阅读说明：本技术 一种防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料的制备方法 (Preparation method of functional feed for preventing and treating ruminal acidosis of ruminants ) 是由 程勐万里 刘素芳 薛芹 喻勇 符秀迪 于 2019-12-18 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料的制备方法,属于饲料领域,该方法包括以下步骤：将玉米粉碎、加干净水搅拌调浆,得到玉米淀粉浆,在玉米淀粉浆中加入a-淀粉酶,进行液化酶解,再加入糖化酶,制得玉米糖浆；将酵母接种到玉米糖浆中,发酵后制得酵母液体培养物；将松针粉、锯末粉、糖蜜、葡萄糖和尿素加入酵母液体培养物中,经混合均匀后制得固态发酵培养基；将高产柠檬酸黑曲霉菌种接到固态发酵培养基中,经发酵后,制得富含柠檬酸固态培养基；将富含柠檬酸固态培养基干燥后,与氯化钙、山楂和陈皮混合,制得所述防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料。本发明制得的饲料可以防治反刍动物瘤胃酸中毒。(The invention discloses a preparation method of a functional feed for preventing and treating ruminant rumen acidosis, belonging to the field of feeds, and the method comprises the following steps: pulverizing corn, adding clean water, stirring, mixing to obtain corn starch slurry, adding alpha-amylase into the corn starch slurry, performing liquefaction and enzymolysis, and adding diastase to obtain corn syrup; inoculating yeast into corn syrup, and fermenting to obtain yeast liquid culture; adding pine needle powder, sawdust powder, molasses, glucose and urea into a yeast liquid culture, and uniformly mixing to obtain a solid fermentation culture medium; inoculating high-yield aspergillus niger to a solid fermentation culture medium, and fermenting to obtain a solid culture medium rich in citric acid; drying the solid culture medium rich in citric acid, and mixing with calcium chloride, hawthorn and dried orange peel to prepare the functional feed for preventing and treating ruminant rumen acidosis. The feed prepared by the invention can prevent and treat ruminant rumen acidosis.)

一种防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料的制备方法

技术领域

本发明涉及反刍动物饲料领域，具体涉及一种防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料的制备方法。

背景技术

中国是人口大国，也是牛羊等反刍动物养殖业大国。2018年，我国肉牛存栏1亿头出栏5000万头，牛肉产量789万吨，肉羊存栏3亿头，出栏2.5亿头，羊肉产量450万吨，奶牛存栏1200万头，牛奶产量3800万吨，牛羊等反刍饲料达到1004万吨。因此，我国反刍动物产业规模较大。

近年来，随着牛、羊等反刍动物存栏数的不断增加和禁牧休牧措施的大力推行，再加上我们牛、羊饲料的结构组成中普遍存在精饲料含量过多、精粗饲料比例不当的问题，结果导致一些营养性疾病尤其是瘤胃酸中毒现象普遍发生。诱发瘤胃酸中毒的主要原因有：一、饲养管理不当，饲草料单一，养殖户饲草料缺乏，给料不当，长期以玉米秸秆或青贮玉米饲草为主，并辅以单纯玉米作为精饲料进行饲喂，造成营养不均衡。据调查，所有患病动物均有过***料史，采食量每日每只500～1000g玉米颗粒。二、运动不足。因圈养舍饲条件有限，运动量不足，造成新陈代谢减缓，也是造成该病发生的原因之一。据调查该病多发于圈养舍饲的动物，放牧为主的发病较少，瘤胃酸中毒的临床症状：一、普通型，患牛精神沉郁，目光呆滞，不愿走动，步态不稳，眼结膜苍白，眼窝下陷，呈现严重脱水症状。食欲减退或废绝，反刍停止，磨牙虚嚼，流涎，粪便稀软，粪色淡而恶臭，体温正常或偏低，随着病程的延长，患病动物渐进性消瘦，直至死亡。二、神经型。患病动物呈现明显的神经症状，兴奋不安头抵障碍物不动，有的角弓反张，眼结膜充血，两眼凝视，视觉障碍或消失，反应迟钝，共济失调，运动强拘，体温多数在38.5℃，随着病情的发展，出现意识不清乃至昏迷而死亡。

瘤胃酸中毒对动物的畜体健康及生产性能的危害极大，同时也影响体内相关代谢和动物对养分的正常转化及利用，进而影响生殖、免疫、生长、泌乳等功能。在我国，虽然关于瘤胃酸中毒的文献报道为数不多，但该病却普遍存在，并且其发病率在我国呈现逐年上升态势，对畜牧生产带来巨大经济损失。因此，近年来预防和治疗瘤胃酸中毒是牛羊生产实践中一个亟待解决的反刍动物饲料难题。

总结来说，反刍动物瘤胃酸中毒就是反刍动物采食大量精饲料后，瘤胃乳酸产生过多，从而引起瘤胃微生物体系失调和功能紊乱的一种代谢性疾病，急性酸中毒时，瘤胃PH值为5以下。瘤胃酸中毒时，瘤胃中主要的乳酸产生菌～牛链球菌的数量明显增加，而乳酸利用菌～反刍兽新月单胞菌和埃氏巨型球菌的增长速度较慢。

反刍兽新月单胞菌和埃氏巨型球菌是瘤胃内主要的乳酸利用菌，可在厌氧的条件下发酵瘤胃中乳酸产量的60％～80％，还能与牛链球菌争夺葡萄糖、麦芽糖等养分，抑制牛链球菌的生长。

酵母培养物是指在特定工艺条件控制下由酵母菌在特定的培养基上经过充分的厌氧发酵后形成的微生态制品。它主要由酵母细胞外代谢产物、经过发酵后变异的培养基和少量已无活性的酵母细胞所构成。一些研究表明，酵母培养物有刺激瘤胃纤维素菌和乳酸菌繁殖，改变瘤胃发酵方式，降低瘤胃氨浓度，提高瘤胃微生物蛋白产量和饲料消化率等作用。在奶牛日粮中添加1-3％酵母培养物，对泌乳早期奶牛具有明显的增乳效果，可使日平均产奶量增加0.48～1.74kg，日平均增乳1.13kg。但酵母培养物对奶牛的作用受日粮营养水平和动物的生理状态影响。酵母培养物之所以在奶牛上体现出显著增乳效果，其原因是该培养物是酵母的代谢产物，能够促进瘤胃发酵使氨细菌、蛋白质合成细菌及纤维细菌等大量繁殖和生长，从而提高饲料粗纤维消化率及细菌利用NPN(非蛋白氮)合成菌体蛋白的效率。

大量研究表明，富马酸、柠檬酸、L-天门冬氨酸等有机酸可促进乳酸利用菌反刍兽新月单胞菌生长，并提供前体，参与琥珀酸-丙酸途径，刺激丙酸的产生，促进反刍兽新月单胞菌对乳酸的利用，同时增加二氧化碳的产生量，从而提高瘤胃pH值，减少慢性酸中毒的发生。

另外，研究发现莫能菌素和二羧酸同时添加，可通过抑制乳酸产生菌(如牛链球菌)的生长和促进乳酸利用菌(反刍兽新月单胞菌)的生长的相加效应，从而减少瘤胃内乳酸的积累，以减少瘤胃酸中毒的发生，但作用有限，瘤胃内pH仅比只添加二羧酸提高0.07～0.31个单位，对严重酸中毒效果不明显。但从经济效益角度考虑，可采用结合添加多种富含柠檬酸的饲草(如苜蓿成熟42d时，柠檬酸含量达到牧草干重的2.9％～4.5％)的方法以达到更经济地利用柠檬酸抑制瘤胃酸中毒的目的。

松针粉是将从松树上修剪下来的幼嫩枝条和针叶收集起来，经过干燥、粉碎而成的。松针粉色绿、幽香，是近年来人们正在开发的一种营养价值较高的畜禽饲料添加剂。松针粉由马尾松、黄山松、黑松、赤松、落叶松、油松、樟子松、云杉和冷杉的树叶加工制成，含有丰富的粗蛋白质、脂肪、微量元素和维生素等。据测定，松针粉含粗蛋白质7％-12％，赖氨酸、天门冬酸等18种氨基酸总含量达5.5％-8.1％，含粗脂肪7％-12％，无氮浸出物37％，灰分2％-6％，铁、锰、钴含量均高于一般牧草，松针粉含有维生素A原、B族、C、K、E等，其中维生素C含量为540-650毫克/千克，叶绿素700-2200毫克/千克，松针粉含代谢能16.72-30.90兆焦/千克。据报道:在饲料中添加3％的松针粉，可全面提高雏鸡免疫功能，提高抗病、抗逆能力和成活率，促进雏鸡的生长。

锯末粉是指在进行木材加工时因为切割而从树木上散落下来的树木本身的沫状木屑。经发酵、消毒后的锯末粉，调节好酸碱度后，作试管苗出瓶后过渡性栽培的基质，其效果和珍珠岩粉一样好。

山楂，又叫“山里红”，具有很高的营养和药用价值，含多种维生素、酒石酸、柠檬酸、山楂酸、苹果酸等，还含有黄酮类、内酯、糖类、蛋白质、脂肪和钙、磷、铁等矿物质。申请人研究发现，山楂能促进脂肪类食物的消化，促进母猪胃液和内源酶分泌，主治母猪饮食积滞，明显增加母猪采食量。

陈皮，中药名。为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮。药材分为“陈皮”和“广陈皮”。采摘成熟果实，剥取果皮，晒干或低温干燥。陈皮是具有促消化和增加食欲功效的一种中药材。首先是因为在陈皮中是含有类柠檬苦素这种物质的，而对于类柠檬苦素味这样的特殊物质来说，对动物来说是可以促进肠道的蠕动的，对我们促进消化是非常有帮助的，而且还可以有效的促进我们消化，再加上陈皮中还含有大量的挥发油、橙皮甙、维生素B、C等对动物有意义的营养成分，再加上陈皮中所含的挥发油也很不错，可以对我们的胃肠有比较温和的刺激作用，这时候就可以很好的促进我们体内的消化液分泌，同时还可以有效的排除肠胃中的积气，有效增加食欲。

氯化钙具有保护肝脏、提高肝脏解毒能力的功效，常用于各种肝病或中毒病的治疗。氯化钙作为固化剂，可用于蔬菜罐头。它还能使大豆凝乳固化形成豆腐，又能作为烹饪分子美食的原料通过与海藻酸钠反应使蔬菜和水果汁表面胶化形成类似鱼子酱状的小球。作为电解质添加到运动饮料或一些软饮料包括瓶装水中。由于氯化钙本身有非常强的咸味所以可代替食盐用于腌黄瓜的制作同时又不增加食物钠含量的效果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料的制备方法，其能够改善反刍动物消化道微生物菌群，促进肠道内有益菌的生长，降低瘤胃乳酸浓度，有效防治反刍动物瘤胃酸中毒。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料的制备方法，包括以下步骤：

(1)将玉米粉碎、加干净水搅拌调浆，得到玉米淀粉浆，将温度升到液化酶解所需温度后，在玉米淀粉浆中加入a-淀粉酶，进行液化酶解，再加入糖化酶，制得玉米糖浆；

(2)将酵母接种到玉米糖浆中，发酵后制得酵母液体培养物；

(3)将松针粉、锯末粉、糖蜜、葡萄糖和尿素加入酵母液体培养物中，经混合均匀后制得固态发酵培养基；

(4)将高产柠檬酸黑曲霉菌种接到固态发酵培养基中，经发酵后，制得富含柠檬酸固态培养基；

(5)将富含柠檬酸固态培养基干燥后，与氯化钙、山楂和陈皮混合，制得所述防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料。

优选地，所述步骤(1)中，玉米和干净水的重量比为100：50～2000，a-淀粉酶添加剂量为0.005～600U/g底物干基，液化温度为30～180℃，液化时间为0.05～15h，糖化酶添加剂量为0.02～200U/g底物干基，糖化酶解温度为8～150℃，糖化酶解时间为0.05～120h。

优选地，所述步骤(1)中，玉米、干净水的重量比为100：400～600，a-淀粉酶添加剂量为15.0～25U/g底物干基，液化温度为70～105℃，液化时间为1～3h，糖化酶添加剂量为20～30U/g底物干基，糖化酶解温度为60～70℃，糖化酶解时间为18～24h。

优选地，所述步骤(2)中，酵母菌菌种液接种量为0.05～25％，发酵温度为10～80℃，发酵起始PH为1.0～15，发酵时间为2～168h，标定溶氧为0.5～500％。

优选地，所述步骤(2)中，酵母菌菌种液接种量为5～10％，发酵温度为25～30℃；发酵起始PH为4.5～5.0，发酵时间为12～16h，标定溶氧为20～30％。

优选地，所述步骤(3)中，松针粉、锯末粉、糖蜜、葡萄糖、尿素、酵母液体培养物重量比为100：1～1000：0～800：0～500：0～50：1～2000，所述步骤(4)中，高产柠檬酸黑曲霉菌菌种液接种量为0.03～30％，发酵温度为2～80℃，发酵起始pH为2.0～16，标定溶氧为0.5～500％，发酵时间为2～480小时。

优选地，所述步骤(3)中，松针粉、锯末粉、糖蜜、葡萄糖、尿素、酵母液体培养物重量比为100：20～30：20～30：5～10：0.5～1：100～120，所述步骤(4)中，高产柠檬酸黑曲霉菌菌种液接种量为6～8％，发酵温度为28～32℃，发酵起始pH为6.0～7，标定溶氧为10～15％，发酵时间为96～120小时。

优选地，所述步骤(5)中，富含柠檬酸固态培养基、氯化钙、山楂、陈皮的重量比为100：0.05～200：0.03～150:0.02～100。

优选地，所述步骤(5)中，富含柠檬酸固态培养基、氯化钙、山楂、陈皮重量比为100：20～30：15～20:12～15。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

(1)本发明制备的防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料，富含酵母培养物、柠檬酸、生物素、多种氨基酸和微量元素，能够改善反刍动物消化道微生物菌群，促进肠道内有益菌的生长，大幅度降低瘤胃乳酸浓度，有效防治反刍动物瘤胃酸中毒。

(2)将发酵松针粉、发酵锯末粉与酵母液体培养物组合起来能够有效防治牛羊瘤胃酸中毒，其效果甚佳。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

将100kg玉米去杂粉碎至60目后，加400kg干净水，搅拌调浆，得500kg玉米淀粉浆，再将7.5kg a-淀粉酶加入到玉米淀粉浆中，在95℃下进行液化酶解1h，再加入10kg糖化酶，在60℃下糖化18h，制得517.5kg玉米糖浆；

将12kg酵母菌种液接种到玉米糖浆中，在温度25℃、起始PH4.5和标定溶氧(DO)25％条件下，有氧发酵发酵12h后，制得酵母液体培养物；

将100kg松针粉、20kg锯末粉、20kg糖蜜、5kg葡萄糖和0.5kg尿素加入100kg酵母液体培养物中，经混合均匀后制得245.5kg固态发酵培养基；

将40kg高产柠檬酸黑曲霉菌种液接到固态发酵培养基中，在温度28℃、起始PH6和标定溶氧(DO)10％条件下，有氧发酵96h后，制得富含柠檬酸固态培养基；

将100kg富含柠檬酸固态培养基和20kg氯化钙、15kg山楂和12kg陈皮混合后，制得147kg防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料。

实施例2

将100kg玉米去杂粉碎至80目后，加500kg干净水，搅拌调浆，得600kg玉米淀粉浆；再将9kg a-淀粉酶加入到玉米淀粉浆中，在100℃下进行液化酶解2h，再加入12kg糖化酶，在65℃下糖化20h，制得621kg玉米糖浆；

将12kg酵母菌种液接种到玉米糖浆中，在温度28℃、起始PH4.5和标定溶氧(DO)25％条件下，有氧发酵发酵14h后，制得酵母液体培养物；

将100kg松针粉、25kg锯末粉、25kg糖蜜、8kg葡萄糖和0.8kg尿素加入110kg酵母液体培养物中，经混合均匀后制得268.8kg固态发酵培养基；

将40kg高产柠檬酸黑曲霉菌种液接到固态发酵培养基中，在温度30℃、起始PH6和标定溶氧(DO)10％条件下，有氧发酵100h后，制得富含柠檬酸固态培养基；

将100kg富含柠檬酸固态培养基和25kg氯化钙、18kg山楂和13kg陈皮混合后，制得156kg防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料。

实施例3

将100kg玉米去杂粉碎至100目后，加600kg干净水，搅拌调浆，得700kg玉米淀粉浆；再将10.5kg a-淀粉酶加入到玉米淀粉浆中，在105℃下进行液化酶解3h，再加入14kg糖化酶，在70℃下糖化22h，制得724.5kg玉米糖浆；

将12kg酵母菌种液接种到玉米糖浆中，在温度30℃、起始PH4.5和标定溶氧(DO)30％条件下，有氧发酵发酵16h后，制得酵母液体培养物；

将100kg松针粉、30kg锯末粉、30kg糖蜜、10kg葡萄糖和1kg尿素加入120kg酵母液体培养物中，经混合均匀后制得291kg固态发酵培养基；

将40kg高产柠檬酸黑曲霉菌种液接到固态发酵培养基中，在温度32℃、起始PH6和标定溶氧(DO)15％条件下，有氧发酵105h后，制得富含柠檬酸固态培养基；

将100kg富含柠檬酸固态培养基和30kg氯化钙、20kg山楂和15kg陈皮混合后，制得165kg防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料。

对比例1

将100kg玉米去杂粉碎至100目后，加600kg干净水，搅拌调浆，得700kg玉米淀粉浆；再将10.5kg a-淀粉酶加入到玉米淀粉浆中，105℃进行液化酶解3h，再加入14kg糖化酶，70℃糖化22h，制得724.5kg玉米糖浆；

将12kg酵母菌种液接种到玉米糖浆中，在温度30℃、起始PH4.5和标定溶氧(DO)30％条件下，有氧发酵发酵16h后，制得酵母液体培养物；

将100kg松针粉、30kg糖蜜、10kg葡萄糖和1kg尿素加入120kg酵母液体培养物中，经混合均匀后制得261kg固态发酵培养基；

将40kg高产柠檬酸黑曲霉菌种液接到固态发酵培养基中，在温度32℃、起始PH6和标定溶氧(DO)15％条件下，有氧发酵105h后，制得富含柠檬酸固态培养基；

将100kg富含柠檬酸固态培养基和30kg氯化钙、20kg山楂和15kg陈皮混合后，制得165kg防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料。

对比例2

将100kg玉米去杂粉碎至100目后，加600kg干净水，搅拌调浆，得700kg玉米淀粉浆；再将10.5kg a-淀粉酶加入到玉米淀粉浆中，105℃进行液化酶解3h，再加入14kg糖化酶，70℃糖化22h，制得724.5kg玉米糖浆；

将12kg酵母菌种液接种到玉米糖浆中，在温度30℃、起始PH4.5和标定溶氧(DO)30％条件下，有氧发酵发酵16h后，制得酵母液体培养物；

30kg锯末粉、30kg糖蜜、10kg葡萄糖和1kg尿素加入120kg酵母液体培养物中，经混合均匀后制得191kg固态发酵培养基；

将40kg高产柠檬酸黑曲霉菌种液接到固态发酵培养基中，在温度32℃、起始PH6和标定溶氧(DO)15％条件下，有氧发酵105h后，制得富含柠檬酸固态培养基；

将100kg富含柠檬酸固态培养基和30kg氯化钙、20kg山楂和15kg陈皮混合后，制得165kg防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料。

一、实施例1制备的防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料中营养物质含量，如表1所示。

表1实施例1制备的防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料中营养物质含量

项目	指标	项目	指标	项目	指标
						色泽	黄褐色或浅黄色	粗纤维/％	≤25.0	磷/％	0.05～2.50
水分/％	≤15.0	粗灰分/％	≤30	赖氨酸/％	≥0.25
						粗蛋白质/％	≥5.0	钙/％	0.1～8	柠檬酸/％	≥0.5
粗脂肪/％	≥0.2	蛋氨酸/％	≥0.05	生物素/mg/kg	≥0.2

二、实施例与对比例制备的防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料的饲喂效果

1、随机选取若干头年龄、健康状况(已较重发病)、进食减少情况相同的牛，随机分为3组，且均由同一人进行喂养，不同之处在于：第一组牛按照5％添加剂量(占TMR日粮比例)，添加饲喂本发明实施例1的防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料；第二组饲喂添加了市面上缓解牛酸中毒的药物；第三组饲喂日常饲粮。对已发病牛康复、死亡情况进行统计，实验时间为3个月，结果如表2所示；

表2三组牛瘤胃酸中毒康复情况

项目	瘤胃酸中毒缓解率％	瘤胃酸中毒康复率％	瘤胃酸中毒死亡率％
				第一组	100	98	0
第二组	62	33	13
				第三组	0	0	52

2、随机选取若干头年龄、健康状况、精料进食量相同的肉牛，随机分为3组，采用日常管理方式进行喂养，且均由同一人进行喂养，不同之处在于：第一组牛按照3％添加剂量(占TMR日粮比例)，添加饲喂本发明实施例3的防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料；第二组饲喂日常饲粮。试验时间为1个月，分别对牛的瘤胃酸中毒的发病率，结果如表3所示：

表3两组牛瘤胃酸中毒发病情况

项目	瘤胃酸中毒发病率％
		第一组	0
第二组	58

3、随机选取若干头年龄、健康状况(已较重发病)、进食减少情况相同的牛，随机分为4组，且均由同一人进行喂养，不同之处在于：第一组牛按照5％添加剂量(占TMR日粮比例)，添加饲喂本发明实施例3的防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料；第二组牛按照5％添加剂量(占TMR日粮比例)，添加饲喂本发明对比例1的防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料；第三组牛按照5％添加剂量(占TMR日粮比例)，添加饲喂本发明对比例2的防治反刍动物瘤胃酸中毒的功能性饲料；第四组饲喂日常饲粮。对已发病牛康复、死亡情况进行统计，实验时间为3个月，结果如表4所示：

表4四组牛瘤胃酸中毒康复情况

项目	瘤胃酸中毒缓解率％	瘤胃酸中毒康复率％	瘤胃酸中毒死亡率％
				第一组	100	97	0
第二组	100	35	0
				第三组	100	23	0
第四组	0	0	53

以上内容仅仅是对本发明结构所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离本发明的结构或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。