具体实施方式

应理解本发明不限于具体的方法、试剂、化合物、组合物或生物系统，当然可以对以上进行变化。还应理解本申请所用术语仅为了描述具体的实施方式，并不旨在进行限制。除非该内容被另外明确说明，否则本说明书以及所附权利要求中所用的单数形式"一个"、"一种"和"该"包括复数指代。因此，例如，提及"一种多肽"包括了两种或更多种多肽等的组合。

本申请所用的"约"在指代可测量数值(如量、持续时间等)时意在涵盖相对于具体数值±20％或±10％的变化，包括±5％、±1％和±0.1％，因为这些变化适于进行所公开的方法。

除非另外定义，本申请所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。尽管与本申请公开相似或相同的任何方法和材料都可用于测试本发明的实践中，但本申请描述了优选的材料和方法。在描述并要求本发明的权利时，将使用以下术语。

“治疗活性抗体”或“治疗性抗体”是指可用于治疗目的，即用于治疗受试者中的障碍的抗体。应该指出，尽管治疗性蛋白质可用于治疗目的，但本发明不限于这样的用途，因为所述蛋白质也可以用于体外研究。

术语"药物制剂"或“制剂”是一种制品，其采用的形式使得活性成分的生物活性有效，并且不含对该制剂所施用的受试者具有不可接受的毒性的其它成分。该制剂为无菌的。

术语“液体制剂”是指处于液体状态下的制剂，且不意图指称重悬浮的冻干制剂。本发明的液体制剂在储存时稳定，并且其稳定性不依赖于冻干(或其他状态改变方法，例如喷雾干燥)。

术语“水性液体制剂”是指使用水作为溶剂的液体制剂。在一种实施方式中，水性液体制剂是不需冻干、喷雾干燥和/或冷冻来维持稳定性(例如化学和/或物理稳定性和/或生物活性)的制剂。

术语“赋形剂”是指可以向制剂添加以提供所需特性(例如稠度、提高的稳定性)和/或调节渗透压的试剂。常用赋形剂的实例包括但不限于糖类、多元醇、氨基酸、表面活性剂和聚合物。

本文中，术语"提供约5.5至约6.5的pH的缓冲剂"是指这样的试剂，通过其酸/碱共轭组分的作用使得包含该试剂的溶液能抵抗pH变化。本发明的制剂中使用的缓冲液可具有约5.5至约6.5范围内的pH、或约5.5至约6.0范围内的pH。在一个实施方式中，pH为约6.0。

在本文中，将pH控制在该范围内的“缓冲剂”实例包括乙酸盐(例如乙酸钠)、琥珀酸盐(例如琥珀酸钠)、葡萄糖酸、组氨酸和/或其盐、甲硫氨酸、柠檬酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐/磷酸盐、咪唑、其组合和其他有机酸缓冲剂。在一种实施方式中，缓冲剂不是蛋白质。在一个实施方式中，该缓冲剂为组氨酸和/或其盐，优选为L-组氨酸和/或其盐。通常，制剂中缓冲剂的浓度可在5-100mM的范围内，或者为约5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM、55mM、60mM、65mM、70mM、75mM、80mM、85mM、90mM、95mM或100mM或以上述任意两个数值为端点构成的范围内，如10-30mM或15-25mM。在一个实施方式中，缓冲剂浓度为约20mM。

"组氨酸缓冲剂"为包含组氨酸和/或其盐的缓冲剂。组氨酸的盐包括组氨酸盐酸盐、组氨酸乙酸盐、组氨酸磷酸盐和组氨酸硫酸盐中的一种或多种。在本发明的一个实施方式中，组氨酸缓冲剂为：由1-10mM的L-组氨酸和10-20mM的L-组氨酸单盐酸盐制成的组氨酸缓冲剂。在一个实施方式中，组氨酸制剂为：由4.5mM的L-组氨酸和15.5mM的L-组氨酸单盐酸盐制成的pH为6.0的组氨酸缓冲剂。在一个实施方式中，组氨酸制剂为：由9.5mM的L-组氨酸和10.5mM的L-组氨酸单盐酸盐制成的pH为5.5的组氨酸缓冲剂。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液由摩尔比为1:1到1:4的组氨酸和组氨酸盐酸盐组成。

本文中，如无特别说明，术语"聚山梨醇酯20的浓度"和"聚山梨醇酯80的浓度"均是指质量体积浓度(w/v)，如"约0.02％聚山梨醇酯20"中"0.02％"即指"100mL液体中含有0.02g的溶质"。

当在本文中使用时，术语“表面活性剂”一般包括保护蛋白质例如抗体免受空气/溶液界面诱导的应力、溶液/表面诱导的应力的影响以减少抗体的聚集或使制剂中颗粒物的形成最小化的试剂。示例性的表面活性剂包括但不限于非离子型表面活性剂例如聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯(如聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80)、聚乙烯-聚丙烯共聚物、聚乙烯-聚丙烯二醇、聚氧乙烯-硬脂酸酯、聚氧乙烯烷基醚、例如聚氧乙烯单月桂基醚、烷基苯基聚氧乙烯醚(Triton-X)、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(泊洛沙姆，Pluronic)、十二烷基硫酸钠(SDS)。在一个实施方式中，该非离子型表面活性剂为聚山梨醇酯20。在一个实施方式中，聚山梨醇酯20的浓度为约0至0.1％(w/v)。在一个实施方式中，聚山梨醇酯20的浓度为约0.01％至0.05％(w/v)。在一个实施方式中，聚山梨醇酯20的浓度为约0.02％(w/v)。在一个实施方式中，该非离子型表面活性剂为聚山梨醇酯80。在一个实施方式中，聚山梨醇酯80的浓度为约0至0.1％(w/v)。在一个实施方式中，聚山梨醇酯80的浓度为约0.01％至0.05％(w/v)。在一个实施方式中，聚山梨醇酯80的浓度为约0.02％(w/v)。

当在本文中使用时，术语“稳定剂”可降低抗体及其他蛋白质聚集。示例性的稳定剂包括但不限于：人血清白蛋白(HSA)、牛血清白蛋白(BSA)、α-酪蛋白、球蛋白、α-乳白蛋白、LDH、溶菌酶、肌红蛋白、卵清蛋白和RNAaseA。稳定剂还包括氨基酸和它们的代谢产物以及它们的盐如盐酸盐，如：精氨酸、甘氨酸、丙氨酸(α-丙氨酸、β-丙氨酸)、甜菜碱、亮氨酸、赖氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、4-羟基脯氨酸、肌氨酸、γ-氨基丁酸(GABA)、奥品类(opines)(丙氨奥品、章鱼碱、甘氨奥品(strombine))和三甲胺的N-氧化物(TMAO)。稳定剂还包括糖、多元醇和它们的代谢产物等，比如NaCl、KCl、MgCl₂、CaCl₂、蔗糖、甘露醇、山梨醇等。在一个实施方式中，该稳定剂为甘露醇。在一个实施方式中，该稳定剂为蔗糖。在一个实施方式中，该稳定剂为山梨醇。在一个实施方式中，该稳定剂为氨基酸或其盐。在一个实施方式中，该氨基酸为精氨酸或盐酸精氨酸。在一个实施方式中，精氨酸或盐酸精氨酸的浓度为约20至200mM。在一个实施方式中，精氨酸或盐酸精氨酸的浓度为约50至200mM。在一个实施方式中，精氨酸或盐酸精氨酸的的浓度约60mM、130mM、160mM或165mM。

本文所用的术语“粘度”可以是“运动粘度”或“绝对粘度”。“运动粘度”是对流体在重力影响下所产生的抵抗性流动的一种测量指标。“绝对粘度”，有时称为动态粘度或简单粘度，是运动粘度与流体密度的乘积(绝对粘度＝运动粘度X密度)。运动粘度的量纲是L2/T，其中L是长度，T是时间。通常，运动粘度以厘沲(cSt)表示。运动粘度的国际单位制单位是mm2/s，即lcSt。绝对粘度以厘泊(cP)单位表示。绝对粘度的国际单位制单位是毫帕斯卡-秒(mPa-s)，其中1cP＝lmPa-s。

对于本发明的液体型制剂，本文所用的术语“低水平粘度”将表示低于约15厘泊(cP)的绝对粘度。例如，如果当使用标准粘度测量技术测量时，该制剂展示的绝对粘度为约15cP、约14cP、约13cP、约12cP、约11cP、约10cP、约9cP、约8cP，或更低，则本发明液体型制剂将被认为是具有“低粘度”。对于本发明液体型制剂，本文所用的术语“中等水平粘度”将表示介于约35cP和约15cP之间的绝对粘度。例如，如果当使用标准粘度测量技术测量时，该制剂展示的绝对粘度为约34cP、约33cP、约32cP、约31cP、约30cP、约29cP、约28cP、约27cP、约26cP、约25cP、约24cP、约23cP、约22cP、约21cP、约20cP、约19cP、18cP、约17cP、约16cP，或约15.lcP，则本发明液体型制剂将被认为是具有“中等粘度”。本发明液体型医药制剂在某些实施方式中可展示低水平至中等水平的粘度。在一个实施方式中，本发明作出了惊人的发现，通过将浓度为约100-200mM的抗体与60-165mM的精氨酸或其盐一起配制，可以获得含低粘度的液体型制剂。在一个实施方式中，还进一步发现，精氨酸或其盐可明显地降低含有其它张度剂如蔗糖、山梨醇、甘露醇等的制剂粘度。

"等渗"是指该制剂具有与人血液基本相同的渗透压。等渗制剂一般具有约250至350mOsm的渗透压。可使用蒸汽压或冰点下降式的渗透压计测量等渗性。

“稳定的”制剂是其中的抗体在制造过程期间和/或储存时基本上保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性的制剂。即使所含的抗体在经过一定时间储存之后未能保持其100％的化学结构或生物功能，医药制剂也可以是稳定的。在某些情况下，在经过一定时间储存之后，能维持约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％的抗体结构或功能，也可被认为是“稳定的”。用于测量蛋白质稳定性的各种分析技术在本技术领域中是可得的，并综述在《肽和蛋白质药物递送》(Peptide and Protein Drug Delivery)247-301，Vincent Lee主编，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，Pubs.(1991))，和Jones，A.(1993)Adv.Drug Delivery Rev.10：29-90中(二者引入作为参考)。

制剂在一定温度下经过一定时间的储存之后，通过测定其中剩余的天然抗体的百分比(及其它方法)，可以测量其稳定性。除其它方法外，天然抗体的百分比可以通过尺寸排阻色谱法(例如尺寸排阻高效液相色谱法[SE-HPLC])来测量，“天然的”指未聚集的和未降解的。在一些实施方式中，蛋白质的稳定性按照具有低百分比的降解(例如片段化)和/或聚集蛋白质的溶液中单体蛋白质的百分数来确定。在一种实施方式中，制剂可以在室温、约25-30℃或40℃下稳定储存至少2周、至少28天、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月，或更长，最多不超过约6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％，或0.1％聚集形式的抗体。

通过测定在离子交换期间在比抗体主馏分(“主要荷电形式”)较为酸性的馏分中迁移的抗体(“酸性形式”)的百分比(及其它方法)，可以测量稳定性，其中稳定性与酸性形式抗体的百分比成反比。除其它方法外，“酸化”抗体的百分比可以通过离子交换色谱法(例如阳离子交换高效液相色谱法[CEX-HPLC])来测量。在一个实施方式中，可接受程度的稳定性意为当制剂在一定温度下经过一定时间的储存之后，其中可检测出的酸性形式的抗体最多不超过约49％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％。在测量稳定性之前储存的一定时间可以是至少2周、至少28天、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月，或更长。当评估稳定性时，容许储存医药制剂的一定温度可以是约-80℃至约45℃范围内的任何温度，例如储存于约-80℃、约-30℃、约-20℃、约0℃、约2-8℃、约5℃、约25℃，或约40℃。

如果抗体在颜色和/或澄清度目测检查时或通过UV光散射或通过孔径排阻层析测量时基本上不显示出例如聚集、沉淀和/或变性的迹象，则所述抗体在该药物制剂中“保持其物理稳定性”。聚集是单个分子或复合物共价或非共价缔合以形成聚集体的过程。聚集可以进行到形成可见沉淀物的程度。

制剂的稳定性例如物理稳定性可以通过本技术领域中公知的方法来评估，包括测量样品的表观消光度(吸光度或光密度)。这样的消光测量与制剂的浊度相关。制剂的浊度部分地是溶解在溶液中的蛋白质的固有性质，并且通常通过比浊法来测量，并用比浊法浊度单位(NTU)来量度。

随着例如溶液中一种或多种组分的浓度(例如蛋白质和/或盐浓度)而变化的浊度水平也被称为制剂的“乳浊”或“乳浊外观”。浊度水平可以参照使用已知浊度的悬液产生的标准曲线来计算。用于测定药物组合物的浊度水平的参比标准品可以基于《欧洲药典》标准(《欧洲药典》(European Pharmacopoeia)，第四版，“欧洲药品质量委员会指令”(Directorate for the Quality of Medicine of the Council of Europe)(EDQM)，Strasbourg，France)。根据《欧洲药典》标准，澄清溶液被定义为浊度低于或等于按照《欧洲药典》标准具有约3的参比悬液的浊度的溶液。比浊法的浊度测量可以检测在不存在缔合或非理想效应的情况下的瑞利散射，其通常随浓度线性变化。用于评估物理稳定性的其他方法在本技术领域中是公知的。

如果抗体在给定时间点的化学稳定性使得抗体被认为仍保持如下文中所定义的其生物活性，则所述抗体在药物制剂中“保持其化学稳定性”。可以通过例如检测或定量抗体的化学改变的形式来评估化学稳定性。化学改变可以包括尺寸改变(例如剪短)，其可以使用例如孔径排阻层析、SDS-PAGE和/或基质辅助的激光解吸电离/飞行时间质谱(MALDI/TOF MS)来评估。其他类型的化学改变包括电荷改变(例如作为脱酰胺或氧化的结果而发生)，其可以通过例如离子交换层析来评估。

如果药物制剂中的抗体对于其预期目的来说是生物活性的，则所述抗体在药物制剂中“保持其生物活性”。例如，如果制剂于例如5℃、25℃、45℃等温度下储存一定时间(例如1至12个月)之后，该制剂所含抗PCSK9抗体与PCSK9结合的亲和力为所述储存之前抗体结合亲和力的至少90％、95％或以上，则可认为本发明之制剂是稳定的。结合亲和力也可用例如ELISA或等离子共振技术测定。

在本发明的情形中，在药理学意义上，抗体的“治疗有效量”或“有效量”是指在抗体可以有效治疗的障碍的症状的预防或治疗或减轻方面有效的量。

术语“受试者”或“患者”意图包括哺乳动物生物体。受试者/患者的实例包括人类和非人类哺乳动物，例如非人类灵长动物、狗、奶牛、马、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔、大鼠和转基因非人类动物。在本发明的特定实施方式中，受试者是人类。

抗PCSK9抗体

本发明所述的制剂包含一种与人PCSK9特异性结合的抗体或其抗原结合片段。本文所用的术语“PCSK9”为一种人类前蛋白转化酶，属于分泌枯草杆菌酶家族的蛋白酶K亚族。现有文献已证明通过与低密度脂蛋白颗粒受体结合和促进其降解，PCSK9可提高血浆LDL水平。

本文所用的术语“抗体”应被理解为包括完整抗体分子及其抗原结合片段。本文所用的术语抗体的“抗原结合部分”或“抗原结合片段”(或简称为“抗体部分”或“抗体片段”)是指抗体中保持了与人PCSK9或其表位特异性结合能力的一个或多个片段。

本文所用的术语“全长抗体”，指包含四条肽链的免疫球蛋白分子，两条重(H)链(全长时约50-70kDa)和两条轻(L)链(全长时约25kDa)通过二硫键互相连接。每一条重链由重链可变区(在本文中缩写为VH)和重链恒定区(在本文中缩写为CH)组成。重链恒定区由3个结构域CH1、CH2和CH3组成。每一条轻链由轻链可变区(在本文中缩写为VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可被进一步细分为具有高可变性的互补决定区(CDR)和其间隔以更保守的称为框架区(FR)的区域。每一个VH或VL区由按下列顺序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4个FR组成。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白对宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq))的结合。

当在本文中使用时，术语“CDR”是指抗体可变序列内的互补决定区。在重链和轻链的各个可变区中存在3个CDR，其对于各个重链和轻链可变区被命名为HCDR1、HCDR2和HCDR3或LCDR1、LCDR2和LCDR3。这些CDR的准确边界按照不同的系统有不同的定义。由Kabat(同上)描述的系统不仅提供了可适用于抗体的任何可变区的明确的残基编号系统，而且提供了定义3个CDR的准确残基边界。这些CDR可以被称为Kabat CDR。Chothia等发现，KabatCDR内的某些子部分采取几乎一致的肽骨架构型，尽管在氨基酸序列水平上具有大的多样性(Chothia等，(1987)Mol.Biol.196:901-917；Chothia等，(1989)Nature342:877-883)。定义与Kabat CDR交叠的CDR的其他边界已由Padlan(1995)FASEB J.9:133-139和MacCalIum(1996)J.Mol.Biol.262(5):732-45描述。再其他的CDR边界定义可能不严格遵从本文中描述的系统之一，但仍然与Kabat CDR交叠，尽管它们可能被缩短或加长，这是由于根据预测或实验发现特定残基或残基组或甚至整个CDR不显著影响抗原结合。本文中使用的方法可以利用按照任何这些系统所定义的CDR，尽管某些实施方式使用了Kabat或Chothia定义的CDR。

本文所述的“抗原结合片段”包括抗体的片段或衍生物，通常包括亲代抗体的抗原结合区或可变区(例如一个或多个CDR)的至少一个片段，其保持亲代抗体的至少一些结合特异性。抗原结合片段的实例包括但不限于Fab，Fab'，F(ab')2和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子，例如sc-Fv；由抗体片段形成的纳米抗体(nanobody)和多特异性抗体。当抗原的结合活性在摩尔浓度基础上表示时，结合片段或衍生物通常保持其抗原结合活性的至少10％。优选结合片段或衍生物保持亲代抗体的抗原结合亲和力的至少20％、50％、70％、80％、90％、95％或100％或更高。还预期抗体的抗原结合片段可包括不明显改变其生物活性的保守或非保守氨基酸取代(称为抗体的“保守变体”或“功能保守变体”)。

术语“单次”或“一次”施用本发明药物制剂，指每一轮施用，包括但不限于，一轮施用一支、两支、三支、四支或多支预充注射器，只要该轮次给予的总药物剂量达到规定的给药量即可。

本发明所述的抗PCSK9抗体或其抗原结合片段包括国际公开号为WO2017088782中描述的任意一个抗PCSK9抗体。在一些实施方式中，在本发明的方法、用途、药物制剂和递送装置中使用的抗体的6个CDR来自于WO2017088782中公开的抗体JS002的6个CDR。

在一个实施方式中，本发明所述的抗PCSK9抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH具有氨基酸序列SEQ ID NO:1，VL具有氨基酸序列SEQ IDNO:2。

在本文实施例中所用的非限制性、示范性抗体被称为“JS002”，其是与人PCSK9特异性结合的人源化完全抗体，包含重链和轻链，其中重链的氨基酸序列为SEQ ID NO:3，轻链的氨基酸序列为SEQ ID NO:4。

药物制剂

本发明所述的制剂是一种包含高浓度活性抗体且具有高稳定性、低粘度的液体性制剂。特别地，本发明发现含有精氨酸盐的制剂粘度明显低于含有张度剂的配制液。另外，在配制液中含有的精氨酸盐能明显降低含有张度剂的配制液。

本发明的制剂包含特异性结合人PCSK9的抗体或其抗原结合片段、缓冲液和稳定剂。优选地，本发明制剂的pH在5.5～6.5的范围内。

本发明的制剂中，抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段通常在100mg/mL至约200mg/mL的范围。在一些实施方案中，本发明的制剂中含有150±10mg/mL的抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段。在优选的实施方案中，本发明制剂中所含有的抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，VL具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。更优选地，所述抗体或抗原结合片段包含重链(HC)和轻链(LC)，其中HC具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，LC具有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

本发明的制剂中，缓冲液可以是乙酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液，优选为组氨酸缓冲液。优选地，缓冲液的pH在5.5-6.0的范围。优选地，本发明的组氨酸缓冲液含有组氨酸和本文所述的组氨酸的盐。通常，用于本发明的组氨酸缓冲液含有1-10mM的组氨酸和10-20mM的组氨酸盐(如单盐酸盐)。优选地，组氨酸缓冲液中，组氨酸与组氨酸的盐的摩尔比在1:1到1:4的范围内。本发明的制剂中，缓冲液的浓度可以为10-50mM，优选为15-25mM，如20mM。

本发明的制剂中，稳定剂可选自精氨酸或其盐、山梨醇、甘露醇和蔗糖中的一种或多种，优选精氨酸盐。示例性的精氨酸盐包括盐酸精氨酸。药剂学中适用作稳定剂的其它精氨酸盐也可用于本发明。通常，本发明制剂中稳定剂的浓度可在50mM至300mM的范围内，如50-200mM、130-200mM或160-250mM。当单独使用精氨酸盐时，制剂中其浓度可在50-200mM、如130-200mM的范围内。在一些实施方案中，稳定剂为精氨酸盐与甘露醇或山梨醇的混合物。当使用精氨酸盐与甘露醇或山梨醇的组合时，制剂中精氨酸盐的浓度可在50-150mM的范围内，甘露醇或山梨醇的浓度可在50-200mM的范围内，两种稳定剂的总浓度可在50mM至300mM、如50mM至250mM的范围内。

在一些实施方式中，本发明所述的制剂包含：(1)抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段；(2)组氨酸缓冲液，pH约为5.5-6.5；和(3)精氨酸盐。

在本发明的一些实施方式中，本发明所述的制剂还包含本文所述的非离子型表面活性剂。通常，含有时，制剂中非离子型表面活性剂的浓度不超过0.1％(w/v)，如0.01-0.05％(w/v)。优选的非离子型表面活性剂包括聚山梨醇酯20和/或聚山梨醇酯80，特别优选的浓度约为0.02％(w/v)。

在一个实施方式中，本发明所述的制剂包含：(1)约100mg/mL至约200mg/mL的抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段；(2)约10-50mM组氨酸缓冲液，pH约为5.5-6.5；(3)约50mM至约200mM的精氨酸盐；以及(4)约0％至约0.1％(w/v)的非离子表面活性剂。

在一个实施方式中，本发明所述的制剂包含：(1)约150±10mg/mL的抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段；(2)约20mM组氨酸缓冲液，pH约为5.5-6.5；(3)约60±5mM、130±5mM或160±5mM的精氨酸盐；以及(4)约0％至约0.1％(w/v)的非离子表面活性剂。

在一个实施方式中，本发明所述的制剂包含：(1)约150±10mg/mL的抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段；(2)约20mM组氨酸缓冲液，pH约为5.5-6.5；(3)约130±5mM的精氨酸盐；以及(4)约0.02％(w/v)的聚山梨酯20。

在一个实施方式中，本发明所述的制剂包含：(1)约150±10mg/mL的抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，VL具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；(2)约20mM组氨酸缓冲液，pH约为5.5-6.5；(3)约130±5mM的精氨酸盐；以及(4)约0.02％(w/v)的聚山梨酯20。

在一个实施方式中，本发明所述的制剂具有5.5-6.5的pH并且包含：(1)约150±10mg/mL的抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体包含包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，VL具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；(2)约20mM组氨酸缓冲液，pH约为5.5-6.5；(3)约130±5mM的精氨酸盐；以及(4)约0.02％(w/v)的聚山梨酯20。

在一个实施方式中，本发明所述的制剂包含：(1)约150±10mg/mL的抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体为全长抗体，其中重链的氨基酸序列为SEQ ID NO:3和轻链的氨基酸序列为SEQ ID NO:4；(2)约20mM组氨酸缓冲液，pH约为5.5-6.5；(3)约130±5mM的精氨酸盐；以及(4)约0.02％(w/v)的聚山梨酯20。

在一个实施方式中，本发明所述的制剂包含：(1)约150±10mg/mL的抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段；(2)约20mM组氨酸缓冲液，pH约为5.5-6.5；(3)约160±5mM的精氨酸盐；以及(4)约0.02％(w/v)的聚山梨酯20。

在一个实施方式中，本发明所述的制剂包含：(1)约150±10mg/mL的抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，VL具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；(2)约20mM组氨酸缓冲液，pH约为5.5-6.5；(3)约160±5mM的精氨酸盐；以及(4)约0.02％(w/v)的聚山梨酯20。

在一个实施方式中，本发明所述的制剂具有5.5-6.5的pH并且包含：(1)约150±10mg/mL的抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体包含包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，VL具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；(2)约20mM组氨酸缓冲液，pH约为5.5-6.5；(3)约160±5mM的精氨酸盐；以及(4)约0.02％(w/v)的聚山梨酯20。

在一个实施方式中，本发明所述的制剂包含：(1)约150±10mg/mL的抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体为全长抗体，其中重链的氨基酸序列为SEQ ID NO:3和轻链的氨基酸序列为SEQ ID NO:4；(2)约20mM组氨酸缓冲液，pH约为5.5-6.5；(3)约160±5mM的精氨酸盐；以及(4)约0.02％(w/v)的聚山梨酯20。

药物递送装置及施用方法

可用于皮下递送本发明药物制剂的一次性笔和/或自动注射器递送装置的实例包括但不限于(Ypsomed)、S0L0STAR^TM笔(sanofi-aventis)、FLEXPEN^TM(NovoNordisk)、以及KWIKPEN^TM(Eli Lilly)、SURECLICK^TM自动注射器(Amgen，Thousand Oaks，CA)、PENLETTM(Haselmeier，Stuttgart，德国)、EPIPEN(Dey，L.P.)和HUMIRA^TM笔(AbbottLabs，Abbott Park，IL)。

本发明选择的(Ypsomed AG)自动注射器，具有多种显著优势，极大的满足患者的需求。主要包括：

2步式操作，使用简单；

易于去除针头保护帽；

大视窗显示；

皮肤按压式操作触发机械装置；

注射开始和结束“咔哒声”提示；

锁定的针头防护罩提供针头的完全防护，避免针头刺伤。

在一些实施方案中，本发明提供一种药物递送装置，其包含(1)自动注射器，(2)一种抗PCSK9抗体的药物制剂，其中，所述抗PCSK9抗体的药物制剂为本发明任一实施方案所述的药物制剂。

在一个实施方式中，所述自动注射器是自动注射器。

在一个实施方式中，所述自动注射器装配有预充式注射器，所述抗PCSK9抗体的药物制剂预填冲于所述预充式注射器内。

在一些实施方案中，本发明提供一种药盒，其含有一支或一支以上预充式注射器，该预充式注射器内预装有1mL本发明任一实施方案所述的药物制剂。

优选地，用于药物递送装置或药盒的药物制剂含有：重链可变区氨基酸序列如SEQID NO:1所示和轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的抗PCSK9抗体或其抗原结合片段，缓冲液，稳定剂和表面活性剂；更优选地，所述药物制剂中，所述抗PCSK9抗体包含重链和轻链，其中重链氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。优选地，所述药物制剂中，所述缓冲液是组氨酸缓冲液，所述缓冲液的浓度为15-25mM，所述缓冲液的pH是5.5～6.5；优选地，所述稳定剂为盐酸精氨酸，其在所述制剂中的浓度为50mM到200mM；优选地，所述表面活性剂为浓度约0.01％至约0.05％(w/v)聚山梨醇酯20。更优选地，所述抗PCSK9抗体的药物制剂包含：(a)约20mM的组氨酸缓冲液；(b)约160mM的盐酸精氨酸；(c)约0.02％(w/v)聚山梨醇酯20；和(d)约150mg/mL的所述抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段。

优选地，所述预充式注射器是1mL预灌封玻璃或聚合物注射器。

优选地，该药盒含有两支、四支、六支、八支、十支或十二支所述预充式注射器，用于以每两周一次的频率、每次150mg所述抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段的给药剂量在1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月的给药周期内通过皮下注射的方式给药。

优选地，该药盒含有三支、六支、九支、十二支、十五支或十八支所述预充式注射器，用于以每四周一次的给药频率、每次三支(即450mg所述抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段)的给药剂量在1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月的给药周期内通过皮下注射的方式给药。

优选地，该药盒含有的所述预充式注射器的数量使得患者可以每两周施用一次、每次一支和/或每四周施用三次、每次三支的方式连续给药1-6个月。

优选地，所述预充式注射器包括针管(含针头)、针头护帽和活塞，其中，所述药物制剂预装在所述针管内。优选地，所述预充式注射器为一次性预充式注射器。

优选地，所述药盒还含有自动注射器，用于装配所述预充式注射器并执行给药功能。优选地，所述自动注射器由上下两个部件组成，上半部分包括弹簧推动装置，下半部分包括预充式注射器存放仓、给药触发按钮和护帽。

药物递送装置的用途和用量

成人原发性高胆固醇血症(包括杂合子型家族性高胆固醇血症)和混合型血脂异常：

可作为饮食的辅助疗法，用于成人原发性高胆固醇血症(杂合子家族性和非家族性)或混合型血脂异常患者的治疗，以降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平：在接受最大耐受剂量的他汀类药物治疗仍无法达到LDL-C目标的患者中，与他汀类药物、或者与他汀类药物及其他降脂疗法联合用药，或者在他汀类药物不耐受或禁忌使用的患者中，单独用药或与其他降脂疗法联合用药。

降低心血管事件的风险：

在动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)的成人患者中，降低心肌梗死、卒中和冠状动脉血运重建的风险，通过与最大耐受剂量的他汀类药物联合用药，伴随或不伴随其他降脂疗法，或者在他汀类药物不耐受或禁忌使用的患者中，单独用药或与其他降脂疗法联合用药。

纯合子型家族性高胆固醇血症(HoFH)：

用于成人或12岁以上青少年的纯合子型家族性高胆固醇血症。可与饮食疗法和其他降低密度脂蛋白(LDL)的治疗(例如他汀类药物)合用，用于患有纯合子型家族性高胆固醇血症(HoFH)且需要进一步降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的患者。

对于原发性高胆固醇血症(包括杂合子型家族性高胆固醇血症)、混合型血脂异常以及已患ASCVD的成人患者，可以皮下给药剂量为150mg每2周一次或450mg每4周一次。基于患者在给药频率和每次注射剂量方面的喜好选择。当改变剂量方案时，在下一次原给药方案的计划日期进行新方案的首次给药。

对于HoFH患者，可以皮下给药剂量为450mg每4周1次。鉴于对治疗的应答取决于LDL-受体功能的水平，应在给药4-8周后检测HoFH患者的LDL-C水平。

除其它用途外，本发明的医药制剂可用于治疗、预防或改善任何与PCSK9活性相关的疾病或失调，包括PCSK9介导的疾病或失调。可以本发明的医药制剂治疗或预防的示范性、非限制性疾病和失调包括各种血脂异常症，例如高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症、13/4脂血症、家族性13/4脂血症、异常3脂蛋白血症、家族性异常3脂蛋白血症、13*4甘油三酯血症和家族性高甘油三酯血症。

本发明也包括治疗上述任意一种疾病的方法，该方法包括通过本发明任一实施方案所述的给药装置给予需要的对象本发明任一实施方案所述的药物制剂。最优选地，给予的药物制剂包含：(a)约20mM的组氨酸缓冲液；(b)约160mM的盐酸精氨酸；(c)约0.02％(w/v)聚山梨醇酯20；和(d)约150mg/mL的所述抗PCSK9的抗体或其抗原结合片段；以每次150mg所述抗体或其抗原结合片段的固定剂量、每两周施用一次的给药频率在一周、二周、三周、一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、半年或更长时间的给药周期内给予需要的对象，或以每次450mg所述抗体或其抗原结合片段的固定剂量、每四周施用一次的给药频率在一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、半年或更长时间的给药周期内给予需要的对象。优选通过皮下注射或静脉注射的方式给药。

下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。

实施例1：缓冲液体系和pH筛选实验

液体型抗体制剂中，缓冲液体系和pH密切影响抗体的稳定性，每种具有独特理化性质的抗体都具有最适宜的缓冲液的种类和pH。筛选一种最佳缓冲液体系和pH，使本发明公开的抗PCSK9抗体具有最佳的稳定性以适宜临床应用。

本研究是以约150mg/mL的浓度JS002，辅料为130mM盐酸精氨酸进行的。使用透析袋进行透析换液使JS002蛋白处于相应的处方中，样品放置在密闭的离心管中进行缓冲液筛选。我们筛选了乙酸钠缓冲液和组氨酸缓冲液(组氨酸与盐酸组氨酸的摩尔比为1：1)两种类型，pH从5.0到6.0水平(如表1所示)。将样品在40℃/环境RH下放置，分别在第2周和第4周取出进行分析检测。蛋白降解的主要途径是聚集物、裂解产品和带电变体的形成。采用尺寸排阻色谱法(SEC-HPLC)测定天然形式(蛋白单体)与聚集形式JS002所占的百分比，采用阳离子交换色谱法(CEX-HPLC)测定酸性与碱性形式mAb所占的百分比。以试验起始(0W)、放置两周(2W)和放置四周(4W)的SEC-HPLC单体含量和CEX-HPLC主峰含量，拟合直线并计算下降斜率(％/周)考察不同缓冲液体系和pH对JS002抗体稳定性的影响，结果汇总见表2所示。

表1：缓冲液体系和pH筛选实验中的处方信息

表2：缓冲液体系和pH筛选实验中稳定性结果汇总

由表2所示，SEC-HPLC实验检测中，抗体在制剂pH 5.5～6.0范围内均可保持相对稳定，高温40℃放置4周后，样品单体含量在94％以上、单体纯度下降速率也在1.5％/周以下；样品主要电荷占45％以上、主要电荷的下降速率在10％/周以下。当缓冲体系为组氨酸缓冲液并且pH为6.0(处方编号3)时，高温40℃放置4周后样品的单体纯度最高(约达97％)，单体纯度的下降速率仅为0.57％/周。基于这些结果，选择pH值为5.5-6.0的20mM组氨酸缓冲剂用于液体型JS002制剂的开发。

实施例2：稳定剂筛选实验

为了进一步探究不同赋形剂对抗体稳定性和粘度的影响，我们选取蔗糖、盐酸精氨酸、山梨醇或甘露醇之一或其组合的制剂进行了比较测试。即将上述不同的赋形剂或其组合分别加入含约150mg/mL JS002的20mM组氨酸缓冲液(pH为5.5或6.0)，具体处方信息如表3所示。各处方制剂分装后放置于40℃条件下，分别在第2周、第4周取出进行分析检测抗体稳定性和配制液粘度。通过分子排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC)检测JS002单体含量变化、弱阳离子高效液相色谱法(CEX-HPLC)检测JS002电荷主峰含量，以及在第四周按标准方法检测制剂粘度。如表4所示，当处方中含有蔗糖、盐酸精氨酸、山梨醇或甘露醇一种或其组合时，抗体均有较强的热稳定性，即制剂高温40℃放置4周后，样品单体含量在98％以上，带主要电荷占51％以上。

特别地，综合各项数据分析，当只含精氨酸盐的制剂，抗体的稳定性最强且粘度最低。具体地，高温40℃放置4周后，仅含精氨酸盐的制剂组：(1)对于抗体结构的稳定性，抗体单体纯度的下降速率明显最低，低至0.1％/周，约为最高的蔗糖组的25-30％，抗体的单体纯度高达98.8％，并且能一定程度改善蔗糖、山梨醇或甘露醇对抗体稳定性的影响；(2)对如抗体电荷的稳定性，抗体主要电荷的下降速率最低，低至6.25％/周，主要电荷高达61.2％；(3)对于制剂的粘度，仅含精氨酸的制剂粘度低于5cP(表5)，明显低于其它各组处方，特别是仅为含蔗糖制剂组的约20-25％。另外，精氨酸盐明显改善含蔗糖、山梨醇或甘露醇制剂的粘度，约降低50％。

高浓度的抗体溶液一般更容易引起抗体聚集、沉淀等，使抗体稳定性降低，并且溶液粘度增加导致注射(特别是皮下或肌内注射)施用难度。综合以上实验，我们发现，当制剂液体制剂中，精氨酸盐不仅能保证抗体JS002的稳定性，还能显著降低液体粘度。特别是，当缓冲液为组氨酸缓冲液(pH为5.5或6.0)，仅含精氨酸盐的一种稳定剂时，抗体稳定性和溶液的粘度效果最优。

表3：稳定剂筛选实验中的处方信息

表4：稳定剂筛选实验结果汇总

表5：各处方制剂的粘度

实施例3：表面活性剂筛选实验

液体制剂中添加表面活性剂常用于保护蛋白质例如抗体在储存过程中免受空气/溶液界面诱导的应力、溶液/表面诱导的应力的影响以减少抗体的聚集或使制剂中颗粒物的形成最小化的试剂，其利于抗体理化性质的稳定。在含有20mM组氨酸缓冲液(pH为6.0)、130mM盐酸精氨酸和150mg/ml的JS002的制剂中分别加入不同浓度的(0-0.5％)的聚山梨酯20或聚山梨酯80，40℃放置2周后分析检测。如表6所示，SEC-HPLC单体含量和CEX-HPLC主峰含量测定结果显示，含有不同浓度的(0-0.5％)的聚山梨酯20或聚山梨酯80制剂中抗体JS002的热稳定性无明显区别，但都保持高稳定性。

表6：表面活性剂筛选

实施例4：制剂长期稳定性研究

含有治疗性抗体的液体药物制品通常需要储存在2-8℃条件下，所以制剂能在长期储存中保持高稳定性非常重要。根据上述的筛选结果，我们设计4个处方进行制剂的长期稳定性研究。

配制如表7所示的4种处方制剂分别储存于透明小瓶中，放置2～8℃条件下若干个月后，对各样品进行分析测试。通过以下参数评估稳定性：(a)目视外观；(b)光阻法检测不溶性微粒(OD405nm)；(c)pH；(d)CE-SDS法检测抗体的分子量；(d)SEC-HPLC测量抗体单体(质量标准：≥97.0％)、聚体(质量标准：≤3.0％)或片段的含量(质量标准：≤1.0％)；(e)CEX-HPLC测量抗体主要电荷(质量标准：≥70.0％)、酸性电荷(质量标准：≤30.0％)或碱性电荷含量(质量标准：≤15.0％)；(f)ELISA法检测抗体结合活性(质量标准：参比品的70％-130％)；以及(g)抗体的生物学活性(HepG2细胞摄取LDL实验，质量标准：参比品的70％-130％)。如表8所示，4种制剂处方在2-8℃条件下，1-12月储存过程具有非常好的稳定性。

表7：用于制剂长期稳定性研究的制剂处方

表8：制剂处方的长期稳定性数据

实施例5：高浓度抗PCSK9抗体的室温储存稳定性

含有治疗性抗体的液体药物制品通常需要储存在2-8℃下直至储存期结束。因此在购买药品至使用的时间内，还需要由患者进行冷藏。取决于所提出的用药方案，在自我施用药物的情况下这可能导致由患者负责的储存时间长达几周。因此，不需在冷藏条件下储存的药物显示出对于家庭护理产品来说患者方便性的显著提高和不正确储存情况下药物品质影响的降低，从而减少了投诉率和温度偏离的监测。

如表9所示，本发明公开的制剂(处方编号：20)对抗蛋白质降解具有更高稳定性，在25℃下测量的所得降解动力学参数满足环境储存长达6个月的要求。

表9：制剂加速稳定性数据汇总(25±2℃)

实施例6：ForteBio亲和力测定(生物光干涉法)

ForteBio亲和力测定按照现有的方法进行。简言之，取4mg JS002(处方编号：29)和Evolocumab(140mg/ml/支，购自AMGEN，批号：1063135)，分别在10KD超滤管中用磷酸盐缓冲液进行100倍换液，换液后以280nm的吸收值测定蛋白含量，调整浓度为2mg/mL。取出生物素，平衡至室温，称取2mg Sulfo-NHS-Biotin加入300μL超纯水中，即为10mM的生物素母液。取2mg/mL JS002和Evolocumab各1mL置于新的EP管中，按照蛋白：生物素＝1:6，加入8μL的生物素母液。混匀，室温反应1-2h。生物素反应结束后，于10KD超滤管中用磷酸盐缓冲液进行100倍换液，换液后以280nm的吸收值测定蛋白含量，调整浓度在1-2mg/mL范围内。生物素化的蛋白分装为每管0.1mL，-80℃保存，冻融不超过1次。分别将生物素化后的JS002和Evolocumab抗体(5μg/mL)偶联到链霉亲和素(SA)生物探针上，实验缓冲液(0.1％BSA，0.02％Tween-20及1xPBS)平衡300s，然后，分别向JS002板和Evolocumab板中依次注入不同浓度稀释的PCSK9，结合300s，解离时间为1800s。根据公式KD＝koff/kon计算亲和力常数。

试验结果如表10所示。Fortebio结果显示，与PCSK9的结合亲和力，JS002明显优于同靶点药物Evolocumab。

表10：Fortebio比较JS002和Repatha对人PCSK9亲和力

实施例7：JS002细胞生物学活性研究(HepG2细胞LDL摄取法)

本实验从细胞水平评价JS002(处方编号：29)对暴露在人PCSK9-D347Y的HepG2细胞LDL的摄取的情况，并且与已上市的同靶点药物Evolocumab(140mg/ml/支，购自AMGEN，批号：1063135)比较。简言之，将人肝癌细胞系(HepG2)细胞(ATCC，批号：62591368)以2.0*10⁴个/孔的密度进行铺板(80μL每孔)，37℃，7％CO₂培养过夜。将JS002抗体及Evolocumab分别进行浓度梯度稀释(起始浓度为20μg/mL，2倍浓度梯度稀释)，取10μL抗体稀释液加入HepG2细胞中，孵育半小时，同时稀释抗原至1μg/mL，取10μL抗原稀释液加入HepG2细胞中，抗原抗体及细胞共孵育4-6h。加入荧光标记的LDL(3μg/mL)，与细胞共孵育16-18h，然后通过酶标仪检测细胞内摄取的荧光量。

实验结果如图1所示，结果表明JS002能够与细胞表面人PCSK9-D347Y结合，从而抑制其与LDLR的结合，增加LDLR对LDL的结合与摄取。并且，JS002(EC50＝92.68ng/mL)促LDL内吞的效果明显优于Evolocumab(EC50＝151.1ng/mL)。

实施例8：高血脂症恒河猴JS002降脂效果研究

本次试验入选19只高脂血症恒河猴(LDL≥l.3mmol/L)，共分为4组：阿托伐他汀钙组(第1-4周给予l.2mg/kg，第5-8周给予2.4mg/kg，4只)、JS002高剂量组(12mg/kg，5只)、JS002低剂量组(4mg/kg，5只)和安慰剂组(5只〉。阿托伐他汀钙组经口给药，连续给药56天，洗脱期21天；JS002高剂量组和JS002低剂量组，每4周一针，给药2次，连续观察78天；给药期和洗脱期定期观察主要疗效分析指标(LOL-C，TC，HDL-C，ApoAL，ApoB和TG)，次要疗效指标(体重)，及安全性指标(血液生化、血常规指标和临床观察)的变化，综合上述指标分析评价JS002(处方编号：20)对高血脂症恒河猴的降脂效果。

实验结果见图2。本次试验中安慰剂组血脂水平稳定，阳性对照阿托伐他汀钙组药效结果与临床文献报道类似，证明实验体系稳定可靠。

在本实验体系下，供试品JS002高剂量组12mg/kg(相当于临床拟用剂量420mg/70kg人，每4周一针，皮下注射2次)，对高脂血症恒河猴LOL-C具有极显著降低作用，与基线比LDL-C给药后D2-D71降低水平可维持40％-70％；JS002低剂量组4mg/kg(相当于临床拟用剂量140mg/70kg人，每4周一针，皮下注射2次)，与基线比LDL-C给药后D2-D57降低水平可维持20％-70％，D57-D78药效作用显著减弱而反弹。JS002高剂量组作用强度和持续时间均优于JS002低剂量组(图2)。整个给药期TG、FPG、ApoAl和HDL-C未见明显变化；各项安全性指标未见与给药相关的改变。

实施例9：食蟹猴药代动力学研究

试验观察健康食蟹猴单次或多次给予不同剂量JS002(处方编号：20)后的药代动力学性质。食蟹猴实验分组与给药情况见表11。其中A、B、C、D组为单次给药，给药剂量分别为2mg/kg、10mg/kg、50mg/kg和10mg/kg，其中A、B和C组给药方式为皮下注射，而D组给药方式为静脉注射。E组为连续给药，给药剂量为10mg/kg，每周给药一次，连续给药四次。

表11：动物分组与给药情况

注：

1.sc:皮下注射。

2.iv:静脉注射。

3.QW:每周一次。

采样后制备血清样品，采用经方法学验证的酶联免疫吸附分析法进行定量检测，结果见表12。

表12：食蟹猴药代动力学参数(平均值±标准偏差)

注：NA表示未检测。

结果显示，食蟹猴单次皮下注射不同剂量(2，10，50mg/kg)供试药物JS002后，血清药物暴露水平随剂量的增高而增加，呈非线性药代动力学特征。JS002消除相半衰期t_1/2为56-74h，336h内的有效半衰期为50-139h。

食蟹猴单次皮下注射10mg/kg受试药物JS002后的生物利用度为89.15％。

食蟹猴连续多次皮下注射10mg/kg(每周1次，连续4次)JS002后，药物在体内的暴露量显著高于同剂量单次给药组，药物在体内存在明显的蓄积。

实施例10：食蟹猴免疫毒性和免疫原性研究

本试验伴随食蟹猴皮下注射给予受试药物JS002(处方编号：20)四周重复给药毒性试验进行考察。按照CFDA的GLP规范要求，评价重组人源化抗PCSK9单克隆抗体注射液可能产生的免疫毒性和免疫原性。本实验设四个剂量组，分别为赋形剂对照组(0mg/kg)，低剂量组(30mg/kg)，中剂量组(100mg/kg)和高剂量组000mg/kg)，每组10只动物，雌雄各半。每周给药l次，连续给药4周，恢复期4周。研究剂量范围内，食蟹猴多次皮下注射给予赋形剂和不同剂量(30、100、300mg/kg)受试药物JS002后，所有个体不同时间点血样均未检测到抗药物抗体，各组的样品阳性率和个体阳性率均为0.0％。结果提示多次皮下注射给予不同剂量(30、100、300mg/kg)受试药物JS002后，其在食蟹猴体内的免疫原性较低。对各组动物肾脏组织进行免疫复合物检测，均未见免疫复合物的沉积现象。其他免疫相关指标显示，各组动物白细胞绝对计数及分类计数、免疫球蛋白水平及AIG比值，淋巴器官/组织的大体解剖观察，胸腺、脾脏脏器重量/系数等均未见给药相荣的异常改变，淋巴细胞亚群分布，均未见给药相关的规律性改变。同时，病理组织学检查显示正常。

实施例11：重组人源化抗PCSK9单克隆抗体注射液(预充式自动注射器)

【产品名称】

重组人源化抗PCSK9单克隆抗体注射液(预充式自动注射器)

【组成成分】

重组人源化抗PCSK9单克隆抗体注射液(预充式自动注射器)：上海君实生物工程有限公司，各组成部分详述如下：

1.重组人源化抗PCSK9单克隆抗体注射液(预充式注射器)：

1.1.重组人源化抗PCSK9单克隆抗体注射液：上海君实生物工程有限公司

1.2.预充式注射器针管(含针头和护帽)：Becton,Dickinson and Company

1.3.预充式注射器活塞：West Pharmaceutical Services,Inc.

2.自动注射器：YpsoMate(Ypsomed AG)。

其中，本品为无菌水针注射剂，规格为150mg(1mL)/支，供皮下注射使用。每支1mL一次性使用的预充式自动注射器中含：重组人源化抗PCSK9单克隆抗体(JS002，处方编号：20)或重组人源化抗PCSK9单克隆抗体(JS002，处方编号：29)。

预充式注射器是药物的内包材，与药液直接接触，部件主要包括针管(含针头)，针头护帽和活塞。

自动注射器由上下两个部件组成，上半部分包括弹簧推动装置，下半部分包括预充式注射器存放仓、给药触发按钮和护帽。该配件不与药液直接接触。

【组合方式】

药品生产企业将重组人源化抗PCSK9单克隆抗体注射液药液灌装在预充式注射器内(图3，a和b)，再将预充式注射器装配在自动注射器中(图3，c)，组装成一次性使用的重组人源化抗PCSK9单克隆抗体(预充式自动注射器)(图3，d)。患者不需要任何组合，即可直接使用本品。

【使用方法】

皮下给药。

使用时，可以选择腹部(除脐周5厘米区域外)、大腿或上臂(仅在其他人帮助注射时)，使用酒精棉球清洁注射部位，等待皮肤干燥。准备注射时，直着取下自动注射器的护帽。然后拉伸或捏紧注射部位，形成紧致的表面。然后以90度角将自动注射器放在皮肤上，用力向下按压自动注射器直到听到一声“咔嗒”的声音，这个表示注射的开始。继续将自动注射器按压在皮肤上直到听到第二声“咔嗒”的声音，同时可以看到视窗颜色的改变，这个意味着注射的结束。注射结束后，将自动注射器从皮肤拔出，针头保护装置将自动回位遮住针头。注射时间一般不超过15秒。预充式自动注射器为一次性使用。

序列表

<110> 上海君实生物医药科技股份有限公司

苏州君盟生物医药科技有限公司

上海君实生物工程有限公司

<120> 抗PCSK9抗体的药物递送装置

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