阅读说明：本技术 一种源于沉香树叶片的生物发酵洗涤液的制备方法 (Preparation method of biological fermentation washing liquid derived from aquilaria sinensis leaves ) 是由 史学文 于 2019-11-20 设计创作，主要内容包括：本发明涉及微生物发酵技术,具体是指一种源于沉香树叶片的生物发酵洗涤液的制备方法,包括以下步骤：(1)筛选纤维素酶、蛋白酶高产菌株；(2)混合发酵；(3)粗滤,将发酵液过滤离心,得到澄清黄色浓稠液体；(4)精滤,向粗滤液中加入4％～5％的粉状活性炭,加热到50℃,充分搅拌2h后过滤,得到澄清液体；(5)制作洗涤剂。本发明充分地利用了农业废料,提高能量利用率,利用了沉香树叶片以及甘蔗渣的资源,变废为宝,生产出了十分良好的洗涤剂,实现了资源利用与避免环境污染的双丰收,除此之外,生物发酵洗涤液具有原料便宜、工艺环保以及排放少等优点,非常适合商业应用。(The invention relates to a microbial fermentation technology, in particular to a preparation method of biological fermentation washing liquid derived from aquilaria sinensis leaves, which comprises the following steps: (1) screening high-yield strains of cellulase and protease; (2) mixing and fermenting; (3) coarse filtering, filtering the fermentation liquor, and centrifuging to obtain clear yellow thick liquid; (4) fine filtering, adding 4-5% of powdered activated carbon into the coarse filtering liquid, heating to 50 ℃, fully stirring for 2h, and filtering to obtain clear liquid; (5) and (5) preparing a detergent. The invention fully utilizes agricultural waste, improves the energy utilization rate, utilizes the resources of the aquilaria sinensis leaves and bagasse, changes waste into valuable, produces a very good detergent, realizes the double harvest of resource utilization and environmental pollution avoidance, and in addition, the biological fermentation washing liquid has the advantages of cheap raw materials, environment-friendly process, less discharge and the like, and is very suitable for commercial application.)

一种源于沉香树叶片的生物发酵洗涤液的制备方法

技术领域

本发明涉及微生物发酵技术领域，具体是指一种源于沉香树叶片的生物发酵洗涤液的制备方法。

背景技术

酵素是指具有生物催化功能的高分子物质，酵素的本质是酶，在酶的催化反应体系中，反应物分子被称为底物，底物通过酶的催化转化为另一种分子。几乎所有的细胞活动进程都需要酶的参与，以提高效率。与其他非生物催化剂相似，酶通过降低化学反应的活化能来加快反应速率，大多数的酶可以将其催化的反应之速率提高上百万倍；同样，酶作为催化剂，本身在反应过程中不被消耗，也不影响反应的化学平衡。例如，蛋白酶可以作为生物活性催化剂催化蛋白质的分解。脂肪酶可以作为生物活性催化剂催化脂肪酶的分解。

酵素洗涤剂中具有以下优点：(1)加酵素后可以通过分解蛋白质和脂肪来帮助除去衣物上的污渍和油渍。(2)发酵原料中通常富含植物护理精华，清除污渍的同时也能保护织物纤维不受损伤，对皮肤无任何伤害。(3)富含特效污垢分离因子及生物活性酶，彻底分解衣物纤维内部及家居表面的顽固污渍。(4)富含植物精华油脂成分，不伤织物，有效防止衣物面料发生化学反应褪色，而且织物洗涤后更加柔软。(5)酵素洗剂适用范围更广，可以清洗各类可机洗衣物，可表面水洗物，油烟机、煤气灶，木质、瓷砖或大理石地板，汽车车体，水槽、马桶、空调等。(6)酵素洗剂稀释溶解后浸泡二十分种左右，能有效杀死大肠杆菌、葡萄球菌及一些有害病菌，并能够有效抑制细菌芽孢繁殖和生成。(7)酵素洗剂泡沫少，易漂清，节水环保，方便清洗不易拆洗的物品，如沙发、窗帘等。(8)酵素洗剂温和无刺激，适合清洗儿童衣物、内衣等。

而现在市面上的洗涤剂一般都含有一定浓度的磷元素，磷是一种高效助洗剂，在洗衣粉中加入15％的聚磷酸盐，能有效分解衣物中的污垢，清洁衣物。但以磷酸盐作为主要助剂，洗涤后的污水排放到河流湖泊中后，水中磷含量升高，水质趋向富营养化，导致各种藻类、水草大量滋生，水质混浊，水体缺氧，使鱼虾等水生物死亡。除此之外，医学研究表明，长期使用高含磷洗衣粉，洗衣粉当中的磷会直接影响人体对钙的吸收，导致人体缺钙或诱发小儿软骨病；用高含磷洗衣粉洗衣服，皮肤常会有一种烧灼的感觉，就是因为高磷洗衣粉改变了水中的酸碱环境，使其变得更富碱性。如果不能将所洗衣物残留磷冲净(实际上这很难做到，因为至少须用流水冲洗衣物5分钟才能减少磷的含量)，日积月累，衣服当中的残留磷就会对皮肤有刺激影响，尤其是婴儿娇嫩的皮肤。另外，碱性强的含磷洗衣粉也容易损伤织物，尤其是纯棉类，长期使用这些以强碱性达到去污目的的洗衣粉，衣物也会被烧伤。

旧式酵素洗涤剂的制作过程虽然原料利用新鲜植物厨余垃圾做到变废为宝，但仍要放糖作为原料之一，增加了制作成本。除此之外，旧式酵素洗涤剂的制作没有对发酵后的粘稠液体进行吸附脱色，发酵洗涤剂带有颜色。另外，旧式酵素洗涤剂的制作运用天然菌进行发酵，菌种蛋白酶不够优质，影响洗涤效果。

发明内容

为解决上述背景技术中提出的问题，本发明的目的在于提供一种源于沉香树叶片的生物发酵洗涤液的制备方法，充分地利用了农业废料，提高能量利用率，利用了沉香树叶片以及甘蔗渣的资源，变废为宝，生产出了十分良好的洗涤剂，实现了资源利用与避免环境污染的双丰收，除此之外，生物发酵洗涤液具有原料便宜、工艺环保以及排放少等优点，非常适合商业应用。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种源于沉香树叶片的生物发酵洗涤液的制备方法，包括以下步骤：(1)筛选纤维素酶、蛋白酶高产菌株；(2)混合发酵；(3)粗滤，将发酵液过滤离心，得到澄清黄色浓稠液体；(4)精滤，向粗滤液中加入4％～5％的粉状活性炭，加热到50℃，充分搅拌2h后过滤，得到澄清液体；(5)制作洗涤剂。

进一步的，步骤(1)具体包括以下步骤：A、土壤采集，在灌木丛下，有腐烂树叶的土壤里采集土样，放置于装有5mL灭菌水的试管中，震荡混匀；

B、涂布平板与培养，取试管中的液体1mL，以等梯度依次稀释到10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7，取10-4、10-5、10-6、10-7稀释倍数的土样液体0.2mL分别加入酪蛋白平板和CMC-Na平板上涂布，然后放入37℃培养箱培养48小时后观察；

C、挑取菌株，培养后酪蛋白平板表面菌落周围会出现明显的透明圈，CMC-Na平板用0.2％刚果红染色30min，然后依次用蒸馏水和1mol/L的NaCl彻底洗去染液，菌落周围可见透明圈，在两种平板上分别挑选透明圈直径与菌落直径比较大的5个菌落进行连续划线培养至纯，纯化后的菌株作为接种于营养琼脂培养基中保存备用。

进一步的，步骤(2)具体为按重量比例，将甘蔗渣2～3份，沉香叶片2～3，水7～10份，装入容器中混合，向容器中加入浆液体积0.1％～0.2％的OD600＝0.6～0.8的纤维素酶、蛋白酶高产菌株培养液以及巨大芽孢杆菌培养液，然后密封。在室温下发酵2个月。

进一步的，步骤(5)具体为按重量比例，酵素滤液3-5份，植物表面活性剂18-22份，酸性助剂1-4份；片碱0.1-0.5份；螯合剂0.3-0.5份；防腐剂0.1-0.5份；增稠剂1-1.5份；抗再沉积剂0.5-1份；去离子水67-74份混合，制成洗涤剂。

本发明的有益效果是：充分地利用了废料，提高能量利用率，此工艺充分利用了沉香树叶片以及甘蔗渣的资源，变废为宝，生产出了十分良好的洗涤剂，实现了资源利用与避免环境污染的双丰收，生物发酵洗涤液富含植物护理精华，配方温和，对织物纤维、皮肤无任何伤害，生物发酵洗涤液去污力很强，富含特效污垢分离因子及生物活性酶，彻底分解衣物纤维内部及家居表面的顽固污渍，生物发酵洗涤液起泡能力较强。易于漂洗，洗涤更省心，其中富含的钾离子对起泡具有促进作用，生物发酵洗涤液具有较强的杀菌功能。生物发酵洗涤液有效杀死大肠杆菌、葡萄球菌及一些有害病菌，并能够有效抑制细菌芽孢繁殖和生成，生物发酵洗涤液具有原料便宜、工艺环保以及排放少等优点，非常适合商业应用。

具体实施方式

下面用具体实施例说明本发明，并不是对本发明的限制。

实施例一

在灌木丛下，有腐烂树叶的土壤里采集土样，放置于装有5mL灭菌水的试管中，震荡混匀；取试管中的液体1mL，以等梯度依次稀释到10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，取10-4，10-5，10-6，10-7稀释倍数的土样液体0.2mL分别加入酪蛋白平板和CMC-Na平板上涂布，然后放入37℃培养箱培养48小时后观察；培养后酪蛋白平板表面菌落周围会出现明显的透明圈，CMC-Na平板用0.2％刚果红染色30min，然后依次用蒸馏水和1mol/L的NaCl彻底洗去染液，菌落周围可见透明圈。在两种平板上分别挑选透明圈直径与菌落直径比较大的5个菌落进行连续划线培养至纯。纯化后的菌株作为接种于营养琼脂培养基中保存备用；按重量比例，将甘蔗渣2份，沉香叶片2份，水7份，装入容器中混合，向容器中加入浆液体积0.1％～0.2％的OD600＝0.6～0.8的纤维素酶、蛋白酶高产菌株培养液以及巨大芽孢杆菌培养液，然后密封；在室温下发酵2个月；将发酵液过滤离心，得到澄清黄色浓稠液体；向粗滤液中加入4％的粉状活性炭，加热到50℃，充分搅拌2h后过滤，得到澄清液体；按重量比例，酵素滤液3份，植物表面活性剂18份，酸性助剂1份；片碱0.1份；螯合剂0.3份；防腐剂0.1份；增稠剂1份；抗再沉积剂0.5份；去离子水67份混合，制成洗涤剂。

实施例二

在灌木丛下，有腐烂树叶的土壤里采集土样，放置于装有5mL灭菌水的试管中，震荡混匀；取试管中的液体1mL，以等梯度依次稀释到10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，取10-4，10-5，10-6，10-7稀释倍数的土样液体0.2mL分别加入酪蛋白平板和CMC-Na平板上涂布，然后放入37℃培养箱培养48小时后观察；培养后酪蛋白平板表面菌落周围会出现明显的透明圈，CMC-Na平板用0.2％刚果红染色30min，然后依次用蒸馏水和1mol/L的NaCl彻底洗去染液，菌落周围可见透明圈。在两种平板上分别挑选透明圈直径与菌落直径比较大的5个菌落进行连续划线培养至纯。纯化后的菌株作为接种于营养琼脂培养基中保存备用；按重量比例，将甘蔗渣1.5份，沉香叶片1.5份，水8份，装入容器中混合，向容器中加入浆液体积0.1％～0.2％的OD600＝0.6～0.8的纤维素酶、蛋白酶高产菌株培养液以及巨大芽孢杆菌培养液，然后密封。在室温下发酵2个月；将发酵液过滤离心，得到澄清黄色浓稠液体；向粗滤液中加入3％的粉状活性炭，加热到50℃，充分搅拌2h后过滤，得到澄清液体；按重量比例，酵素滤液4份，植物表面活性剂20份，酸性助剂3份；片碱0.3份；螯合剂0.4份；防腐剂0.3份；增稠剂1.3份；抗再沉积剂0.8份；去离子水70份混合，制成洗涤剂。

实施例三

在灌木丛下，有腐烂树叶的土壤里采集土样，放置于装有5mL灭菌水的试管中，震荡混匀；取试管中的液体1mL，以等梯度依次稀释到10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，取10-4，10-5，10-6，10-7稀释倍数的土样液体0.2mL分别加入酪蛋白平板和CMC-Na平板上涂布，然后放入37℃培养箱培养48小时后观察；培养后酪蛋白平板表面菌落周围会出现明显的透明圈，CMC-Na平板用0.2％刚果红染色30min，然后依次用蒸馏水和1mol/L的NaCl彻底洗去染液，菌落周围可见透明圈。在两种平板上分别挑选透明圈直径与菌落直径比较大的5个菌落进行连续划线培养至纯。纯化后的菌株作为接种于营养琼脂培养基中保存备用；按重量比例，将甘蔗渣3份，沉香叶片3份，水10份，装入容器中混合，向容器中加入浆液体积0.1％～0.2％的OD600＝0.6～0.8的纤维素酶、蛋白酶高产菌株培养液以及巨大芽孢杆菌培养液，然后密封；在室温下发酵2个月；将发酵液过滤离心，得到澄清黄色浓稠液体；向粗滤液中加入5％的粉状活性炭，加热到50℃，充分搅拌2h后过滤，得到澄清液体；按重量比例，酵素滤液5份，植物表面活性剂22份，酸性助剂4份；片碱0.5份；螯合剂0.5份；防腐剂0.5份；增稠剂1.5份；抗再沉积剂1份；去离子水74份混合，制成洗涤剂。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。