组织蛋白酶抑制剂及其制备方法和应用

文档序号：1458311 发布日期：2020-02-21 浏览：24次 >En<

阅读说明：本技术 组织蛋白酶抑制剂及其制备方法和应用 (Cathepsin inhibitor and preparation method and application thereof ) 是由袁雷马恩龙于 2018-08-10 设计创作，主要内容包括：本发明涉及药物化学领域,涉及组织蛋白酶抑制剂及其制备方法和应用,具体涉及一种新型的类肽类化合物或其药学上可接受的溶剂化物、药物组合物和药物制剂及其制备方法。还涉及所述化合物或其药学上可接受的溶剂化物、药物组合物和药物制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。所述的化合物及其异构体如通式(I)所示,其中R<Sub>1</Sub>和R<Sub>2</Sub>如说明书和权利要求书所述。<Image he="343" wi="470" file="DDA0001760526290000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The invention relates to the field of pharmaceutical chemistry, relates to a cathepsin inhibitor, a preparation method and application thereof, and particularly relates to a novel peptoid compound or a pharmaceutically acceptable solvate, a pharmaceutical composition, a pharmaceutical preparation and a preparation method thereof. And alsoRelates to the application of the compound or the pharmaceutically acceptable solvate, the pharmaceutical composition and the pharmaceutical preparation thereof in preparing antitumor drugs. The compound and the isomer thereof are shown as a general formula (I), wherein R 1 And R 2 As described in the specification and claims.)

组织蛋白酶抑制剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及药物化学领域，涉及组织蛋白酶抑制剂及其制备方法和应用，具体涉及一种新型的类肽类化合物或其药学上可接受的溶剂化物、药物组合物和药物制剂及其制备方法。还涉及所述化合物或其药学上可接受的溶剂化物、药物组合物和药物制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

恶性肿瘤是严重威胁人类健康与生命的常见疾病和多发疾病(Siegel R.L.，Miller K.D.，Jemal A.Cancer statistics,2017.CA Cancer J.Clin.,2017,67(1):7-30)。药物治疗占据着重要地位，目前，临床上使用的大部分癌症治疗药物的作用机制是诱导肿瘤细胞凋亡。然而，肿瘤细胞对这些药物的凋亡敏感性有很大差异，而且随着此类药物的不断使用，肿瘤细胞出现的多耐药性也大大影响了化学治疗的效果。与此同时，已有确切数据表明90％与癌症相关的死亡都是由原发肿瘤细胞转移所致(Marx V.TrackingMetastasis and Tricking Cancer.Nature,2013,494,133-138)。由此可见，开发既能通过新颖作用机制抑制肿瘤细胞增殖，又兼有抑制肿瘤细胞转移作用的抗肿瘤药物是一项具有深远意义的工作。

近十年间越来越多的研究证明自噬在肿瘤发生、发展过程中作用关键。调控细胞自噬作用已经成为杀死肿瘤细胞的新策略，是目前国际肿瘤学界研究的热点(Morel,E.,Mehrpour,M.,Botti,J.,Dupont,N.,Hamai,A.,Nascimbeni,A.C.,Codogno,P.Autophagy:adruggable process.Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.,2017,57,375-398)。大隅良典因在细胞自噬机制研究领域的成就获得诺贝尔奖后，更是将自噬的研究推向了崭新的高度。因此，开发自噬调控药物对于已出现耐药性的癌症治疗具有重要意义。

另一方面，组织蛋白酶也与肿瘤细胞的发生发展密切关联。自20世纪90年代起，组织蛋白酶的晶体结构被陆续确定,包括组织蛋白酶B、C、H、L、K、S等。随着对组织蛋白酶的深入探索，发现组织蛋白酶除了在胞内蛋白质周转更新中发挥重要作用外，还参与许多其它生理过程，如细胞的增殖、粘附、凋亡、脂质代谢及免疫反应等。在细胞癌变过程中，大量组织蛋白酶被分泌到胞质来降解细胞外基质和基底膜，从而促进肿瘤细胞的侵袭和转移，增加新生血管的形成以便于肿瘤生长。

研究显示，组织蛋白酶B、K、L、S经常涉及重要的病理生理环境，是与人体多种癌变、疾病发生过程关系最为密切的几种亚型。组织蛋白酶L参与蛋白质降解、激素前体活化、抗原递呈、骨基质降解、神经系统的发育和成熟等多种生理活动。在胃肠道间质瘤、神经胶质瘤、腹主动脉瘤、子宫内膜癌、卵巢癌、膀胱癌、肾癌等肿瘤组织中，组织蛋白酶L表达高于正常组织。组织蛋白酶S可以在中性pH条件下长时间保持蛋白水解活性，与多种疾病发生过程关系密切。例如，组织蛋白酶S在肺癌组织和星形细胞瘤中的表达水平显著升高。Ryschich等发现组织蛋白酶S可能促进肝癌细胞的血管生成(Aggarwal N.,SloaneB.F.Cathepsin B:multiple roles in cancer.Proteomics Clin.Appl.,2014,8(5-6):427-437；Pranjol M.Z.I.,Gutowski N.,Hannemann M.The potential role of theproteases cathepsin D and cathepsin L in the progression and metastasis ofepithelial ovarian cancer.Biomolecules,2015,5(4):3260-3279；Tsai J.Y.,LeeM.J.,Chang M.D.,Wang H.C.，Lin C.C.Huang H.Effect of novel human cathepsin Sinhibitors on cell migration in human cancer cells.Journal of EnzymeInhibition and Medicinal Chemistry,2014,29(4):538-546；Fatma H.A.,Law B.K.,Paul V.J.,Luesch H.Crassystatins D-F,potent Aspartic Protease Inhibiors fromMarine Cyanobacteria as Potential Antimetastatic Agents Targeting InvasiveBreast Cancer.J.Nat.Prod.,2017,80,2969-2986.Erica N.P.,Song J.L.,KumarG.D.K.,Odutola S.O.,Chavarria G.E.,Charlton-Sevcik A.K.,Strecker T.E.,BarnesA.L.,Sudhan D.R.,Wittenborn T.R.,Siemann D.W.,Horsman M.R.,Chaplin D.J.,Trawick M.L.,Pinney K.G.Synthesis and biochemical evaluation ofbenzoylbenzophenone thiosemicarbazone analogues as potent and selectiveinhibitors of cathepsin L.Bio.Med.Chem.,2015,23,6974-6992.)。

显而易见，组织蛋白酶与肿瘤的转移和侵袭关系密切，是阻断肿瘤细胞转移和侵袭非常有潜力的靶点。由此可见，开发组织蛋白酶抑制剂对于肿瘤的治疗同样具有十分重要的意义。

综上所述，开发具有诱导自噬和抑制肿瘤转移和侵袭的双重作用的组织蛋白酶抑制剂对抗肿瘤药物的研究具有非凡的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有诱导自噬和抑制肿瘤转移和侵袭的双重作用的组织蛋白酶抑制剂。该抑制剂可用于制备治疗/或预防肿瘤的药物。

本发明的具体技术方案如下：

本发明提供了一种通式(I)所示的化合物及其异构体：

其中，

R₁为直链或支链的C1-C10烷基，C5-C6环烷基，取代或未取代的5-10元芳基、5-10元杂环芳基、5-10元杂环基,所述取代基为卤素、羟基、硝基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基、苄氧基、茚满基、偶氮基、C2-C4羧基；所述杂环基或杂环芳基可以任选含有1-3个N、O或S的杂原子；

R₂为取代或未取代的5-10元芳基、5-10元杂环芳基、5-10元杂环基，所述取代基为卤素、羟基、硝基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基、苄氧基、茚满基、偶氮基、C2-C4羧基；所述杂环基或杂环芳基可以任选含有1-3个N、O或S的杂原子；

本发明优选具有通式(I)所示的化合物及其异构体：

其中，

R₁为直链或支链的C1-C6烷基，C5-C6环烷基，取代或未取代的5-6元芳基、5-6元杂环芳基、5-6元杂环基,所述取代基为卤素、羟基、硝基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基、苄氧基、茚满基、偶氮基、C2-C4羧基；所述杂环基或杂环芳基可以任选含有1-3个N、O或S的杂原子；

R₂为取代或未取代的5-6元芳基、5-6元杂环芳基、5-6元杂环基，所述取代基为卤素、羟基、硝基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基、苄氧基、茚满基、偶氮基、C2-C4羧基；所述杂环基或杂环芳基可以任选含有1-3个N、O或S的杂原子；

本发明优选具有通式(I)所示的化合物及其异构体：

R₁为取代或未取代的5-6元芳基,所述取代基为卤素、羟基、硝基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基、苄氧基、茚满基、偶氮基；

R₂为取代或未取代的5-6元芳基,所述取代基为卤素、羟基、硝基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基、苄氧基、茚满基、偶氮基；

本发明优选具有通式(I)所示的化合物及其异构体：

R₁为取代或未取代的苯基,所述取代基为卤素、羟基、硝基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基；

R₂为取代或未取代的苯基，所述取代基为卤素、羟基、硝基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷基、卤代C1-C6烷氧基；

本发明优选具有通式(I)所示的化合物及其异构体：

R₁为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环戊基、环己基、苯基、苯乙基、苯丙基、联苯基、邻羟基苯基、间羟基苯基、对羟基苯基、邻氨基苯基、间氨基苯基、对氨基苯基、邻羧基苯基、间羧基苯基、对羧基苯基、邻乙酰基苯基、间乙酰基苯基、对乙酰基苯基、邻甲基苯基、间甲基苯基、对甲基苯基、邻甲氧基苯基、间甲氧基苯基、对甲氧基苯基、邻苄氧基苯基、间苄氧基苯基、对苄氧基苯基、邻三氟甲基苯基、间三氟甲基苯基、对三氟甲基苯基、邻氰基苯基、间氰基苯基、对氰基苯基、邻氟基苯基、间氟基苯基、对氟基苯基、邻氯基苯基、间氯基苯基、对氯基苯基、邻溴基苯基、间溴基苯基、对溴基苯基、邻碘基苯基、间碘基苯基、对碘基苯基、邻硝基苯基、间硝基苯基、对硝基苯基、邻偶氮基苯基、间偶氮基苯基、对偶氮基苯基、2-氯-4-氟苯基、2-溴-5-氟苯基、3-氯-2-氟苯基、3-溴-4-氟苯基、4-溴-3-氟苯基、2，3-二氯苯基、2，4-二氟苯基、2，4-二溴苯基、3-氟-4-甲氧基苯基、3-溴-4-甲氧基苯基、2，3，4-三氯苯基、2，4，5-三氯苯基、2，4，6-三氯苯基、2，4，6-三甲基苯基、3-氟-4-甲基苯基、3-氰基-4-氟苯基、5-溴-2-甲基苯基、2-溴-4,6-二氟基苯基、2,4-二氟-5-氯苯基、3,5-二氟-4-溴苯基、4-溴-2,5-二氟苯基、4-溴-2,6-二氯苯基、4-溴-3,5-二氟苯基、2-溴-4,6-二氟苯基、3,5-二氟-4-溴苯基、2-溴-4-甲基-5-氟苯基、2-氯-4-三氟甲基苯基、2-溴-4-三氟甲基苯基、3,5-二三氟甲基苯基、4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯基、α-萘基、β-萘基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、噻唑-2-基、吡咯-2-基、吡咯-3-基、吡唑-3-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、喹啉-8-基、异喹啉-6-基、吗啉-4-基、N-CBZ-哌啶-4-基、N-Boc-哌啶-4-基；咪唑-1-基、三氮唑-1-基、尿嘧啶-1-基、尿嘧啶-3-基、胞嘧啶-1-基、胸腺嘧啶-1-基、胸腺嘧啶-3-基、腺嘌呤-7-基、腺嘌呤-9-基、鸟嘌呤-7-基、鸟嘌呤-9-基、茚满-5-基；

R₂为邻氨基苯基、间氨基苯基、对氨基苯基、邻羧基苯基、间羧基苯基、对羧基苯基、邻乙酰基苯基、间乙酰基苯基、对乙酰基苯基、邻甲基苯基、间甲基苯基、对甲基苯基、邻甲氧基苯基、间甲氧基苯基、对甲氧基苯基、邻苄氧基苯基、间苄氧基苯基、对苄氧基苯基、邻三氟甲基苯基、间三氟甲基苯基、对三氟甲基苯基、邻氰基苯基、间氰基苯基、对氰基苯基、邻氟基苯基、间氟基苯基、对氟基苯基、邻氯基苯基、间氯基苯基、对氯基苯基、邻溴基苯基、间溴基苯基、对溴基苯基、邻碘基苯基、间碘基苯基、对碘基苯基、邻硝基苯基、间硝基苯基、对硝基苯基、邻偶氮基苯基、间偶氮基苯基、对偶氮基苯基、2-氯-4-氟苯基、2-溴-5-氟苯基、3-氯-2-氟苯基、3-溴-4-氟苯基、4-溴-3-氟苯基、2，3-二氯苯基、2，4-二氟苯基、2，4-二溴苯基、3-氟-4-甲氧基苯基、3-溴-4-甲氧基苯基、2，3，4-三氯苯基、2，4，5-三氯苯基、2，4，6-三氯苯基、2，4，6-三甲基苯基、3-氟-4-甲基苯基、3-氰基-4-氟苯基、5-溴-2-甲基苯基、2-溴-4,6-二氟基苯基、2,4-二氟-5-氯苯基、3,5-二氟-4-溴苯基、4-溴-2,5-二氟苯基、4-溴-2,6-二氯苯基、4-溴-3,5-二氟苯基、5-氯-2,4-二氟苯基、2-溴-4-甲基-5-氟苯基、2-氯-4-三氟甲基苯基、2-溴-4-三氟甲基苯基、3,5-二三氟甲基苯基、4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯基、α-萘基、β-萘基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、噻唑-2-基、吡咯-2-基、吡咯-3-基、吡唑-3-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、喹啉-8-基、异喹啉-6-基、吗啉-4-基、N-CBZ-哌啶-4-基、N-Boc-哌啶-4-基；咪唑-1-基、三氮唑-1-基、尿嘧啶-1-基、尿嘧啶-3-基、胞嘧啶-1-基、胸腺嘧啶-1-基、胸腺嘧啶-3-基、腺嘌呤-7-基、腺嘌呤-9-基、鸟嘌呤-7-基、鸟嘌呤-9-基，

包括所有光学异构体，即：(S,S)光学异构体，(R,S)光学异构体，(R,R)光学异构体，(S,R)光学异构体。

特别优选的化合物的化学名称和结构式如下所示：

(R)-N-(4-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(4-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(4-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(4-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(4-甲氧苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(4-甲氧苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(4-甲氧苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(4-甲氧苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(4-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(4-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(4-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(4-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(4-氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(4-氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(4-氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(4-氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-苯磺酰基苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-苯磺酰基苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-苯磺酰基苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-苯磺酰基苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(3-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(3-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(3-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(3-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(2-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(2-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(2-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(2-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(2,4-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(2,4-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(2,4-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(2,4-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(2,6-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(2,6-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(2，6-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(2，6-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(5-溴-2-甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(5-溴-2-甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(5-溴-2-甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(5-溴-2-甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(5-氯-2,4-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(5-氯-2,4-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(5-氯-2,4-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(5-氯-2,4-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(2,5-二甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(2,5-二甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(2，5-二甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(2,5-二甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(4-异丙氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(4-异丙氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(4-异丙氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(4-异丙氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(2-硝基-4-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(2-硝基-4-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(2-硝基-4-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(2-硝基-4-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(2,4-二甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(2,4-二甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(2,4-二甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(2,4-二甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(4-硝基-3-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(4-硝基-3-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(4-硝基-3-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(4-硝基-3-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(4-氨基-3-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(4-氨基-3-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(4-氨基-3-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(4-氨基-3-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(4-羟基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(R)-N-(4-羟基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(4-羟基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

(S)-N-(4-羟基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

本发明所述的化合物均具有抑制组织蛋白酶(L或S亚型)活性，并且可完全诱导肿瘤细胞自噬和抑制肿瘤细胞转移和侵袭作用而发挥抗肿瘤作用。

本发明进一步提供了上述部分化合物的制备方法，但不仅限于下述制备方法：

以光学活性的N-Boc-苯丙氨酸为原料，与光学活性的N-(取代的苯甲酰基)-苯丙氨醇在缩合试剂作用下在适当溶剂条件下发生酯化反应，所述的缩合剂包括:CDI、DCC、EDCI、HOBt等。维持温度在1-100℃，优选10-70℃，更优选为20-40℃。反应一段时间，优选50-80小时，更优选为40-60小时。得到光学活性的N-Boc-苯丙氨酸-(N-取代的苯甲酰胺基)-3-苯丙酯。在一定温度下用适当试剂脱去Boc保护基团，反应温度1-100℃，优选10-70℃，更优选为20-40℃。脱保护试剂包括：三氟乙酸、盐酸、氯化氢/乙醇溶液、氯化氢/甲醇溶液、氯化氢/四氢呋喃溶液、氯化氢/乙酸乙酯溶液等。反应一段时间，优选1-10小时，更优选为2-8小时。所得脱保护产物在以有机碱为缚酸剂的条件下，有机碱举例：吡啶、三乙胺、二乙胺或哌啶，与取代的苯磺酰氯在一定温度下反应，温度为0-100℃，优选10-70℃，更优选为20-40℃。反应一段时间，例如反应10-30小时，得到式I化合物。

本发明还提供了一种药物组合物，是以上式(I)的化合物或其异构体作为活性成分。本发明的化合物可与药学上可接受的稀释剂、辅助剂和/或载体混合制成临床上需要的药用组合物。当本发明的药物组合物应用于临床时，可将其配制成若干种剂型，如：口服制剂(如片剂，胶囊剂，锭剂，溶液或混悬液)；可注射的制剂(如可注射的溶液或混悬液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射用水可立即使用)；局部制剂(如软膏或溶液)。用于本发明的药物组合物载体是药学领域可得到的常见载体，包括：口服制剂用的粘合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稀释剂、稳定剂、悬浮剂、无色素、矫味剂等；可注射制剂用的防腐剂、加溶剂、稳定剂等；局部制剂用的基质、稀释剂、润滑剂、防腐剂等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下是不稳定的，可将其配制成肠衣片剂。

本发明的化合物与最接近的现有技术相比，具有以下优点：

(1)提供了一种新颖结构类型的组织蛋白酶抑制剂。

(2)此类化合物还显示了独特的抗肿瘤机制。是通过完全诱导肿瘤细胞自噬作用而发挥的抗肿瘤作用。所述化合物均通过抑制组织蛋白酶而发挥抑制肿瘤细胞的转移和侵袭。且通过完全诱导肿瘤细胞自噬作用而发挥的作用。其耐药性更好，值得在临床推广使用。

(3)在抑制肿瘤增殖的同时，此类化合物还显示了抑制肿瘤细胞转移的作用。

这种既具有新颖抗肿瘤作用机制，又能够抑制肿瘤转移的双功能性分子具有其他类药物无法比拟的优势。

(4)本发明上述化合物的制备工艺简单，药品纯度高、收率高、质量稳定，易于进行大规模生产。

附图说明

图1为MDC方法检测MDA-MB-231肿瘤细胞自噬的形成。

图2为抑制MDA-MB-231肿瘤细胞转移及侵袭实验。

A.刮板实验；B.Transwell小室实验。

具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容做进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1：(R)-N-取代苯磺酰基苯丙氨酸-(S或R)-2-取代苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备的制备通法(1)

步骤A：(R或S)-N-叔丁氧羰基苯丙氨酸-(S或R)-2-取代苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备通法

N-叔丁氧羰基(Boc)-D(或L)-苯丙氨酸(0.2g，0.75mmol)溶解于干燥的二氯甲烷(10ml)中，加入(N,N’)-羰基二咪唑(0.15g，0.93mmol)，室温下，搅拌30min。然后将二氯甲烷(10ml)稀释的各种N-(取代的苯甲酰化)-苯丙氨醇(0.28g，0.75mmol)加入到反应体系中，最后在室温条件下反应过夜。硅胶柱层析(氯仿:丙酮＝500:1)得到白色固体，产率为64-85％。

步骤B：

(R或S)-N-取代苯磺酰基苯丙氨酸-(S或R)-2-取代苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备通法

将(1)(0.2g，0.32mmol)和三氟乙酸(3ml)在35℃下剧烈搅拌3h。减压蒸干得到白色固体，将其溶于二氯甲烷(100ml)，滴加三乙胺(0.2ml)，然后在冰浴条件下滴加各种取代苯磺酰氯(0.05ml，0.43mmol)，反应过夜。反应液分别用20％柠檬酸、饱和碳酸氢钠、水、饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析(氯仿:丙酮＝300:1)得到0.18g白色固体，产率为90-96％。

实施例2：(R)-N-(4-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为89％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.00-7.75(m,19H,ArH),6.53(d,1H,J＝7.8Hz,6-NH),5.18(d,J＝9.0Hz,1H，7-NH),4.61(m,1H,4-H),4.34-4.36(d,J＝9.6Hz,1H,3a-H),4.11(d,J＝5.4Hz,1H,2-H),4.03(dd,J＝7.2Hz,1H,3b-H),3.06-3.10(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H,1a-H),2.97-3.00(dd，J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.87-2.93(dd,J＝13.8,6.6Hz,2H,1b-H,5b-H)；¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃):δ170.6,167.1,138.2,136.9,134.8,134.0,132.2×2,131.6,129.2×2,129.0×2,128.7×2,128.7×2,128.4×2,128.4×2,127.8,127.3,127.0×2,126.8,66.2，57.3,49.8，38.7，37.2.

实施例3：(R)-N-(4-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为85％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.02-7.73(m,19H,ArH),6.45(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.17(d,J＝9.6Hz,1H,7-NH),4.59(m,1H,4-H),4.25-4.28(dd,J＝11.4,3.0Hz,1H,3a-H),4.17-4.21(dd,J＝14.4,8.4Hz,1H,2-H),4.12-4.15(dd，J＝11.4，4.8Hz,1H，3b-H)，3.08-3.11(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H,1a-H),2.98-2.95(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.92-2.88(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,1b-H),2.83-2.87(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5b-H).

实施例4：(S)-N-(4-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为86％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.00-7.75(m,19H,ArH),6.53(d,1H,J＝7.8Hz,6-NH),5.18(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.61(m,1H,4-H),4.34-4.36(d,J＝9.6Hz,1H,3a-H),4.11(d,J＝5.4Hz,1H,2-H),4.03(dd,J＝7.2Hz,1H,3b-H),3.06-3.10(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H,1a-H),2.97-3.00(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.87-2.93(dd,J＝13.8,6.6Hz,2H,1b-H,5b-H)。

实施例5：(S)-N-(4-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为86％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.02-7.73(m,19H,ArH),6.45(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.17(d,J＝9.6Hz,1H,7-NH),4.59(m,1H,4-H),4.25-4.28(dd，J＝11.4,3.0Hz,1H,3a-H),4.17-4.21(dd,J＝14.4,8.4Hz,1H,2-H),4.12-4.15(dd,J＝11.4,4.8Hz,1H,3b-H),3.08-3.11(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H,1a-H)，2.98-2.95(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.92-2.88(dd,J＝13.8，6.6Hz,1H,1b-H),2.83-2.87(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5b-H).

实施例6：(R)-N-(4-甲氧苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为82％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.75-7.82(m,19H,ARH),6.60(d,1H,J＝8.4Hz，6-NH)，5.10(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.57(m,1H,4-H),4.32-4.34(dd，J＝10.8,3.0Hz,1H,3a-H),4.17-4.21(dd,J＝14.4,7.8Hz,1H,2-H),3.97-4.00(dd,J＝11.4,4.2Hz,1H,3b-H),3.83(s,3H,8-H),3.03-3.06(dd,J＝13.8,6.0Hz,1H,1a-H),2.94-2.98(m，2H，5a-H，1b-H)，2.82-2.86(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H).¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃):δ171.6,166.9,163.0,136.9,134.9,133.9,131.6,130.6,129.2×2,129.2×4,128.7×2,128.6×2,128.5×2,127.3,127.0×2,126.8,114.1×2,65.9,56.8,55.5,50.2,38.8,37.0.

实施例7：(R)-N-(4-甲氧苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为80％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.81-7.75(m,19H,ArH),6.54(d，1H，J＝7.8Hz，6-NH)，5.05(d，J＝9.0Hz，1H，7-NH)，4.54(m，1H,4-H),4.17-4.22(m,2H,3a-H,2-H),4.07-4.09(dd,J＝10.8,3.6Hz,1H,3b-H),3.81(s,3H,8-H),3.04-3.07(dd,J＝13.8,6.0Hz,1H,1a-H),2.90-2.97(m,2H,5a-H,1b-H),2.77-2.80(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H)。

实施例8：(S)-N-(4-甲氧苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为81％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.75-7.82(m,19H,ArH),6.60(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.10(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.57(m,1H,4-H),4.32-4.34(dd,J＝10.8,3.0Hz,1H,3a-H),4.17-4.21(dd,J＝14.4,7.8Hz,1H,2-H),3.97-4.00(dd,J＝11.4,4.2Hz,1H,3b-H),3.83(s,3H,8-H),3.03-3.06(dd,J＝13.8,6.0Hz,1H,1a-H),2.94-2.98(m,2H,5a-H,1b-H),2.82-2.86(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H).

实施例9：(S)-N-(4-甲氧苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为80％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.81-7.75(m,19H,ArH),6.54(d,1H,J＝7.8Hz,6-NH),5.05(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.54(m,1H,4-H),4.17-4.22(m,2H,3a-H,2-H),4.07-4.09(dd,J＝10.8,3.6Hz,1H,3b-H),3.81(s,3H,8-H),3.04-3.07(dd,J＝13.8,6.0Hz,1H,1a-H),2.90-2.97(m,2H，5a-H，1b-H),2.77-2.80(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H)。

实施例10：(R)-N-(4-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为66％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.98-7.75(m,19H,ArH),6.52(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.30(d,J＝8.4Hz,1H,7-NH),4.64(m,1H,4-H),4.35-4.38(dd,J＝11.4,3.0Hz,1H,3a-H),4.11-4.15(m,1H,2-H),4.05-4.07(dd,J＝10.8,4.2Hz,1H,3b-H),3.09-3.12(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H,1a-H),2.99-3.02(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.86-2.93(m,2H,1b-H,5b-H).¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃):δ171.1,167.1,143.0,136.7,134.9,134.3,133.9,131.6,129.1×2，129.1×2，128.7×2，128.7×2，128.5×2,127.4，127.3×2,127.0×2,126.9,126.0,66.3,57.3,50.0,38.6,37.1.

实施例11：(R)-N-(4-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为65％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.00-7.74(m,19H,ArH),6.46(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.31(d,J＝7.8Hz,1H,7-NH),4.62(m,1H,4-H),4.29-4.30(m,1H,3a-H),4.19-4.23(m,1H,2-H),4.14-4.17(dd,J＝10.8,4.8Hz,1H,3b-H),3.11-3.14(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H,1a-H),2.96-3.00(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.85-2.90(m,2H,1b-H,5b-H)。

实施例12：(S)-N-(4-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为60％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.98-7.75(m,19H,ArH),6.52(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.30(d,J＝8.4Hz,1H,7-NH),4.64(m,1H,4-H),4.35-4.38(dd,J＝11.4,3.0Hz,1H,3a-H),4.11-4.15(m,1H,2-H),4.05-4.07(dd,J＝10.8,4.2Hz,1H,3b-H),3.09-3.12(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H,1a-H),2.99-3.02(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.86-2.93(m,2H,1b-H,5b-H)。

实施例13：(S)-N-(4-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为61％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.00-7.74(m,19H,ArH),6.46(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.31(d,J＝7.8Hz,1H,7-NH),4.62(m,1H,4-H),4.29-4.30(m,1H,3a-H),4.19-4.23(m,1H,2-H),4.14-4.17(dd,J＝10.8,4.8Hz,1H,3b-H),3.11-3.14(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H,1a-H),2.96-3.00(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.85-2.90(m,2H,1b-H,5b-H)。

实施例14：(R)-N-(4-氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为69％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.01-7.75(m,19H,ArH),6.52(d,1H，J＝8.4Hz，6-NH)，5.14(d，J＝9.0Hz，1H，7-NH)，4.61(m，1H，4-H)，4.34-4.36(dd,J＝11.4,3.6Hz,1H，3a-H),4.10-4.13(m,1H,2-H),4.02-4.05(dd,J＝11.4,4.8Hz,1H,3b-H),3.06-3.09(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H,1a-H),2.97-3.01(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.91-2.95(dd,J＝13.8,8.4Hz,1H,1b-H),2.87-2.90(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H).¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃):δ171.3,167.1,165.8,164.1,136.8,135.4，134.9，133.9，131.6，129.7,129.6,129.1×3,128.7×2,128.7×2,128.5×2,127.3,127.0×2,126.9,116.2,116.1,66.1,57.1,50.1,38.7,37.1.

实施例15：(R)-N-(4-氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为65％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.99-7.74(m,19H,ArH),6.49(d，1H，J＝7.8Hz，6-NH),5.19(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.58(m,1H,4-H),4.24-4.26(dd,J＝10.8，3.0Hz，1H，3a-H),4.17-4.20(m,1H,2-H),4.11-4.14(dd,J＝11.4,4.8Hz,1H,3b-H),3.08-3.11(dd,J＝14.4,6.0Hz，1H,1a-H),2.94-2.97(dd,J＝13.8,7.2Hz,1H,5a-H),2.89-2.93(dd,J＝13.8,7.8Hz，1H，1b-H)，2.82-2.86(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H)。

实施例16：(S)-N-(4-氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为60％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.01-7.75(m,19H,ArH),6.52(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.14(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.61(m,1H,4-H),4.34-4.36(dd,J＝11.4,3.6Hz,1H,3a-H),4.10-4.13(m,1H,2-H),4.02-4.05(dd,J＝11.4,4.8Hz,1H,3b-H),3.06-3.09(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H,1a-H),2.97-3.01(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.91-2.95(dd,J＝13.8,8.4Hz,1H,1b-H),2.87-2.90(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H).

实施例17：(S)-N-(4-氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为63％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.99-7.74(m,19H,ArH),6.49(d,1H,J＝7.8Hz,6-NH),5.19(d,J＝9.0Hz，1H，7-NH)，4.58(m，1H，4-H)，4.24-4.26(dd，J＝10.8,3.0Hz,1H,3a-H),4.17-4.20(m,1H,2-H),4.11-4.14(dd,J＝11.4，4.8Hz，1H,3b-H),3.08-3.11(dd,J＝14.4，6.0Hz,1H,1a-H),2.94-2.97(dd,J＝13.8,7.2Hz,1H,5a-H),2.89-2.93(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,1b-H),2.82-2.86(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H)。

实施例18：(R)-N-苯磺酰基苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为66％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.02-7.75(m,20H,ArH),6.54(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.15(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.56(m,1H,4-H),4.28-4.29(dd,J＝11.4,4.8Hz,1H,3a-H)，4.13-4.17(m，1H，2-H),3.97-3.99(dd，J＝11.4，4.2Hz,1H,3b-H),3.04-3.07(dd,J＝13.8,6.0Hz,1H,1a-H),2.94-2.99(m,2H,5a-H,1b-H),2.82-2.86(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H)；¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃):δ170.8,167.1,139.1,137.0,134.8,134.0,132.9,131.5,129.2×2,129.0×2,129.0×2,128.7×2,128.6×2,128.4×2,127.4,127.1×2,126.9×2,126.8,65.9,57.1,49.9,38.8,37.2.

实施例19：(R)-N-苯磺酰基苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为61％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.03-7.74(m,20H,ArH),6.46(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.16(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.53(m,1H,4-H),4.21-4.24(m,1H,2-H),4.16-4.18(dd,J＝11.4,3.6Hz,1H,3a-H),4.05-4.08(dd,J＝11.4,4.8Hz,1H,3b-H),3.05-3.08(dd,J＝13.8,6.0Hz,1H,1a-H),2.91-2.98(m,2H,5a-H,1b-H),2.76-2.80(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H).

实施例20：(S)-N-苯磺酰基苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为60％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.02-7.75(m,20H,ArH),6.54(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.15(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.56(m,1H,4-H)，4.28-4.29(dd,J＝11.4,4.8Hz,1H,3a-H),4.13-4.17(m,1H,2-H),3.97-3.99(dd，J＝11.4,4.2Hz,1H,3b-H),3.04-3.07(dd,J＝13.8,6.0Hz,1H,1a-H),2.94-2.99(m,2H,5a-H,1b-H),2.82-2.86(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H)；

实施例21：(S)-N-苯磺酰基苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为61％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.03-7.74(m,20H,ArH),6.46(d，1H，J＝8.4Hz,6-NH),5.16(d，J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.53(m,1H,4-H),4.21-4.24(m,1H,2-H),4.16-4.18(dd,J＝11.4,3.6Hz,1H，3a-H),4.05-4.08(dd,J＝11.4,4.8Hz,1H,3b-H),3.05-3.08(dd,J＝13.8,6.0Hz,1H,1a-H),2.91-2.98(m,2H,5a-H,1b-H),2.76-2.80(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H).

实施例22：(R)-N-(3-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为50％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.03-7.79(m,19H,ArH),6.43(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.20(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.58(m,1H,4-H),4.21-4.26(m,2H,3a-H,2-H),4.12-4.14(dd,J＝11.4,5.4Hz,1H,3b-H),3.09-3.12(dd，J＝13.8,6.0Hz,1H,1a-H),2.91-2.98(m,2H,5a-H,1b-H),2.83-2.86(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H).¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃):δ170.6,167.2,141.1,136.9,135.8,134.7,134.0,129.8,129.2×2,129.0×2,128.7×2,128.7×2,128.5×2,127.5,127.0×2,126.8,125.4，122.9,66.2,57.3,49.8,38.7,37.2.

实施例23：(R)-N-(3-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为52％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.01-7.81(m,19H,ArH),6.48(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.19(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.61(m,1H,4-H),4.33-4.35(dd,J＝11.4,3.6Hz,1H,3a-H),4.14-4.18(m,1H,2-H),4.03-4.06(dd，J＝11.4，4.8Hz，1H，3b-H),3.06-3.10(dd,J＝14.4,6.0Hz,1H,1a-H),2.96-3.00(dd,J＝13.8,7.2Hz,1H,5a-H),2.91-2.95(dd,J＝14.4,8.4Hz,1H,1b-H),2.87-2.90(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H)；

实施例24：(S)-N-(3-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为53％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.03-7.79(m,19H,ArH),6.43(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.20(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.58(m,1H,4-H),4.21-4.26(m,2H,3a-H,2-H),4.12-4.14(dd,J＝11.4,5.4Hz,1H,3b-H),3.09-3.12(dd,J＝13.8,6.0Hz,1H,1a-H),2.91-2.98(m,2H,5a-H,1b-H),2.83-2.86(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H).

实施例25：(S)-N-(3-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为52％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.01-7.81(m，19H,ArH),6.48(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH)，5.19(d，J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.61(m,1H,4-H),4.33-4.35(dd,J＝11.4,3.6Hz,1H,3a-H),4.14-4.18(m,1H,2-H),4.03-4.06(dd,J＝11.4,4.8Hz,1H,3b-H),3.06-3.10(dd,J＝14.4,6.0Hz,1H,1a-H),2.96-3.00(dd，J＝13.8,7.2Hz,1H,5a-H),2.91-2.95(dd，J＝14.4,8.4Hz,1H,1b-H),2.87-2.90(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H)；

实施例26：(R)-N-(2-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为46％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.06-7.97(m,19H,ArH),6.50(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.55(d,J＝8.4Hz,1H,7-NH),4.57(m,1H,4-H),4.28-4.31(dd,J＝11.4，3.0Hz，1H,3a-H),4.20-4.23(m,1H,2-H),3.98-4.00(dd,J＝11.4,4.2Hz,1H,3b-H)，3.04-3.11(m,2H,1-H),2.94-2.97(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.80-2.84(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H)；¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃):δ170.6,167.0,138.4,137.0,135.2,134.6,134.1,133.8,131.5,130.8,129.2×2,129.0×2,128.8×2,128.6×2,128.4×2,127.5,127.5,127.1×2,126.7,120.1,65.8,57.5,49.9,38.6,37.2.

实施例27：(R)-N-(2-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为42％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.07-7.98(m,19H，ArH)，6.41(d,1H,J＝7.8Hz,6-NH),5.59(d,J＝8.4Hz,1H,7-NH),4.52(m,1H,4-H)，4.30-4.33(m，1H,2-H),4.10-4.11(d,J＝4.0Hz,1H,3-H),3.08-3.12(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,1a-H),3.03-3.06(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,1b-H),2.88-2.92(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.72-2.76(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H).

实施例28：(S)-N-(2-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为49％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.06-7.97(m,19H,ArH),6.50(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.55(d,J＝8.4Hz,1H,7-NH)，4.57(m,1H,4-H),4.28-4.31(dd,J＝11.4,3.0Hz,1H,3a-H)，4.20-4.23(m,1H,2-H),3.98-4.00(dd,J＝11.4,4.2Hz,1H,3b-H),3.04-3.11(m，2H,1-H),2.94-2.97(dd,J＝13.8，6.6Hz,1H,5a-H),2.80-2.84(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H)；

实施例29：(S)-N-(2-溴苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为51％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ7.07-7.98(m,19H,ArH),6.41(d,1H,J＝7.8Hz,6-NH),5.59(d,J＝8.4Hz,1H,7-NH),4.52(m,1H,4-H),4.30-4.33(m,1H,2-H),4.10-4.11(d,J＝4.0Hz,1H,3-H),3.08-3.12(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,1a-H),3.03-3.06(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,1b-H),2.88-2.92(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.72-2.76(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H).

实施例30：(R)-N-(2,4-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为50％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.72-7.75(m,18H,ArH),6.45(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.34(d,J＝8.4Hz,1H,7-NH),4.62(m,1H,4-H),4.31-4.34(dd,J＝11.4,3.6Hz,1H,3a-H),4.27-4.31(m,1H,2-H),4.07-4.10(dd,J＝11.4,4.2Hz,1H,3b-H),3.10-3.13(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H,1a-H),2.97-3.03(m,2H,5a-H,1b-H),2.86-2.89(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H)；¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃):δ170.7,167.1,165.8,159.4,136.9,134.8,134.0,131.5,131.3,129.2×2,129.0×2,128.7×2,128.7×2,128.4×2,127.4,127.0×2,126.8,124.2,111.5,106.6,66.0,57.4,49.8,38.7,37.2.

实施例31：(R)-N-(2,4-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为45％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.73-7.76(m，18H，ArH)，6.41(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.42(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.58(m,1H,4-H),4.35-4.38(m,1H,2-H),4.21-4.24(dd,J＝11.4,4.2Hz,1H,3a-H),4.13-4.16(dd,J＝11.4,4.8Hz,1H,3b-H),3.11-3.14(dd,J＝13.8,6.0Hz,1H,1a-H),2.99-3.02(dd,J＝13.8,7.2Hz,1H,1b-H),2.93-2.97(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.82-2.85(dd,J＝14.4,7.8Hz,1H,5b-H).

实施例32：(S)-N-(2,4-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为56％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.72-7.75(m,18H,ArH),6.45(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.34(d,J＝8.4Hz,1H,7-NH),4.62(m,1H,4-H),4.31-4.34(dd,J＝11.4,3.6Hz,1H,3a-H),4.27-4.31(m,1H,2-H),4.07-4.10(dd,J＝11.4,4.2Hz,1H,3b-H),3.10-3.13(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H,1a-H),2.97-3.03(m,2H,5a-H,1b-H),2.86-2.89(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H)；¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃):δ170.7,167.1,165.8,159.4,136.9，134.8，134.0，131.5,131.3,129.2×2,129.0×2,128.7×2,128.7×2,128.4×2,127.4,127.0×2,126.8,124.2,111.5,106.6,66.0,57.4,49.8,38.7,37.2.

实施例33：(S)-N-(2,4-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为55％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.73-7.76(m,18H,ArH),6.41(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.42(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.58(m,1H,4-H),4.35-4.38(m,1H,2-H),4.21-4.24(dd,J＝11.4,4.2Hz,1H,3a-H),4.13-4.16(dd,J＝11.4,4.8Hz,1H,3b-H),3.11-3.14(dd,J＝13.8,6.0Hz,1H,1a-H),2.99-3.02(dd,J＝13.8,7.2Hz,1H,1b-H),2.93-2.97(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.82-2.85(dd,J＝14.4,7.8Hz,1H,5b-H).

实施例34：(R)-N-(2,6-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为60％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.87-7.75(m,18H，ArH),6.48(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.60(d，J＝8.4Hz，1H,7-NH),4.59(m,1H,4-H)，4.44-4.47(m,1H,2-H),4.29-4.32(dd,J＝11.4,3.6Hz,1H,3a-H),4.04-4.06(dd,J＝11.4,4.2Hz,1H,3b-H),3.13-3.16(dd,J＝13.8，6.0Hz,1H,1a-H),3.05-3.09(dd,J＝13.8,7.2Hz,1H,1b-H),2.94-2.97(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H,5a-H),2.83-2.87(dd,J＝14.4,8.4Hz,1H,5b-H)；¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃):δ170.5,167.0,160.1,158.3,137.0,134.7,134.5,133.9,131.5，129.2×2，129.0×2，128.8×2,128.6×2,128.4×2,127.4,127.0×2,126.8,117.8,113.0,112.9,66.0,57.4,49.9,38.7,37.1.

实施例35：(R)-N-(2,6-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为64％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.84-7.72(m,18H,ArH),6.39(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.56(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.50-4.57(m,2H,4-H,2-H),4.15-4.18(dd,J＝11.4,4.2Hz,1H,3a-H),4.08-4.11(dd,J＝11.4,4.8Hz,1H,3b-H),3.13-3.16(dd,J＝13.8,6.0Hz,1H,1a-H),3.06-3.09(dd,J＝13.8,7.2Hz,1H,1b-H),2.89-2.92(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.76-2.79(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H).

实施例36：(S)-N-(2,6-二氟-苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为66％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.87-7.75(m,18H,ArH),6.48(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.60(d,J＝8.4Hz,1H,7-NH),4.59(m,1H,4-H),4.44-4.47(m,1H,2-H),4.29-4.32(dd,J＝11.4,3.6Hz,1H,3a-H),4.04-4.06(dd,J＝11.4,4.2Hz,1H,3b-H),3.13-3.16(dd,J＝13.8,6.0Hz,1H,1a-H),3.05-3.09(dd,J＝13.8,7.2Hz,1H,1b-H),2.94-2.97(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H,5a-H),2.83-2.87(dd,J＝14.4,8.4Hz,1H,5b-H)；

实施例37：(S)-N-(2,6-二氟-苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

实施例38：(R)-N-(5-溴-2-甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为79％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.75-7.92(m,18H,ArH),6.44(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.46(d,J＝6.6Hz,1H,7-NH),4.52(m,1H,4-H),4.29-4.32(dd,J＝11.4,3.6Hz,1H,3a-H),4.21-4.25(dd,J＝13.8,7.2Hz,1H,2-H),3.94-3.96(dd,J＝10.8,3.6Hz,1H,3b-H),3.73(s,3H,8-H),3.09-3.12(dd,J＝13.8,6.0Hz,1H,1a-H),3.03-3.07(dd,J＝13.8,7.2Hz,1H,1b-H),2.91-2.95(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.81-2.84(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H)；¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃):δ170.9,167.1,155.2,137.3，137.0，134.9,134.1,132.1,131.5,129.2×2,129.0×2,128.7×2，128.6×2，128.4×2，128.4,127.4,127.0×2，126.7,113.8,112.3,65.7,57.4,56.4,49.9,38.9,37.1.

实施例39：(R)-N-(5-溴-2-甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为77％。¹H-NMR(600MHz，CDCl₃):δ6.74-7.94(m,18H,ArH),6.33(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.50(d,J＝7.8Hz,1H,7-NH),4.50(m,1H,4-H),4.28-4.31(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,2-H),4.08-4.15(m,2H,3-H),3.76(s,3H,8-H),3.09-3.12(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,1a-H),3.03-3.07(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,1b-H),2.89-2.92(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.75-2.78(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H).

实施例40：(S)-N-(5-溴-2-甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

实施例41：(S)-N-(5-溴-2-甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为77％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.74-7.94(m,18H,ArH),6.33(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.50(d,J＝7.8Hz,1H，7-NH),4.50(m,1H,4-H)，4.28-4.31(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,2-H),4.08-4.15(m,2H,3-H),3.76(s,3H,8-H),3.09-3.12(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,1a-H),3.03-3.07(dd，J＝13.8，6.6Hz，1H，1b-H)，2.89-2.92(dd,J＝13.8,6.6Hz,1H,5a-H),2.75-2.78(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H).

实施例42：(R)-N-(5-氯-2，4-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为75％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.80-7.79(m,17H,ArH),6.40(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.40(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.64(m,1H,4-H),4.30-4.35(m,2H,3a-H,2-H),4.13-4.16(dd,J＝11.4,4.8Hz,1H,3b-H),3.11-3.14(dd,J＝14.4,5.4Hz,1H,1a-H),2.95-3.01(m,2H,1b-H,5a-H),2.88-2.91(dd,J＝13.8，7.8Hz，1H，5b-H)；¹³C-NMR(150MHz，CDCl₃):δ170.5，167.1,160.7,157.4,136.8,134.8,133.9,131.6,131.0,129.2×2,129.0×2,128.7×2,128.7×2,128.5×2,127.4,127.0×2,126.9,125.2,117.1,106.7,66.2,57.5,49.8,38.7,37.3.

实施例43：(R)-N-(5-氯-2,4-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为82％。1H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.81-7.79(m,17H,ArH),6.37(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.49(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.62(m,1H,4-H),4.38-4.42(m,1H,2-H),4.27-4.29(dd,J＝14.4,4.8Hz,1H,3a-H),4.16-4.19(dd,J＝14.4,5.4Hz,1H,3b-H),3.13-3.17(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H,1a-H),2.96-2.99(m,2H,1b-H，5a-H)，2.86-2.89(dd，J＝13.8，7.2Hz，1H，5b-H).

实施例44：(S)-N-(5-氯-2，4-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为78％。1H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.80-7.79(m,17H,ArH),6.40(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.40(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.64(m,1H,4-H),4.30-4.35(m,2H,3a-H,2-H),4.13-4.16(dd,J＝11.4,4.8Hz,1H,3b-H),3.11-3.14(dd,J＝14.4,5.4Hz,1H,1a-H),2.95-3.01(m,2H,1b-H,5a-H),2.88-2.91(dd,J＝13.8,7.8Hz,1H,5b-H)；

实施例45：(S)-N-(5-氯-2,4-二氟苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为84％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃):δ6.81-7.79(m,17H,ArH),6.37(d,1H,J＝8.4Hz,6-NH),5.49(d,J＝9.0Hz,1H,7-NH),4.62(m,1H,4-H),4.38-4.42(m,1H,2-H),4.27-4.29(dd,J＝14.4,4.8Hz,1H,3a-H),4.16-4.19(dd,J＝14.4,5.4Hz,1H,3b-H),3.13-3.17(dd,J＝13.8,5.4Hz,1H,1a-H),2.96-2.99(m,2H,1b-H,5a-H),2.86-2.89(dd,J＝13.8,7.2Hz,1H,5b-H).

实施例46：(R)-N-(2,5-二甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为64％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.71–6.80(m,18H,ArH),6.49(d,J＝8.4Hz,1H),5.50(d,J＝6.7Hz,1H),4.50(dq,J＝11.7,4.1Hz,1H),4.26(dd,J＝11.3，3.5Hz,1H),4.20(d,J＝6.7Hz,1H),3.90(dd,J＝11.3,3.9Hz,1H),3.74(s,3H),3.68(s,3H),3.06(dd,J＝6.7,1.6Hz,2H),2.89(d,J＝6.9Hz,1H),2.79(d,J＝8.0Hz,1H).¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃)δ171.27,166.90,152.90,150.11,136.92,134.93,134.00,131.50,129.15×2,129.14×2,128.59×2,128.58×2,128.46×2,127.46,127.28×2,126.94,126.73,120.33,113.99,113.46,65.65,57.15,56.58,55.86,50.16,39.01,36.96.

实施例47：(R)-N-(2,5-二甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为63％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.70–6.79(m,18H,ArH),6.38(d,J＝8.2Hz,1H),5.54(d,J＝7.4Hz,1H),4.47–4.41(m,1H),4.27(d,J＝7.0Hz,1H),4.05(dd,J＝9.2,4.3Hz,2H),3.71(d,J＝7.9Hz,6H),3.06(dd,J＝6.7,3.2Hz,2H),2.85(d,J＝6.8Hz,1H),2.71(d,J＝7.8Hz,1H).

实施例48：(S)-N-(2,5-二甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为65％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.71–6.80(m,18H,ArH),6.49(d,J＝8.4Hz,1H),5.50(d,J＝6.7Hz,1H),4.50(dq,J＝11.7,4.1Hz,1H),4.26(dd,J＝11.3,3.5Hz,1H),4.20(d,J＝6.7Hz，1H)，3.90(dd，J＝11.3,3.9Hz,1H)，3.74(s，3H)，3.68(s，3H)，3.06(dd，J＝6.7,1.6Hz,2H),2.89(d,J＝6.9Hz,1H),2.79(d,J＝8.0Hz,1H).

实施例49：(S)-N-(2,5-二甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为67％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.70–6.79(m,18H,ArH),6.38(d,J＝8.2Hz,1H),5.54(d,J＝7.4Hz,1H),4.47–4.41(m,1H),4.27(d,J＝7.0Hz,1H),4.05(dd,J＝9.2,4.3Hz,2H),3.71(d,J＝7.9Hz,6H),3.06(dd,J＝6.7,3.2Hz,2H),2.85(d,J＝6.8Hz,1H),2.71(d,J＝7.8Hz,1H).

实施例50：(R)-N-(4-异丙氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为65％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.78–6.75(m,19H,ArH),6.64(d,J＝8.4Hz,1H),5.06(d,J＝8.9Hz,1H),4.61–4.53(m,2H),4.35(dd,J＝11.3,3.4Hz,1H),4.14–4.05(m,1H),3.97(dd,J＝11.3,4.0Hz,1H),3.04(dd,J＝13.9,5.9Hz,1H),2.95(dd,J＝13.9,7.2Hz,2H),2.84(dd,J＝13.8,8.0Hz,1H),1.34(dd,J＝6.0,5.0Hz,6H).¹³C-NMR(151MHz,CDCl₃)δ171.61,166.94,161.50,136.99,134.95,133.94，131.50，129.99，129.19×2,129.15×2，129.14×2,128.62×2,128.59×2,128.44×2,127.22,127.02×2,126.73,115.41×2,70.33,65.85,56.85,50.21,38.73,37.02,21.72,21.71.

实施例51：(R)-N-(4-异丙氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为61％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.75–6.74(m,19H,ArH),6.57(d,J＝8.3Hz,1H),5.09(d,J＝9.2Hz,1H),4.55(p,J＝5.8Hz,2H),4.22(dd,J＝11.4,3.5Hz,1H),4.17(ddd,J＝9.2,7.4,6.1Hz,1H),4.09(dd,J＝11.3,4.4Hz,1H),3.05(dd,J＝13.9,6.1Hz,1H),2.93(dd,J＝13.9,7.2Hz,2H),2.80(dd,J＝13.8,7.9Hz,1H),1.33(dd,J＝6.0,4.1Hz,6H).

实施例52：(S)-N-(4-异丙氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为68％。1H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.78–6.75(m,19H,ArH),6.64(d,J＝8.4Hz,1H),5.06(d,J＝8.9Hz,1H),4.61–4.53(m,2H),4.35(dd,J＝11.3,3.4Hz,1H),4.14–4.05(m,1H),3.97(dd,J＝11.3,4.0Hz,1H),3.04(dd,J＝13.9,5.9Hz,1H),2.95(dd,J＝13.9,7.2Hz,2H),2.84(dd,J＝13.8,8.0Hz,1H),1.34(dd,J＝6.0,5.0Hz,6H).

实施例53：(S)-N-(4-异丙氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯的制备

合成方法同实施例1，产率为64％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.75–6.74(m,19H,ArH),6.57(d,J＝8.3Hz,1H),5.09(d,J＝9.2Hz,1H),4.55(p,J＝5.8Hz,2H),4.22(dd,J＝11.4,3.5Hz,1H),4.17(ddd,J＝9.2,7.4,6.1Hz,1H),4.09(dd,J＝11.3,4.4Hz,1H),3.05(dd,J＝13.9,6.1Hz,1H),2.93(dd,J＝13.9,7.2Hz,2H),2.80(dd,J＝13.8,7.9Hz,1H),1.33(dd,J＝6.0,4.1Hz,6H).

实施例54：(R)-N-(2-硝基-4-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为71％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.91–6.99(m,18H,ArH),6.38(d，J＝8.2Hz，1H)，6.04(d，J＝8.1Hz，1H)，4.64(d，J＝8.6Hz，1H)，4.42(d，J＝5.0Hz，1H),4.28(dd,J＝11.3,3.5Hz,1H),4.16(s，0H)，3.55(d,J＝5.1Hz,0H),3.20(dd,J＝11.3,4.8Hz,1H),3.00–2.86(m,2H).¹³C-NMR(151MHz,CDCl₃)δ170.41,167.05,147.08,137.36,136.60,135.25,135.02,134.92,133.80,131.65,130.79,129.67,129.65,129.08×2,129.03×2,128.71×2,128.56×2,127.35,126.89×2,122.62,122.60,66.24,58.38,49.73,38.27,37.15,29.62.

实施例55：(R)-N-(2-硝基-4-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为76％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.97–6.99(m,18H，ArH),6.40(d,J＝8.4Hz,1H),6.02(d,J＝8.8Hz,1H),4.62(qt,J＝7.9,4.3Hz,1H),4.51(td,J＝8.9,5.0Hz，1H)，4.27(dd，J＝11.3，3.7Hz,1H),4.15(dd,J＝11.3,5.1Hz,1H),3.22(dd,J＝11.3,5.0Hz,1H),2.99–2.92(m,2H),2.89(dd,J＝13.9,7.8Hz,1H).

实施例56：(S)-N-(2-硝基-4-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为73％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.91–6.99(m,18H,ArH),6.38(d,J＝8.2Hz,1H),6.04(d,J＝8.1Hz，1H)，4.64(d，J＝8.6Hz，1H),4.42(d,J＝5.0Hz,1H),4.28(dd,J＝11.3,3.5Hz,1H),4.16(s,1H)，3.55(d，J＝5.1Hz，1H),3.20(dd,J＝11.0,4.8Hz,1H),3.00–2.86(m,2H).

实施例57：(S)-N-(2-硝基-4-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为74％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.97–6.99(m,18H,ArH),6.40(d,J＝8.4Hz,1H)，6.02(d，J＝8.8Hz,1H),4.62(qt,J＝7.9,4.3Hz,1H)，4.51(td,J＝8.9,5.0Hz,1H),4.27(dd,J＝11.3,3.7Hz,1H),4.15(dd,J＝11.3，5.1Hz，1H)，3.22(dd,J＝11.1,5.0Hz,1H),2.99–2.92(m,2H),2.89(dd,J＝11.1,7.8Hz,1H).

实施例58：(R)-N-(2,4-二甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为78％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.71–7.02(m,18H,ArH),6.53(d,J＝8.4Hz,1H),6.44(dd,J＝8.7,2.2Hz，1H)，6.38–6.30(m,1H),5.35(d,J＝6.5Hz,1H),4.50(dt,J＝7.9,4.0Hz,1H),4.30(dd,J＝11.3,3.5Hz,1H),4.10(q,J＝6.8Hz,1H),3.86(dd,J＝11.4,3.7Hz,1H),3.80(s,3H),3.66(s,3H),3.10–3.01(m,2H),2.89(dd,J＝13.8,6.9Hz,1H),2.78(dd,J＝13.8,8.0Hz,1H).¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃)δ171.45,165.26,158.19,136.98,135.06,133.98,132.83,131.55,131.35,129.16×2,129.11×2,128.61×2,128.56×2,128.49×2,127.27,126.95×2,126.70,118.96,103.97,99.35,65.65,57.19,56.07,55.63,50.00,39.02,36.95.

实施例59：(R)-N-(2,4-二甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为73％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.63–7.03(m,18H,ArH),6.33(d,J＝8.2Hz,1H),6.29(d,J＝7.3Hz,2H),5.34(d,J＝7.5Hz,1H),4.39(tt,J＝8.2,4.3Hz,1H),4.13(q,J＝7.1Hz,1H),3.96(dd,J＝11.3,4.2Hz,1H),3.89(dd,J＝11.3,3.7Hz,1H),3.71(s,3H),3.64(s,3H),2.97(d,J＝6.9Hz,2H),2.73(dd,J＝13.9,6.9Hz,1H),2.59(dd,J＝13.9,7.7Hz,1H).

实施例60：(S)-N-(2,4-二甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为76％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.71–7.02(m,18H,ArH),6.53(d,J＝8.4Hz,1H),6.44(dd,J＝8.7,2.2Hz,1H),6.38–6.30(m,1H),5.35(d,J＝6.5Hz，1H)，4.50(dt，J＝7.9,4.0Hz,1H)，4.30(dd，J＝11.3，3.5Hz,1H),4.10(q,J＝6.8Hz,1H),3.86(dd,J＝11.4,3.7Hz,1H),3.80(s,3H),3.66(s,3H),3.10–3.01(m,2H),2.89(dd,J＝13.8,6.9Hz,1H),2.78(dd,J＝13.8,8.0Hz,1H).

实施例61：(S)-N-(2,4-二甲氧基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为72％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.63–7.03(m,18H,ArH),6.33(d,J＝8.2Hz,1H),6.29(d,J＝7.3Hz,2H),5.34(d,J＝7.5Hz,1H),4.39(tt,J＝8.2,4.3Hz,1H)，4.13(q，J＝7.1Hz,1H)，3.96(dd,J＝11.3,4.2Hz,1H),3.89(dd,J＝11.3,3.7Hz,1H),3.71(s,3H),3.64(s,3H),2.97(d,J＝6.9Hz,2H),2.73(dd,J＝13.9,6.9Hz,1H),2.59(dd,J＝13.9,7.7Hz,1H).

实施例62：(R)-N-(4-硝基-3-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为69％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.77–7.06(m,18H,ArH),6.32(d,J＝8.4Hz,1H),5.00–4.81(m,1H),4.67–4.51(m,2H),4.33(dd,J＝9.0Hz,1H),4.15(d,J＝11.5Hz,1H),3.12(dd,J＝13.7,6.1Hz,2H)，2.94(dd，J＝13.9，6.3Hz,1H),2.81(dd,J＝13.8,8.3Hz,1H).¹³C-NMR(151MHz,CDCl₃)δ172.19,169.86,167.26,167.06,136.48,135.80,134.58,134.19,133.94,131.80,131.58,129.33,129.15,129.11,129.01,128.95,128.86,128.76,128.70,128.66,128.53,127.69,127.25,127.09,126.92,126.83,66.55,53.82,50.20,49.80,37.28,28.32.

实施例63：(R)-N-(4-硝基-3-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为66％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.75–6.47(m,18H,ArH),4.98(d,J＝7.4Hz,1H),4.57(dtd,J＝14.4,8.3，7.1，4.2Hz,2H),4.37–4.26(m，1H)，4.10(dd,J＝11.6,4.1Hz,1H),3.08(d,J＝6.6Hz,2H),2.94(dd,J＝13.6,6.0Hz,1H),2.79(dd,J＝13.6，8.7Hz，1H).

实施例64：(S)-N-(4-硝基-3-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为73％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.77–7.06(m,18H,ArH),6.32(d,J＝8.4Hz,1H),5.00–4.81(m,1H),4.67–4.51(m,2H),4.33(dd,J＝9.0Hz,1H),4.15(d,J＝11.5Hz,1H),3.12(dd,J＝13.7,6.1Hz,2H)，2.94(dd,J＝13.9,6.3Hz,1H),2.81(dd,J＝13.8,8.3Hz,1H).

实施例65：(S)-N-(4-硝基-3-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为72％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.75–6.47(m,18H,ArH),4.98(d,J＝7.4Hz,1H),4.57(dtd,J＝14.4,8.3,7.1,4.2Hz，2H),4.37–4.26(m,1H)，4.10(dd,J＝11.6,4.1Hz,1H),3.08(d,J＝6.6Hz,2H)，2.94(dd,J＝13.6,6.0Hz,1H),2.79(dd,J＝13.6,8.7Hz,1H).

实施例66：(R)-N-(4-氨基-3-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为83％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.76–7.03(m,ArH,18H),7.01(d,J＝1.9Hz,1H),6.63(d,J＝8.6Hz,1H),6.55(d,J＝8.3Hz,1H),5.04(d,J＝9.1Hz,1H),4.57(qt,J＝7.5,3.8Hz,1H),4.33(dd,J＝11.3,3.8Hz,1H),4.08(td,J＝8.4,5.9Hz,1H),3.98(dd,J＝11.3,4.2Hz,1H),3.04(dd,J＝13.9,5.8Hz,1H),2.93(d,J＝7.02H),2.86(dd,J＝13.9,7.6Hz,1H).¹³C-NMR(150MHz,CDCl₃)δ166.17,162.37,143.42,132.18,130.07,129.24,127.00,126.76,124.44×2,124.23×2,123.93×2,123.88×2,123.65×2,122.57,122.27×2,122.23,122.00,121.97，119.91，118.10,111.91,61.13,52.32，45.04，34.05，32.37.

实施例67：(R)-N-(4-氨基-3-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为82％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.75–7.03(m,ArH,18H),6.56(d,J＝8.6Hz,1H),6.52(d,J＝8.2Hz,1H),5.06(d,J＝9.2Hz,1H),4.55(dq,J＝7.8,4.0Hz,1H),4.31(t,J＝6.7Hz，1H),4.23(dd，J＝11.3,3.7Hz,1H),4.19–4.08(m，2H),3.06(dd,J＝13.9,5.9Hz,1H),2.92(dd,J＝13.9,7.3Hz,2H),2.82(dd,J＝13.9,7.8Hz,1H).

实施例68：(S)-N-(4-氨基-3-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为85％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.76–7.03(m,ArH,18H),7.01(d,J＝1.9Hz,1H),6.63(d,J＝8.6Hz,1H),6.55(d,J＝8.3Hz,1H),5.04(d,J＝9.1Hz,1H),4.57(qt,J＝7.5,3.8Hz,1H),4.33(dd,J＝11.3,3.8Hz,1H),4.08(td,J＝8.4,5.9Hz,1H),3.98(dd,J＝11.3,4.2Hz，1H),3.04(dd,J＝13.9,5.8Hz,1H),2.93(p，J＝7.0,6.4Hz,2H),2.86(dd,J＝13.9,7.6Hz,1H).

实施例69：(S)-N-(4-氨基-3-三氟甲基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为80％。¹H-NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.75–7.03(m,ArH,18H),6.56(d,J＝8.6Hz,1H),6.52(d,J＝8.2Hz,1H),5.06(d,J＝9.2Hz,1H),4.55(dq，J＝7.8，4.0Hz，1H)，4.31(t,J＝6.7Hz,1H),4.23(dd,J＝11.3,3.7Hz,1H),4.19–4.08(m,2H),3.06(dd,J＝13.9,5.9Hz,1H),2.92(dd,J＝13.9,7.3Hz,2H),2.82(dd,J＝13.9,7.8Hz,1H).

实施例70：(R)-N-(4-羟基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为48％。¹H-NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ8.70(s，1H),7.69–6.81(m,ArH,19H),6.80(d,J＝4.1Hz,1H),5.37(d,J＝9.2Hz,1H),4.48(tq,J＝7.6,4.3,3.8Hz,1H),4.14–4.07(m,2H),3.89(dd,J＝11.2,4.1Hz,1H),3.08–2.90(m,2H),2.81(qd,J＝14.0,7.3Hz,2H).¹³C-NMR(151MHz,DMSO)δ171.26,166.61,161.31,138.81,136.83,134.89,131.66,131.01,129.52×2,129.50×2,129.12×2,128.68×4,128.64×2,127.65×2,127.07,126.63,115.73×2,66.17,57.72,49.96,38.18,36.59.

实施例71：(R)-N-(4-羟基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为50％。¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ10.34(s,1H),8.29–7.07(m,ArH,19H),6.78–6.73(m,2H),4.38(tq,J＝8.6,5.7Hz,1H),4.00–3.96(m,1H),3.96–3.92(m,1H),3.88(dd,J＝10.8,5.3Hz,1H),2.91(dd,J＝13.8,6.2Hz，1H)，2.80–2.76(m,2H)，2.73(dd，J＝13.7,8.6Hz,1H).

实施例72：(S)-N-(4-羟基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(R)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为54％。¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ8.70(s,1H),7.69–6.81(m,ArH,19H),6.80(d,J＝4.1Hz,1H),5.37(d,J＝9.2Hz,1H),4.48(tq,J＝7.6,4.3,3.8Hz,1H),4.14–4.07(m,2H),3.89(dd,J＝11.2,4.1Hz,1H),3.08–2.90(m,2H),2.81(qd,J＝14.0,7.3Hz,2H).

实施例73：(S)-N-(4-羟基苯磺酰基)-苯丙氨酸-(S)-2-苯甲酰胺基-3-苯丙酯

合成方法同实施例1，产率为56％。¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ10.34(s,1H),8.29–7.07(m,ArH,19H),6.78–6.73(m,2H),4.38(tq,J＝8.6,5.7Hz，1H),4.00–3.96(m,1H)，3.96–3.92(m,1H),3.88(dd,J＝10.8,5.3Hz,1H),2.91(dd,J＝13.8,6.2Hz,1H),2.80–2.76(m,2H),2.73(dd,J＝13.7,8.6Hz,1H).

实施例74：组织蛋白酶抑制活性测试

1.实验材料：组织蛋白酶L、S和MDA-MB-231在37℃的温度下、5％CO₂饱和湿度的培养箱内培养。各化合物在无菌条件下用二甲基亚砜(DMSO)溶解后，用RPMI-1640培养液稀释至所需浓度，DMSO最终浓度小于0.5％。RPMI 1640购于Gibco(Grand Island,USA)、胎牛血清(FBS)购于Biological Industries、青霉素-链霉素购于HyClone公司、胰蛋白酶(Trypsin，1:250)购于Biosharp公司、二甲基亚砜(DMSO)购于Sigma Chemical公司、单丹磺酰戊二胺(MDC)购于南京凯基生物技术股份有限公司。

2.仪器：二氧化碳培养箱(日本SANYO公司，型号：MCO-5AC)、倒置显微镜(日本OLYMPUS公司，型号：CKX41)、酶联免疫分析仪(Tecan，Austria)、细胞培养板(美国Costar公司)、PH测试仪(上海梅特勒－托利多仪器有限公司，型号：DELTA-320)。

实验方法(荧光染色法)：组织蛋白酶L或S：PH＝5.5的MES-NaOH缓冲溶液，其中含2.5mmol/L的EDTA，2.5mmol/L的DTT和10％的DMSO。以20μmol/L Z-Phe-Arg-AMC为荧光底物。用上述缓冲液将Cathepsin稀释至4nM备用，再用上述缓冲液将Cathepsin的底物稀释至40μM备用。将体积为50μL(空白)或49μL的酶分别与不加抑制剂或1uL不同浓度的抑制剂混合均匀。在37℃恒温培养箱培育30min后向其中加入荧光底物50μL，混匀后立即进行时间依赖效应的荧光强度检测(激发波长380nm，发射波长460nm)，该过程的检测使用的是酶标仪。抑制剂浓度分别为0、0.01、0.1、1、10、100μM。测试时间为10min，每1min扫描一次。得到的值做荧光强度随时间变化的直线，该直线的斜率即表明组织蛋白酶分解底物的初速度，而酶反应的初速度既可理解为酶的活性，通过与不加抑制剂的组织蛋白酶分解底物的速度比较(斜率)，就可看出抑制效果的好坏。将三个对照组所得的斜率求平均值，认为此值即是酶活力为100％，将其余不同浓度的斜率值分别除以上述平均值得到对应的酶的残余活力。用1减去残余活力即为酶的抑制率，通过SPSS软件分析即可得到每个抑制剂的IC₅₀值。试验结果见表1。

表1代表性化合物对两种酶cathepsin L and S的IC₅₀值

实施例75：诱导MDA-MB-231肿瘤细胞自噬作用研究。

以酶活性最优的实施例22为例：

1.MDA-MB-231细胞抑制活性测试

实验材料同上。实验方法(MTT法)：取0.25％胰蛋白酶消化单层培养的MDA-MB-231细胞，用含10％胎牛血清的RPMI1640培养液配成单细胞悬液，接种于96孔板中，每孔200μL(含3×104-5×104个细胞)。将培养板放入CO₂孵箱，在37℃、5％CO₂条件下，待培养细胞贴壁后加入不同浓度的待测化合物，每个化合物测试4个浓度(1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7、1×10^- ⁸mol/L)，对照组加入与给药组等体积的溶剂。继续在CO₂孵箱中于37℃、5％CO2条件下培养72h。每孔加入20μL MTT溶液(5mg/mL)，于37℃继续孵育4h，中止培养，弃去孔内培养上清液，每孔加入150μL DMSO，轻度振荡10min，选择570nm波长，在酶标仪上测定各孔光吸收值(OD值)，用下面公式计算化合物对肿瘤细胞的抑制率，并计算IC₅₀。重复测试3次，取平均值为最终结果。测试结果表明，实施例22对于MDA-MB-231肿瘤细胞的IC₅₀为26.24±1.43。

2.MDC染色法考察细胞自噬

取对数生长期的细胞经0.25％胰酶消化后，用10％胎牛血清的RPMI1640配成单细胞悬液，以3×10⁵个/瓶细胞数接种于六孔板中，于培养箱中培养24h，待充分贴壁后，弃去上清液，加入2mL含所需浓度药物的培养液，对照组加入2mL含0.1％DMSO的培养液，培养箱中孵育相应时间。然后于37℃用50mM MDC处理一小时。最后通过荧光检测器检测。结果见图1。

实施例76：抑制MDA-MB-231肿瘤细胞转移与侵袭作用研究。

以酶活性最优的实施例22为例：

为了考察实施例22对MDA-MB-231细胞迁移的抑制作用，我们选用无毒浓度的实施例22处理细胞48h，两个广谱组织蛋白酶抑制剂(E-64、E64d)作为阳性对照，结果显示，实施例22在无毒剂量内能够浓度依赖性的抑制乳腺癌细胞的迁移。同样，为了研究实施例22对MDA-MB-231细胞侵袭的抑制作用，我们选用无毒浓度的实施例22进行Transwell小室侵袭实验，两个广谱组织蛋白酶抑制剂(E-64、E64d)作为阳性对照，结果显示，实施例22在无毒剂量内能够浓度依赖性的抑制乳腺癌细胞的侵袭(图2)。以上结果进一步表明，MDA-MB-231细胞内组织蛋白酶活性与细胞的迁移侵袭能力有着密切联系，细胞组织蛋白酶活性越强，细胞的迁移侵袭能力也越强，抑制了细胞组织蛋白酶活性之后，其迁移侵袭能力明显下降。

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