阅读说明：本技术 一种微波辅助提取***二酚及其制备的方法 (Microwave-assisted extraction of cannabidiol and preparation method thereof ) 是由 刘胜贵 王钲霖 蒋永昌 付彬彬 李智高 孔令羽 于 2019-11-29 设计创作，主要内容包括：本发明属于生物医药技术领域,具体涉及一种微波辅助提取大麻二酚及其制备的方法,本发明所述的大麻二酚量百分含量为大于等于95％小于100％,四氢大麻酚的重量百分含量为未检出；本发明提供一种微波辅助提取大麻二酚及其制备的方法,申请人经过多次创造性试验,解决了现有工艺提取时间长、提取不完全等技术问题,同时还有效解决了高效率提取设备成本问题。该制备方法能够显著提高从工业大麻中提取大麻二酚的提取率,简化提取步骤。(The invention belongs to the technical field of biomedicine, and particularly relates to a microwave-assisted cannabidiol extraction method and a preparation method thereof, wherein the cannabidiol accounts for more than or equal to 95% and less than 100% by weight, and tetrahydrocannabinol accounts for no detection; the invention provides a microwave-assisted extraction method of cannabidiol and a preparation method thereof, and through multiple creative tests, the technical problems of long extraction time, incomplete extraction and the like of the existing process are solved, and meanwhile, the problem of high-efficiency extraction equipment cost is effectively solved. The preparation method can remarkably improve the extraction rate of cannabidiol from industrial cannabis sativa and simplify the extraction steps.)

一种微波辅助提取***二酚及其制备的方法

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体一种微波辅助提取***二酚及其制备的方法。

背景技术

***（Cannabis sativa L .）亦称火麻或线麻，是桑科、***属植物，一年生直立草本，高1-3米。***中含有的***二酚（CBD）成分，是目前在其它动植物中尚未分离出的酚类化合物，***二酚（CBD）是非成瘾性成分，具有很高的药用价值。研究表明，若将***二酚合理地应用在医学上，则有抗癫痫、抗精神病，抗忧郁，止痛，减轻癌症因化疗而引起的恶心以及治疗哮喘等功能。近年来科学家还发现***二酚（CBD）为强力抗氧化剂，具有阻断某些毒品人体神经的不利影响，并且具有阻断乳腺癌转移、抗类风湿性关节炎、抗失眠等一系列生理活性功能。根据***所含有的四氢***酚（THC）的比例，通常把它分为工业***和毒品***两类。工业***属低毒***，其中四氢***酚（THC）的含量最高不超0 .3%（按各国公认的界定法），不具有毒品利用价值；而在毒品***的叶和花四氢***酚（THC）的含量较高，属高毒***。

由于***二酚的药用价值，全球建起了许多提取工厂，现有技术提取大***二酚多是利用有机溶剂浸提法进行提取，这一方面消耗了大量有机溶剂，增加萃取成本和对环境的污染，另一方面残留在***二酚提取物中的有机溶剂也会降低***二酚提取物的品质，所以一种提高大***二酚提取物的纯度和提取效率的同时降低生产成本的提取方法极为重要。为克服现有技术的不足，本发明提供一种微波辅助提取***二酚及其制备的方法，该方法易于操作，选择性高、能耗与物耗小、提取时间短、提取纯度高，且不需要特殊的分离步骤。

发明内容

本发明提供一种微波辅助制备***二酚的方法，经过多次创造性试验，解决了现有工艺提取时间长、提取不完全等技术问题，同时还有效解决了高效率提取设备成本问题。该制备方法能够显著提高从工业***中提取***二酚的提取率，简化提取步骤。

本发明的技术方案如下：

一种***二酚提取物，提取物中***二酚的重量百分含量为大于等于95％小于100％，四氢***酚的重量百分含量为未检出。优选的提取物中***二酚的重量百分含量为大于等于97％小于100％，四氢***酚的重量百分含量为未检出。

该***二酚提取物的制备方法为：

(1)筛选和脱水：将晾干的工业***放入粉碎机中进行粉碎，再将粉碎过筛后的工业***进行脱水干燥，制备得到水分含量低于10％的工业***粗品(w/w)。

(2)热处理：将步骤(1)得到的工业***原料放入干燥箱中，干燥2-5小时，所述干燥箱的干燥温度为110-140℃，得到转化后工业***原料。

(3)微波预处理：将步骤(2)得到的转化原料投入到提取罐中，开启微波发生器预处理2-8min。

（4）浸提：向步骤( 3)中加入浸提溶剂，常温下浸泡提取0.5～2小时，得到初提液。

(5)过滤：将步骤(4)得到的初提液进行加压过滤。

(6)浓缩和干燥：将步骤(5)得到的过滤液进行减压浓缩，烘干后得***二酚提取物。

（7）水沉：将***二酚粗品溶于混合有机溶剂中，其中混合有机溶剂与***二酚粗品体积与重量比为15-25:1(ml/g)，制备得到***二酚粗品溶液；将***二酚粗品溶液冷却至5-10℃，加入***二酚的反溶剂，，过滤，干燥，得到***二酚粗品。

（8）制备：得到***二酚提取物经过絮凝沉淀、柱层析、结晶等方法制得***二酚晶体。

步骤(1)中所述粉碎机的筛网为30～50目；脱水干燥的温度选自60～80℃。

步骤(4)中所述的浸提溶剂选自C1-C4的醇类，优选甲醇、乙醇、异丙醇或其混合溶剂。

步骤(4)中所述原料与浸提溶剂的质体比选自3:1～1:3，优选2:1、1:1或1:2。

步骤(5)中所述的过滤分离压力为0.1-0.2MPa，滤网为400-600目。

步骤（7）中所述混合溶剂为C5～C10的饱和烷烃类和C1～C3的醇类的混合溶剂；所述C5～C10的饱和烷烃类和C1～C3的醇类的体积比选自1:1～1:3；所述反溶剂为水，所述水和***二酚粗品溶液的体积比选自1:1～1:5。

与现有技术相比，本发明的技术方案具有以下优点：

本发明提供的通过微波预处理从工业***中提取***二酚的方法与现有技术中的提取方法相比，工艺简单，不需要使用大量有机溶剂反复提取；此外，能够大大的缩短提取时间和提高提取率，具有较好的制药工业应用价值。

具体实施方式

以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此。本说明书实施例所述的内容仅仅是对发明构思的实现形式的列举，本发明的保护范围不应当被视为仅限于实施例所陈述的具体形式，本发明的保护范围也及于本领域技术人员根据本发明构思所能够想到的等同技术手段。尽管以下本发明的实施方案进行了描述，但本发明并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，下述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本发明保护之列。

实施例1

微波辅助提取及制备***二酚

（1）将10kg工业***清洗、晾干，采用XL-60C型中药粉碎机，然后过40目筛，粉碎过筛后的工业***花叶在放置于烘箱中，于75℃脱水干燥，得到工业***粗品。

（2）将步骤(1)得到的工业***原料放入干燥箱中，原料平铺厚度为1.5厘米，设置干燥温度为130℃，干燥4小时，得到转化后工业***原料。

（3）将步骤(2)得到的转化原料投入到50L提取罐中，开启微波发生器预处8min。

（4）向步骤( 3)中加入无水乙醇，无水乙醇与工业***原料的质量体积比为1:3，60℃下浸泡1小时；放出第一次浸提液，再加入无水乙醇，无水乙醇与工业***原料的质量体积比为1:2，60℃下浸泡0.5小时，合并得到初提液。

（5）将步骤(4)得到的初提液打入到600目过滤罐中，升压至0.1MPa过滤。

（6）将步骤(5)得到的过滤液进行减压浓缩，于90℃下烘干，制备得到***二酚提取物104g。

（7）所得***二酚粗品100g溶于200ml乙醇和正己烷混合溶剂中(乙醇与正己烷混合溶剂的体积比为1:1)，制备得到***二酚粗品溶液；将制得的***二酚粗品溶液温度降低至5℃，向溶液中加入纯水(水与***二酚粗品溶液的体积比（1:2) ，5～10℃静置过夜，过滤，干燥，得到***二酚粗品48 .16g(***二酚含量34％)。

（8）得到***二酚粗品经过絮凝沉淀、柱层析、结晶等方法制得***二酚晶体8.2g(***二酚含量99 .6％，未检出四氢***酚)；所用的絮凝剂为PAC，层析填料为大孔树脂，结晶溶剂为环己烷。

实施例2

微波辅助提取及制备***二酚

（1）将10kg工业***清洗、晾干，采用XL-60C型中药粉碎机，然后过40目筛，粉碎过筛后的工业***花叶在放置于烘箱中，于75℃脱水干燥，得到工业***粗品。

（2）将步骤(1)得到的工业***原料放入干燥箱中，原料平铺厚度为1.5厘米，设置干燥温度为130℃，干燥4小时，得到转化后工业***原料。

（3）将步骤(2)得到的转化原料投入到50L提取罐中，开启微波发生器预处5min。

（4）向步骤( 3)中加入无水乙醇，无水乙醇与工业***原料的质量体积比为1:3，60℃下浸泡1小时；放出第一次浸提液，再加入无水乙醇，无水乙醇与工业***原料的质量体积比为1:2，60℃下浸泡0.5小时，合并得到初提液。

（5）将步骤(4)得到的初提液打入到600目过滤罐中，升压至0.1MPa过滤。

（6）将步骤(5)得到的过滤液进行减压浓缩，于90℃下烘干，制备得到***二酚提取物106g。

（7）所得***二酚粗品100g溶于200ml乙醇和正己烷混合溶剂中(乙醇与正己烷混合溶剂的体积比为1:1)，制备得到***二酚粗品溶液；将制得的***二酚粗品溶液温度降低至5℃，向溶液中加入纯水(水与***二酚粗品溶液的体积比（1:2) ，5～10℃静置过夜，过滤，干燥，得到***二酚粗品46.3g(***二酚含量36％)。

（8）得到***二酚粗品经过絮凝沉淀、柱层析、结晶等方法制得***二酚晶体8.4g(***二酚含量99 .2％，未检出四氢***酚)；所用的絮凝剂为PAC，层析填料为大孔树脂，结晶溶剂为环己烷。

实施例3

微波辅助提取及制备***二酚

（1）将20kg工业***清洗、晾干，采用XL-60C型中药粉碎机，然后过40目筛，粉碎过筛后的工业***花叶在放置于烘箱中，于75℃脱水干燥，得到工业***粗品。

（2）将步骤(1)得到的工业***原料放入干燥箱中，原料平铺厚度为1.5厘米，设置干燥温度为130℃，干燥4小时，得到转化后工业***原料。

（3）将步骤(2)得到的转化原料投入到50L提取罐中，开启微波发生器预处6min。

（4）向步骤( 3)中加入无水乙醇，无水乙醇与工业***原料的质量体积比为1:3，60℃下浸泡1小时；放出第一次浸提液，再加入无水乙醇，无水乙醇与工业***原料的质量体积比为1:2，60℃下浸泡0.5小时，合并得到初提液。

（5）将步骤(4)得到的初提液打入到600目过滤罐中，升压至0.1MPa过滤。

（6）将步骤(5)得到的过滤液进行减压浓缩，于90℃下烘干，制备得到***二酚提取物216g。

（7）所得***二酚粗品100g溶于200ml乙醇和正己烷混合溶剂中(乙醇与正己烷混合溶剂的体积比为1:1)，制备得到***二酚粗品溶液；将制得的***二酚粗品溶液温度降低至5℃，向溶液中加入纯水(水与***二酚粗品溶液的体积（1:2) ，5～10℃静置过夜，过滤，干燥，得到***二酚粗品48.0g(***二酚含量32％)。

（8）得到***二酚粗品经过絮凝沉淀、柱层析、结晶等方法制得***二酚晶体7.9g(***二酚含量99 .8％，未检出四氢***酚)；所用的絮凝剂为PAC，层析填料为大孔树脂，结晶溶剂为环己烷。

实施例4

***二酚的制备

所得***二酚粗品100g溶于200ml乙醇和正庚烷混合溶剂中(乙醇与正庚烷混合溶剂的体积比为4:1)，制备得到***二酚粗品溶液；将制得的***二酚粗品溶液温度降低至5℃，向溶液中加入纯水(水与***二酚粗品溶液的体积比（1:2) ，5～10℃静置过夜，过滤，干燥，得到***二酚粗品53.0g(***二酚含量27％)

得到***二酚粗品经过絮凝沉淀、柱层析、结晶等方法制得***二酚晶体8.4g(***二酚含量99 .0％，未检出四氢***酚)；所用的絮凝剂为PAC，层析填料为大孔树脂，结晶溶剂为正己烷。

检测对比

对照品1：参照专利CN106278828A实施例1所述方法提取。

实验例样品1：参照实施例1所述方法制备。

实验例样品2：参照实施例4所述方法制备。

检测分析方法：实验仪器：日本日立公司H itachi L-2300高效液相色谱仪；日本日立公司H i ta c h i L - 24 0 0紫外检测器；日本日立公司D- 2 0 0 0 E l i te色谱工作站；Sartorius公司BP210S电子天平。

试剂：乙醇、四氢呋喃为色谱纯，购自山东禹王实业有限公司；醋酸为色谱纯；

供试品：***二酚晶体，通过实施例1所述方法制备。

供试品溶液配制：取供试品溶液1mg，以乙醇定容配制成100μg/mL的供试品溶液。

对照品：***二酚和四氢***酚购自中国药品生物制品检定所。

色谱柱：色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18液相色谱柱880975-902。

流动相配制：有机相为乙醇与四氢呋喃混合溶剂(v/v＝15:1)；水相为0 .8％的醋酸钠水溶液(w/v)。

流动相：

A：0 .8％的醋酸钠水溶液(用醋酸调pH至2 .5)-乙醇四氢呋喃(90:10)；

B：0 .8％的醋酸钠水溶液(用醋酸调pH至2 .5)-乙醇四氢呋喃(60:40)。

检测条件：流速为1 .0mL/min；检测波长为220nm；柱温为35℃；进样量为10μL。

表1梯度条件(体积比):

对照品溶液制备及线性回归方程的确定:取***二酚对照品(1mg/mL)溶液，以乙醇定容制备成200μg/mL***二酚的对照品母液，再配制成浓度梯度为0 .05μg/mL、0 .5μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL的***二酚对照品溶液；按照***二酚相同的方法，取四氢***酚对照品(1mg/mL)溶液，以乙醇定容制备成成200μg/mL***二酚的对照品母液，再配制成浓度梯度为0 .02μg/mL、0 .2μg/mL、0 .8μg/mL、4μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μ/mL的四氢***酚对照品溶液。

根据其相应的峰面积得如下线性回归方程:

***二酚:

Y＝75621X+39051，n＝8(R2＝0 .9995)；

四氢***酚:

Y＝73973X+36298，n＝8(R2＝0 .9994)。

上述对照品及及实验例样品的CBD含量的检测结果参见表2。

表2各样品CBD含量的结果:

名称	CBD含量	四氢***酚含量
			标准品	100％	未检出
对照品	93 .7％	0.27%
			实验例样品1	99 .6％	未检出
实验例样品2	99 .0％	未检出

通过上述检测结果可知，本发明所提供的制备方法与CN106278828A所提供的方法相比，工艺简单，不需要反复提取以及通过柱层析的方法，提取率高达90％以上；此外，精制过后的***二酚提取物，纯度达到99％以上，未检出四氢***酚，符合药用标准，因此本发明所提供制备和精制方法适用于制药工业化生产，降低生产成本的同时减少环境的污染。