一种玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J及其编码基因和应用
阅读说明：本技术 一种玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J及其编码基因和应用 (Corn sucrose transporter ZmSUT3J and coding gene and application thereof ) 是由 贺红霞 李楠 朱旭 柳青 郭嘉 孙传波 李传龙 金峰学 李海云 贺红利 杨春明 于 2019-11-26 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J及其编码基因和应用,属于植物生物工程技术领域。玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J有氨基酸序列如SEQ ID No.2所述,所述玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J基因在培育耐逆植物和提高植物产量中的应用,所述植物为拟南芥和玉米。本发明提供的蛋白及其编码基因,可以调控植物生长和发育,受多种胁迫诱导,参与植物对多种胁迫的响应。将本发明的基因重组载体导入植物,可以提高植物的耐盐性。本发明提供的蛋白及其编码基因对于培育耐逆性好的玉米及其他植物新品种具有重要实用价值。本发明在玉米中超表达能够提高玉米的耐逆性及产量,本发明可以应用到玉米育种中,对提高玉米耐逆性和产量有着积极的作用。(The invention relates to a corn sucrose transporter ZmSUT3J, and a coding gene and application thereof, belonging to the technical field of plant bioengineering. The corn sucrose transporter ZmSUT3J has an amino acid sequence shown in SEQ ID No.2, and the corn sucrose transporter ZmSUT3J gene is applied to cultivating stress-tolerant plants and improving the yield of plants, wherein the plants are Arabidopsis thaliana and corn. The protein and the coding gene thereof provided by the invention can regulate and control the growth and development of plants, are induced by various stresses and participate in the response of the plants to the various stresses. The salt tolerance of the plant can be improved by introducing the gene recombinant vector into the plant. The protein and the coding gene thereof provided by the invention have important practical values for cultivating corn with good stress tolerance and other new plant varieties. The overexpression in the corn can improve the stress tolerance and the yield of the corn, and the invention can be applied to corn breeding and has a positive effect on improving the stress tolerance and the yield of the corn.)
技术领域
本发明涉及植物生物工程技术领域，尤其涉及一种玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J及其编码基因和应用。
背景技术
玉米是重要的粮食、饲料作物，同时也是制药、糖料、淀粉、油料、酒精工业等的主要原料。玉米属于逆境敏感型植物，所以很容易受胁迫条件的干扰和伤害。土壤盐碱化已成为玉米产量和品质提高的主要环境因素。植物由根系吸收土壤中水肥并通过叶片光合作用生成糖，而糖不仅作为植物代谢的能量来源和结构物质，同时还作为信号分子参与植物体内众多代谢过程，影响着植物的种子萌发、下胚轴伸长、子叶伸展、根系生长发育、开花和衰老等众多生理生化过程。王玉凤等研究发现，盐胁迫下玉米体内会积累大量的可溶性糖来缓解盐胁迫对细胞的伤害(王玉凤,王庆祥et al.2007)。可溶性糖中的葡萄糖(Glc)和蔗糖(Suc)对植物生长发育具有重要作用，并可作为信号物质参与调控植物对生物和非生物胁迫的响应。蔗糖在植物细胞的细胞质中合成，是主要的糖类物质形式，也是从叶片运输到植物体其他部位的主要糖类形式。此外，蔗糖是植物体内一种重要的信号分子，参与植物糖信号的传导及调控植物生长发育进程，蔗糖转运蛋白(Sucrose transporter,缩写为SUT或SUC)是在蔗糖的运输及卸载中起重要作用的一类12次跨膜蛋白。蔗糖转运蛋白作为蔗糖转运的工具，参与韧皮部蔗糖卸载，在很大程度上调节着植株源库关系和碳氮代谢。
蔗糖转运蛋白是植物适应逆境胁迫的主要调控因子，了解植物蔗糖转运蛋白调控的作用机理，揭示蔗糖转运蛋白与逆境胁迫的关系，对提高作物产量及耐逆性新品种培育具有指导意义。
中国专利申请《一种蔗糖转运蛋白基因启动子ZmSUT4pro及其应用》公开号CN105255888A，公开的启动子具有跟特异表达调控及多种激素调节相关的顺式作用元件，GUS组织化学染色证实该启动子可用来在植物的根、叶片、茎中表达外源基因，为转基因植物的培育奠定了基础。
发明内容
本发明提供一种玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J及其编码基因和应用。
一种玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所述。
一种玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J，含有一个474氨基酸的蔗糖转运子，自氨基末端第22位-第495位氨基酸残基为GPH-sucrose superfamily的保守结构域。
一种玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所述。
本发明提供了用于如上所述玉米蔗糖转运蛋白基因同源克隆的引物序列，引物名称分别为ZmS3BamFW：5’CGGGATCCCGATGGCTGGTGATGGCATGGAGGTA 3’和 ZmS3SpeRev：5’CGAGCTCGTCAGTGCCCTCCTCCCATGGAGACG 3’。
含有所述玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J基因的重组菌。
含有所述玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J基因的表达盒。
含有所述玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J基因的植物表达载体，其核苷酸序列如SEQID No.3所述。
所述植物表达载体是将玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J基因***含有ZmSUT4pro启动子的pCAMBIA3300的多克隆位点得到的重组质粒。
所述玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J基因在培育耐逆植物中的应用，所述植物为拟南芥和玉米。
所述玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J基因在培育耐逆植物中的应用，所述耐逆为耐盐碱。
所述玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J基因在提高植物产量中的应用，所述植物为玉米，但不仅限于玉米。
一种培育转基因植物的方法，是将所述的目标基因导入植物中，得到耐逆性高于所述植物的转基因植物，所述目标植物为拟南芥和玉米。
本发明提供的蛋白及其编码基因，可以调控植物生长和发育，受多种胁迫诱导，参与植物对多种胁迫的响应。将本发明的基因重组载体SEQ ID No.3导入植物，可以提高植物的耐盐性。本发明提供的蛋白及其编码基因对于培育耐逆性好的玉米及其他植物新品种具有重要实用价值。本发明通过实验证明，ZmSUT3J基因在玉米中超表达能够提高玉米的耐逆性及产量，本发明可以应用到玉米育种中，对提高玉米耐逆性和产量有着积极的作用。
附图说明
图1A为吉853玉米自交系总RNA电泳图，图中1-4为根、茎、雌蕊、雄穗；
图1B为ZmSUT3J基因的RT-PCR扩增图，图中M：DL2000分子量Marker，1-4分别为根、茎、雌蕊、雄穗的cDNA为模板；
图2是植物表达载体pCAM-S4P-SUT3J的载体图谱；
图3A是转pCAM-S4P-SUT3J拟南芥T3代植株RT-PCR结果图；以Marker为中心，左侧1-12为SUT3扩增结果，右侧1-12为内参TUB2扩增结果；样品分别为：1-3：S8-2-3；4-6：S8-2-4；7-8：S8-2-5；9-10，S4P-GUS；11-12：野生型，marker：Gene ruler mix(Thermoscientific)；
图3B是转ZmSUT3OE拟南芥T2代表型，移栽后10d，左侧为野生型拟南芥，右侧为SUT3J OE(8-2株系)；
图3C是转ZmSUT3OE拟南芥T2代表型，移栽后15d，左侧为野生型拟南芥，右侧为SUT3J OE(8-2株系)；
图3D是转ZmSUT3OE拟南芥T2代表型，在MS0固体培养基中加140mM NaCl 生长14天后的情况，左侧为野生型拟南芥，右侧为SUT3J OE(8-2株系)；
图4A是转ZmSUT3J玉米PCR检测bar基因示例，1和14:Marker2K；2:质粒；3: 水；4-13,15-26:转ZmSUT3J玉米；
图4B是转ZmSUT3J玉米PCR检测ZmSUT3J基因实例，1、26、27和52:Marker2K； 2:质粒；3:水；4-25以及28-51:转ZmSUT3OE玉米
图5是转ZmSUT3J玉米纯合阳性材料AA(右侧)与纯合阴性材料aa(左侧)的田间表型；
图6A是转ZmSUT3J玉米的PCR检测图；1，2K Marker；2:质粒；3，水；4，转 ZmSUT3基因玉米；5，非基因玉米；
图6B是转ZmSUT3J玉米的RT-PCR检测图；
图7是转ZmSUT3J玉米的Southern杂交；M:15kbMarker；1:质粒；2:非转基因玉米；3:转ZmSUT3基因玉米；
图8A是转ZmSUT3J玉米的穗行数差异图；
图8B是转ZmSUT3J玉米的穗粗差异图；
图8C是转ZmSUT3J玉米的.穗重差异图；
图8D是转ZmSUT3J玉米的百粒重差异图；
图8E是转ZmSUT3J玉米的穗部表型差异图，其中A:转ZmSUT3基因玉米阳性纯合系；B:转ZmSUT3基因玉米阴性纯合系；
图9A是转ZmSUT3J玉米盐胁迫条件下株高差异图；
图9B是转ZmSUT3J玉米碱胁迫条件下株高差异图；
图9C是转ZmSUT3J玉米盐胁迫条件下茎秆粗差异图；
图9D是转ZmSUT3J玉米碱胁迫条件下茎秆粗差异图；
图9E是转ZmSUT3J玉米盐胁迫条件下结穗率差异图；
图9F是转ZmSUT3J玉米碱胁迫条件下结穗率差异图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对发明做进一步说明。
实验材料：
质粒：pBACKZERO-T(北京全式金公司)，pCAMBIA3300(Cambia Labs)；
菌株：大肠杆菌E.coli TransT1(北京全式金公司)，农杆菌EHA105(市售)；
植物材料：玉米受体材料Hi-II，吉853玉米自交系，四287玉米自交系，均由吉林省农业科学院试验地种植。
下述实施例中所用的方法如无特别说明，均为常用分子生物学、组织培养技术和基因工程所记载的方法。具体步骤可参见：《Molecular Cloning:A Laboratory Manual》(Sambrook,J.,Russell,David W.,Molecular cloning:A Laboratory Manual,3rdedition, 2001,NY,Cold Spring Harbor)。各种试剂及内切酶：购自大连TaKaRa公司，上海捷瑞生物科技有限公司，基因合成由上海捷瑞生物科技有限公司完成，测序分析由华大基因完成。
实施例1 ZmSUT3J基因ORF编码区的克隆与分析
1.1总RNA的提取及反转录-PCR扩增
分别取100mg新鲜玉米自交系吉853的根、茎、叶及雄穗组织，与液氮中研磨成粉末；加入1mL RNA裂解液，参考Promega RNA提取试剂盒说明书提取总RNA，进行1.0％琼脂糖凝胶电泳，电泳结果见附图1A。
1.2 RT-PCR扩增
预先将每个部位的cDNA进行半定量RT-PCR扩增，数据分析结果表明，雄穗部位目的基因表达量较高，且扩增所得PCR产物与预期大小相近，因此选择对雄蕊部位反转录得到的cDNA进行扩增。以总RNA(约1μg)反转录合成cDNA第一链为模板进行PCR扩增，PCR电泳结果见附图1B。凝胶回收目的片段连接到克隆载体pBACKZERO-T，得到重组载体命名为pBK-SUT3J，转化E.coli TransT1感受态细胞(北京全式金生物技术有限公司)，经菌落PCR及酶切双重检测后，选取阳性克隆进行测序分析(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司)。
实施例2植物表达载体pCAM-S4P-SUT3J的构建
利用BamH I和Spe I双酶切pBK-SUT3J和pCAM-S4P,回收目的片段和载体片段进行连接，得到载体pCAM-S4P-SUT3J，载体图谱见附图2。
实施例3 ZmSUT3J基因在拟南芥中超表达及表型鉴定
3.1拟南芥蘸花法遗传转化
3.1.1播种及移栽野生型拟南芥：营养土和蛭石1:1混合，大营养钵保留4棵，移栽后继续覆盖3-4天保鲜膜。
3.1.2工程菌的制备：拟南芥遗传转化用含有pCAM-S4P-SUT3J的GV3101菌株，挑取阳性克隆检测后，先用2mL离心管少量摇菌，每管装1mL的LB，分装2管，摇8—10 小时待浑浊后再转移到500mL三角瓶(按1：100的比例装有200mL的LB)中扩摇8—10 小时直到OD值为0.8为止(注意使用无菌离心管和灭菌的LB，并填加合适的抗生素利福平、卡那霉素)。接下来就是离心富集农杆菌(用离心瓶或者是50mL的大离心管)，然后用100mL的5﹪的蔗糖悬浮，蔗糖溶液中加入20μL表明活性剂，也就是浓度0.02％
3.1.3遗传转化：在拟南芥初次开花时将花蕾剪掉，可以促进侧枝更多的花枝的增生。在用花序浸染法转化拟南芥之前，先用剪刀剪去已经长成的角果，把100mL的5％的蔗糖悬浮的菌液倒入大皿内，然后把拟南芥的花序浸入进去侵染2分钟，浸染的过程要转动营养钵，浸染后用滤纸擦干，浸染后的拟南芥要用黑色塑料袋或者薄膜覆盖，暗培养24小时。浸染后悉心照料，保持水分充足。由于拟南芥的盛花期较长，所以一般要浸染2—3次。
3.1.4筛选T1代拟南芥种子：角果自然开裂后就可以收种子了。此时收的种子是T1种子。巴氏消毒液和灭过菌的ddH2O按1：1混合，在2mL离心管中灭菌就行，灭菌3次，总时间不要超过8分钟，用灭菌水洗5次。然后用0.1％无菌琼脂悬浮。用拟南芥筛选培养基进行筛选，加5mg/L的草铵膦(300uL母液/500mL MS)和头孢霉素(cef 母液100mg/mL,500uL母液/500mL MS)(8克琼脂/L)，加草铵膦是由于T-DNA标签上的Bar基因是草铵膦抗性的，起筛选作用；加头孢霉素主要是抑制杂菌生长的作用。由于T1代种子的阳性率较低，所以筛选时每个皿要筛选很多种子，这时候种子之间可以紧密靠近，但注意不要过分紧密。筛选T1代种子的皿放在光照培养室，长出幼苗后就可以观察出来筛选效果，转基因阳性的幼苗长得比较绿，而且比转基因阴性的幼苗长得高一点，转基因阴性的幼苗发黄，而且较矮。T1代阳性拟南芥幼苗至少20棵，挑选出阳性的拟南芥幼苗平铺于新的拟南芥筛选培养基直至生根，注意培养皿要立起来放。
3.1.5筛选T2代拟南芥种子：待拟南芥幼苗的根长到一定长度后即可进行移栽，移栽前要清洗掉根部的培养基(防止长菌)，移栽时防止伤根。移栽完成后浇水并覆盖白色薄膜3—4天。待角果开裂就可以收种子了，此时收的种子是T2种子，由于T2种子开始出现纯合与杂合基因型的分离，所以此时再进行筛选时每个皿里涂的种子不宜过多，种子之间不能靠的太近。如果是单拷贝的，则会出现3：1的分离比，如果是双拷贝的，则会出现15：1的分离比，依次类推。不出现分离的T2及T3种子就是纯系，将它们种下去长出的拟南芥即可以进行基因功能验证。一般来说，至少要保证转基因纯系在10个以上。
3.2转基因株系的分子鉴定
以上转基因拟南芥分子鉴定，T1和T2代主要是利用除草剂筛选。附图4为转基因拟南芥T3代植株RT-PCR检测结果，检测引物S3 422fw:CTGGTGATGGCATGGAGGTA 和S3 422rev:AGCCAGAATCCCATCACGAA。内参基因拟南芥TUB2基因，片段大小是483bp，TUB2-483fw:CTCAAGAGGTTCTCAGCAGTA，TUB2-483rev： TCACCTTCTTCATCCGCAGT，根据RT-PCR结果，转基因株系的ZmSUT3J能够在拟南芥中超表达(附图3A)。
3.3 ZmSUT3J OE拟南芥的表型鉴定及耐盐性鉴定
所得拟南芥转化事件8-2，后代表型特征初步显示ZmSUT3J在调节源库运输和碳氮代谢方面有重要作用。转ZmSUT3J超表达拟南芥植株表现为营养生长旺盛，开花晚、花期长、结实率高(附图3B和3C)。在140mM NaCl条件下，ZmSUT3J超表达拟南芥植株耐盐性较对照相比有所提高(附图3D)。
实施例4表达载体pCAM-S4P-SUT3J在玉米中的表达研究
4.1表达载体pCAM-S4P-SUT3J转化农杆菌EHA105
向50μL农杆菌EHA105感受态细胞中加入1μgpCAM-UGN质粒DNA，冰浴 30min；放入液氮中1min，然后立即放入37℃水浴锅中水浴5min；取出离心管，加入 0.5mLYEP培养基，28℃，220rpm振荡培养3-5hr；取出菌液涂于含有相应抗生素的 YEP平板上，在28℃培养箱中倒置培养2天，直到菌落出现。
4.2重组农杆菌鉴定
挑取单菌落，接种于含有相应抗生素的YEP液体培养基中，28℃振荡培养过夜。碱裂解法提取质粒DNA并酶切鉴定。
4.3转ZmSUT3J基因玉米植株的获得
采用农杆菌介导的玉米幼胚遗传转化法对玉米受体材料Hi-II进行遗传转化，具体方法如下：
(1)将含有植物表达载体pCAM-S4P-SUT3J的农杆菌EHA105于YEP液体培养基中，28℃摇菌16h，5000rpm离心5min收集菌体，重悬液重悬，调OD550至0.3，制成侵染液备用；
(2)取授粉9～12d的玉米HiII幼穗，剥去苞叶，95％酒精灭菌10min，取出后在超净工作台中吹干，解剖刀剥取幼胚于侵染液中暗处静止侵染5min。侵染结束后，无菌滤纸吸干幼胚上菌液，盾片朝上接种于共培养基中，28℃暗培养3d，转至恢复培养基中，28℃暗培养7d；
(3)将幼胚转至含有3mg/L双丙氨膦的筛选培养基中，28℃暗培养14d，以后每 14天更换一次筛选培养基，直到抗性愈伤增殖至直径2cm左右；
(4)将抗性愈伤转接至暗分化培养基，25℃暗培养21d。将分化得到的胚芽鞘转接至光分化培养基，25℃光下培养14d，待胚芽鞘长出完整的根、茎和叶，将再生苗转至生根壮苗培养基，25℃光下培养14d；
(5)将再生苗移栽入营养土，在炼苗室炼苗，待植株长出新叶显示成活，将植株移入温室；
(6)4～6叶期取叶片提取基因组DNA，利用PCR技术进行分子检测，确定外源基因已经转入玉米基因组中且表达(附图4A和4B)，转基因植株套袋授粉自交结实收获种子。
实施例5转ZmSUT3J基因玉米阳性和阴性纯合系的获得
在田间经过1代与玉米自交系四287杂交和2代自交获得F3代阳性和阴性纯合系。
对各季种植材料采用在苗期除草剂涂抹的方法鉴定除草剂抗性，再取叶片提取基因组DNA，进行PCR检测，收获种子。
将收获的F3代果穗每穗取籽粒20粒，播种于温室营养钵中，待小苗生长至3叶 1心时，2倍剂量除草剂涂抹叶尖处理，一周后查看结果。根据孟德尔遗传规律判断，全部苗被处理叶尖呈枯黄的为转基因纯合阴性材料，部分呈枯黄的为杂合阳性材料，全部无枯黄的为纯合阳性材料。纯合系阳性AA和阴性aa的植株生长情况见附图5。
实施例6转ZmSUT3J基因玉米的PCR检测及RT-PCR检测
采用CTAB法提取玉米叶片基因组DNA。
根据ZmSUT3J基因序列及载体上启动ZmSUT3J基因表达的启动子序列设计检测引物，检测引物及PCR反应条件如下：
PCR检测结果如附图6B所示。
在抽雄期分别取转ZmSUT3J玉米的根、茎、叶、花丝、雄穗进行RT-PCR，以鉴定目的基因在转录水平上的表达情况。检测以玉米GAPDH基因为内参基因，当材料为纯合型时，ZmSUT3J在转基因玉米的根、茎、花丝中无表达，在叶中有极其微量的表达，在雄穗中特异性高表达，且阴性材料表达量高于阳性材料(附图6B)。
实施例7：转ZmSUT3J玉米的Southern Blot分析
Southern Blot分析使用的是Roche的地高辛试剂盒II，实验具体流程参照试剂盒说明书。
根据ZmSUT3J基因序列及载体上启动ZmSUT3J基因表达的启动子序列设计探针(442bp)，使用BamHI限制性内切酶进行基因组DNA酶切。附图7结果表明，ZmSUT3J 基因已整合到玉米基因组中，为双拷贝。
实施例8：转ZmSUT3J玉米穗部农艺性状调查
在雄穗中超表达ZmSUT3J的玉米株系表现出高产的应用潜力。
为考察ZmSUT3J基因对玉米产量的影响，对田间种植后收获的转ZmSUT3J基因玉米进行了穗部农艺性状调查，调查的性状包括穗行数、穗粗、穗重和百粒重。整理数据后进行单因素方差分析，比较两组材料的差异显著性。
(1)穗行数：阳性材料穗行数大于阴性材料，P值小于0.05，大于0.01，差异显著(附图8A)。
方差分析
(2)穗粗：阳性材料穗粗大于阴性材料，P值小于0.01，差异极显著(附图8B)。
方差分析
(3)穗重：阳性材料穗重大于阴性材料，P值小于0.05，大于0.01，差异显著(附图8C)。
方差分析
(4)百粒重：阳性材料百粒重大于阴性材料，P值小于0.01，差异极显著(附图 8D)。
方差分析
结果表明：转ZmSUT3J玉米在高产育种中有潜在的育种价值。
实施例9：转ZmSUT3J玉米耐盐碱性鉴定
在雄穗中超表达ZmSUT3J基因的玉米株系表现出耐逆的应用潜力，下面实施例说明其在耐盐碱胁迫上的应用。
在花盆中种植纯合阳性材料和阴性材料，每盆1株。将阴性和阳性幼苗各分为两组，一组进行盐胁迫，一组进行碱胁迫，阴性材料为阳性材料的对照组。
盐胁迫处理：每3天每盆浇含100mmol/L氯化钠的霍格兰营养液4L，直至结实灌浆期为止。
碱胁迫处理：每3天每盆浇含25mmol/L碳酸钠的霍格兰营养液4L，直至结实灌浆期为止。
1.在开花期测量株高
(1)盐胁迫：阳性材料株高高于阴性材料。单因素方差分析结果显示P值小于0.05大于0.01，差异显著(附图9A)。
方差分析
(2)碱胁迫：阳性材料株高高于阴性材料。单因素方差分析结果显示P值小于0.05大于0.01，差异显著(附图9B)。
方差分析
3.茎秆粗：在结实期测量茎秆粗。
(1)盐胁迫：阳性材料茎秆粗比阴性材料粗，单因素方差分析P值大于0.05，差异不显著(附图9C)。
方差分析
(2)碱胁迫：阳性材料茎秆粗比阴性材料粗，单因素方差分析P值小于0.01，差异极显著(附图9D)。
方差分析
4.结穗率：在灌浆期调查结穗情况，从统计结果表明在盐胁迫或碱胁迫条件下转基因阳性材料接穗率均显著高于阴性材料(附图9E和附图9F)。
综上结果说明转ZmSUT3J玉米在耐盐碱玉米育种中有潜在的育种价值。
序列表
<110> 吉林省农业科学院
<120> 一种玉米蔗糖转运蛋白ZmSUT3J及其编码基因和应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1527
<212> DNA
<213> 人工合成(人工合成)
<400> 1
atggctggtg atggcatgga ggtatctgcc agcgggggtg gcggcggcaa caagcagccg 60
cagatcagcc ttttggggct gttcctcgca tgcatggtcg ccggcggcgt gcagtacgga 120
tgggcgctgc agctctccct tctcaccccc tacgtccaga cactggggat tcctcatgct 180
cttacatcag tcatgtggct ctgtggacct attgctggct tacttgtaca accctgcgtc 240
ggcctctata gtgacaaatg cacttctaag cttgggagac ggaggccatt catctttaca 300
ggatgcatca tcatctgtat atctgtgata gtcatcggtt tctcctcaga catcggttac 360
gctctcggtg acacgacgga agactgcaat gtttacacgg ggaagcggct gcacgcggcc 420
ttgttcttcg tgatgggatt ctggctgctg gacttttcca acaacacggt gcagggcccc 480
gcacgcgcgc tgatggcgga cctcgcaggc agccacggac ccagcacggc gaacgccatc 540
ttcgtgtcgt ggatggcgat cgggaacatc ctgggctact cgtcggggtc caccgacaag 600
tggcacacct ggttcccgtt cctgcagacg agggcatgct gcgaggcgtg cgccaacctc 660
aaggccgcct tcctggtgtc ggtggtgttc ctgggcctgt ccacggtggt gaccatgatc 720
ttcgcccgcg aggtgccgct ggacccggcg gcggcggcga agcaggacga ggccggggag 780
tcgtcgggcc cgttcgccgt tttcaagggc atgaagaaca tgccccccgg catgccgcag 840
gtgctcatcg tcacgggcct cacctggctc tcctggttcc ccttcatcct cttcgacacc 900
gactggatgg gccgcgagat gtaccacggc aggcccgacg gcagccccga ggaggtggcc 960
aggttccagg agggcgtccg gcagggcgcc ttcggcctgc tcctcaactc cgtcgtcctc 1020
ggagccagct ccttcctcat cgagcccatg tgccgcaagc tcaccgccaa ggtcgtgtgg 1080
gtcatgagca gcttcctcgt ctgcgtcgcc atggccttgg tcaccgtcct cagctcctgg 1140
tcgctcggcg acatcggggg caacgtgcag gacgccgccg ccgtggataa gggcctcaag 1200
accaccgcgc tcgccatctt cgtcttcctc ggcttcccat tcgcggtcct atgcagcgtt 1260
ccgttcgccg tgacggcaca gctggcggcg gccaagggcg gcgggcaggg gctgtgcacg 1320
ggggtcctca acatctccat cgtggtgcca cagatggtca tcgccattgg ctctgggccg 1380
tgggacgagc tgttcggcaa gggcaacatc ccggcgttcg ggctcgccgc cgtcttcgcc 1440
ttcaccgctg ccgtcgcagg gatcatcatg ctgccaaagc agcccaagac cagcttccgg 1500
tccgtctcca tgggaggagg gcactga 1527
<210> 2
<211> 508
<212> PRT
<213> 人工合成(人工合成)
<400> 2
Met Ala Gly Asp Gly Met Glu Val Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Asn Lys Gln Pro Gln Ile Ser Leu Leu Gly Leu Phe Leu Ala Cys Met
20 25 30
Val Ala Gly Gly Val Gln Tyr Gly Trp Ala Leu Gln Leu Ser Leu Leu
35 40 45
Thr Pro Tyr Val Gln Thr Leu Gly Ile Pro His Ala Leu Thr Ser Val
50 55 60
Met Trp Leu Cys Gly Pro Thr Ala Gly Leu Leu Val Gln Pro Cys Val
65 70 75 80
Gly Leu Tyr Ser Asp Lys Cys Thr Ser Lys Leu Gly Arg Arg Arg Pro
85 90 95
Phe Ile Phe Thr Gly Cys Ile Ile Ile Cys Ile Ser Val Ile Val Ile
100 105 110
Gly Phe Ser Ser Asp Ile Gly Tyr Ala Leu Gly Asp Thr Thr Glu Asp
115 120 125
Cys Asn Val Tyr Thr Gly Lys Arg Leu His Ala Ala Leu Phe Phe Val
130 135 140
Met Gly Phe Trp Leu Leu Asp Phe Ser Asn Asn Thr Val Gln Gly Pro
145 150 155 160
Ala Arg Ala Leu Met Ala Asp Leu Ala Gly Ser His Gly Pro Ser Thr
165 170 175
Ala Asn Ala Ile Phe Val Ser Trp Met Ala Ile Gly Asn Ile Leu Gly
180 185 190
Tyr Ser Ser Gly Ser Thr Asp Lys Trp His Thr Trp Phe Pro Phe Leu
195 200 205
Gln Thr Arg Ala Cys Cys Glu Ala Cys Ala Asn Leu Lys Ala Ala Phe
210 215 220
Leu Val Ser Val Val Phe Leu Gly Leu Ser Thr Val Val Thr Met Ile
225 230 235 240
Phe Ala Arg Glu Val Pro Leu Asp Pro Ala Ala Ala Ala Lys Gln Asp
245 250 255
Glu Ala Gly Glu Ser Ser Gly Pro Phe Ala Val Phe Lys Gly Met Lys
260 265 270
Asn Met Pro Pro Gly Met Pro Gln Val Leu Ile Val Thr Gly Leu Thr
275 280 285
Trp Leu Ser Trp Phe Pro Phe Ile Leu Phe Asp Thr Asp Trp Met Gly
290 295 300
Arg Glu Met Tyr His Gly Arg Pro Asp Gly Ser Pro Glu Glu Val Ala
305 310 315 320
Arg Phe Gln Glu Gly Val Arg Gln Gly Ala Phe Gly Leu Leu Leu Asn
325 330 335
Ser Val Val Leu Gly Ala Ser Ser Phe Leu Ile Glu Pro Met Cys Arg
340 345 350
Lys Leu Thr Ala Lys Val Val Trp Val Met Ser Ser Phe Leu Val Cys
355 360 365
Val Ala Met Ala Leu Val Thr Val Leu Ser Ser Trp Ser Leu Gly Asp
370 375 380
Ile Gly Gly Asn Val Gln Asp Ala Ala Ala Val Asp Lys Gly Leu Lys
385 390 395 400
Thr Thr Ala Leu Ala Ile Phe Val Phe Leu Gly Phe Pro Phe Ala Val
405 410 415
Leu Cys Ser Val Pro Phe Ala Val Thr Ala Gln Leu Ala Ala Ala Lys
420 425 430
Gly Gly Gly Gln Gly Leu Cys Thr Gly Val Leu Asn Ile Ser Ile Val
435 440 445
Val Pro Gln Met Val Ile Ala Ile Gly Ser Gly Pro Trp Asp Glu Leu
450 455 460
Phe Gly Lys Gly Asn Ile Pro Ala Phe Gly Leu Ala Ala Val Phe Ala
465 470 475 480
Phe Thr Ala Ala Val Ala Gly Ile Ile Met Leu Pro Lys Gln Pro Lys
485 490 495
Thr Ser Phe Arg Ser Val Ser Met Gly Gly Gly His
500 505
<210> 3
<211> 11158
<212> DNA
<213> 人工合成(人工合成)
<400> 3
catgccaacc acagggttcc cctcgggatc aaagtacttt gatccaaccc ctccgctgct 60
atagtgcagt cggcttctga cgttcagtgc agccgtcttc tgaaaacgac atgtcgcaca 120
agtcctaagt tacgcgacag gctgccgccc tgcccttttc ctggcgtttt cttgtcgcgt 180
gttttagtcg cataaagtag aatacttgcg actagaaccg gagacattac gccatgaaca 240
agagcgccgc cgctggcctg ctgggctatg cccgcgtcag caccgacgac caggacttga 300
ccaaccaacg ggccgaactg cacgcggccg gctgcaccaa gctgttttcc gagaagatca 360
ccggcaccag gcgcgaccgc ccggagctgg ccaggatgct tgaccaccta cgccctggcg 420
acgttgtgac agtgaccagg ctagaccgcc tggcccgcag cacccgcgac ctactggaca 480
ttgccgagcg catccaggag gccggcgcgg gcctgcgtag cctggcagag ccgtgggccg 540
acaccaccac gccggccggc cgcatggtgt tgaccgtgtt cgccggcatt gccgagttcg 600
agcgttccct aatcatcgac cgcacccgga gcgggcgcga ggccgccaag gcccgaggcg 660
tgaagtttgg cccccgccct accctcaccc cggcacagat cgcgcacgcc cgcgagctga 720
tcgaccagga aggccgcacc gtgaaagagg cggctgcact gcttggcgtg catcgctcga 780
ccctgtaccg cgcacttgag cgcagcgagg aagtgacgcc caccgaggcc aggcggcgcg 840
gtgccttccg tgaggacgca ttgaccgagg ccgacgccct ggcggccgcc gagaatgaac 900
gccaagagga acaagcatga aaccgcacca ggacggccag gacgaaccgt ttttcattac 960
cgaagagatc gaggcggaga tgatcgcggc cgggtacgtg ttcgagccgc ccgcgcacgt 1020
ctcaaccgtg cggctgcatg aaatcctggc cggtttgtct gatgccaagc tggcggcctg 1080
gccggccagc ttggccgctg aagaaaccga gcgccgccgt ctaaaaaggt gatgtgtatt 1140
tgagtaaaac agcttgcgtc atgcggtcgc tgcgtatatg atgcgatgag taaataaaca 1200
aatacgcaag gggaacgcat gaaggttatc gctgtactta accagaaagg cgggtcaggc 1260
aagacgacca tcgcaaccca tctagcccgc gccctgcaac tcgccggggc cgatgttctg 1320
ttagtcgatt ccgatcccca gggcagtgcc cgcgattggg cggccgtgcg ggaagatcaa 1380
ccgctaaccg ttgtcggcat cgaccgcccg acgattgacc gcgacgtgaa ggccatcggc 1440
cggcgcgact tcgtagtgat cgacggagcg ccccaggcgg cggacttggc tgtgtccgcg 1500
atcaaggcag ccgacttcgt gctgattccg gtgcagccaa gcccttacga catatgggcc 1560
accgccgacc tggtggagct ggttaagcag cgcattgagg tcacggatgg aaggctacaa 1620
gcggcctttg tcgtgtcgcg ggcgatcaaa ggcacgcgca tcggcggtga ggttgccgag 1680
gcgctggccg ggtacgagct gcccattctt gagtcccgta tcacgcagcg cgtgagctac 1740
ccaggcactg ccgccgccgg cacaaccgtt cttgaatcag aacccgaggg cgacgctgcc 1800
cgcgaggtcc aggcgctggc cgctgaaatt aaatcaaaac tcatttgagt taatgaggta 1860
aagagaaaat gagcaaaagc acaaacacgc taagtgccgg ccgtccgagc gcacgcagca 1920
gcaaggctgc aacgttggcc agcctggcag acacgccagc catgaagcgg gtcaactttc 1980
agttgccggc ggaggatcac accaagctga agatgtacgc ggtacgccaa ggcaagacca 2040
ttaccgagct gctatctgaa tacatcgcgc agctaccaga gtaaatgagc aaatgaataa 2100
atgagtagat gaattttagc ggctaaagga ggcggcatgg aaaatcaaga acaaccaggc 2160
accgacgccg tggaatgccc catgtgtgga ggaacgggcg gttggccagg cgtaagcggc 2220
tgggttgtct gccggccctg caatggcact ggaaccccca agcccgagga atcggcgtga 2280
cggtcgcaaa ccatccggcc cggtacaaat cggcgcggcg ctgggtgatg acctggtgga 2340
gaagttgaag gccgcgcagg ccgcccagcg gcaacgcatc gaggcagaag cacgccccgg 2400
tgaatcgtgg caagcggccg ctgatcgaat ccgcaaagaa tcccggcaac cgccggcagc 2460
cggtgcgccg tcgattagga agccgcccaa gggcgacgag caaccagatt ttttcgttcc 2520
gatgctctat gacgtgggca cccgcgatag tcgcagcatc atggacgtgg ccgttttccg 2580
tctgtcgaag cgtgaccgac gagctggcga ggtgatccgc tacgagcttc cagacgggca 2640
cgtagaggtt tccgcagggc cggccggcat ggccagtgtg tgggattacg acctggtact 2700
gatggcggtt tcccatctaa ccgaatccat gaaccgatac cgggaaggga agggagacaa 2760
gcccggccgc gtgttccgtc cacacgttgc ggacgtactc aagttctgcc ggcgagccga 2820
tggcggaaag cagaaagacg acctggtaga aacctgcatt cggttaaaca ccacgcacgt 2880
tgccatgcag cgtacgaaga aggccaagaa cggccgcctg gtgacggtat ccgagggtga 2940
agccttgatt agccgctaca agatcgtaaa gagcgaaacc gggcggccgg agtacatcga 3000
gatcgagcta gctgattgga tgtaccgcga gatcacagaa ggcaagaacc cggacgtgct 3060
gacggttcac cccgattact ttttgatcga tcccggcatc ggccgttttc tctaccgcct 3120
ggcacgccgc gccgcaggca aggcagaagc cagatggttg ttcaagacga tctacgaacg 3180
cagtggcagc gccggagagt tcaagaagtt ctgtttcacc gtgcgcaagc tgatcgggtc 3240
aaatgacctg ccggagtacg atttgaagga ggaggcgggg caggctggcc cgatcctagt 3300
catgcgctac cgcaacctga tcgagggcga agcatccgcc ggttcctaat gtacggagca 3360
gatgctaggg caaattgccc tagcagggga aaaaggtcga aaaggtctct ttcctgtgga 3420
tagcacgtac attgggaacc caaagccgta cattgggaac cggaacccgt acattgggaa 3480
cccaaagccg tacattggga accggtcaca catgtaagtg actgatataa aagagaaaaa 3540
aggcgatttt tccgcctaaa actctttaaa acttattaaa actcttaaaa cccgcctggc 3600
ctgtgcataa ctgtctggcc agcgcacagc cgaagagctg caaaaagcgc ctacccttcg 3660
gtcgctgcgc tccctacgcc ccgccgcttc gcgtcggcct atcgcggccg ctggccgctc 3720
aaaaatggct ggcctacggc caggcaatct accagggcgc ggacaagccg cgccgtcgcc 3780
actcgaccgc cggcgcccac atcaaggcac cctgcctcgc gcgtttcggt gatgacggtg 3840
aaaacctctg acacatgcag ctcccggaga cggtcacagc ttgtctgtaa gcggatgccg 3900
ggagcagaca agcccgtcag ggcgcgtcag cgggtgttgg cgggtgtcgg ggcgcagcca 3960
tgacccagtc acgtagcgat agcggagtgt atactggctt aactatgcgg catcagagca 4020
gattgtactg agagtgcacc atatgcggtg tgaaataccg cacagatgcg taaggagaaa 4080
ataccgcatc aggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg 4140
gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg 4200
ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa 4260
ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg 4320
acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc 4380
tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc 4440
ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc 4500
ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg 4560
ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc 4620
actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga 4680
gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc 4740
tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac 4800
caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg 4860
atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc 4920
acgttaaggg attttggtca tgcattctag gtactaaaac aattcatcca gtaaaatata 4980
atattttatt ttctcccaat caggcttgat ccccagtaag tcaaaaaata gctcgacata 5040
ctgttcttcc ccgatatcct ccctgatcga ccggacgcag aaggcaatgt cataccactt 5100
gtccgccctg ccgcttctcc caagatcaat aaagccactt actttgccat ctttcacaaa 5160
gatgttgctg tctcccaggt cgccgtggga aaagacaagt tcctcttcgg gcttttccgt 5220
ctttaaaaaa tcatacagct cgcgcggatc tttaaatgga gtgtcttctt cccagttttc 5280
gcaatccaca tcggccagat cgttattcag taagtaatcc aattcggcta agcggctgtc 5340
taagctattc gtatagggac aatccgatat gtcgatggag tgaaagagcc tgatgcactc 5400
cgcatacagc tcgataatct tttcagggct ttgttcatct tcatactctt ccgagcaaag 5460
gacgccatcg gcctcactca tgagcagatt gctccagcca tcatgccgtt caaagtgcag 5520
gacctttgga acaggcagct ttccttccag ccatagcatc atgtcctttt cccgttccac 5580
atcataggtg gtccctttat accggctgtc cgtcattttt aaatataggt tttcattttc 5640
tcccaccagc ttatatacct tagcaggaga cattccttcc gtatctttta cgcagcggta 5700
tttttcgatc agttttttca attccggtga tattctcatt ttagccattt attatttcct 5760
tcctcttttc tacagtattt aaagataccc caagaagcta attataacaa gacgaactcc 5820
aattcactgt tccttgcatt ctaaaacctt aaataccaga aaacagcttt ttcaaagttg 5880
ttttcaaagt tggcgtataa catagtatcg acggagccga ttttgaaacc gcggtgatca 5940
caggcagcaa cgctctgtca tcgttacaat caacatgcta ccctccgcga gatcatccgt 6000
gtttcaaacc cggcagctta gttgccgttc ttccgaatag catcggtaac atgagcaaag 6060
tctgccgcct tacaacggct ctcccgctga cgccgtcccg gactgatggg ctgcctgtat 6120
cgagtggtga ttttgtgccg agctgccggt cggggagctg ttggctggct ggtggcagga 6180
tatattgtgg tgtaaacaaa ttgacgctta gacaacttaa taacacattg cggacgtttt 6240
taatgtactg aattaacgcc gaattaattc gggggatctg gattttagta ctggattttg 6300
gttttaggaa ttagaaattt tattgataga agtattttac aaatacaaat acatactaag 6360
ggtttcttat atgctcaaca catgagcgaa accctatagg aaccctaatt cccttatctg 6420
ggaactactc acacattatt atggagaaac tcgagtcaaa tctcggtgac gggcaggacc 6480
ggacggggcg gtaccggcag gctgaagtcc agctgccaga aacccacgtc atgccagttc 6540
ccgtgcttga agccggccgc ccgcagcatg ccgcgggggg catatccgag cgcctcgtgc 6600
atgcgcacgc tcgggtcgtt gggcagcccg atgacagcga ccacgctctt gaagccctgt 6660
gcctccaggg acttcagcag gtgggtgtag agcgtggagc ccagtcccgt ccgctggtgg 6720
cggggggaga cgtacacggt cgactcggcc gtccagtcgt aggcgttgcg tgccttccag 6780
gggcccgcgt aggcgatgcc ggcgacctcg ccgtccacct cggcgacgag ccagggatag 6840
cgctcccgca gacggacgag gtcgtccgtc cactcctgcg gttcctgcgg ctcggtacgg 6900
aagttgaccg tgcttgtctc gatgtagtgg ttgacgatgg tgcagaccgc cggcatgtcc 6960
gcctcggtgg cacggcggat gtcggccggg cgtcgttctg ggctcatggt agactcgaga 7020
gagatagatt tgtagagaga gactggtgat ttcagcgtgt cctctccaaa tgaaatgaac 7080
ttccttatat agaggaaggt cttgcgaagg atagtgggat tgtgcgtcat cccttacgtc 7140
agtggagata tcacatcaat ccacttgctt tgaagacgtg gttggaacgt cttctttttc 7200
cacgatgctc ctcgtgggtg ggggtccatc tttgggacca ctgtcggcag aggcatcttg 7260
aacgatagcc tttcctttat cgcaatgatg gcatttgtag gtgccacctt ccttttctac 7320
tgtccttttg atgaagtgac agatagctgg gcaatggaat ccgaggaggt ttcccgatat 7380
taccctttgt tgaaaagtct caatagccct ttggtcttct gagactgtat ctttgatatt 7440
cttggagtag acgagagtgt cgtgctccac catgttatca catcaatcca cttgctttga 7500
agacgtggtt ggaacgtctt ctttttccac gatgctcctc gtgggtgggg gtccatcttt 7560
gggaccactg tcggcagagg catcttgaac gatagccttt cctttatcgc aatgatggca 7620
tttgtaggtg ccaccttcct tttctactgt ccttttgatg aagtgacaga tagctgggca 7680
atggaatccg aggaggtttc ccgatattac cctttgttga aaagtctcaa tagccctttg 7740
gtcttctgag actgtatctt tgatattctt ggagtagacg agagtgtcgt gctccaccat 7800
gttggcaagc tgctctagcc aatacgcaaa ccgcctctcc ccgcgcgttg gccgattcat 7860
taatgcagct ggcacgacag gtttcccgac tggaaagcgg gcagtgagcg caacgcaatt 7920
aatgtgagtt agctcactca ttaggcaccc caggctttac actttatgct tccggctcgt 7980
atgttgtgtg gaattgtgag cggataacaa tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat 8040
tacgaattcc cgatctagta acatagatga caccgcgcgc gataatttat cctagtttgc 8100
gcgctatatt ttgttttcta tcgcgtatta aatgtataat tgcgggactc taatcataaa 8160
aacccatctc ataaataacg tcatgcatta catgttaatt attacatgct taacgtaatt 8220
caacagaaat tatatgataa tcatcgcaag accggcaaca ggattcaatc ttaagaaact 8280
ttattgccaa atgtttgaac gatcggggaa attcgagctc gctgttacta gtatggctgg 8340
tgatggcatg gaggtatctg ccagcggggg tggcggcggc aacaagcagc cgcagatcag 8400
ccttttgggg ctgttcctcg catgcatggt cgccggcggc gtgcagtacg gatgggcgct 8460
gcagctctcc cttctcaccc cctacgtcca gacactgggg attcctcatg cccttacatc 8520
agtcatgtgg ctctgtggac ctactgctgg cttacttgta caaccctgcg tcggcctcta 8580
tagtgacaaa tgcacttcta agcttgggag acggaggcca ttcatcttta caggatgcat 8640
catcatctgt atatctgtga tagtcatcgg tttctcctca gacatcggtt acgctctcgg 8700
tgacacgacg gaagactgca atgtttacac ggggaagcgg ctgcacgcgg ccttgttctt 8760
cgtgatggga ttctggctgc tggacttttc caacaacacg gtgcagggcc ccgcacgcgc 8820
gctgatggcg gacctcgcag gcagccacgg acccagcacg gcgaacgcca tcttcgtgtc 8880
gtggatggcg atcgggaaca tcctgggcta ctcgtcgggg tccaccgaca agtggcacac 8940
ctggttcccg ttcctgcaga cgagggcatg ctgcgaggcg tgcgccaacc tcaaggccgc 9000
cttcctggtg tcggtggtgt tcctgggcct gtccacggtg gtgaccatga tcttcgcccg 9060
cgaggtgccg ctggacccgg cggcggcggc gaagcaggac gaggccgggg agtcgtcggg 9120
cccgttcgcc gttttcaagg gcatgaagaa catgcccccc ggcatgccgc aggtgctcat 9180
cgtcacgggc ctcacctggc tctcctggtt ccccttcatc ctcttcgaca ccgactggat 9240
gggccgcgag atgtaccacg gcaggcccga cggcagcccc gaggaggtgg ccaggttcca 9300
ggagggcgtc cggcagggcg ccttcggcct gctcctcaac tccgtcgtcc tcggagccag 9360
ctccttcctc atcgagccca tgtgccgcaa gctcaccgcc aaggtcgtgt gggtcatgag 9420
cagcttcctc gtctgcgtcg ccatggcctt ggtcaccgtc ctcagctcct ggtcgctcgg 9480
cgacatcggg ggcaacgtgc aggacgccgc cgccgtggat aagggcctca agaccaccgc 9540
gctcgccatc ttcgtcttcc tcggcttccc attcgcggtc ctatgcagcg ttccgttcgc 9600
cgtgacggca cagctggcgg cggccaaggg cggcgggcag gggctgtgca cgggggtcct 9660
caacatctcc atcgtggtgc cacagatggt catcgccatt ggctctgggc cgtgggacga 9720
gctgttcggc aagggcaaca tcccggcgtt cggccttgcc gccgtcttcg ccttcaccgc 9780
tgccgtcgca gggatcatca tgctgccaaa gcagcccaag accagcttcc ggtccgtctc 9840
catgggagga gggcactgag gatccctcac cggggtaggg cttctttggc tttgccttct 9900
ttctaggcag tctggagatg aagtgcttca gaagttcgca tgctcggagc ttgtgacgga 9960
ccaggaagcc atggttctgg catgatgagt ccatcagctt ctgaaatggt caccatcgtt 10020
tttcgccgat ggacgagatc cgccgtggtg acttcttcct catcgcgtcg gggacaatga 10080
ttcctccgat gcttgtcgag gtgttcccaa cgctcctttt ctcgccgctt ggctcgctgg 10140
tgccgcgcga gctcttttct ttgcgtaaaa tagcgccccg tcgcatcctc cccgtcaaca 10200
aacttggtca ctatgtcgac gagattagag gtggtctttg gcttccctca tctaagctcg 10260
aggacgagcg cctcgttggt ggtgtcgtaa gtggaagaca catactacat cggcgtcagt 10320
ggcatcgagg agttcgtttc ttttctggga aaacctctag atgtaatctc gaagactcac 10380
cccgctcttc taggtgtgcc tctggaggtc ccaggagctc gcagggcgct tgtaggtgcc 10440
ctagaagttt ctgatgaagg ccttcctgag gtctactagc catggatggt gtcggttggt 10500
agatgctcga gctaatccct cgccccttct gcaaggtgga tggggaagaa ctagatgatg 10560
acatcgtcgt ccttgattcc cgccatgtgg caagcaaggc agtaatcctc caaccacaca 10620
ccagggtttg aagacccgtc gtatatggaa atgattgttg tcgctcttac ctttgcaagg 10680
aactgcacct tgcggataaa gcgtccaaag gtgcatggcc ccgacccagg gggactaggg 10740
ctacgctcat gcctcctttc gtgtggttgg ttgacctctt cttgctcccg acgccggtta 10800
tcgatgatgt gctaggcgcc gcggaagctt ggcactggcc gtcgttttac aacgtcgtga 10860
ctgggaaaac cctggcgtta cccaacttaa tcgccttgca gcacatcccc ctttcgccag 10920
ctggcgtaat agcgaagagg cccgcaccga tcgcccttcc caacagttgc gcagcctgaa 10980
tggcgaatgc tagagcagct tgagcttgga tcagattgtc gtttcccgcc ttcagtttaa 11040
actatcagtg tttgacagga tatattggcg ggtaaaccta agagaaaaga gcgtttatta 11100
gaataacgga tatttaaaag ggcgtgaaaa ggtttatccg ttcgtccatt tgtatgtg 11158