一种地黄块根的诱导营养液及诱导培养方法
阅读说明：本技术 一种地黄块根的诱导营养液及诱导培养方法 (Induction nutrient solution and induction culture method for rehmannia root tuber ) 是由 薛涛 薛建平 段永波 戈圆圆 刘鑫 刘嫚 江珊珊 姜雪云 施江 熊雨婕 于 2020-05-07 设计创作，主要内容包括：本发明涉及组织培养技术领域,具体涉及一种地黄块根的诱导营养液及诱导培养方法。每L所述营养液中包括如下组分：黄腐酸12-13mg、硝酸铵115-125mg、磷酐22-26mg、氧化钾155-160mg、氧化钙80-83mg、硫酸镁23-26mg、EDTA-Mn0.25-0.26mg、EDTA-Fe0.25-0.26mg、EDTA-Zn0.033-0.036mg、EDTA-Cu 0.005mg、钼酸铵0.005mg,硼酸0.005mg；以水定容。本发明还提供了利用该营养液诱导培养地黄块根的方法,二者配合能够促进地黄块根的诱导,提高地黄块根的移栽萌发率和移栽萌发率,突破解决了试管地黄块根易愈伤化,后期难以萌发的技术难点。(The invention relates to the technical field of tissue culture, in particular to an induction nutrient solution and an induction culture method for a rehmannia root tuber. Each L of the nutrient solution comprises the following components: 12-13mg of fulvic acid, 125mg of ammonium nitrate 115-160 mg of phosphoric anhydride, 22-26mg of potassium oxide 155-160mg of calcium oxide, 80-83mg of magnesium sulfate, 23-26mg of EDTA-Mn0.25-0.26mg of EDTA-Fe0.25-0.26mg of EDTA-Zn0.033-0.036mg of EDTA-Cu0.005mg, 0.005mg of ammonium molybdate and 0.005mg of boric acid; the volume is determined by water. The invention also provides a method for inducing and culturing the rehmannia root tuber by using the nutrient solution, and the two are matched to promote the induction of the rehmannia root tuber, improve the transplanting germination rate and the transplanting germination rate of the rehmannia root tuber, and break through the technical difficulties that the rehmannia root tuber in a test tube is easy to callus and difficult to germinate in the later period.)
技术领域
本发明涉及组织培养技术领域，具体涉及一种地黄块根的诱导营养液及诱导培养方法。
背景技术
地黄为玄参科药用草本植物，其块根入药，是我国常用的大宗药材之一，具抗肿瘤、抗衰老、降血糖、增强免疫力等功效。地黄在我国分布广泛，主要为大田栽培，多分布于山西、河南、安徽、四川等地，其中河南焦作一带为地黄的道地产区。长期以来地黄多采用块根无性繁殖方法，引起病毒病泛滥，导致地黄品种严重退化，影响其产量和品质。针对植物病毒病，目前尚无安全有效的药物治疗途径，主要依赖于植物茎尖的脱毒培养，进而培育脱毒苗，但脱毒苗存在运输不便、移栽存活率低等缺点，一定程度影响其推广应用。
基于脱毒试管苗推广的缺点，有研究报道了试管地黄块根的诱导，并展望了试管块根生产人工种子的应用前景，但诱导的试管地黄块根多易愈伤化，后期难以萌发，限制了后期的推广应用。因此，开发一种便捷易推广的地黄种苗培育方法成为地黄种植生产中亟待解决的科学问题。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种地黄块根的诱导营养液及诱导培养方法。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种地黄块根的诱导营养液，每L所述营养液中包括如下组分：黄腐酸12-13mg、硝酸铵115-125mg、磷酐22-26mg、氧化钾155-160mg、氧化钙80-83mg、硫酸镁23-26mg、EDTA-Mn0.25-0.26mg、EDTA-Fe0.25-0.26mg、EDTA-Zn0.033-0.036mg、EDTA-Cu0.005 mg、钼酸铵0.005mg，硼酸0.005mg；
以水定容。
进一步的，所述的营养液的pH值范围在5.5-6.0。
本发明还提供了利用上述营养液诱导培养地黄块根的方法，包括以下步骤：
将地黄试管苗脱毒及快繁，后对获得的脱毒地黄苗进行生根壮苗培养，地黄苗生根后移至雾培系统培养，培养光照强度为12000lux，培养温度25℃，培养期间定时喷雾营养液，从移至雾培系统开始计算，前期喷雾周期设置为20min/次，每次喷雾15s，培养7-8d待新根生成后，将喷雾周期调为40min/次，每次喷雾15s，培养80-90d后，剪取生成的块根转至土中进行萌发。
与现有技术相比，本发明具有如下技术效果：
本发明的营养液以黄腐酸和硼酸为主效因子起诱导作用，并配合其他组分提供营养元素，其中，C元素来源于黄腐酸、N元素来源于硝酸铵和钼酸铵、P元素来源于磷酐、K元素来源于氧化钾、Ca元素来源于氧化钙、Mg元素来源于硫酸镁、Mn元素来源于EDTA-Mn，Fe元素来源于EDTA-Fe、Zn元素来源于EDTA-Zn、Cu元素来源于EDTA-Cu、Mo元素来源于钼酸铵、B元素来源于硼酸。
本发明的营养液配合诱导方法，能够促进地黄块根的诱导，提高地黄块根的移栽萌发率和移栽萌发率，突破解决了试管地黄块根易愈伤化，后期难以萌发的技术难点。
附图说明
图1为脱毒地黄苗的生根培养。
图2A为脱毒地黄苗的雾化培养，B为块根诱导。
图3A为脱毒地黄苗诱导后的块根，B为萌发试验结果。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明，但不应理解为本发明的限制。如未特殊说明，下述实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
地黄块根的诱导营养液的配制
按质量称取如下组分：黄腐酸12mg、硝酸铵115mg、磷酐22mg、氧化钾155mg、氧化钙80mg、硫酸镁23mg、EDTA-Mn素0.25mg、EDTA-Fe 0.25mg、EDTA-Zn素0.033mg、EDTA-Cu0.005mg、钼酸铵0.005mg、硼酸0.005mg，加水定容至1L，调整pH至5.7，制得营养液。
实施例2
地黄块根的诱导营养液的配制
按质量称取如下组分：黄腐酸12.5mg、硝酸铵120mg、磷酐24mg、氧化钾158mg、氧化钙81mg、硫酸镁25mg、EDTA-Mn 0.258mg、EDTA-Fe 0.034mg、EDTA-Zn0.035 mg、EDTA-Cu0.005mg、钼酸铵0.005mg、硼酸0.005mg，加水定容至1L，调整pH至5.5，制得营养液。
实施例3
地黄块根的诱导营养液的配制
按质量称取如下组分：黄腐酸13mg、硝酸铵125mg、磷酐26mg、氧化钾160mg、氧化钙83mg、Mg元素26mg、硫酸镁0.26mg、EDTA-Mn 0.26mg、EDTA-Fe 0.26mg、EDTA-Zn 0.036mg、EDTA-Cu 0.005mg、钼酸铵0.005mg、硼酸0.005mg，加水定容至1L，调整pH至6，制得营养液。
对比例1
地黄块根的诱导营养液的配制
按质量称取如下组分：黄腐酸12mg、硝酸铵130mg、磷酐20mg、氧化钾170mg、氧化钙75mg、硫酸镁30mg、EDTA-Mn 0.3mg、EDTA-Fe 0.3mg、EDTA-Zn 0.04mg、EDTA-Cu 0.005mg、钼酸铵0.005mg、硼酸0.005mg，加水定容至1L，调整pH至6，制得营养液。
对比例2
地黄块根的诱导营养液的配制
省略黄腐酸，其余同实施例1。
对比例3
省略硼酸，其余同实施例1。
对比例4
地黄块根的诱导营养液的配制
EDTA-Cu质量0.004mg，其余同实施例1。
对比例5
地黄块根的诱导营养液的配制
EDTA-Cu质量0.006mg，其余同实施例1。
对比例6
地黄块根的诱导营养液的配制
钼酸铵0.004mg，其余同实施例1。
对比例7
地黄块根的诱导营养液的配制
钼酸铵0.006mg，其余同实施例1。
对比例8
地黄块根的诱导营养液的配制
硼酸0.004mg，其余同实施例1。
对比例9
地黄块根的诱导营养液的配制
硼酸0.006mg，其余同实施例1。
实施例4
取85-5怀地黄试管苗，于超净工作台上借助解剖镜剥取其生长点，转接至含2.0mg6-BA和0.2mg IAA的MS培养基进行植株再生的培养，随后将诱导的脱毒地黄苗转至含0.1mg的1/2MS诱导生根(图1)。地黄苗生根后移至雾培系统培养，培养光照强度为12000lux，培养温度25℃，培养期间定时对地黄苗根部喷雾营养液，从移至雾培系统开始计算，前期喷雾周期设置为20min/次，每次喷雾15s，培养7-8d待新根生成后，将喷雾周期调为40min/次，每次喷雾15s，培养80d后，随机抽取20株测定块根数量，剪取生成的块根转至土中进行萌发，记录移栽萌发率和移栽成活率。
实验组：采用实施例1-3制备的营养液，记作A、B、C组。
对照组：采用对比例1-9制备的营养液，记作D-M组。
表1 不同营养液对地黄块根诱导培养的影响
如表1及图2-3所示，结果表明A、B、C组平均每株诱导的块根数量显著高于D-F组，移栽萌发率均为100％，移栽成活率高于95％。
需要说明的是，本发明权利要求书中涉及数值范围时，应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用，为了防止赘述，本发明描述了优选的实施例。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。