧瓶中，加5ml醋酸，室温下搅拌溶解，然后慢慢加入25ml乙酸乙酯，水浴加热至50℃，趁热过滤，滤液密封，静置放置0.5小时，得到无色块状晶体，过滤得到产品。

将得到的单晶进行X射线单晶衍射测试，得到的单晶空间结构图见附图1。从附图1可知，C8手性为R型(即3R)，C9手性为S型(即2S)，C11手性为S型(即L-亮氨酸)，该单晶所示结构元素组成及立体构型与乌苯美司乙酸盐立体构型完全相符。

实施例2乌苯美司醋酸盐单晶溶解度实验

按照US4786754和CN103910648A的方法制备乌苯美司γ晶型和盐酸乌苯美司，与实施例1制备得到的乌苯美司醋酸盐单晶同时测试以1mL水为溶剂,25℃时的溶解度，结果见下表：

化合物	水(1ml,25℃)
		乌苯美司γ晶型	24.80mg
盐酸乌苯美司	26.18mg
		乌苯美司醋酸盐单晶	30.21mg

结果表明，本发明的乌苯美司醋酸盐单晶相比乌苯美司在水中有更高的溶解度。

实施例3乌苯美司醋酸盐单晶稳定性实验

考察本发明的乌苯美司醋酸盐单晶留样0～18个月不同时间时的外观，以及溶解在水中的色泽、澄清度及含量，结果见下表：

留样时间(月)	外观	溶液色泽	澄清度	含量
					0	白色结晶粉末	黄绿色5号	＜0.5	99.9％
6	白色结晶粉末	黄绿色5号	＜0.5	99.5％
					12	白色结晶粉末	黄绿色5号	＜0.5	99.2％
18	白色结晶粉末	黄绿色5号	＜0.5	99.1％

结果表明本发明的乌苯美司醋酸盐单晶稳定性好。

实施例4乌苯美司醋酸盐胶囊的制备

处方组成：

制备方法：将处方量的聚乙烯吡咯烷酮加乙醇溶液配制成12％的聚乙烯吡咯烷酮溶液，将乌苯美司醋酸盐单晶粉碎过80-100目筛后加入该溶液制得含药粘合剂，另将微晶纤维素、乳糖、交联羧甲基纤维素纳分别过80-100目筛后混合均匀后作底料，用含药粘合剂于流化床25℃制粒，18目整粒，加入硬脂酸镁混合均匀后装填胶囊。

测试溶出度，并与市售乌苯美司胶囊对比，结果为：

结果表明，乌苯美司醋酸盐胶囊溶出速度较快，体外的一致性较好。

实施例5乌苯美司醋酸盐片剂的制备

处方组成：

制备方法：将乌苯美司醋酸盐单晶粉碎，与乳糖、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠混合后过80目筛，加入硬脂酸镁，混合均匀，压片。

测试溶出度，并与市售乌苯美司片对比，结果为：

结果表明，乌苯美司醋酸盐片溶出速度较快，体外的一致性较好。