阅读说明：本技术 双膦酸盐型自凝固复合骨移植物及其制备方法 (Bisphosphonate type self-coagulation composite bone graft and preparation method thereof ) 是由 严永刚 邓光进 于 2020-05-21 设计创作，主要内容包括：本发明属于骨修复材料领域,具体涉及用于骨质疏松修复和重建的双膦酸盐型自凝固复合骨移植物及其制备方法。本发明提供一种双膦酸盐型自凝固复合骨移植物,所述复合骨移植物为双膦酸钙盐/自凝固钙盐复合物,所述双膦酸钙盐/自凝固钙盐复合物由固相部分和液相部分组成,固液比为1：0.3～1.0g/ml；其中,固相部分包括双膦酸钙盐和自凝固钙盐,各原料的质量比为：双膦酸钙盐：自凝固钙盐＝1：1～6。本发明首次将双膦酸盐与自凝固复合材料复合得到一种骨移植物,该自凝固复合骨移植物具有优良的可注射性、合适的凝固时间、缓慢的双膦酸根释放和优异的生物活性,可以用于骨质疏松和创伤引起的骨缺损的修复和重建与功能恢复。(The invention belongs to the field of bone repair materials, and particularly relates to a bisphosphonate type self-setting composite bone graft for repairing and reconstructing osteoporosis and a preparation method thereof. The invention provides a bisphosphonate type self-coagulation composite bone graft, which is a calcium bisphosphonate/self-coagulation calcium salt composite, wherein the calcium bisphosphonate/self-coagulation calcium salt composite consists of a solid phase part and a liquid phase part, and the solid-liquid ratio is 1: 0.3-1.0 g/ml; wherein the solid phase part comprises calcium biphosphate and self-solidifying calcium salt, and the mass ratio of the raw materials is as follows: calcium bisphosphate salt: self-setting calcium salt 1: 1 to 6. The invention firstly compounds the bisphosphonate and the self-solidifying composite material to obtain the bone graft, and the self-solidifying composite bone graft has excellent injectability, proper solidification time, slow diphosphonate release and excellent biological activity, and can be used for repairing and reconstructing bone defects caused by osteoporosis and trauma and restoring functions.)

双膦酸盐型自凝固复合骨移植物及其制备方法

技术领域

本发明属于骨修复材料领域，具体涉及用于骨质疏松修复和重建的双膦酸盐型自凝固复合骨移植物及其制备方法。

背景技术

骨质疏松(osteoporosis，OP)是一种以低骨量和骨组织微结构破坏为特征，导致骨质脆性增加和易于骨折的全身性骨代谢性疾病。各年龄时期均可发病，分为原发性和继发性两类。原发性骨质疏松系指不伴引起本病的其他疾患；继发性骨质疏松则是由于各种全身性或内分泌代谢性疾病引起的骨组织量减少。常常在不知不觉中发生椎体压缩骨折，也可因咳嗽、打喷嚏、轻微外伤等诱发椎体骨折。新鲜椎体骨折的数周内，出现局部疼痛，体征出现叩击痛。多个椎体压缩者，出现驼背(罗锅)，身高变矮；非椎体骨折时，疼痛和畸形表现更加严重。

骨吸收抑制药包括雌激素、雌激素受体调节剂、双磷酸盐、降钙素等4类，常常单独或轮流应用；但是联合2种或多种，而且足量应用时(例如：充足剂量的女性激素替代的同时，应用阿仑膦酸钠(福善美)每天10mg的剂量)，尽管骨密度的增加更加有效，但是尚不了解对于“骨微结构”、“骨脆性”、“骨折发病率”的影响。

对于双膦酸盐药物，无论是口服还是注射，都存在以下问题：

(1)双膦酸盐的水溶性高，如阿伦磷酸钠水中溶解性为10mg/mL，代谢过快、短时间药物浓度在胃中或血液中达到高峰，随后迅速衰减，并排泄出体外，药物使用效率低，并需要频繁用药；

(2)水溶性高导致的刺激和副作用，比如阿膦酸钠导致兔胃糜烂；阿仑膦酸盐增加吲哚美辛诱导的胃窦溃疡的发生率；阿仑膦酸盐还可增强吲哚美辛诱导的大鼠胃损伤，延缓胃溃疡愈合；阿仑膦酸盐(每周两次0.04-0.1mg/kg或每周0.1mg/kg)部分阻断人PC-3ML细胞的骨转移的建立，并导致腹膜和其他软组织中的肿瘤形成；

(3)骨形成的基础元素是自由钙离子和自由磷酸根离子，通过DNA的调节逐步形成难溶性钙盐如羟基磷灰石等从而形成骨组织，单一双膦酸盐如阿仑膦酸盐直接作用于破骨细胞，抑制胆固醇生物合成途径中的限速步骤外，难以提供更多的成骨元素；

(4)由骨质疏松或其它原因引起的骨丢失和损伤，需要再缺损部位的即时填充、免得由于空隙导致的进一步骨折和创伤，因此原位固化固定和填充的骨修复和重建材料有利于骨重建和恢复。

发明内容

针对上述情况，本发明的目的在于提供一种双膦酸盐型自凝固复合骨移植物及其制备方法，本发明首次将双膦酸盐与自凝固复合材料复合得到一种骨移植物，该自凝固复合骨移植物具有优良的可注射性、合适的凝固时间、缓慢的双膦酸根释放和优异的生物活性，可以用于骨质疏松和创伤引起的骨缺损的修复和重建与功能恢复。

本发明的技术方案：

本发明要解决的第一个技术问题提供一种双膦酸盐型自凝固复合骨移植物，所述复合骨移植物为双膦酸钙盐/自凝固钙盐复合物，所述双膦酸钙盐/自凝固钙盐复合物由固相部分和液相部分组成，固液比为1：0.3～1.0g/ml；其中，固相部分包括双膦酸钙盐和自凝固钙盐，各原料的质量比为：双膦酸钙盐：自凝固钙盐＝1：1～6。

进一步，所述自凝固钙盐为两种及其以上自凝固钙盐的复合物。

更进一步，所述自凝固钙盐选自硅酸三钙(Ca₃SiO₅，C₃S)、硅酸二钙(2CaO·SiO₂，C₂S)、柠檬酸钙(C₁₂H₁₀Ca₃O₁₄)、海藻酸钙(C₁₈H₂₄CaO₁₉)、磷酸氢钙(CaHO₄P)或半水硫酸钙(CaH₂O₅S.H₂O)中的至少两种。

进一步，所述液相组分为注射用水、生理盐水或葡萄糖注射液中的至少一种。

进一步，所述双膦酸钙盐采用下述方法制得：将中性或微碱性钙化合物与双膦酸钠盐通过离子交换反应，得到微溶或难溶的双膦酸钙盐。

进一步，所述双膦酸钠盐选自：阿仑膦酸钠、奈立膦酸钠盐、奥帕膦酸钠、利赛膦酸钠、伊班膦酸钠或帕米膦酸钠中的至少一种。

进一步，所述中性或微碱性钙化物选自：无水氯化钙(CaCl₂)、硅酸三钙(Ca₃SiO₅，C₃S)、硅酸二钙(2CaO·SiO₂，C₂S)、氧化钙(CaO)、氢氧化钙[Ca(OH)₂]、柠檬酸钙(C₁₂H₁₀Ca₃O₁₄)或磷酸氢钙(CaHO₄P)中的至少一种。

进一步，所述固相部分还包括保湿剂，所述保湿剂选自：海藻酸钠、透明质酸或明胶中的至少一种。

进一步，所述保湿剂的添加量为固相部分(固体)总质量的0.5～5％。

进一步，所述双膦酸钙盐/自凝固钙盐复合物进入血液、体液、模拟体液等pH为7～8。

本发明要解决的第二个技术问题是提供上述双磷酸盐型自凝固复合骨移植物的制备方法，所述制备方法为：以双膦酸钙盐、自凝固钙盐和固化液为原料，各原料搅拌混匀并成型得双膦酸盐型自凝固复合骨移植物；其中，固液比为1：0.3～1.0g/ml；双膦酸钙盐和自凝固钙盐的质量比为：双膦酸钙盐：自凝固钙盐＝1：1～6。

进一步，所述自凝固钙盐为两种及其以上自凝固钙盐的复合物。

更进一步，所述自凝固钙盐选自硅酸三钙(Ca₃SiO₅，C₃S)、硅酸二钙(2CaO·SiO₂，C₂S)、柠檬酸钙(C₁₂H₁₀Ca₃O₁₄)、海藻酸钙(C₁₈H₂₄CaO₁₉)、磷酸氢钙(CaHO₄P)或半水硫酸钙(CaH₂O₅S.H₂O)中的至少两种。

进一步，所述固化液为注射用水、生理盐水或葡萄糖注射液中的至少一种。

进一步，上述原料中还包括保湿剂，所述保湿剂选自：海藻酸钠、透明质酸或明胶中的至少一种。

进一步，所述保湿剂的添加量为固相部分(固体)总量的0.5～5％。

进一步，上述方法中，双膦酸钙盐、自凝固钙(有保湿剂的一起加入)与固化液搅拌混合成型前先采用球磨的方法混合均匀；其中，球磨时间为2～12小时；优选为4～8小时，球磨速率为100～200转/分钟，优选120～150转/分钟。

进一步，所述自凝固钙盐使用前于120℃真空下干燥5～24小时，优选8～12小时，除去游离水分。

进一步，上述方法中，所述双膦酸钙盐采用下述方法制得：将中性或微碱性钙化合物与双膦酸钠盐通过离子交换反应，得到微溶或难溶的双膦酸钙盐。

进一步，制备双膦酸钙盐的方法为：常温下将双膦酸钠盐(NaR)溶于水中，然后加入中性或微碱性钙化合物(CaX)，充分搅拌0.5～2.0小时，密封放置12～24小时，然后离心除去上清液，用水洗涤至少4次(水洗比例固液比为1：5)后，冷冻干燥或者真空阴干到双膦酸钙盐(CaR)，磨细为300μm以下细粉备用；其中双磷酸钠盐和钙化合物的摩尔比为：NaR：CaX＝1：0.5～2.0(mol)。

进一步，所述双膦酸钠盐选自：阿仑膦酸钠、奈立膦酸钠盐、奥帕膦酸钠、利赛膦酸钠、伊班膦酸钠或帕米膦酸钠中的至少一种。

进一步，所述中性或微碱性钙化物选自：无水氯化钙(CaCl₂)、硅酸三钙(Ca₃SiO₅，C₃S)、硅酸二钙(2CaO·SiO₂，C₂S)、氧化钙(CaO)、氢氧化钙[Ca(OH)₂]、柠檬酸钙(C₁₂H₁₀Ca₃O₁₄)或磷酸氢钙(CaHO₄P)中的至少一种。

本发明要解决的第三个技术问题提供上述双膦酸盐型自凝固复合骨移植物的应用，其可用于骨质疏松修复和重建。

本发明的有益效果：

本发明首次将双膦酸盐与自凝固钙盐组成具有治疗功能的双膦酸钙盐自凝固复合骨移植物，其释放双膦酸根的时效可达30周以上，符合骨形成周期，其释放量可以调控，凝固时间在20～60分钟内可以根据比例任意调整；固化1小时候的抗压强度已经达到2MPa，24小时达到20MPa；多种自凝固钙类化合物与双膦酸钙盐的联合使用，使其具有良好的塑形凝固性能。合适的凝固时间、良好的可注射性、较高的力学强度和缓慢的双膦酸根释放是使得负双膦酸钙盐自凝固复合骨移植物可以在骨质疏松或其它因素引起的骨缺损方面得到广泛的应用。

具体实施方式

本发明要解决的第一个技术问题提供一种双膦酸盐型自凝固复合骨移植物，所述复合骨移植物为双膦酸钙盐/自凝固钙盐复合物，所述双膦酸钙盐/自凝固钙盐复合物由固相部分和液相部分组成，固液比为1：0.3～1.0g/ml；其中，固相部分包括双膦酸钙盐(CaR)和自凝固钙盐，各原料的质量比为：双膦酸钙盐：自凝固钙盐＝1：1～6。

进一步，所述自凝固钙盐为两种及其以上自凝固钙盐的复合物。本发明中之所以选择双膦酸钙盐和两种或两种以上的自凝固钙盐以恰当的比例复配，是为了同时兼顾pH、强度、降解和凝固时间。两者及以上自凝固钙盐的比例需要考虑形成的复合钙盐在溶于水或者模拟体液以及其他固化液之后的pH值应处于7.0～8.0范围内，以满足人体血液环境和成骨环境的要求。

所述双膦酸钙盐采用下述方法制得：将中性或微碱性钙化合物与双膦酸钠盐通过离子交换反应，得到微溶或难溶的双膦酸钙盐；从而减小双膦酸钠盐的溶解、延缓其溶解、控制其释放速度，增长其有效时间。

进一步，所述固相部分还包括保湿剂，所述保湿剂选自：海藻酸钠、透明质酸或明胶中的至少一种。所述保湿剂的添加量为固相部分(固体)总量的0.5～5％。加入适量的海藻酸钠、透明质酸或明胶都能使骨质疏松修复和重建的双膦酸盐型自凝固复合骨移植物的抗压强度和成型性提高。

本发明中，使用溶解度较大的双膦酸钠盐通过离子交换改性得到溶解度较小的的双磷酸钙盐，其中改性使用的钙类化合物必须是碱性或微碱性，因为酸性或中性钙盐如磷酸二氢钙、葡萄糖酸钙、氯化钙、硝酸钙等，由于其溶解度大，与双膦酸钠盐反应后形成的双膦酸钙盐可能由于pH值小于7从而导致其溶解度增大，离心或洗涤的时候滤液中含量较高，从而影响其产量和后面的配比。

本发明中，经过离子交换后的双膦酸钙盐(CaR)溶解度远小于双膦酸钠盐，与其它凝固钙盐共同组成复合物，遇水后进行水合，形成以水合结晶水搭桥的链接固化形式，从而形成具有韧性和强度的复合物，根据几种成分含量的变化，其凝固时间、凝固后的强度、凝固后重新进入水中或者体液中的双膦酸根释放速度均可以控制和调整。

本发明要解决的第二个技术问题是提供上述双磷酸盐型自凝固复合骨移植物的制备方法，所述制备方法为：以双膦酸钙盐、自凝固钙盐和固化液为原料，各原料搅拌混匀并成型得双膦酸盐型自凝固复合骨移植物；其中，固液比为1：0.3～1.0g/ml。本发明中，固液比是影响骨水泥强度、凝固时间的核心因素，如果固液比太低粘度太大、难以成型；如果固液比太高则凝固时间太长、不能满足临床要求、其强度也会降低。

本发明要解决的第三个技术问题提供上述双膦酸盐型自凝固复合骨移植物的应用，其可用于骨质疏松修复和重建。

下面结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步的描述，并不因此将本发明限制在所述的实例范围之中。

实施例1

取32.51g阿仑膦酸钠，溶于500ml水中，搅拌等全部溶解完后，加入5.55g无水氯化钙，充分搅拌2小时，放置12小时；然后离心除去上清液、用水离心洗涤四次后冷冻干燥得26.5g阿仑膦酸钙盐(CaR)。

分别取10g阿仑膦酸钙盐(CaR)、120℃干燥过的10g硅酸三钙(CaSS1)和20g半水硫酸钙(CaSS2)、0.5g透明质酸混合进行球磨，球磨速率为150r/m，球磨6小时后于120目筛中过滤；得到39.75g复合物。

称量10g得到的复合物，加入5ml水，搅拌均匀，再将泥浆体放入直径6mm，和12mm的聚四氟乙烯模具中成型即可；10分钟后取出样品，

于2小时后、24小时后，于25℃、湿度55％的环境下测量抗压强度，加力速度2mm/mim；并测试其降解速度、骨细胞增长率。

测试结果：

2小时抗压强度：2.8MPa，24小时抗压强度：25MPa。

按照1：30(g/ml)(样品与体外模拟液的比例)放入37℃的SBF(体外模拟液采用的SBF溶液)的摇床，震荡速度60次/分钟，进行降解实验：第一天降解7.25％，第一周降解15.16％，第二周降解总量22.22％，第三周降解总量29.38％，第四周降解32.15％；第五周降解36.09％；第八周降解41.44％；第十二周降解51.66％；第十六周降解60.33％；第二十周降解68.38％；第二十六周降解75.79％。

按照0.2g/ml标准于37度注射用水中浸泡72小时，过滤得到提取液，分别使用原始浓度和稀释5倍的提取液进行小鼠成骨细胞培养，观察分析24小时、48小时和72小时的细胞形态和细胞生长分化率；72小时，原始浓度和稀释5倍的细胞增值率结果分别是：101％和120％。

实施例2

取32.51g阿仑膦酸钠，溶于500ml水中，搅拌等全部溶解完后，加入8.31g柠檬酸钙，充分搅拌2小时，放置12小时；然后离心除去上清液、用水离心洗涤四次后冷冻干燥得27.1g阿仑膦酸钙盐(CaR)。

分别取15g阿仑膦酸钙盐(CaR)、120℃干燥过的10g柠檬酸钙(CaSS1)、5g磷酸氢钙(CaSS2)和20g半水硫酸钙(CaSS3)、0.5g透明质酸混合进行球磨，球磨速率为150r/m，球磨6小时后于120目筛中过滤；得到49.25g复合物。

称量20g得到的复合物，加入11ml水，搅拌均匀，再将泥浆体放入直径6mm，和12mm的聚四氟乙烯模具中成型即可。10分钟后取出样品，于2小时后、24小时后测量抗压强度；并测试其降解速度、骨细胞增长率。

测试结果：2小时抗压强度：2.1MPa，24小时抗压强度：21.5MPa。

按照1：30(g/ml)放入37℃SBF的摇床，震荡速度60次/分钟，进行降解实验：第一天降解6.12％，第一周降解13.25％，第二周降解总量23.37％，第三周降解总量30.49％，第四周降解35.65％；第五周降解41.16％；第八周降解45.32％；第十二周降解53.52％；第十六周降解63.12％；第二十周降解70.28％；第二十六周降解78.35％。

按照0.2g/ml标准于37度注射用水中浸泡72小时，过滤得到提取液，分别使用原始浓度和稀释5倍的提取液进行小鼠成骨细胞培养，观察分析24小时、48小时和72小时的细胞形态和细胞生长分化率；72小时，原始浓度和稀释5倍细胞增值率结果分别是：105％，118％。

实施例3

取59.8g奈立膦酸钠盐，溶于1000ml水中，搅拌等全部溶解完后，加入7.75g硅酸三钙(C₃S)，充分搅拌2小时，放置12小时；然后离心除去上清液、用水离心洗涤四次后冷冻干燥得58.5g奈立膦酸钙盐(CaR)。

分别取20g奈立膦酸钙盐(CaR)、120℃干燥过的15g硅酸二钙(CaSS1)、10g柠檬酸钙(CaSS2)和20g半水硫酸钙(CaSS3)、0.5g透明质酸混合进行球磨，球磨速率为150r/m，球磨6小时后于120目筛中过滤；得到63.80g复合物。

称量20g得到的复合物，加入10ml水，搅拌均匀，再将泥浆体放入直径6mm，和12mm的聚四氟乙烯模具中成型即可。10分钟后取出样品，于2小时后、24小时后测量抗压强度；并测试其降解速度、骨细胞增长率。

测试结果：2小时抗压强度：3.3MPa,24小时抗压强度：22MPa。

按照1：30(g/ml)放入37℃的SBF的摇床，震荡速度60次/分钟。进行降解实验。第一天降解8.15％，第一周降解16.22％，第二周降解总量21.37％，第三周降解总量31.50％，第四周降解35.49％；第五周降解38.13％；第八周降解42.21％；第十二周降解49.49％；第十六周降解59.36％；第二十周降解67.58％；第二十六周降解73.89％。

按照0.2g/ml标准于37度注射浸泡72小时，过滤得到提取液，分别使用原始浓度和稀释5倍的提取液进行小鼠成骨细胞培养，观察分析24小时、48小时和72小时的细胞形态和细胞生长分化率；72小时，原始浓度和稀释5倍的结果分别是：111％，130％。

实施例4

取32.51g阿仑膦酸钠，溶于500ml水中，搅拌等全部溶解完后，加入3.80g氢氧化钙，充分搅拌2小时，放置12小时；然后离心除去上清液、用水离心洗涤四次后冷冻干燥得26.4g阿仑膦酸钙盐(CaR)。

分别取10g阿仑膦酸钙盐(CaR)、120℃干燥过的10g硅酸三钙(CaSS1)和20g半水硫酸钙(CaSS2)、10g磷酸氢钙(CaSS3)和0.5g透明质酸混合进行球磨，球磨速率为150r/m，球磨6小时后于120目筛中过滤；得到49.80g复合物。

称量10g得到的复合物，加入5.5ml水，搅拌均匀，再将泥浆体放入直径6mm，和12mm的聚四氟乙烯模具中成型即可。10分钟后取出样品，与2小时后、24小时后测量抗压强度；并测试其降解速度、骨细胞增长率。

测试结果：2小时抗压强度：3.1MPa,24小时抗压强度：29MPa。

按照1：30(g/ml)放入37℃SBF的摇床，震荡速度60次/分钟。进行降解实验。第一天降解6.63％，第一周降解13.78％，第二周降解总量20.55％，第三周降解总量25.25％，第四周降解29.60％；第五周降解33.87％；第八周降解38.66％；第十二周降解43.04％；第十六周降解49.11％；第二十周降解52.58％；第二十六周降解55.82％。

按照0.2g/ml标准与37度注射用水浸泡72小时，过滤得到提取液，分别使用原始浓度和稀释5倍的提取液进行小鼠成骨细胞培养，观察分析24小时、48小时和72小时的细胞形态和细胞生长分化率；72小时，原始浓度和稀释5倍的结果分别是：99％，116％。

实施例5

称取26.31g奥帕膦酸钠溶于500ml水中，搅拌等全部溶解完后，加入5.55g无水氯化钙，充分搅拌2小时，放置12小时；然后离心除去上清液、用水离心洗涤四次后冷冻干燥得26.0g奥帕膦酸钙盐(CaR)。

分别取15g奥帕膦酸钙盐(CaR)、120℃干燥过的10g柠檬酸钙(CaSS1)、10g磷酸氢钙(CaSS2)、15g半水硫酸钙(CaSS3)和0.6g透明质酸混合进行球磨，球磨速率为150r/m，球磨6小时后于120目筛中过滤；得到49.60g复合物。

称量10g得到的复合物，加入5ml水，搅拌均匀，再将泥浆体放入直径6mm，和12mm的聚四氟乙烯模具中成型即可；10分钟后取出样品，于2小时后、24小时后测量抗压强度；并测试其降解速度、骨细胞增长率。

测试结果：2小时抗压强度：2.1MPa；24小时抗压强度：20MPa。

按照1：30(g/ml)放入37℃SBF的摇床，震荡速度60次/分钟。进行降解实验。第一天降解8.11％，第一周降解15.97％，第二周降解总量23.62％，第三周降解总量30.39％，第四周降解33.85％；第五周降解39.39％；第八周降解45.33％；第十二周降解55.36％；第十六周降解63.19％；第二十周降解71.55％；第二十六周降解78.86％。

按照0.2g/ml标准与37度注射用水浸泡72小时，过滤得到提取液，分别使用原始浓度和稀释5倍的提取液进行小鼠成骨细胞培养，观察分析24小时、48小时和72小时的细胞形态和细胞生长分化率；72小时，原始浓度和稀释5倍的结果分别是：98％，116％。

实施例6

称取30.51g利赛膦酸钠，溶于500ml水中，搅拌等全部溶解完后，加入2.81g优级纯氧化钙，充分搅拌2小时，放置12小时；然后离心除去上清液、用水离心洗涤四次后冷冻干燥得30.10g利赛膦酸钙盐(CaR)。

分别取15g利赛膦酸钙盐(CaR)、120℃干燥过的20g硅酸三钙(CaSS1)、5g磷酸氢钙(CaSS2)、20g半水硫酸钙(CaSS3)和0.5g透明质酸混合进行球磨，球磨速率为150r/m，球磨6小时后于120目筛中过滤；得到59.05g复合物。

称量10g得到的复合物，加入6ml水，搅拌均匀，再将泥浆体放入直径6mm，和12mm的聚四氟乙烯模具中成型即可。10分钟后取出样品，与2小时后、24小时后测量抗压强度；并测试其降解速度、骨细胞增长率。

测试结果：2小时抗压强度：2.2MPa,24小时抗压强度：35MPa。

按照1：30(g/ml)放入37℃SBF的摇床，震荡速度60次/分钟。进行降解实验。第一天降解6.68％，第一周降解15.39％，第二周降解总量21.05％，第三周降解总量25.36％，第四周降解29.13％；第五周降解33.22％；第八周降解38.02％；第十二周降解43.10％；第十六周降解50.53％；第二十周降解55.36％；第二十六周降解61.15％。

按照0.2g/ml标准与37度注射用水浸泡72小时，过滤得到提取液，分别使用原始浓度和稀释5倍的提取液进行小鼠成骨细胞培养，观察分析24小时、48小时和72小时的细胞形态和细胞生长分化率；72小时，原始浓度和稀释5倍的结果分别是：98％，125％。

实施例7

同实例1，其中透0.5g明质酸保水剂被0.5g明胶取代取。

测试结果：2小时抗压强度：1.1MPa,24小时抗压强度：15MPa。

按照1：30(g/ml)放入37℃SBF的摇床，震荡速度60次/分钟。进行降解实验。第一天降解9.21％，第一周降解17.26％，第二周降解总量25.65％，第三周降解总量32.56％，第四周降解37.11％；第五周降解45.01％；第八周降解50.23％；第十二周降解55.86％；第十六周降解63.25％；第二十周降解73.58％；第二十六周降解79.92％。

按照0.2g/ml标准与37度注射用水浸泡72小时，过滤得到提取液，分别使用原始浓度和稀释5倍的提取液进行小鼠成骨细胞培养，观察分析24小时、48小时和72小时的细胞形态和细胞生长分化率；72小时，原始浓度和稀释5倍的结果分别是：101％，120％。

实施例8

同实例2，0.5g透明质酸保水剂被0.6g海藻酸钠取代。

测试结果：2小时抗压强度：2.8MPa,24小时抗压强度：25MPa。

按照1：30(g/ml)放入37℃SBF的摇床，震荡速度60次/分钟。进行降解实验。第一天降解7.25％，第一周降解15.16％，第二周降解总量22.22％，第三周降解总量29.38％，第四周降解32.15％；第五周降解36.09％；第八周降解41.44％；第十二周降解51.66％；第十六周降解60.33％；第二十周降解68.38％；第二十六周降解75.79％。

按照0.2g/ml标准与37度注射用水浸泡72小时，过滤得到提取液，分别使用原始浓度和稀释5倍的提取液进行小鼠成骨细胞培养，观察分析24小时、48小时和72小时的细胞形态和细胞生长分化率；72小时，原始浓度和稀释5倍的结果分别是：101％，120％。

实施例9

同实施例1，固化液由纯水换成生理盐水。

测试结果：2小时抗压强度：0.9MPa,24小时抗压强度：13.5MPa。

第一天降解8.30％，第一周降解17.06％，第二周降解总量23.55％，第三周降解总量31.68％，第四周降解35.35％；第五周降解41.11％；第八周降解46.32％；第十二周降解58.76％；第十六周降解65.32％；第二十周降解72.39％；第二十六周降解78.93％。

按照0.2g/ml标准与37度注射用水浸泡72小时，过滤得到提取液，分别使用原始浓度和稀释5倍的提取液进行小鼠成骨细胞培养，观察分析24小时、48小时和72小时的细胞形态和细胞生长分化率；72小时，原始浓度和稀释5倍的结果分别是：102％，120％。

实施例10

同实施例2，固化液由纯水换成葡萄糖注射液。

测试结果：2小时抗压强度：2.1MPa,24小时抗压强度：21.5MPa。

按照1：30(质量)放入37℃SBF的摇床，震荡速度60次/分钟。进行降解实验。第一天降解6.12％，第一周降解13.25％，第二周降解总量23.37％，第三周降解总量30.49％，第四周降解35.65％；第五周降解41.16％；第八周降解45.32％；第十二周降解53.52％；第十六周降解63.12％；第二十周降解70.28％；第二十六周降解78.35％。

按照0.2g/ml标准与37度注射用水浸泡72小时，过滤得到提取液，分别使用原始浓度和稀释5倍的提取液进行小鼠成骨细胞培养，观察分析24小时、48小时和72小时的细胞形态和细胞生长分化率；72小时，原始浓度和稀释5倍细胞增值率结果分别是：105％，118％。

对比例1

阿伦磷酸钠比较。将10g阿伦磷酸钠磨细(小于120目)，加入5ml水，调成泥浆状，再将泥浆体放入直径6mm，和12mm的聚四氟乙烯模具中成型。半小时后从磨具中顶出，出现破裂。按照1:30(质量)放入37℃SBF的摇床，震荡速度60次/分钟。半个小时后全部散开，两个小时后全部溶解。除了可测阿伦磷酸钠浓度外，无法进入其它测试。

对比例2

阿伦磷酸钙盐比较。将10g阿伦磷酸钙盐磨细(小于120目)，加入5ml水,调成泥浆状，再将泥浆体放入直径6mm，和12mm的聚四氟乙烯模具中成型。半小时后从磨具中顶出，未出现破裂。两个小时后，测定其抗压强度为0.9MPa。按照1:30(质量)放入37℃SBF的摇床，震荡速度60次/分钟。半个小时后开裂，两个小时后全部散开，但未全部溶解、溶液处于浑浊状态，在SBF中无法保持形状、没有强度，不适合于临床使用。

对比例3

双膦酸盐缺位比较。分别称取硅酸三钙(CaSS1)20g、半水硫酸钙(CaSS2)20g和0.5g透明质酸混合进行球磨，球磨速率为150r/m，球磨6小时后于120目筛中过滤；得到39.75g复合物。

称量10g得到的复合物，加入5ml水，搅拌均匀，再将泥浆体放入直径6mm，和12mm的聚四氟乙烯模具中成型即可。10分钟后取出样品，与2小时后、24小时后测量抗压强度；并测试其降解速度、骨细胞增长率。

测试结果：2小时抗压强度：3.9MPa,24小时抗压强度：35MPa。

按照1：30(g/ml)放入37℃SBF的摇床，震荡速度60次/分钟。第一天降解5.35％，第一周降解25.16％，第二周降解总量28.51％，第三周降解总量32.33％，第四周降解41.11％；第五周降解45.09％；第八周降解46.63％；第十二周降解46.95％；第十六周降解46.33％；第二十周降解46.15％；第二十六周降解46.23％。

按照0.2g/ml标准与37度注射用水浸泡72小时，过滤得到提取液，分别使用原始浓度和稀释5倍的提取液进行小鼠成骨细胞培养，观察分析24小时、48小时和72小时的细胞形态和细胞生长分化率；72小时，原始浓度和稀释5倍的结果分别是：50％，85％。

该复合物双膦酸盐缺位，虽有较好的抗压强度，其生物学性能较差，细胞分化和增值不理想，前期降解快、第五周开始趋于稳定、难以降解，不利于骨组织的连续再生和重建。

对比例4

阿仑膦酸钙盐和保湿剂缺位比较。20g柠檬酸钙、15g磷酸氢钙(CaSS2)和15g半水硫酸钙混合进行球磨，球磨速率为150r/m，球磨6小时后于120目筛中过滤。得到49.00g复合物。

称量10g得到的复合物，加入6ml水，搅拌均匀，再将泥浆体放入直径6mm，和12mm的聚四氟乙烯模具中成型即可。10分钟后取出样品，与2小时后、24小时后测量抗压强度；并测试其降解速度、骨细胞增长率。

测试结果：2小时抗压强度：1.8MPa,24小时抗压强度：14.5MPa。

按照1：30(g/ml)放入37℃SBF的摇床，震荡速度60次/分钟。进行降解实验。固化5小时之内放进SBF，能够保护良好的形状，逐步从表面降解；24小时干燥后，放入SBF半个小时候会开裂、成为小颗粒。

第一天降解7.55％，第一周降解15.22％，第二周降解总量23.97％，第三周降解总量31.69％，第四周降解35.65％；第五周降解40.15％；第八周降解45.55％；第十二周降解51.51％；第十六周降解56.02％；第二十周降解60.18％；第二十六周降解63.33％。

按照0.2g/ml标准与37度注射用水浸泡72小时，过滤得到提取液，分别使用原始浓度和稀释5倍的提取液进行小鼠成骨细胞培养，观察分析24小时、48小时和72小时的细胞形态和细胞生长分化率；72h，原始浓度和稀释5倍细胞增值率结果分别是：80％，95％。

保湿剂缺位，会导致固化后的应力开裂、双膦酸盐缺位、导致降解性、细胞增值率降低。

对比例5

在双膦酸钙盐缺位情况下，固化液变化的比较。

20g柠檬酸钙、15g磷酸氢钙(CaSS2)、15g半水硫酸钙和0.5g海藻酸钠混合进行球磨，球磨速率为150r/m，球磨6小时后于120目筛中过滤；得到49.00g复合物。

称量10g得到的复合物，加入6ml葡萄糖注射液，搅拌均匀，再将泥浆体放入直径6mm，和12mm的聚四氟乙烯模具中成型即可；10分钟后取出样品，于2小时后、24小时后测量抗压强度；并测试其降解速度、骨细胞增长率。

测试结果：2小时抗压强度：0.8MPa，24小时抗压强度：12.2MPa。

按照1：30(g/ml)放入37℃SBF的摇床，震荡速度60次/分钟。进行降解实验。固化5小时之内放进SBF，能够保护良好的形状，逐步从表面降解；24小时干燥后，放入SBF半个小时候会开裂、成为小颗粒。

第一天降解8.96％，第一周降解18.25％，第二周降解总量25.36％，第三周降解总量35.44％，第四周降解39.64％；第五周降解45.15％；第八周降解50.33％；第十二周降解56.71％；第十六周降解61.12％；第二十周降解66.37％；第二十六周降解72.32％。

按照0.2g/ml标准于37度注射用水浸泡72小时，过滤得到提取液，分别使用原始浓度和稀释5倍的提取液进行小鼠成骨细胞培养，观察分析24小时、48小时和72小时的细胞形态和细胞生长分化率；72h，原始浓度和稀释5倍细胞增值率结果分别是：88％，98％。

双膦酸盐缺位、细胞增值率降低。