阅读说明：本技术 用于炎性病症的抗il-1r3抗体 (anti-IL-1R 3 antibodies for inflammatory disorders ) 是由 S·费舍尔 K·贝克曼 于 2018-05-08 设计创作，主要内容包括：本发明涉及通过表征IL1R3信号传导途径成员如IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36、IL1RA和/或IL1R3及其变体的失控或异常表达,治疗医学病症和/或疾病的方法。更具体地,本发明涉及用于治疗受试者中IL1R3介导的炎性病症和/或疾病的抗IL1R3抗体。这类病症和疾病包括但不限于炎性疾病、免疫性疾病、纤维化疾病、嗜酸粒细胞性疾病、感染、疼痛、中枢神经系统障碍、眼病、遗传性全身性炎性疾病、及全身性和局部炎性疾病以及癌症相关的慢性炎症。(The present invention relates to methods of treating medical conditions and/or diseases by characterizing uncontrolled or abnormal expression of IL1R3 signaling pathway members, such as IL-1 α, IL-1 β, IL-33, IL-36, IL1RA, and/or IL1R3 and variants thereof, more specifically, the invention relates to anti-IL 1R3 antibodies for treating IL1R 3-mediated inflammatory conditions and/or diseases in a subject, such conditions and diseases include, but are not limited to, inflammatory diseases, immunological diseases, fibrotic diseases, eosinophilic diseases, infections, pain, central nervous system disorders, ocular diseases, inherited systemic inflammatory diseases, and systemic and local inflammatory diseases, as well as cancer-associated chronic inflammation.)

用于炎性病症的抗IL-1R3抗体

技术领域

本发明涉及治疗特征在于IL1R3信号传导途径成员如IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36、IL1RA和/或IL1R3的失控或异常表达的医学病症和/或疾病的方法。更具体地，本发明涉及炎性病症和/或疾病中抗IL-1R3抗体的方法和用途。

背景技术

白介素1受体辅助蛋白(IL1RAP)，也称作IL1R3，是1型白介素1受体(IL1R1)的辅助受体并且对传输IL-1信号传导不可或缺。一旦结合IL-1，则IL-1R1与IL-1RAcP缔合，形成有功能的信号传导受体复合体，后者刺激NFkB活性。

IL-33、其受体ST2和IL-1RAcP还形成就NFkB激活而言活性与IL-1β/IL-1R1/IL-1RAcP复合体相似的复合体(IL-33/ST2/IL-1RAcP)。IL-36(IL-36α(IL-1F6)、IL-36β(IL-1F8)和IL-36γ(IL-1F9))、其受体IL-36R以及IL-1RAcP还形成就NFkB激活而言活性与IL-1β/IL-1R1/IL-1RAcP复合体相似的复合体(IL-36/Il-36R/IL-1RAcP)。

白介素-1(IL-1)途径是在哺乳动物炎症反应中发挥关键作用且与广泛类型免疫、代谢、生理和造血活动相关的细胞信号传导途径。IL-1家族包括三种在结构上相关的细胞因子：IL-1α、IL-1β和IL-1受体拮抗剂(IL-1ra)。三者当中，IL-1α和IL-1β是促炎激动剂，而IL-1受体拮抗剂(IL-1ra)起到阻断IL-1α和IL-1β活性的作用。IL-1的全部已知生物学功能均经I型IL-1R介导。IL-1α、IL-1β和IL-1ra以高亲和力结合I型IL-1R。相反，IL-1β以高亲和力结合II型IL-1R并且IL-1α和IL-lra以低亲和力结合II型IL-1R。II型IL-1R具有严重截短的胞质结构域并且一旦与IL-1结合，则并不转导信号至细胞，反而通过充当诱饵受体参与调节IL-1-介导的应答。

IL-1产生由感染、微生物毒素、致炎因子和过敏反应触发。总体上，IL-1的主要功能是在炎症或过敏性免疫反应的部位调节免疫应答和炎症反应的幅度和持续时间。当产生过量IL-1或IL-1表达未适当调节时，疾病状态可发展。因此，IL-1已经涉及多种炎性和免疫调节性疾病和病症。已经提出，IL-1的全身或局部过量促成众多医学疾病的发生。在该提议上进一步，已经显示阻断IL-1α和IL-1β活性的IL-1ra在治疗被认为由IL-1信号传导介导的一些疾病中具有不同程度的疗效。

已经提出，抑制IL-1可能在患有特征在于IL-1表达或IL-1活性异常或过度的多种疾病的患者中有益。作为与IL-1活性相关的疾病的治疗剂，IL-1ra和ICE抑制剂得到有限程度的成功。尽管开发这类疾病的有效治疗方面已经取得进展，但需要改进的治疗药物和方法。

不幸地，现有的IL-1途径抑制剂如Kineret、ilaris或Arcalyst具有某些阻碍其治疗性使用的缺点。例如，Kineret(IL-1Rα)具有短半衰期并且因此需要非常频繁的治疗间隔时间(每日)。靶向单一细胞因子的抗体(例如Ilaris)允许其他IL-1家族细胞因子的冗余信号传导/活动出现。此外，已知IL-1家族细胞因子激发促炎性和IL-1R3非依赖性抗炎信号传导，当靶向细胞因子或其α链受体时，前述二者均受干扰。相反，本发明的抗体综合以下优点：治疗间隔时间非频繁、同步抑制不同IL-1家族细胞因子介导的信号传导和阻断促炎性信号传导途径方面有特异性。

因此，本发明提供用于治疗与IL1R3信号传导途径成员表达不受控相关的病症的新颖和改进的方法，以及下文中描述的有利特征。

发明内容

本发明涉及治疗特征在于IL1R3信号传导途径成员如IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36、IL1RA和/或IL1R3及其变体的失控或异常表达的医学病症和/或疾病的方法。

更具体地，本发明涉及用于治疗受试者中IL1R3介导的炎性病症和/或疾病的抗IL1R3抗体。

这类病症和疾病包括但不限于炎性疾病、免疫性疾病、纤维化疾病、嗜酸粒细胞性疾病(eosinophilic disorders)、感染、疼痛、中枢神经系统障碍、眼病、遗传性全身性炎性疾病、及全身性和局部炎性疾病以及癌症相关的慢性炎症。

具体实施方式

定义

根据本发明的术语"兔"意为分类目兔形目(Lagomorpha)的成员的动物，所述兔形目包括科(野兔(hares)和家兔(rabbits))和鼠兔科(Ochotonidae)(鼠兔(pikas))，优选属穴兔属(Oryctolagus)

术语"抗体"涵盖各种形式的抗体结构，包括但不限于，完整抗体和抗体片段，只要其示出根据本发明的性质即可。

根据本发明的术语"兔单克隆抗体"意为通过免疫兔并从所述兔的抗原生成细胞中分离而产生的单克隆抗体、以及进一步修饰的此类抗体，优选人源化抗体、嵌合抗体、其片段、或进一步遗传工程或重组生产的抗体，只要保留根据本发明的特征性质即可。优选抗体来自所述兔的B细胞或兔杂交瘤细胞。

根据本发明的术语"抗体生成细胞"意为兔B细胞，其生成抗体，优选B细胞或兔杂交瘤细胞。

"天然抗体"通常为由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成的异四聚体糖蛋白。各轻链通过一个共价二硫键连接至重链，而二硫键的数量在不同免疫球蛋白同种型的重链之间不同。各重链和轻链还具有规则间隔的链内二硫桥。各重链在一端具有可变结构域(VH)，接着是多个恒定结构域。各轻链在一端具有可变结构域(VL)，并在其另一端具有恒定结构域。轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对齐，并且轻链可变结构域与重链可变结构域对齐。认为特定的氨基酸残基在轻链和重链可变结构域之间形成界面。

对于肽或多肽序列的"百分比(％)氨基酸序列同一性"定义为，在根据需要比对序列并引入空位(gap)以实现最大百分比序列同一性并且不将任何保守替换考虑为序列同一性的一部分后，候选序列中与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。为了测定百分比氨基酸序列同一性的目的的比对可以以在本领域技术范围内的各种方式实现，例如，使用公众可获得的计算机软件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。

术语“VL(或VH)区”具有与VL(或VH)结构域相同的含义。

根据本发明，术语“Fc受体”或“FcR”指与抗体的Fc区结合的人受体。FcR结合IgG抗体并且包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类受体，包括这些受体的等位变体和可变剪接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(“激活性受体”)和FcγRIIB(“抑制性受体”)，它们具有主要在其胞质结构域内不同的相似氨基酸序列。激活性受体FcγRIIA在其胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)。抑制性受体FcγRIIB在其胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)(参见Daeron M.,Annu.Rev.Immunol.15:203-234,(1997)中的综述)。FcRIIIA(CD16a)介导ADCC。FcR在Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol 9:457-92(1991)；Capel等人,Immunomethods 4:25-34(1994)；和de Haas等人,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)中综述。这些和全部其他FcRs由本文中的术语“FcR”涵盖。该术语还包括负责转移母体IgG至胎儿的新生儿受体FcRn(Guyer等人,J.Immunol.117:587(1976)和Kim等人,J.Immunol.24:249(1994))并且介导更慢的分解代谢，因此介导较长的半衰期。

如本文所用的术语"抗体效应子功能"或"效应子功能"指的是由IgG的一个(或多个)Fc效应子结构域(例如，免疫球蛋白的Fc区)提供的功能。此类功能可通过例如一个(或多个)Fc效应子结构域与具有吞噬或裂解活性的免疫细胞上的Fc受体的结合、或者通过一个(或多个)Fc效应子结构域与补体系统的组分的结合来实现。典型的效应子功能为ADCC、ADCP和CDC。

"抗体片段"指的是除了完整抗体以外的分子，其包含与完整抗体所结合的抗原结合的完整抗体的一部分。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；和从抗体片段形成的多特异性抗体。

与参考抗体"结合相同表位的抗体"指的是在竞争分析中阻断参考抗体与其抗原的结合50％以上的抗体，反之，参考抗体在竞争分析中阻断抗体与其抗原的结合50％以上。本文提供示例性的竞争分析。

"抗体依赖性的细胞介导的细胞毒性"和"ADCC"指的是细胞介导的反应，其中表达FcR的非特异性细胞毒性细胞(例如天然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞、和巨噬细胞)识别靶细胞上结合的抗体，并且随后引起靶细胞的裂解。调节ADCC的原代细胞、NK细胞仅表达FcyRIII，而单核细胞表达FcyRI、FcyRII和FCYRIII。

术语“抗体依赖性细胞吞噬作用”和“ADCP”指的是抗体包被的细胞全部或部分由与免疫球蛋白Fc区结合的吞噬免疫细胞(例如，巨噬细胞、嗜中性粒细胞和树突细胞)内在化的过程。

"C1q"是包括免疫球蛋白的Fc区的结合位点的多肽。C1q与两个丝氨酸蛋白酶C1r和C1s一起，形成复合物C1，即补体依赖性细胞毒性(CDC)途径的第一组分。人C1q可商购自例如Quidel,San Diego,Calif。

抗体的"类"指的是其重链具有的恒定结构域或恒定区的类型。存在5大类抗体：IgA、IgD、IgE、IgG、和IgM，并且这些中的几类可进一步分为亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、和IgA2。对应于不同类的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为a、δ、ε、γ、和μ。

例如药物制剂等的试剂的"有效量"指的是在需要的剂量和时间段下，有效实现期望的治疗或预防结果的量。

本文中术语"Fc区"用于定义免疫球蛋白重链的C末端区域，其包含恒定区的至少一部分。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。除非本文另有说明，否则在Fc区或恒定区中氨基酸残基的编号根据EU编号系统，也称为EU索引，其如Kabat,等人,Sequences ofProteins of Immunological Interest,第5版.Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,MD(1991)所述。

"变体Fc区"包含凭借至少一个如本文所述的"氨基酸修饰"与"天然"或"野生型"序列Fc区的氨基酸序列不同的氨基酸序列。如本文所用的术语“Fc变体”指在Fc结构域中包含修饰的多肽。本发明的Fc变体根据组成它们的氨基酸修饰定义。因此，例如，P329G是其中将相对于亲本Fc多肽的位置329处的脯氨酸置换成甘氨酸的Fc变体，其中根据EU索引进行编号。可以未指定野生型氨基酸的身份，在这种情况下前述变体称作P329G。对于本发明中讨论的全部位置，均根据EU索引进行编号。EU索引或如Kabat或EU编号方案中的EU索引指EU抗体的编号(Edelman等人，Proc Natl Acad Sci USA 63(1969)78-85，因而通过引用的方式完整并入)。修饰可为添加、删除、或置换。置换可包括天然存在的氨基酸或非天然存在的氨基酸。变体可包括非天然氨基酸。实例包括美国专利号6,586,207；WO 98/48032；WO 03/073238；US 2004/0214988 A1；WO 05/35727 A2；WO 05/74524 A2；Chin,J.W.等人,Journalof the American Chemical Society 124(2002)9026-9027；Chin,J.W.和Schultz,P.G.,ChemBioChem 11(2002)1135-1137；Chin,J.W.等人,PICAS United States of America 99(2002)11020-11024；以及Wang,L.和Schultz,P.G.,Chem.(2002)1-10，全部文献均通过引用的方式完整并入本文。

术语"含有Fc区的多肽"指的是包含Fc区的多肽例如抗体或免疫黏附素(参见下述定义)。

术语"Fc受体"或"FcR"用于描述与抗体的Fc区结合的受体。结合IgG抗体的FcR(γ受体)包括FcyRI、FcyRII、和FcyRIII亚类的受体，包括等位基因变体和这些受体的可选地剪接的形式。FcyRII受体包括FcyRIIA(“激活受体”)和FcyRIIB(“抑制受体”)，其具有主要在其细胞质结构域中不同的相似的氨基酸序列。激活受体FcyRIIA在其细胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)。抑制受体FcyRIIB在其细胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)(参见Daeron,M.,Annu.Rev.Immunol.15(1997)203-234中的综述)。FcR在Ravetch,和Kinet,Annu.Rev.Immunol 9(1991)457-492；Capel，等人，Immunomethods 4(1994)25-34；和de Haas，等人，J.Lab.Clin.Med.126(1995)330-41中综述。其他FcR，包括未来将识别的那些，在本文中由术语“FcR”涵盖。该术语还包括新生儿受体FcRn，其负责母体IgG至胎儿的转移(Guyer，等人，J.Immunol.117(1976)587和Kim，等人，J.Immunol.24(1994)249)。

如本文使用的"IgG Fc配体"意为来自任何生物体的、与IgG抗体的Fc区结合从而形成Fc/Fc配体复合物的分子，优选多肽。Fc配体包括但不限于FcyR、FcyR、FcyR、FcRn、Clq、C3、甘露聚糖结合性凝集素、甘露糖受体、葡萄球菌A蛋白、链球菌G蛋白、和病毒FcyR。Fc配体还包括Fc受体同源物(FcRH)，其为与FcyR同源的Fc受体的家族(Davis,等人,Immunological Reviews 190(2002)123-136，其通过引用整体并入)。Fc配体可包括结合Fc的未发现的分子。具体的IgG Fc配体为FcRn和Fcγ受体。如本文所用的"Fc配体"意为来自任何生物体的、与抗体的Fc区结合从而形成Fc/Fc配体复合物的分子，优选多肽。

如本文所用的"Fcγ受体"、"FcyR"或"FcγR"意为结合IgG抗体Fc区并由FcyR基因编码的蛋白质家族的任何成员。在人类中，该家族包括但不限于，FcyRI(CD64)，包括同种型FcyRIA、FcyRIB、和FcyRIC；FcyRII(CD32)，包括同种型FcyRIIA(包括同种异型H131和R131)、FcyRIIB(包括FcyRIIB-l和FcyRIIB-2)、和FcyRIIc；以及FcyRIII(CD 16)，包括同种型FcyRIIIA(包括同种异型V158和F158)和FcyRIIIb(包括同种异型FcyRIIB-NA1和FcyRIIB-NA2)(Jefferis,等人,Immunol Lett 82(2002)57-65，其通过引用整体并入)，以及任何未发现的人FcyR或者FcyR同种型或同种异型。FcyR可来自任何生物体，包括但不限于人、小鼠、大鼠、兔、和猴。小鼠FcyR包括但不限于FcyRI(CD64)、FcyRII(CD32)、FcyRIII(CD 16)、和FCYRIII-2(CD 16-2)，以及任何未发现的小鼠FcyR或者FcyR同种型或同种异型。

如本文所用的"FcRn"或"新生儿Fc受体"意为结合IgG抗体Fc区并至少部分由FcRn基因编码的蛋白质。FcRn可来自任何生物体，包括但不限于人、小鼠、大鼠、兔、和猴。如本领域已知的，功能性FcRn蛋白包括两种多肽，通常称为重链和轻链。轻链为β-2-微球蛋白并且重链由FcRn基因编码。除非本文另有说明，FcRn或FcRn蛋白指的是FcRn重链与β-2-微球蛋白的复合物。

"免疫缀合物"意为与一种或多种细胞毒性剂例如化学治疗剂、药物、生长抑制剂、毒素、其他抗体或放射性同位素缀合的抗体。

“抗体片段”包含全长抗体的一部分，优选地其可变区，或至少其抗原结合位点。抗体片段的实例包括双抗体、Fab片段和单链抗体分子。scFv抗体例如在Huston,J.S.,Methods in Enzymol.203(1991)46-88中描述。

如本文所用的术语"单克隆抗体"或"单克隆抗体组合物"指的是单一氨基酸组成的抗体分子的制剂。

术语"人源化抗体"或"抗体的人源化形式(version)"指的是抗体工程导致的重链和轻链都人源化的抗体。人源化的链通常是其中V区氨基酸序列改变使得(作为整体分析)与人种系序列在同源性上比与种源的种系序列更接近。人源化评估是基于得到的氨基酸序列而不是方法本身。

如本文所用的术语“特异性结合，针对靶标，或抗靶标抗体“指的是通过ELISA测量的抗体与相应抗原(靶标)或抗原表达细胞的结合，其中所述ELISA优选包含将相应抗原涂覆至固体支持体上，在允许与相应抗原或蛋白质形成免疫复合物的条件下加入所述抗体，通过使用与根据本发明的抗体结合的二抗和使用过氧化物酶介导的显色测量光密度值(OD)来检测所述免疫复合物。

根据本发明的术语“抗原”指的是用于免疫的抗原或包含所述抗原作为其蛋白序列的一部分的蛋白质。例如，对于免疫，可以使用蛋白质的细胞外结构域的片段(例如前20个氨基酸)，对于检测/分析等，可以使用蛋白质的细胞外结构域或全长蛋白质。

本文中的术语“特异性结合”或“特异性识别”意为抗体对抗原显示明显的(appreciable)亲和力，并且优选不显示显著的交叉反应性。

“明显的”结合亲和力包括以至少10^-7M、具体地至少10^-8M、更具体地至少10^-9M或甚至更具体地至少10^-10M的亲和力结合。

“不显示显著的交叉反应性”的抗体是不会明显地结合不期望的其他蛋白质的抗体。对本发明表位特异的抗体例如将不与IL-1R3上的其他表位显著地交叉反应。特异性结合可以根据用于测定这类结合的任何领域公知的方法、例如通过竞争性结合分析(例如ELISA)来测定。

如本文所用的全部蛋白质术语均指人蛋白质。如果意指来自另一个物种的蛋白质，则明确地提到这点。

如本文所用，术语“IL-1α”指人IL-1(UniProtKB P01583)。如本文所用，术语“IL-1β”指人IL-1β(UniProtKB P01584)。IL-1通过诱导IL-2释放、B细胞成熟及增殖以及成纤维细胞生长因子活性来刺激胸腺细胞增殖。IL-1蛋白质涉及炎症反应，被鉴定为内源性热原(UniProtKB)。

如本文所用，术语“IL-33”指人IL-33(UniProtKB O95760)，一种与IL1RL1/ST2受体结合并借助其发送信号的细胞因子，所述受体转而激活靶细胞中的NF-κ-B和MAPK信号传导途径(UniProtKB)。

如本文所用，术语“IL-36”指人IL-36α(UniProtKB Q9UHA7)、IL-36β(UniProtKBQ9NZH7)和或IL-36γ(UniProtKB Q9NZH8)。IL-36是一种与IL1RL2/IL-36R受体结合并借助其发送信号的细胞因子，所述受体转而激活靶细胞中与促炎反应关联的NF-κ-B和MAPK信号传导途径。IL-36似乎通过作用于角质形成细胞、树状细胞及间接作用于T细胞以驱动组织浸润、细胞成熟和细胞增殖，来参与皮肤炎症反应(UniProtKB)。

如本文所用，术语“NFkB”指由p105亚基(P19838)和p100亚基(Q00653)组成的人核因子NF-κ-B。

根据本发明，将“对NFkB的抑制”作为对人细胞中NFkB依赖性萤光素酶基因表达的抑制来测量。这类方法例如在Windheim M.等人,Mol.Cell.Biol.28(2008)1783-1791；Huang J.等人PNAS USA 94(1997)12829-12832；Xiaoxia L.等人,Mol.Cell,Biol.19(1999)4643-4652中描述。如果本文中意指鼠NFkB，则明确地提到这点。

如本文所用的"根据本发明的抗体的可变区(或结构域)"(轻链(VL)的可变区、重链(VH)的可变区)表示直接参与抗体与抗原结合的该对轻链和重链区中的每个。可变轻链和重链区具有相同的一般结构，并且各区包含序列广泛保守、通过三个互补决定区CDR连接的4个框架(FR)区。根据本发明的抗体包含共同足够用于与相应抗原特异性结合的VH区和VL区或其部分。

当本文使用时，术语"抗体的抗原结合部分"指的是抗体的负责抗原结合的氨基酸残基。抗体的抗原结合部分优选包括来自"互补决定区"或"CDR"的氨基酸残基。CDR序列根据Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版.PublicHealth Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)定义，并对其残基进行编号。使用该编号系统，实际的线性氨基酸序列可包含对应于可变区的FR或CDR的缩短或***的更少或额外的氨基酸。通过将抗体序列的同源性区域与“标准”Kabat标号序列对齐，可以确定给定抗体的残基的Kabat编号。

如本文所用的短语“肠胃外施用”和“肠胃外方式施用”意指除了肠内和局部施用之外的施用模式，通常通过注射施用，并且包括，而不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、角质层下、关节内、被膜下、蛛网膜下、椎管内、硬膜外和胸骨内注射和输注。

如本文所用的术语"癌症"可为例如肺癌、非小细胞肺(NSCL)癌、细支气管肺泡细胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、***区癌症、肠胃癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子***、***癌、外阴癌、何杰金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、***癌、***癌、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、间皮瘤、肝细胞癌、胆癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、脊柱轴肿瘤、脑干胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、神经鞘瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、鳞状细胞癌、垂体腺瘤、淋巴瘤、淋巴细胞性白血病，包括任意上述癌症的难治性形式，或上述癌症中的一种或多种的组合。

发明详述

如本申请的简述中概述，在提供合适方法治疗IL1R3途径成员表达失控介导的炎性病症方面存在几种困难。本发明满足这种需要并且提供治疗、抑制或缓解炎性病症和/或疾病的方法，所述炎性病症和/或疾病包括免疫性疾病、纤维化疾病、嗜酸粒细胞性疾病、感染、疼痛、中枢神经系统障碍、眼病、遗传性全身性炎性疾病、及全身性和局部炎性疾病。

本发明涉及一种治疗、抑制或缓解有需求的受试者中炎性病症和/或疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的拮抗性IL1R3抗体。

特别地，本发明涵盖用于治疗受试者中IL1R3介导的炎性病症和/或疾病的抗IL1R3抗体。

这类炎性病症和/或疾病可以选自由炎性病症、免疫性疾病、纤维化疾病、嗜酸粒细胞性疾病、感染、疼痛、中枢神经系统障碍、眼病、遗传性全身性炎性疾病、及全身性和局部炎性疾病组成的组。

在本发明的一方面，治疗的炎性疾病是IL-1依赖性疾病。该疾病可以是全身性和局部炎性疾病，如Schnitzler综合征、

病、继发性淀粉样变、Henoch-Schonlein紫癜、特发性复发性心包炎、全身发作型幼年特发性关节炎、成人发作型史迪尔氏病、巨噬细胞活化综合征、Sweet综合征/嗜中性皮肤病、嗜中性脂膜炎、Erdheim-Chester/组织细胞病、SAPHO、PFAPA、多中心Castlem病、Jessner-Kanof病、原发性Sjoegren综合征疲劳、Kawasaki病、慢性肉芽肿性疾病中的结肠炎、化脓性汗腺炎、自身免疫性内耳病、重度创伤性脑损伤)、或遗传性全身性炎性疾病如家族性地中海热(FMF)、CAPS、TRAPSa、HIDS、PAPA、PASH、DIRA、Blau综合征/肉芽肿关节炎、甲羟戊酸激酶缺乏、Majeed综合征、NLRP12自身炎性综合征。

在本发明的优选方面，炎性病症选自COPD、炎性皮肤病、银屑病、泛发脓疱性银屑病(GPP)、炎症性肠病(IBD)、哮喘、异位性皮炎、特发性肺纤维化、腹膜炎、类风湿性关节炎(RA)、或与高尿酸血症相关的代谢性风湿性疾病。

在一个优选的实施方案中，炎性病症是与高尿酸血症相关的代谢性风湿性疾病。代谢性风湿性疾病可以选自痛风、假痛风、药物所致痛风和慢性活动性(active)(难治性)痛风的组。

根据本发明的一方面，为了治疗所述代谢性风湿性疾病，施用IL1R3拮抗性抗体。所述IL1R3拮抗性抗体可以与治疗痛风的治疗剂组合施用。

它可以与治疗痛风的治疗剂同时施用。但它也可以与治疗痛风的治疗剂依次施用。

本发明的另一方面涵盖用于治疗炎性病症和/或疾病的方法，其中炎性病症是癌症相关的慢性炎症。

本发明还涉及治疗炎性病症和/或疾病的抗IL1R3抗体，其中炎性病症是癌症相关的慢性炎症。

如本文所用的术语"癌症"可为例如肺癌、非小细胞肺(NSCL)癌、细支气管肺泡细胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、***区癌症、肠胃癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子***、***癌、外阴癌、何杰金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、***癌、***癌、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、间皮瘤、肝细胞癌、胆癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、脊柱轴肿瘤、脑干胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、神经鞘瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、鳞状细胞癌、垂体腺瘤、淋巴瘤、淋巴细胞性白血病，包括任意上述癌症的难治性形式，或上述癌症中的一种或多种的组合。

优选地，本发明的抗体用于治疗癌症相关的慢性炎症，其中癌症选自胰腺癌、肝癌、肺癌(与石棉、感染、吸烟、二氧化硅引起的炎症相关)、非小细胞肺癌、结直肠癌/结肠炎相关的癌(与炎症性肠病相关)、肠胃癌、胃癌、慢性胃炎相关的胃癌、***受体阳性乳腺癌、头颈鳞状细胞癌、间皮瘤、胆囊癌症(慢性胆囊炎相关)、卵巢癌、膀胱癌、***癌、大肠杆菌感染相关的***癌、甲状腺癌、霍奇金病、MALT淋巴瘤、唾液腺癌、黑素瘤、子宫内膜异位症相关的子宫内膜癌、Barrett食管炎相关的食管癌。

优选地，癌症是乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、非小细胞肺癌、结直肠癌、肠胃癌、胃癌、***受体阳性乳腺癌、头颈鳞状细胞癌、间皮瘤、胆囊癌症、卵巢癌、膀胱癌、***癌、甲状腺癌、霍奇金病、MALT淋巴瘤、唾液腺癌或黑素瘤。

本发明的抗体可以用于治疗癌症相关的慢性炎症，原因是某些肿瘤由分泌炎性细胞因子如IL-1α、IL-1β、IL-33、IL-36的肿瘤微观环境细胞引起或引发。在一些情况下，这类细胞因子的表达导致肿瘤抗性形成。

因此，在本发明的一方面，抗体用于治疗受试者，其中受试者包含肿瘤，如实体瘤，并且显示肿瘤抗性或对细胞毒疗法、抑制细胞性疗法或靶向/免疫疗法的反应不充分。优选地，受试者是人类受试者，例如癌症患者。

伴同或依次使用细胞因子抑制剂和抗癌化合物显著地改善这类治疗的反应率或可以破坏肿瘤抗性。

本发明因此还涵盖一种用于治疗受试者的方法，其中受试者特征在于耐受或显示对一种或多种细胞毒性、细胞生长抑制性或靶向抗癌的反应不充分。

在本发明的一方面，所述IL1R3抗体与一种或多种细胞毒性、细胞生长抑制性或靶向抗癌剂组合施用。

在本发明的一方面，所述IL1R3拮抗性抗体与一种或多种细胞毒性、细胞生长抑制性或靶向抗癌同时施用。在另一方面，IL1R3拮抗性抗体与一种或多种细胞毒性、细胞生长抑制性或靶向抗癌剂依次施用。

在后一种情况下，优选用一种或多种细胞毒性、细胞生长抑制性或靶向抗癌剂的治疗后施用抗体。

本发明的细胞毒性或细胞生长抑制性抗癌剂可以是紫杉烷、蒽环类、烷基化剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、激酶抑制剂、核苷酸类似物、肽抗生素和铂基剂。

优选地，靶向抗癌剂用于靶向疗法中并且选自以下之一或其组合：抗EGFR化合物如西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、帕尼单抗和抗HER2化合物如曲妥珠单抗、阿妥曲妥珠单抗-恩坦辛(ado-trastuzumab emtansine)、帕妥珠单抗。

进一步优选靶向抗癌剂是靶向检查点抑制剂。这些抑制剂可以是但不限于：抗PD1化合物如派姆单抗(pembrolizumab)和纳武单抗(nivolumab)，和抗PDL1化合物如阿特珠单抗、阿维鲁单抗(Avelumab)和德瓦鲁单抗(Durvalumab)，和抗CTLA-4化合物如伊匹木单抗和曲美木单抗(Tremelimumab)。

本发明针对靶向癌症疗法提供显著改善的缓解率，原因是实现了广谱抑制细胞因子诱导的信号传导。癌适应症中的这种活性不通过直接耗尽癌细胞的活性(如现有技术的几种化合物所做那样)来实现，而通过调节IL1R3信号传导途径抑制癌症相关的炎症来实现。

本发明的抗体提供非常有利的活性特征，因为它们能够实现有效抑制癌症相关的慢性炎症，并且与此同时，避免不想要的副作用，因为它们不影响表达IL-1R3的所靶向细胞的活力。

本发明因此提供超过其他IL-1家族靶向疗法的几个优点。商业化合物Kineret(IL-1Rα)具有短半衰期和非常频繁的治疗间隔时间(每日)。靶向单一细胞因子的抗体(例如Ilaris)允许其他IL-1家族细胞因子的冗余信号传导/活动出现。此外，已知IL-1家族细胞因子激发促炎性和IL-1R3非依赖性抗炎信号传导，当靶向细胞因子或其α链受体时，前述二者均受干扰。相反，本发明的抗体综合以下优点：治疗间隔时间非频繁、同步抑制不同IL-1家族细胞因子介导的信号传导和阻断促炎性信号传导途径方面有特异性。

如本文所述的抗体优选地是对IL-1R3具有高亲和力、高特异性和强力中和活性的单克隆抗体。本发明因此还涵盖对IL-1R3具有高亲和力和特异性、具有强力IL-1R3中和活性和稳定性改善的IL-1R3抗体。

在本发明的一个优选实施方案中，抗体具有减少的效应子功能。优选地，根据本发明的抗体显示Fcγ-受体信号传导减少或显示无Fcγ-受体信号传导。进一步优选，抗体不诱导ADCC。

本发明的另一方面是抗IL1R3抗体，其至少包含人IgG1 Fc区的氨基酸置换L234A和L235A或人IgG4 Fc区的S228P和L235E或在另一生物体中相应的功能性突变。

在本发明的一个实施方案中，抗IL1R3抗体包含

a)包含互补决定区的重链可变区(VH)，所述互补决定区包括CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3

其中CDR-H1区包含选自SEQ ID NO:69-85和178的组的氨基酸序列

其中CDR-H2区包含选自SEQ ID NO:86–102和179的组的氨基酸序列

和其中CDR-H3区包含选自SEQ ID NO:103–119和180的组的氨基酸序列；和

b)包含互补决定区的轻链可变区(VL)，所述互补决定区包括CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3

其中CDR-L1区包含选自SEQ ID NO:120-136和181的组的氨基酸序列，

其中CDR-L2区包含选自SEQ ID NO:137-153和182的组的氨基酸序列，和

其中CDR-L3区包含选自SEQ ID NO:154-170和SEQ ID NO:175和183的组的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明的所述抗体包含CDR-L3的位置2处的置换。所述置换可以是半胱氨酸至丝氨酸置换。

在本发明的一方面，受试者是人受试者并且抗体包含

a)包含互补决定区的重链可变区(VH)，所述互补决定区包括CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3

其中CDR-H1区包含选自SEQ ID NO:69–85的组的氨基酸序列，

其中CDR-H2区包含选自SEQ ID NO:86–102的组的氨基酸序列，

并且其中CDR-H3区包含选自SEQ ID NO:103–119的组的氨基酸序列；和

b)包含互补决定区的轻链可变区(VL)，所述互补决定区包括CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3

其中CDR-L1区包含选自SEQ ID NO:120-136的组的氨基酸序列，

其中CDR-L2区包含选自SEQ ID NO:137-153的组的氨基酸序列，和

其中CDR-L3区包含选自SEQ ID NO:154-170和SEQ ID NO:175的组的氨基酸序列。

在本发明的另一方面，受试者是小鼠并且抗体包含

a)包含互补决定区的重链可变区(VH)，所述互补决定区包括CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3

其中CDR-H1区包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列，

其中CDR-H2区包含SEQ ID NO:179的氨基酸序列，

和其中CDR-H3区包含SEQ ID NO:180的氨基酸序列，以及

b)包含互补决定区的轻链可变区(VL)，所述互补决定区包括CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3

其中CDR-L1区包含SEQ ID NO:181的氨基酸序列，

其中CDR-L2区包含SEQ ID NO:182的氨基酸序列，和

其中CDR-L3区包含SEQ ID NO:183的氨基酸序列。

在本发明的其他实施方案中，抗体包含重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述重链可变(VH)区与选自由SEQ ID NO:1至34和173和176的VH区组成的组的VH区至少90％相同；所述轻链可变(VL)与选自由SEQ ID NO:35至68和174和177的VL区组成的组的VL区至少90％相同。

在本发明的一个实施方案中，抗体是人源化抗体。

在这类实施方案中，受试者是人受试者并且抗体包含重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述重链可变(VH)区与选自由SEQ ID NO:1至34和173的VH区组成的组的VH区至少90％相同；所述轻链可变(VL)区与选自由SEQ ID NO:35至68和174的VL区组成的组的VL区至少90％相同。

在另一个实施方案中，受试者是小鼠并且抗体包含重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述重链可变(VH)区与SEQ ID NO:176的VH区至少90％相同；所述轻链可变(VL)区与SEQ ID NO:177的VL区至少90％相同。

在一个实施方案中，根据本发明的抗体是与IL-1R3特异性结合的抗体或其片段或衍生物，所述片段或衍生物含有所述抗体的足以赋予IL-1R3结合特异性的至少一部分，并且可以包含重链可变(VH)区，所述重链可变(VH)区与选自由SEQ ID NO:1至34和173和176的VH区组成的组的VH区至少60％相同、优选地至少70％相同、更优选地至少80％相同、更优选地至少90％相同。

在一个实施方案中，所述抗体包含重链可变(VH)区序列，所述序列与选自根据本发明的VH序列的组的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。

在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有置换(例如，保守性置换)、***或删除，同时根据本发明，抗体保留与相应抗原特异性结合的能力。

本发明还涉及与IL-1R3特异性结合的抗体或其片段或衍生物，所述片段或衍生物含有所述抗体的足以赋予IL-1R3结合特异性的至少一部分，并且包含轻链可变(VL)区，所述轻链可变(VL)区与选自由SEQ ID NO:35至68和174和177的VL区组成的组的VL区至少60％相同、优选地至少70％相同、更优选地至少80％相同、更优选地至少90％相同。

所述抗体可以包含与本发明VL序列的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变(VL)区。

在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有置换(例如，保守性置换)、***或删除，同时抗体保留与相应抗原特异性结合的能力。

在某些实施方案中，已经在所述VL序列中置换、***和/或删除总计1至10个氨基酸。在某些实施方案中，置换、***或删除出现在CDR外部的区域内(即，在FR中)。本发明还包含可以根据本领域已知方法产生的亲和力成熟抗体。Marks等人,Bio/Technology 10:779-783(1992)描述了借助VH和VL结构域改组的亲和力成熟。CDR和/或构架残基的随机诱变由Barbas等人,Proc Nat.Acad.Sci,USA 91:3809-3813(1994)；Schier等人,Gene 169:147-155(1995)；Yelton等人,J.Immunol.1 55:1994-2004(1995)；Jackson等人,J.Immunol.1 54(7):3310-9(1995)；和Hawkins等人,J.Mol.Biol.226:889-896(1992)以及WO2010108127描述。

在某些实施方案中，已经在所述VH序列或VL序列的每个序列中置换、***和/或删除总计1至10个氨基酸。在一个实施方案中，本发明的所述抗体包含VH或VL序列的位置90处的置换。优选位置90处的氨基酸由丝氨酸置换。这种置换优选地在轻链可变区(VL)的位置90处。在优选实施方案中，SEQ ID NO:62的位置90处的半胱氨酸由丝氨酸置换。但是，本发明的抗体不限于位置90处的氨基酸置换，而可以包含导致功能抗体拥有本发明抗体特性的任何置换、删除或***。因此，本发明抗体的VL和VH序列还可以在不同位置处包含其他突变。

在某些实施方案中，置换、***或删除出现在CDR外部的区域内(即，在FR中)。

在其他实施方案中，置换，***，或删除出现在CDR内部的区域内。在一个优选的实施方案中，本发明的抗体包含CDR-L3的位置2处的置换。优选该置换是半胱氨酸至丝氨酸。在一个实施方案中，所述置换处于SEQ ID NO:164中。

本发明还涵盖与IL-1R3特异性结合的抗体或其片段或衍生物，所述片段或衍生物含有所述抗体的足以赋予IL-1R3结合特异性的至少一部分，其中抗体包含重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包含选自SEQ ID NO:1至34和173和176的组的氨基酸序列。

优选地，重链可变区(VH)序列是SEQ ID NO:1、可选地SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQID NO:28、或SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、或可选地SEQ ID NO:34或173和176。

另外，本发明涉及如下方法，其中所述与IL-1R3特异性结合的抗体或其含有所述抗体的足以赋予IL-1R3结合特异性的至少一部分的片段或衍生物包含轻链可变区(VL)，所轻链可变区述包含选自SEQ ID NO:35至68和174和177的组的氨基酸序列。

甚至更优选地，轻链可变区(VL)序列是SEQ ID NO:35、或SEQ ID NO:36、SEQ IDNO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ IDNO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ IDNO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ IDNO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ IDNO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ IDNO:67、或可选地SEQ ID NO:68或174或177。

与IL-1R3特异性结合的根据本发明的抗体或其含有所述抗体的足以赋予IL-1R3结合特异性的至少一部分的片段或衍生物，还包含选自由以下组成的组的抗体的各自的CDR1、CDR2和CDR3区的VH区和VL区：MAB-15-0139、MAB-15-0106、MAB-15-0108、MAB-15-0110、MAB-15-0117、MAB-15-0121、MAB-15-0140、MAB-15-0115、MAB-15-0125、MAB-15-0119、MAB-15-0109、MAB-15-0097、MAB-15-0135、MAB-15-0133、MAB-15-0107、MAB-15-0128、MAB-15-0116、MAB-16-0004、MAB-16-0009、MAB-16-0028、MAB-16-0031、MAB-16-0043、MAB-16-0049、MAB-16-0045、MAB-16-0040、MAB-16-0036、MAB-16-0046、MAB-16-0030、MAB-16-0021、MAB-16-0019、MAB-16-0015、MAB-16-0027、MAB-16-0048、MAB-16-0041、MAB-16-0149、MAB-16-0150、MAB-16-0531。

在一个实施方案中，与IL-1R3特异性结合的抗体或其含有所述抗体的足以赋予IL-1R3结合特异性的至少一部分的片段或衍生物包含SEQ ID NO:1和35、或SEQ ID NO:2和36。根据本发明的抗体根据还可以包含SEQ ID NO:3和37、或SEQ ID NO:4和38、或SEQ IDNO:5和39、或SEQ ID NO:6和40、或SEQ ID NO:7和41、或SEQ ID NO:8和42、或SEQ ID NO:9和43、或SEQ ID NO:10和44、或SEQ ID NO:11和45、或SEQ ID NO:12和46。可选地，根据本发明的抗体包含SEQ ID NO:13和47、或SEQ ID NO:14和48、或SEQ ID NO:15和49、或SEQ IDNO:16和50、或SEQ ID NO:17和51、或SEQ ID NO:18和52、或SEQ ID NO:19和53、或SEQ IDNO:20和54、或SEQ ID NO:21和55、或SEQ ID NO:22和56、或SEQ ID NO:23和57、或SEQ IDNO:24和58、或SEQ ID NO:25和59、或SEQ ID NO:26和60、或SEQ ID NO:27和61。

可选地，根据本发明的抗体包含SEQ ID NO:28和62、或SEQ ID NO:29和63、或SEQID NO:30和64、或SEQ ID NO:31和65、或SEQ ID NO:32和66、或SEQ ID NO:33和67、或SEQID NO:34和68、或SEQ ID NO:173和54、或SEQ ID NO:28和174、或SEQ ID NO:176和177。

更优选地，与IL-1R3特异性结合的抗体或其含有所述抗体的足以赋予IL-1R3结合特异性的至少一部分的片段或衍生物包含恒定区序列CR-H(SEQ ID NO:172)和CR-L(SEQID NO:171)和选自SEQ ID NO:1至34和173和176的组的VH区和选自SEQ ID NO:35至68和174和177的组的VL区。

与IL-1R3特异性结合的抗体或其含有所述抗体的足以赋予IL-1R3结合特异性的至少一部分的片段或衍生物还包含恒定区序列CR-H(SEQ ID NO:172)和CR-L(SEQ ID NO:171)和包含选自由以下组成的组的抗体的各自的CDR1、CDR2和CDR3区的VH区和VL区：MAB-15-0139、MAB-15-0106、MAB-15-0108、MAB-15-0110、MAB-15-0117、MAB-15-0121、MAB-15-0140、MAB-15-0115、MAB-15-0125、MAB-15-0119、MAB-15-0109、MAB-15-0097、MAB-15-0135、MAB-15-0133、MAB-15-0107、MAB-15-0128、MAB-15-0116、MAB-16-0004、MAB-16-0009、MAB-16-0028、MAB-16-0031、MAB-16-0043、MAB-16-0049、MAB-16-0045、MAB-16-0040、MAB-16-0036、MAB-16-0046、MAB-16-0030、MAB-16-0021、MAB-16-0019、MAB-16-0015、MAB-16-0027、MAB-16-0048、MAB-16-0041、MAB-16-0149和MAB-16-150、和MAB-16-0531。

根据本发明抗体的优选治疗性应用，本发明抗体的效应子功能(如ADCC)减少或缺乏。与现有技术的其他抗体如CAN04(例如WO 2015/132602A1)相反，本发明的抗体避免不想要的免疫细胞耗尽。

优选地，根据本发明的抗体显示Fcγ-受体信号传导减少或显示无Fcγ-受体信号传导。

因此，本发明还涉及抗体，其中所述抗体至少包含人IgG1 Fc区的氨基酸置换L234A和L235A或人IgG4 Fc区的S228P和L235E或功能性等同突变。

在根据本发明的一个实施方案中，抗体是人源化IgG1_LALA抗体。

在另一个实施方案中，抗体是小鼠IgG2a_LALA抗体。

在根据本发明的一个实施方案中，抗体抑制IL-1R3诱导的NFkB活性。

在另一个实施方案中，与IL-1R3特异性结合的抗体或其含有所述抗体的足以赋予IL-1R3结合特异性的至少一部分的片段或衍生物结合与选自以下抗体的组的抗体相同的表位：MAB-15-0139、MAB-15-0106、MAB-15-0108、MAB-15-0110、MAB-15-0117、MAB-15-0121、MAB-15-0140、MAB-15-0115、MAB-15-0125、MAB-15-0119、MAB-15-0109、MAB-15-0097、MAB-15-0135、MAB-15-0133、MAB-15-0107、MAB-15-0128、MAB-15-0116、MAB-16-0004、MAB-16-0009、MAB-16-0028、MAB-16-0031、MAB-16-0043、MAB-16-0049、MAB-16-0045、MAB-16-0040、MAB-16-0036、MAB-16-0046、MAB-16-0030、MAB-16-0021、MAB-16-0019、MAB-16-0015、MAB-16-0027、MAB-16-0048、MAB-16-0041、MAB-16-0149、MAB-16-150和MAB-16-0531。

根据本发明的抗体具有以下优点：当与它们的靶标结合时是非常强力的。它们显示出对其抗原IL1R3的强烈结合能力，但对其他受体没有这种能力。在生物化学酶联免疫吸附测定(ELISA)和细胞结合分析(流式细胞术)中研究并且在图2、图6和图7中例举抗体的结合特性。

根据本发明的优选抗体显示小于30ng/ml、优选地小于20ng/ml的半数最大有效浓度(EC50)。在其他实施方案中，它们显示小于15ng/ml、10ng/ml或小于5ng/ml的EC50。在生物化学ELISA实验中，根据本发明的优选抗体显示16.3ng/ml的EC50(参阅图7)。

根据本发明的抗体还显示在以下实验中与其抗原非常强烈地结合，其中不同细胞系中表达人IL1R3，同时抗体不结合不表达人IL1R3的细胞系(例如NIH-3T3，参阅图5)。

在IL1R3高表达细胞系SK-MEL-30(参阅图6，实施例4)中，抗体显示优选小于400ng/ml、更优选小于350ng/ml或小于310ng/ml的EC50。

在本发明涵盖的一个优选实施方案中，根据本发明的抗体抑制IL-1α刺激的和/或IL-1β刺激的NFkB活性。图3、图4和图8例示了本发明抗体的强力抑制活性。

在一个实施方案中，与IL-1R3特异性结合的抗体或其含有所述抗体的足以赋予IL-1R3结合特异性的至少一部分的片段或衍生物抑制IL-1α刺激的NFkB活性。

在另一个实施方案中，与IL-1R3特异性结合的抗体或其含有所述抗体的足以赋予IL-1R3结合特异性的至少一部分的片段或衍生物抑制IL-1β刺激的NFkB活性。

优选在HEK293T/17-FR细胞中，根据本发明的抗体以小于100ng/ml、优选地小于95ng/ml、85ng/ml、75ng/ml、65ng/ml、55ng/ml、45ng/ml、35ng/ml、25ng/ml、20ng/ml和最优选地小于15ng/ml的EC50抑制IL-1β刺激的NFkB活性(例如参阅图3)。

进一步优选在A549-NFkB-RE-Luc细胞中，根据本发明的抗体以小于1000ng/ml、优选地小于500ng/ml、300ng/ml、200ng/ml、和最优选小于100ng/ml的EC50抑制IL-1α刺激的NFkB活性(例如参阅图8)。

进一步优选在A549-NFkB-RE-Luc细胞中，根据本发明的抗体以小于700ng/ml、优选地小于600ng/ml、300ng/ml、200ng/ml、100ng/ml和最优选小于50ng/ml的EC50抑制IL-1β刺激的NFkB活性(例如参阅图8)。

本发明还涵盖抗体，其中所述抗体抑制通过选自由IL-1β/IL-1R1/IL-1RAcP、IL-1α/IL-1R1/IL-1RAcP、IL-33/ST2/IL-1RAcP和/或IL-36/Il-36R/IL-1RAcP组成的组的复合物刺激的NFkB活性。

另外，相对于无根据本发明的所述抗体的相同测定，本发明的抗体以10μg/mL的浓度(兔IgG同种型具有150KD的分子量)将0.1ng/ml人IL-1α、人IL-1β、IL-33和/或IL-36(关于分子量，参见UniProtKB/Swiss-Prot)刺激的A549-NFkB-RE-Luc细胞裂解物(Steady-Glo^TM萤光素酶测定体系；Promega；目录号E2510)中的NFkB表达抑制50％以上、优选地70％以上、优选地80％以上、优选地90％以上，更优选地95％以上。

在一个实施方案中，根据本发明的抗体分别抑制HEK 293T/17细胞(用NF-kB报告基因控制下的萤光素酶转染的HEK 293T/17-FR细胞))、HEK-Blue-IL33^TM细胞(Invivogen)或HEK-293/17-IF细胞中IL-1α、IL-1β、IL-33和/或IL-36刺激的萤光素酶活性。

优选地，将所述IL-1α刺激的萤光素酶活性抑制达50％以上、优选地达70％以上、优选地达80％以上、优选地达90％以上以及更优选地达95％以上。优选地，将所述IL-1α刺激的萤光素酶活性抑制达95％。

优选地，将所述IL-1β刺激的萤光素酶活性抑制达50％以上、优选地达70％以上、优选地达80％以上、优选地达90％以上以及更优选地达95％以上。优选地，将所述IL-1β刺激的萤光素酶活性抑制达95％。

优选地，将所述IL-33刺激的萤光素酶活性抑制达50％以上、优选地达70％以上、优选地达80％以上、优选地达90％以上以及更优选地达95％以上。优选地，将所述IL-33刺激的萤光素酶活性抑制达95％。

优选地，将所述IL-36刺激的萤光素酶活性抑制达50％以上、优选地达70％以上、优选地达80％以上、优选地达90％以上以及更优选地达95％以上。优选地，将所述IL-36刺激的萤光素酶活性抑制达95％。

另外，根据本发明的抗体抑制人IL-1α和IL-1b介导的IL-6释放并且比多克隆抗体优越。图9中显示并例示这种强力抑制活性。在这些实验中，EC50值显示，人源化抗IL-1R3IgG1-LALA抗体比山羊抗人IL1-R3多克隆抗体AF676(R&D Systems)优越。在本发明的优选实施方案中，抗体以小于2500ng/ml、优选地小于1500ng/ml、小于1000ng/ml、小于600ng/ml、小于400ng/ml、或小于300ng/ml的EC50抑制人IL-a介导的IL-6释放。还优选本发明的抗体以小于500ng/ml、优选地小于400ng/ml、小于300ng/ml、小于200ng/ml或小于150ng/ml的EC50抑制人IL-b介导的IL-6释放。

在根据本发明的另一个实施方案中，抗体抑制人IL-33介导的NfkB信号传导。图10例示了所选择的本发明抗体在HEK-Blue-IL33^TM细胞中的抑制性活性并且展示了超过多克隆抗体的优越性。在本发明的优选实施方案中，抗体以小于20000ng/ml、优选地小于18000ng/ml、小于3000ng/ml、小于1000ng/ml、小于500ng/ml或小于400ng/ml的EC50抑制IL-33介导的NfkB信号传导。

本发明的抗体还可以抑制人IL-36介导的NfkB信号传导(图11)。优选地，它们在小于100ng/ml、优选地在小于50ng/ml、小于40ng/ml、小于30ng/ml、小于20ng/ml或小于15ng/ml的EC50抑制IL-36介导的NfkB信号传导。

令人震惊地，发明人发现根据本发明的抗体抑制由各种不同刺激物介导的细胞因子释放。例如，抗体抑制由IL-1α、IL-33和IL-36α介导的细胞因子释放。图12中显示所选择抗体的结果。例如，抗体MAB-16-0030抑制全部三种刺激物介导的细胞因子释放，而IL-1Rα仅影响IL-1α介导的细胞因子释放。

通过多种细胞因子同时或接续作用，维持或建立与急性或慢性炎症相关的疾病。早期“警告”如IL-1α和IL-33可以触发其他细胞因子(包括IL-1b和IL-36)建立强烈炎性环境。因此，伴同抑制由多种细胞因子介导的信号传导产生有效的炎症过程控制。本发明抗体的关键方面在于，它们通过阻断IL1R3受体抑制多种细胞因子信号传导。

抗体与免疫细胞的结合可以例如通过直接诱导凋亡信号传导途径、刺激过多细胞因子释放或抗体依赖的细胞毒性(ADCC)，导致细胞耗尽和有害作用。

重要地，根据本发明的抗体不影响免疫细胞的活力。例如，它们不影响人外周血单核细胞(PBMC)的活力并且它们不在PBMC中诱导IL-6释放(参阅图13)。

根据本发明的抗体不仅在如上文所述的不同细胞系中，还在来自供体的PMBC或全血细胞中抑制细胞因子释放的功能性激活。它们抑制不同特异性或复杂刺激物介导的细胞因子释放。例如，它们抑制用LPS、热灭活的白假丝酵母(Candida albicans)、IL-12/IL-33或抗CD3/CD28抗体刺激的PBMC活化(参阅图14和图15)。

另外，在一个实施方案中，根据本发明的抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体能够在混合淋巴细胞反应中抑制IFNg、IL-6、TNF-α、IL-13、IL-17和IL-10的释放(参阅图16)。

本发明的方法还涵盖向患者以药物组合物的形式施用药学上的有效量的根据本发明的抗体或其衍生物或片段。

这种药物组合物可以包含药学上可接受的载体和治疗有效量的与IL-1R3特异性结合的本发明抗体或其含有所述抗体的足以赋予IL-1R3结合特异性的至少一部分的片段或衍生物。

如本文所用，“药学上的载体”包括生理上相容的任何和全部溶剂、分散介质、包衣、抗菌药和抗真菌药、等渗剂和吸收延迟剂等。优选地，载体适于静脉内、肌内、皮下、肠胃外、脊髓或表皮施用(例如，通过注射或输注)。

可以通过本领域已知的多种方法施用本发明的组合物。如熟练技术人员将理解的，施用的途径和/或模式将取决于所想要的结果而变动。为了通过某些施用途径施用本发明的化合物，可能需要将混合物用防止其失活的材料包衣或随这种材料共施用。例如，该化合物可以在适宜的载体例如脂质体或稀释剂中施用至受试者。药学上可接受的稀释剂包括盐水和缓冲水溶液。药学上的载体包括无菌水溶液或分散体和用于现场制备无菌可注射溶液剂或分散剂的无菌粉末。使用用于药学活性物质的此类介质和试剂是本领域已知的。

如本文所用的短语“肠胃外施用”和“肠胃外方式施用”意指除了肠内和局部施用之外的施用模式，通常通过注射施用，并且包括，而不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、角质层下、关节内、被膜下、蛛网膜下、椎管内、硬膜外和胸骨内注射和输注。

这些组合物也可以含有佐剂如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可以通过上文的消毒方法和通过纳入多种抗菌剂和抗真菌剂，例如，尼泊金酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等确保防止存在微生物。还可期望将等渗剂如糖、氯化钠等纳入所述组合物。此外，可以通过纳入延迟吸收的物质如单硬脂酸铝和明胶引起可注射药物形式的延长吸收。无论选择何种施用途径，均通过本领域技术人员已知的常规方法，将本发明的化合物(其可以按适宜水合形式使用)和/或本发明的药物组合物配制成药学上可接受的剂型。可改变本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平，以获得活性成分的下述量，所述量就具体患者、组合物和施用方式而言可以有效达到所希望的治疗反应，并同时对患者无毒性。选择的剂量水平将取决于多种药物代谢动力学因素，包括所用的本发明特定组合物的活性、施用途径、施用时间、正在使用的化合物的***速率、治疗的持续期、与所用特定组合物联合使用的其他药物、化合物和/或材料、正在接受治疗的患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康和既往病史等医学领域熟知的因素。

在另一方面，本发明涉及与小鼠IL-1R3受体特异性结合的抗体或其片段或衍生物，其中抗体包含重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述重链可变(VH)区与SEQ ID NO:176的VH区至少90％相同；所述轻链可变(VL)区与SEQ ID NO:177的VL区至少90％相同。

优选地，所述抗体包含重链可变区(VH)序列，所述序列与选自根据本发明的VH序列的组的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。

在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列含有置换(例如，保守性置换)、***或删除，同时根据本发明，抗体保留与相应抗原特异性结合的能力。

在本发明的另一方面，所述抗体包含轻链可变区(VL)序列，所述序列与选自根据本发明的VL序列的组的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。

在某些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列含有置换(例如，保守性置换)、***或删除，同时根据本发明，抗体保留与相应抗原特异性结合的能力。

优选与小鼠IL-1R3受体特异性结合的所述抗体或其片段或衍生物具有其减少的效应子功能或缺乏其效应子功能。

优选地，本发明的抗体显示Fcγ-受体信号传导减少或显示无Fcγ-受体信号传导。进一步优选它们不诱导ADCC。

在一个实施方案中，与小鼠IL-1R3受体特异性结合的本发明抗体或其片段或衍生物是其FC部分中具有突变L234A和L235A(根据EU编号索引的氨基酸位置)的小鼠IgG2a。

本发明的另一方面涉及用于临床前研究中的与小鼠IL-1R3受体特异性结合的抗体或其片段或衍生物。这类研究可以在动物模型中、优选地在鼠疾病模型中实施。这类模型系统包括但不限于尿酸单钠晶体(MSU)诱导的小鼠腹膜炎模型、血清转移诱导的类风湿性关节炎、胶原蛋白诱导的关节炎、抗体诱导的关节炎、胶原蛋白抗体诱导的关节炎、K/BxN抗体转移关节炎、咪喹莫特诱导的炎性皮肤病/银屑病、获得性大疱性表皮松解模型、硫代乙醇酸盐诱导的腹膜炎、免疫复合物诱导的腹膜炎、博来霉素诱导的肺纤维化、异种移植性银屑病、烟草烟雾诱导的肺部炎症COPD、气管滴注弹性蛋白酶COPD、荧光素异硫氰酸酯(FITC)诱导的肺损伤/纤维化、辐射诱导的纤维化、硅石诱导的肺纤维化、石棉纤维诱导的肺纤维化、DSS诱导的结肠炎、三硝基苯磺酸诱导的结肠炎、噁唑酮诱导的结肠炎、过继转移性结肠炎、屋尘螨(HDM)、蟑螂或链格孢(Alternaria)交替诱导的哮喘、卵清蛋白诱导的哮喘、木瓜蛋白酶诱导的肺部炎症、表皮致敏特应性皮炎模型(卵清蛋白、屋尘螨(HDM)、半抗原、金黄色葡萄球菌(S.aureus))、使用免疫受损或人源化小鼠的异种移植物或患者衍生的异体移植肿瘤生长模型、移植的同基因肿瘤、化学诱导的皮肤肿瘤模型、DSS诱导的结直肠肿瘤模型。

优选地，抗体用于尿酸单钠晶体(MSU)诱导的小鼠腹膜炎模型中。

实施例

以下实施例结合图和表用来说明本发明。

实施例1：人IL-1R3生物化学ELISA

分析原理：

将NUNC Maxisorp384孔微量滴定板用加Fc标签的人IL-1R3包被。在封闭过程后，来自B细胞上清液的特异性抗体与抗原结合并且随后用POD标记的抗体检测。样品在1:2稀释时试验。

材料：

平板：384孔NUNC Maxisorp平板；目录号464718

蛋白质：加Fc标签的人IL-1R3(浓度1.5mg/ml；分析浓度0.5μg/mL)

标准Ab：P013-02(浓度1mg/ml；起始分析浓度2μg/mL)

检测Ab：抗兔IgG、过氧化物酶连接的物种特异性完整抗体(来自驴)(ECL)；GE；目录号NA9340；分析稀释度：1:5000

PBS：盒中的缓冲液，预混PBS缓冲液，10x；Roche Applied Sciences；目录号11666789001

BSA：来自牛血清的牛血清白蛋白级分V；Roche Applied Sciences；目录号10735086001

Tween 20：Tween 20；Carl Roth；目录号9127.2

TMB：TMB溶液；Life Technologies；目录号SB02

HCl：1M Titripur盐酸；Merck；目录号1090571000

ELISA缓冲液：PBS，0.5％BSA，0.05％Tween

洗涤缓冲液：PBS，0.1％Tween

封闭缓冲液：PBS，2％BSA，0.05％Tween

方法：

1.添加PBS中12.5μL加Fc标签的人IL-1R3(0.5μg/ml)至384孔NUNC Maxisorp平板并且在室温温育1小时。

2.用90μl洗涤缓冲液洗涤3次。

3.每个孔添加90μL封闭缓冲液并且在室温温育1小时。

4.用洗涤缓冲液洗涤3次。

5.添加Elisa缓冲液中的12.5μL抗体并且在室温温育1小时。

6.用洗涤缓冲液洗涤3次。

7.添加Elisa缓冲液中的12.5μL 1:5000POD-抗体并且在室温温育1小时。

8.用洗涤缓冲液洗涤6次。

9.添加15μL TMB。

10.充分显色后添加15μL HCl。

11.在450nm/620nm读取吸光度。

实施例2：抑制h-IL-1R3-受体的h-IL-1R3特异性抗体通过萤光素酶报告实验的表征

分析原理：

在聚-D-赖氨酸-细胞培养平板中接种表达NF-kB-RE萤火虫萤光素酶报告分子的293T/17-FR细胞。在IL-1b刺激后，使用Steady-Glo萤光素酶分析试剂盒，对293T/17-FR裂解物试验激活的NF-kB。含有功能抗体的上清液与hIL-1R3结合并抑制NF-kB激活，这以低信号显示。

材料：

平板：细胞平板：384孔PDL Costar细胞培养平板；目录号3844

分析平板：384孔lumitrac白色-平板；Corning；目录号3572

细胞：293T/17-FR；分析浓度250,000个细胞/ml

蛋白质：IL-1b(浓度0.03mg/ml；分析浓度115pg/ml；工作浓度230pg/ml)

标准Ab：P013_06(浓度0.2mg/ml；起始工作浓度6μg/ml)

试剂盒：Steady-Glo萤光素酶测定体系；Promega；目录号E2510

细胞培养基：DMEM培养基；PAN Biotech；目录号P04-04510

FCS：胎牛血清，HyClone；Thermo；目录号St30070.03293T/17-FR培养基：DMEM培养基，10％FCS，(+20μg/ml潮霉素B)

方法：

1.细胞培养物程序：

使用胰蛋白酶/EDTA(在室温仅温育30秒)，将汇合的293T/17-FR细胞每周一(接种(seed out)：5x10⁶个细胞/T175瓶)和每周五(接种：3x10⁶个细胞/T175瓶)分瓶。

2.将25μl DMEM+10％FCS中的细胞(0.25x10⁶个细胞/ml)接种至384孔PDL平板(Corning目录号#3844)并且在37℃和5％CO₂下温育过夜。

3.抽吸培养基并且添加12.5μL条件培养基中的抗体或仅条件培养基并且在37℃和5％CO₂下温育30分钟(程序：3次抽吸和样品转移)

4.添加DMEM+10％FCS中的12.5μL IL-1b并且在37℃和5％CO₂下温育5小时。

5.使培养的细胞对室温平衡10分钟。

6.添加25μl Steady-Glo试剂并用移液器混合几次

7.等待5分钟，之后转移45μl上清液至384孔lumitrac白色平板(Corning目录号3572)

8.Tecan读数仪中测量发光：积分时间：0.5秒

实施例3：IL-1(α/β)刺激后A549-NFκB-RE-Luc稳定转染的细胞的NFκB表达的抑制

分析原理：

将A549-NFκB-RE-Luc稳定转染的细胞(Signosis)吸至384孔平板并温育过夜。在第2天，允许抗IL1R3抗体与结合A549-NFkB-RE-Luc稳定转染的细胞，随后通过添加IL-1(α或β)刺激这些细胞。这导致萤光素酶基因转录，原因在于NFκB信号传导途径激活，并且可以通过裂解细胞和添加萤光素予以测量。

试验抗体是否可以抑制NFkB途径的激活并因此降低发光信号。

材料：

平板：无菌384孔低边白色平底聚苯乙烯TC处理的微量平板；Corning；目录号3570

蛋白质：IL-1α(P026_09)；重组人IL-1α/IL-1F1；10μg/mL；R&D Systems；目录号200-LA-002

IL-1β(P026_10)；重组人IL-1β/IL-1F2；25μg/mL；R&D Systems；目录号200-LB-005

标准Ab：MAB-15-0115；MAB Discovery GmbH；2.51mg/ml；工作浓度10μg/mL

细胞：A549-NFκB-RE-Luc稳定转染的细胞；Signosis；目录号SL-0014

培养基：DMEM；PAN；目录号P04-04510

FCS：南非低IgG胎牛血清；PAN；目录号1552-P120909

青/链霉素：10,000U青霉素/ml；10mg链霉素/ml；PAN Biotech；目录号P06-07100

脱离剂：胰蛋白酶-EDTA 1x；PAN；目录号P10-023100(T175为4mL/T75为2mL；37℃约8分钟)

细胞培养基：DMEM，10％FCS，1％青/链霉素检测试剂盒：Steady-Glo^TM萤光素酶测定体系；Promega；目录号E2510

方法：

1.在细胞培养基中培养A549-NFκB-RE-Luc稳定转染的细胞(1.7E+04个细胞/cm²，持续3天；2.28E+04个细胞/cm²，持续2天)。切勿超过10代！

2.将每孔25μL培养基的40,000个A549-NFκB-RE-Luc稳定转染的细胞(浓度＝1.6x10⁶个细胞/mL)铺展到处理的白色平底384孔细胞培养平板。

在37℃/5％CO₂下温育过夜。

3.使用CyBio抽吸机器人(程序：文件夹P026/NFκB中的“培养基移除和样品转移”)抽吸平板中的培养基并且在平板中添加10μL样品或标准品。在37℃/5％CO₂下温育1小时。

4.将培养基中的10μL IL-1(α或β)添加至平板使用CyBio抽吸机器人(程序：文件夹P026/NFκB中的“从储库转移”)(工作浓度：0.2ng/mL；分析浓度：0.1ng/mL)并且在37℃/5％CO₂下温育5小时。

在执行步骤4之前，根据Steady-Glo方案溶解Steady-Glo底物于Steady-Glo缓冲液中并且平衡该溶液与分析平板至室温。

5.添加20μL Steady-Glo混合物，彻底地混合以保证恰当溶解细胞。在室温温育10分钟

6.使用设置成500毫秒积分时间的微量平板读数仪(程序：Lumineszenz-384)，测定每个孔的相对发光单位。

实施例4：细胞结合分析

在DMEM+10％FCS中培养A549细胞和NIH-3T3细胞。在DMEM+15％FCS中培养HEK-293细胞并在RPMI+10％FBS中培养SK-MEL-30。将细胞使用Accumax(Sigma)收获，用PBS洗涤并重悬于染液缓冲液(BD Pharmingen)中。将抗IL-1R3抗体在染色缓冲液中以10μg/mL的浓度与细胞在4℃温育30分钟。对于EC50 SK-MEL-30细胞结合分析，将细胞以始于20μg/mL的1:2稀释系列中温育。将细胞用染色缓冲液洗涤并且与Alexa-488标记的山羊抗人第二抗体(Dianova)在4℃温育30分钟。将细胞用染色缓冲液洗涤并重悬于含有1:100稀释的DRAQ7(Abcam)死细胞染液的缓冲液中。使用BD Accuri C6 Sampler流式细胞仪分析细胞。使用Excel(Microsoft)和XLfit(IDBS)进行曲线拟合和EC50计算。

实施例5：人IL-1R3生物化学ELISA

将Nunc384孔Maxisorp平板用PBS中浓度0.25μg/mL的重组加Fc标签的hIL-1R3(Ser21-Glu359)在室温包被60分钟。将平板用洗涤缓冲液(PBS 0.1％Tween)洗涤三次并且在室温用PBS、0.2％BSA、0.05％Tween封闭60分钟。用洗涤缓冲液洗涤三次后，添加ELISA缓冲液(PBS，0.5％BSA，0.05％Tween)中浓度范围6至0.03μg/mL的抗体(1:3稀释系列)并且在室温温育60分钟。将平板用洗涤缓冲液洗涤三次，随后与ELISA缓冲液中稀释度1:5000的抗人IgG过氧化物酶连接的物种特异性F(ab)2片段(山羊，AbD Serotec)在室温温育60分钟。将平板用ELISA洗涤缓冲液洗涤六次，之后添加TMB底物溶液(Invitrogen，15μL/孔)。在温育5分钟后，添加终止溶液(1M HCl、15μL/孔)并且使用Tecan M1000平板读数仪测量吸光度(450nm/620nm)。使用Excel(Microsoft)和XLfit(IDBS)进行曲线拟合和EC50计算。

实施例6：IL-1α和IL-1β功能性中和测定

将A-549-NFκB-RE-Luc(Signosis)在DMEM，10％FCS，1％青/链霉素中培养5天，之后，将它们在组织培养处理的384孔白色平底聚苯乙烯微量平板(Corning)中按25μL培养基中40,000个细胞/孔的细胞密度接种。将细胞在37℃/5％CO₂下温育过夜。通过抽吸移除培养基并且以10μL培养基体积中的多种浓度添加单克隆或多克隆(山羊抗人IL-1R3，AF676，R&D Systems)抗体并且在37℃/5％CO₂下温育60分钟。将重组人IL-1α或IL-1β(R&DSystems)蛋白在10μL培养基中添加至终浓度0.1ng/ml并且将平板在37℃/5％CO₂下温育5小时。将20μL Steady-Glo^TM(Promega)溶液添加至每个孔，彻底混合并且将平板在室温温育10分钟，之后使用Tecan M1000平板读数仪，测量发光。使用Excel(Microsoft)和XLfit(IDBS)进行曲线拟合和EC50计算。

实施例7：IL-1α和IL-1β功能性中和测定–A-549IL6释放测定

将A549细胞以25μL培养基中6,000个细胞/孔的密度接种在培养处理的384孔透明细胞平板(Corning)中DMEM、10％FCS、1％青/链霉素内。将细胞在37℃/5％CO₂下温育过夜。通过抽吸移除培养基并且以12.5μL培养基体积中的多种浓度添加单克隆或多克隆(山羊抗人IL-1R3，AF676，R&D Systems)抗体并且在37℃/5％CO₂下温育三小时。将重组人IL-1α或IL-1β(R&D Systems)蛋白在12.5μL培养基中添加至终浓度0.1ng/ml并且将平板在37℃/5％CO₂下温育48小时。使用DuoSet人IL-6ELISA试剂盒(R&D Systems，目录号DY206-05)，根据生产商的说明测量细胞上清液中的分泌型人IL-6水平。使用Excel(Microsoft)和XLfit(IDBS)进行曲线拟合和EC50计算。

实施例8：IL-33功能性中和测定

将HEK-Blue^TM IL-33细胞(InvivoGen)在DMEM，10％FCS中培养5天，之后，将它们在细胞培养处理的384孔透明平底微量平板(Corning)按15μl培养基中25,000个细胞/孔的细胞密度接种。将多种浓度的单克隆或多克隆(山羊抗人IL-1R3，AF676，R&D Systems)抗体在5μl培养基体积中添加并且将平板在37℃/5％CO₂下温育60分钟。将重组人IL-33(R&DSystems)蛋白在5μl培养基中添加至终浓度5ng/ml并且将平板在37℃/5％CO₂下温育过夜。将5μL细胞上清液转移至含有20μl 2xQUANTI-Blue试剂(InvivoGen)的透明平底聚苯乙烯NBS^TM 微量平板(Corning)。将平板在37℃温育45分钟并且使用Tecan M1000平板读数仪，在655nm测量光密度。使用Excel(Microsoft)和XLfit(IDBS)进行曲线拟合和EC50计算。

实施例9：IL-36功能性中和测定

将HEK293/17-IF细胞(MAB Discovery GmbH)在DMEM、10％FCS、20μg/mL潮霉素中培养5天，之后，将它们在细胞培养处理的384孔白色平底平板(Corning)按20μl培养基中30,000个细胞/孔的细胞密度接种。将细胞在37℃/5％CO₂下温育过夜。通过抽吸移除培养基并且将多种浓度的单克隆或多克隆(山羊抗人IL-1R3，AF676，R&D Systems)抗体在10μL培养基体积中添加。将平板在37℃/5％CO₂下温育60分钟。将重组人IL-36g(R&D Systems)蛋白在10μL培养基中添加至终浓度15ng/ml并且将平板在37℃/5％CO₂下温育5小时。将20μL Steady-Glo^TM(Promega)溶液添加至每个孔，彻底混合并且将平板在室温温育10分钟，之后使用Tecan M1000平板读数仪，读取发光。使用Excel(Microsoft)和XLfit(IDBS)进行曲线拟合和EC50计算。

实施例10：中和IL-1α、IL-33和IL-36α

对三种不同的细胞系用IL-1α、IL-33或IL-36α试验抗IL-1R3抗体的功能，以确定对涉及三种依赖于IL-1R3进行信号传导的IL-1受体(IL-1R1、-R4或-R6)的信号传导途径的影响。

用IL-1α刺激人肺上皮细胞系A549作为IL-1依赖性疾病(如自身炎性疾病)的模型。将该细胞系在T75瓶中的完整F-12K培养基(10％FCS、1％青/链霉素)里培养(37℃、5％CO₂)并且平均2次/周分瓶，分析前传代不超过15次。将A549细胞接种(50,000/孔)在96平底平板中，静置3小时，之后与MAB-16-0030(20μg/mL–1μg/mL)或IL-1Rα(10μg/mL)预温育1小时。随后用重组人IL-1α(50pg/ml，Peprotech)刺激细胞24小时，之后收获上清液并分析IL-6产生(Duoset ELISA,RnD Systems)。

对一种人肥大细胞系(HMC-1)研究依赖IL-33的诱导IL-8产生。将该细胞系在T75瓶中的完整Iscove改良Dulbeccos培养基(IMDM，10％FCS，1％青/链霉素)里培养(37℃、5％CO₂)并且平均3次/周分瓶，分析前不具有高于2*10⁶/mL的细胞密度，也不传代超过15次。将HMC-1细胞接种(30,000/孔)在96平底平板中，静置3小时，之后与MAB-16-0030(20μg/mL–1μg/mL)或IL-1Rα(10μg/mL)预温育1小时。随后用重组人IL-33(20ng/mL，RnD systems)刺激细胞24小时，之后收获上清液并分析IL-8产生(Duoset ELISA,RnD Systems)。

使用人角蛋白细胞系(HaCaT)研究对IL-36信号传导的影响。将该细胞系在T75瓶中的完整DMEM(10％FCS、1％青/链霉素)里培养(37℃、5％CO₂)并且平均3次/周分瓶，分析前传代不超过15次。将HaCaT细胞接种(50,000/孔)在96平底平板中，静置3小时，之后与MAB-16-0030(20μg/mL–1μg/mL)或IL-1Rα(10μg/mL)预温育1小时。随后用重组人IL-36α(50ng/mL,RnD systems)刺激细胞24小时，之后收获上清液并分析IL-8产生(DuosetELISA,RnD Systems)。

实施例11：PBMC的活力和IL-6释放

使用常规MTT还原测定，试验抗hIL-1R3抗体MAB-16-0030对来自三位健康供体的未受刺激的PBMC(500,000/孔)的活力的影响。简而言之，将PBMC(200μL)与培养基单独温育或MAB-16-0030(20μg/mL)温育。在24小时、3天和5天后，将PBMC与MTT(20μL)温育2小时，之后，在ELISA读数仪上在570nm测量吸光度。使用吸光度和转化MTT的活细胞之间的已知线性度，使用单独培养基作为设定为100％的对照，计算活细胞数目。在MTT分析的相同日，收获在相同条件下温育并来自相同供体的源自PBMC的上清液并且随后分析IL-6产生(DuosetELISA,RnD systems)，以评价单独MAB-16-0030的任何可能的刺激效应。

实施例12：功能性阻断PBMC

从健康供体新鲜分离的PBMC用来评价MAB-16-0030对采用多样抗原刺激的人细胞的影响。对于全部刺激物，均使用在总体积200μL中刺激的500,000个PBMC/孔实施实验。将细胞接种并且与单独的培养基、MAB-16-0030(20–0.1μg/mL)或IL-1Rα(10μg/mL)温育1小时，之后刺激。使用以下刺激物；LPS(10ng/mL，24小时，无FCS的RPMI)、抗人CD3/CD28(1.25μg/mL；0.5μg/mL(eBioscience)3天，RPMI 10％FCS)、IL-12/-33(2ng/mL；20ng/mL(Peprotech；RnD Systems))、3天、RPMI 10％FCS)或热灭活的白假丝酵母(0.5*10⁶/mL，5天，RPMI 10％FCS)。在刺激后，收获上清液并且根据生产商的方案，使用Duoset ELISA(RnDSystems)测定细胞因子产生。

实施例13：功能性阻断全血中的免疫细胞

热灭活的白假丝酵母用来刺激全血。在微量离心管中分配从健康供体新鲜收获的血液(EDTA管)(250μL/管)并且将其与单独的培养基(RPMI，无FCS)、MAB-16-0030(20–0.1μg/mL)或IL-1Rα(10μg/mL)预温育1小时，之后用白假丝酵母(0.5*10⁶/mL)刺激至终体积1mL。在温育24小时(37℃，5％CO₂)后，收获上清液并通过ELISA(Duoset，RnD Systems)分析细胞因子产生。

实施例14：混合淋巴细胞反应(MLR)

来自健康的非匹配供体的PBMC与单独的培养基，MAB-16-0030(20–1μg/mL)或IL-1Rα(10μg/mL)按1:1比率(250,000个/供体)混合并且温育5天(RPMI，10％FCS)。根据生产商的方案，使用Quansys多路复用平台分析细胞因子产生。

实施例15：NFkB萤光素酶基因报告基因检测

将NFkB萤光素酶报告子NIH3T3细胞(Signosis)按每孔25μL DMEM、10％FCS、1％青/链霉素培养基20,000个细胞(浓度＝0.8x10⁶个细胞/mL)接种在细胞培养处理的384孔白色平底平板中。将细胞在37℃/5％CO₂下温育过夜。吸出培养基并将12.5μL含MAB-16-0531的抗体溶液添加至各种浓度的细胞。在37℃/5％CO₂下温育1小时后，在培养基中添加12.5μL小鼠IL-1β至终浓度50pg/ml。将细胞在37℃/5％CO₂下温育5小时。将25μl Steady-Glo^TM(Promega)溶液添加至每个孔，彻底混合并且将平板在室温温育10分钟，之后使用Tecan M1000平板读数仪，测量发光。通过使用Excel(Microsoft)和XLfit(IDBS)获得曲线拟合和EC50计算。

实施例16：NIH-3T3 IL6-释放测定

将NIH 3T3细胞按每孔15μL DMEM+1％FCS培养基12,500个细胞(浓度＝0.83x10⁶个细胞/mL)接种在细胞培养处理的384孔平底平板中。将细胞在37℃/5％CO₂下温育2小时。在培养基中添加10μL抗体MAB-16-0531至各种浓度的细胞。在37℃/5％CO₂下温育1.5小时后，在培养基中添加25μL人IL-1β至终浓度50pg/ml。将细胞在37℃/5％CO₂下温育过夜。根据生产商的说明，通过ELISA(DuoSet ELISA；R&D Systems；目录号840171)定量培养上清液中的分泌型小鼠IL6。使用Excel(Microsoft)和XLfit(IDBS)进行曲线拟合和EC50计算。

实施例17：尿酸单钠晶体(MSU)诱导的小鼠腹膜炎模型

3mg MSU(Invitrogen)/小鼠用于腹膜内注射(I.P)作为刺激物，并且抗IL-1R3(MAB-16-0531，500μg/小鼠)或IL-1Rα(10mg/kg)用于抑制。使用盐水作为对照既用于刺激，又用于抑制。四组包含作为刺激物对照(盐水(抑制)+盐水(刺激))的4只小鼠、采用单独MSU(盐水)的8只小鼠、采用MAB-16-0531(500μg/小鼠+MSU)的8只小鼠和采用IL-1Rα(10mg/kg+MSU)的8只小鼠。在MSU刺激之前1小时腹腔内注射MAB-16-0531和IL-1Rα。在注射MSU或盐水后6小时，将小鼠处死。在含有EDTA的微量离心管中采集血液并且通过使用10mL冰冷的PBS灌洗，采集腹膜液。分离骨-骨髓细胞，并将器官立即冷冻在液氮中。计数腹膜液中细胞的数目(HESKA HemaTrue)。

实施例18：MSU腹膜炎中的嗜中性粒细胞活化和细胞因子产生

中性粒细胞是痛风中最丰富的细胞类型并且其活化与弹性蛋白酶产生相关。分析来自实施例17的腹膜液和IP细胞裂解物的中性粒细胞弹性蛋白酶标志物水平和MPO水平。在TritonX 0.5％中制备IP裂解物。在腹膜液和IP细胞裂解物二者中测量细胞因子。对于腹膜液中的低丰度细胞因子，在4℃于预煮沸(15分钟)的透析膜(MWCO 3.5kDa，Spectra/Por3透析膜，Spectrumlabs)中浓缩8mL流体(终末范围：4.7-10.9倍浓缩)，所述透析膜淹没在作为吸湿溶液的聚乙二醇(MN 6-8000，Sigma Aldrich)。通过除以透析浓缩系数计算初始浓度。对脾脏裂解物和全血裂解物分析细胞因子水平并且对裂解物的蛋白质浓度归一化。使用Duoset ELISA(R&D Systems)或多重测定(Quansys Biosciences)，根据方案测量细胞因子浓度。使用蛋白质分析染料试剂(BioRad)和作为标准品的BSA，采用标准Bradford测定分析脾脏裂解物和腹膜液中的蛋白质水平。如图20a-c中所示，用a-mIL1R3抗体MAB-16-0531处理显著地减少MSU诱导的胞内弹性蛋白酶和腹膜液中的弹性蛋白酶。MAB-16-0531小鼠的腹膜液中IL-6、G-CSF、KC和CCL-2水平强烈地降低。系统性地，脾脏裂解物中MPO和KC也降低，血浆中IL-6和G-CSF降低(图20d)。

实施例19：OVA过敏性哮喘体内模型

已经应用OVA诱导的过敏性哮喘模型作为IL-33依赖性体内模型。使用1:1混合Imject铝佐剂(100μL、ThermoFischer)的OVA(15μg/100μL、Sigma-Aldrich)，腹腔方式致敏野生型6周龄C57BL/6雄性小鼠(Jackson Laboratories)。在第1、第14和第21天注射小鼠。在第25-28天，用MAB 16-0531(500μg/小鼠，MAB Discovery)腹腔注射小鼠或用IgG2a-LALA对照(500μg/小鼠，MAB Discovery，“溶剂(vehicle)”组和“OVA”组)腹腔注射小鼠。在第26-28天在短期二氧化碳麻醉下，注射后30分钟进行OVA气管内滴注(50μL中50μg/小鼠)。通过将导管***气管中并用3x 1ml洗液洗涤气道，实施支气管肺泡灌洗(BAL)。这之后是使用流式细胞术进行细胞表型分型。小鼠Fc阻断(BD Biosciences)后，针对小鼠靶的以下单克隆抗体(mAb)用于流式细胞术：PE-Cy7 CD11c(N418)、PerCP-Cy5.5 CD11b(M1/70)、FITC-Ly6G(1A8-Ly6G)(均来自eBioscience)；PE-Siglec-F(E250-4440)(来自BD Biosciences)(在含有10mg/ml BSA、0.1mg/ml NaN₃的DPBS中染色)。使用FlowJo软件(Treestar)，在Canto II流式细胞仪上分析细胞。通过台盼蓝拒染法计数BAL细胞。在BAL后，将肺用DPBS中的预温3％低熔点琼脂糖灌洗并且允许冷却，之后取出进入磷酸盐缓冲的***中过夜。将肺包埋在石蜡中，切片并用H&E和PAS染色。使用Leica DM2000 LED显微镜和LAS V4.12软件评价组织学。图21a-b显示MAB-16-0531处理显著地减少总BAL白细胞计数(WBC)、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞。在图21c中，肺切片HE染色证实MAB-16-0531处理减少病理学，并且PAS染色显示气道中产生粘液的杯状细胞的量降低(PAS)。

实施例20：咪喹莫特诱导的银屑病体内模型

IL-36在皮肤炎症中具有明显作用并且IL-36Ra中的突变与人脓疱性银屑病关联。因此，使用咪喹莫特诱导的银屑病体内模型，已经试验抗IL1R3疗法对皮肤炎性疾病的应用。将WT十二周龄C57BL/6小鼠(Jackson Laboratories)进行背部皮肤剃毛并且用脱毛膏(Nair)处理。每日对背部皮肤施加75mg IMQ(Aldara 5％IMQ)或对照乳膏剂(凡士林乳膏剂)(第1天-第5天)(IMQ：IMQ(n＝10)和a-mIL1R3(n＝9)组；对照乳膏剂：溶剂组(n＝3))并且每两天施加IP注射剂(第1天、第3天和第5天)。溶剂组和IMQ组接受小鼠IgG对照(20mg/kg，MAB Discovery)，治疗组接受MAB 16-0531(20mg/kg，MAB Discovery)。同时涂施耳部，在左耳上涂施对照乳膏剂(全部小鼠；5mg凡士林乳膏剂)并且在右耳上涂施组适宜刺激物乳膏剂(溶剂：5mg凡士林乳膏剂；IMQ和a-mIL1R3：5mg IMQ乳膏剂)。

每日监测体重。第6日将小鼠处死，使用量规测量左耳和右耳厚度。使用HemaTrue分析仪(HESKA)，评估全血细胞计数。由6位设盲人员目视评定背部皮肤的照片(红斑和剥落，评分0(无反应)至4(受影响最大))。从皮肤穿刺活检样品分离RNA。RNA提取自裂解物并且cDNA生成自0.8μg RNA(NanoDrop)(高容量cDNA逆转录试剂盒(Applied Biosystems))。在使用SYBR Green master mix(Applied Biosystems)和0.1μM细胞因子特异性引物的实时qPCR反应中使用50ng cDNA。使用GAPDH作为参考基因，并且使用Pfaffl方法计算比率，包括所分析的引物效率。

通过ELISA测量在新鲜获得的皮肤活检样品中的髓过氧化物酶(MPO)水平。MPO水平对总蛋白量值(通过Bradford法测定)归一化。

图22和图23显示，MAB-16-0531处理显著地减少咪喹莫特诱导的皮肤炎症，这还与皮肤粒细胞浸润、MPO水平和IL17F mRNA表达的减少相关。

实施例21：通过IgG1和IgG1-LALA抗IL1R3抗体激活Fc受体介导的效应子功能

为了试验IgG-1和IgG1-LALA形式的人源化抗IL1R3抗体在激发Fc介导的效应细胞功能(如ADCC)方面的活性，将MAB-16-0030作为IgG1或IgG1-LALA抗体产生。将表达hIL1R3的靶细胞SK-MEL-30细胞以2500个细胞/孔的密度接种在组织培养处理的384孔平板中25μL含有10％FCS的RPMI培养基内。接种后24小时，在含有4％低IgG-FCS的RPMI培养基中添加4000个效应细胞/孔(ADCC生物分析效应细胞，Jurkat，Promega目录号G701A)。随后添加抗体至10000至0.002ng/ml的终浓度并且将平板在37℃和5％CO₂下温育6小时。根据生产商的说明(Bio-Glo萤光素酶检测)并使用Tecan M1000微量平板读数仪，测量萤光素酶基因报告Jurkat细胞中NF-kB信号传导的激活。“诱导倍数”值代表RLU(抗体处理–背景)/RLU(无抗体对照–背景)。通过使用Excel(Microsoft)和XLfit(IDBS)获得曲线拟合和EC50计算。如图24中所示，仅IgG1形式的MAB-16-0030在效应子Jurkat报告细胞中诱导NF-kB信号传导，而采用IgG1-LALA形式时效应细胞活化被消除。

附图说明

图1：序列(按照单字母代码的氨基酸)

可变区(VR)的完整序列：

重链：完整VH：SEQ ID NO:1-34和SEQ ID NO:173和176

轻链：完整VL：SEQ ID NO:35-68和SEQ ID NO:174和177

互补决定区(CDR)：

重链：CDRH1：SEQ ID NO:69-85和178

CDRH2：SEQ ID NO:86-102和179

CDRH3：SEQ ID NO:103-119和180

轻链：CDRL1：SEQ ID NO:120-136和181

CDRL2：SEQ ID NO:137-153和182

CDRL3：SEQ ID NO:154-170和175和183

恒定区(CR)：

轻链：CR-L：SEQ ID NO: 171

重链：CR-H：SEQ ID NO: 172

在以下图中，AF676是购自以下链接的商业多克隆抗体制品：https:// www.rndsystems.com/products/human-il-1-racp-il-1-r3-antibody_af676

图2：人IL-1R3 ELISA

用代表人IL-1R3胞外结构域的人Il-1R3蛋白(0.5mg/ml、至少1小时)包被384孔微量滴定板。在彻底洗涤步骤后，接着封闭步骤，添加抗体(每孔12.5μL)并且在室温温育1小时。彻底洗涤未结合的抗体。通过将微量滴定板与过氧化物酶标记的抗人检测抗体温育(室温1小时)，鉴定结合的抗体的量。通过添加TMB起始过氧化物酶反应并且在450nm/620nm下测量吸光度。

图3：HEK293报告基因检测

用pGL4.32[luc2P/NF-κB-RE/Hygro]载体(Promega)稳定转染HEK293T/17-FR细胞并且接种在384孔PDL Costar细胞培养平板中，随后与抗体温育30分钟。随后将细胞用IL-1β刺激5小时，之后根据生产商的方案，使用Steady-Glo萤光素酶分析试剂盒(Promega)测定NF-kB活性。

图4：使用A549稳定细胞系的NFκB萤光素酶报告基因检测

已经将A549-NFkB-RE-Luc稳定转染的细胞(购自Signosis)培养3天(1.7E+04个细胞/cm³)。用4x10⁴个细胞/孔填充TC处理的384孔低边白色平底聚苯乙烯微量滴定板(Corning)。在10小时培养时间后，将细胞与抗体温育1小时，之后将细胞用10μL IL-1β刺激另外5小时。已经通过相对于未受刺激的细胞确定每个孔相对发光单位的Steady-GloTM萤光素酶测定系统(Promega)来测量NFkB调节作用。

图5：细胞结合分析：与IL-1R3表达细胞的结合

使用流式细胞术，试验人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体与具有不同IL-1R3受体密度的细胞系的结合。人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体与低表达和高表达IL-1R3的细胞系结合。抗体不与小鼠NIH-3T3细胞结合。实验根据实施例4中描述的方法实施。

图6：细胞结合分析：人IL-1R3高表达细胞系SK-MEL-30上的细胞结合作用

使用流式细胞术，通过与高表达IL-1R3的细胞系SK-MEL-30的结合，测定人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体的EC50细胞结合值。人源化抗IL-1R3IgG1-LALA抗体MAB-16-0030和MAB-16-0149分别显示307和306ng/ml的细胞结合作用。实验根据实施例4中描述的方法实施。

图7：人IL-1R3生物化学ELISA

在生物化学ELISA中试验人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体与重组人IL-1R3蛋白的结合。例举的抗体分别显示16.3ng/ml和29.1ng/ml的EC50结合值。实验根据实施例5中描述的方法实施。

图8：A549-NFkB-RE-Luc细胞中人IL-1a和IL-1b介导的NfKB信号传导的抑制

使用分别以0.1ng/ml IL-1a和IL-1b刺激A549-NFkB-RE-Luc细胞，在基于细胞的基因报告基因检测中试验对IL-1a和IL-1b的功能性中和。人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体显示优于山羊抗人IL1-R3多克隆抗体AF676(R&D Systems)的EC50值。实验根据实施例6中描述的方法实施。

图9：IL-1α和IL-1β功能性中和测定-通过A-549细胞对人IL-1a和IL-1b介导的IL-6释放的抑制

使用A-549细胞试验人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体对IL-1a和IL-1b介导的IL-6细胞释放的中和。EC50值显示，人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体比山羊抗人IL1-R3多克隆抗体AF676优越(R&D Systems)。实验根据实施例7中描述的方法实施。

图10：IL-33功能性中和测定-HEK-Blue-IL33^TM细胞中人IL-33介导的NfkB-信号传导的抑制

使用IL-33刺激的基因报告HEK-Blue-IL33^TM细胞(InvivoGen)，试验人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体对IL-33介导的细胞信号传导的中和。EC50值显示，人源化抗IL-1R3IgG1-LALA抗体比山羊抗人IL1-R3多克隆抗体AF676优越(R&D Systems)。实验根据实施例8中描述的方法实施。

图11：IL-36功能性中和测定-HEK-293/17-IF细胞中人IL-36介导的NfkB-信号传导的抑制

使用IL-36g刺激的基因报告HEK-293/17-IF细胞，试验人源化抗IL-1R3IgG1-LALA抗体对IL-36介导细胞信号传导的中和。常见的人源化抗IL-1R3IgG1-LALA抗体显示优于山羊抗人IL1-R3多克隆抗体AF676(R&D Systems)的EC50值。实验根据实施例9中描述的方法实施。

图12：IL-1a、IL-33和IL-36a介导的细胞的细胞因子释放的中和

使用特定的IL-1a、IL-33和IL-36a依赖性细胞系统，试验对IL-1a、IL-33和IL-36a介导的细胞的细胞因子释放的中和。试验根据本发明的代表性人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体(MAB-16-0030)对细胞因子释放的抑制并且与IL-1Ra比较。尽管根据本发明的抗体能够抑制全部三种刺激物介导的细胞因子释放，但IL-1Ra仅影响IL-1a介导的细胞因子释放。实验根据实施例10中描述的方法实施。

图13：用人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体处理的未受刺激的PBMC的活力和IL-6释放

抗体与免疫细胞的结合可以例如通过直接诱导凋亡信号传导途径、刺激过多细胞因子释放或抗体依赖的细胞毒性(ADCC)，导致细胞耗尽和有害作用。为了排除人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体直接影响PBMC的活力，在与不同浓度的根据本发明的代表性人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体(MAB-16-0030)温育1天、3天和5天后，研究三位供体的PBMC的活力和IL-6释放。活力和IL-6释放均未受影响。这些结果支持，在无间接细胞耗尽和不诱导细胞有害作用的情况下，人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体在免疫细胞上阻断IL-1R3功能。实验根据实施例11中描述的方法实施。

图14：用不同刺激物的PBMC的功能性阻断

为了试验人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体是否抑制特殊或复杂刺激物刺激的PBMC活化，将10位供体的PBMC用LPS、热灭活的的白假丝酵母、IL-12/IL-33或抗CD3/CD28抗体刺激。根据本发明的代表性人源化抗IL-1R3IgG1-LALA抗体(MAB-16-0030)能够抑制全部受试验的刺激物介导的细胞因子释放。实验根据实施例12中描述的方法实施。

图15：全血中用白假丝酵母活化的免疫细胞的功能性阻断

为了试验人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体是否抑制全血中免疫细胞的活化，将8位供体的全血用热灭活的白假丝酵母刺激。根据本发明的代表性人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体(MAB-16-0030)能够抑制假丝酵母诱导的IL-6细胞因子释放。实验根据实施例13中描述的方法实施。

图16：混合淋巴细胞反应(MLR)中的细胞因子释放的阻断

使用不匹配的健康供体的PBMC，在混合淋巴细胞反应(MLR)中试验人源化抗IL-1R3 IgG1-LALA抗体阻断多样细胞因子释放的能力。根据本发明的代表性人源化抗IL-1R3IgG1-LALA抗体(MAB-16-0030)能够抑制IFNg、IL-6、TNF-a、IL-13、IL-17和IL-10释放。实验根据实施例14中描述的方法实施。

图17：鼠细胞中IL-1b介导的信号传导的中和

使用基于小鼠NIH-3T3细胞的NFkB萤光素酶基因报告基因检测，试验根据本发明的抗小鼠IL-1R3抗体对IL-1b的功能中和。根据本发明的代表性抗体(MAB-16-0531)显示剂量依赖地抑制IL-1b介导的NFkB信号传导，EC50为805ng/ml。实验根据实施例15中描述的方法实施。

图18：来自鼠细胞的IL-1b介导的IL-6释放的中和

在IL-1b刺激的NIH-3T3细胞中试验根据本发明的抗小鼠IL-1R3抗体对IL-6自小鼠细胞释放的抑制。根据本发明的代表性抗体(MAB-16-0531)显示剂量依赖地抑制IL-6释放，EC50为1560ng/ml。实验根据实施例16中描述的方法实施。

图19：尿酸单钠晶体(MSU)诱导的小鼠腹膜炎模型

为了试验向痛风患者施加抗IL-R3疗法的依据，使用尿酸单钠晶体(MSU)诱导的小鼠腹膜炎模型。MSU的施用在腹膜腔中产生强烈炎症反应，诱导几种炎性细胞(如单核细胞和中性粒细胞)内流，从而模拟急性痛风反应的经典炎性特征。在腹膜中注射3mg MSU之前一小时，腹腔内施用根据本发明的代表性抗IL1R3抗体(MAB-16-0531)或IL-1Ra。腹膜腔中细胞的量值显示，抗IL-1R3抗体处理显著地抑制MSU诱导的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞浸润。实验根据实施例17中描述的方法实施。

图20：MSU腹膜炎中的嗜中性粒细胞活化和细胞因子产生

包括MSU腹膜炎中炎症的局部和全身性标志物的嗜中性粒细胞活化的致弱。(a)腹膜液中嗜中性粒细胞蛋白酶弹性蛋白酶的水平。(b)来自腹膜液的细胞中胞内弹性蛋白酶的总水平。(c)来自腹膜液的细胞中胞内MPO的总水平。(d)细胞因子和趋化因子浓度，局部(腹膜液)和全身。WB；裂解的全血，norm.；归一化/脾脏中mg蛋白质。MSU；载体+MSU。a-mIL1R3；a-mIL1R3+MSU。IL 1Ra；IL 1Ra+MSU。抑制剂处理组与MSU刺激组比较。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001(学生t检验，均数+SEM，例外是：(b)，G CSF、KC(WB)和KC(脾脏)；曼-惠特尼U-检验，中位数附带IQR)。

图21：OVA过敏性哮喘体内模型

a-mIL1R3抗体在体内减少OVA诱导的细胞内流。(a)来自BAL液的总WBC。(b)流式细胞术限定的来自(a)的细胞分类计数(cell differentials)。(c)使用H&E和PAS染色的肺组织，来自组平均(WBC)粗点标记的小鼠的组织学。在OVA刺激+a-mIL1R3(MAB-16-0531)处理的小鼠和单独OVA之间比较。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001(学生t检验)。均数+SEM。

图22：咪喹莫特银屑病体内模型

(a)皮肤中IL 36αmRNA诱导。(b)涂施IMQ的耳和涂施对照乳膏剂的耳之间耳厚度的倍数变化。(c)研究结束时由n＝6位设盲人员进行目视评定(0；不受影响–4；受最大影响(红斑和剥落))。(d)皮肤中的MPO浓度，归一化/mg蛋白质。(e)来自(c)和(d)的数据之间的斯皮尔曼相关性。(e)全血中的粒细胞浓度。在抑制剂处理组和IMQ刺激组之间比较。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001，((b、f)曼-惠特尼U检验；(d、e)学生t检验，均数±SEM例外是(d)，中位数附带IQR)。

图23：咪喹莫特银屑病体内模型

咪喹莫特处理的小鼠的皮肤活检样品中的IL36α/β/γ、IL17F和TNFa mRNA水平

图24：效应细胞介导的抗IL1R3 IgG1和IgG1-LALA抗体功能

在效应细胞中试验含有IgG1-LALA或IgG1 Fc部分的抗IL1R3抗体MAB-16-0030对Fc受体介导的NF-kB信号传导的激活。与IgG1-LALA抗体相反，渐增浓度的IgG1抗体与表达hIL1R3的SK-MEL-30细胞的结合在Jurkat基因报告效应细胞中激发Fc受体介导的信号传导。

序列表

<110> MAB发现股份有限公司(MAB Discovery GmbH)

<120> 用于炎性病症的抗IL-1R3抗体

<130> 65713P WO

<140> EP 17169953

<141> 2017-05-08

<160> 183

<170> PatentIn version 3.5

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1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Val Ala Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Val Thr Tyr Tyr Ala Ser

50 55 60

Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Asp Thr Ser Ser Thr Thr Leu

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe

85 90 95

Cys Ala Ser Glu Thr Asp Gly Asn Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 25

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 25

Glu Val Gln Leu Glu Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser

20 25 30

Tyr Trp Arg Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Val Ala Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Gly Asp Val Thr Tyr Tyr Ala Asn

50 55 60

Trp Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ala Ser Gly Val Gly Phe Gly Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 26

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 26

Glu Val Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Val Ala Cys Ile Phe Ile Gly Tyr Gly Asp Val Thr Trp Tyr Ala Ser

50 55 60

Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Ala Asn Ser Lys Asn Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Phe Cys Ala Arg Ala Leu Gly Ser Ser Gly Tyr Arg Val Asn Leu Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 27

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 27

Gln Val Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Gln Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Met Ile Tyr Gly Ser Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Thr Thr Ser Thr Thr Leu Tyr Leu Gln Met

65 70 75 80

Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Asp

85 90 95

Pro Gln Tyr Phe Ile Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser

<210> 28

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 28

Glu Val Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Gln Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr

20 25 30

Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Tyr Ile Gly Gly Thr Thr Ala Tyr Ala Ser Trp Pro Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Arg Leu Gln Gly Ala Asn Tyr Tyr Asn Ser Leu Ala Leu Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 29

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 29

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Ser Asn

20 25 30

Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu

35 40 45

Val Ala Cys Ile Tyr Thr Asn Ser Gly Asn Thr Trp Ser Ala Ser Trp

50 55 60

Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Asn Ser Thr Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Leu Asn Tyr Pro Asp Thr Ser Asn Leu Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 30

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 30

Glu Val Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Phe Gly

20 25 30

Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Val Ala Cys Ile Tyr Gly Asp Ser Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asn Trp

50 55 60

Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Asn Ser Lys Asn Thr Leu

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe

85 90 95

Cys Ala Arg Tyr Pro Gly Gly Ser Tyr Tyr Asn Leu Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 31

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 31

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Thr

20 25 30

Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Val Ala Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser

50 55 60

Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asn Ser Ser Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Val Asp Gly Ser Ser Ser Gly Ser Trp Asp Leu Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 32

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 32

Glu Val Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Ser Phe Ser Ser Ser

20 25 30

Asp Phe Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Val Ala Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Val Ser Ile Tyr Tyr Ala Thr

50 55 60

Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Ala Ser Ser Thr Thr Leu

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe

85 90 95

Cys Ala Arg Ser Thr Gly Ser Val Gly Arg Gly Phe Asn Leu Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 33

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 33

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ile

20 25 30

Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Val Gly Cys Ile Tyr Thr Gly Asn Ser Asp Phe Thr Tyr Tyr Ala Asn

50 55 60

Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Phe Cys Ala Arg Phe Arg Asp Asp Tyr Ala Ser Leu Lys Leu Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 34

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 34

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Gly

20 25 30

Tyr Asp Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Val Gly Cys Ile Tyr Thr Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp

50 55 60

Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Thr Thr Leu

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe

85 90 95

Cys Ala Arg Asn Ser Asn Asp Trp Met Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 35

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 35

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

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85 90 95

Asn Gly Ala Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 36

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 36

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Leu Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Ser Tyr Ser Thr Gly

85 90 95

Pro Asp Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 37

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 37

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ile Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ala Thr Thr Tyr Asn

85 90 95

Val Asp Asn Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 38

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 38

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asn Ile Gly Asn Gly

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

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100 105 110

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<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 39

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly

20 25 30

Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

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Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Asn

85 90 95

Thr Gly Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 40

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 40

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Val Cys Thr Asp Ile Ser

85 90 95

Thr Asp Asp Leu Tyr Asn Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile

100 105 110

Lys

<210> 41

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 41

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Val Tyr Thr Tyr Ser Thr

85 90 95

Asp Ile His Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 42

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 42

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Val Tyr Thr His Ile Ser

85 90 95

Ala Asp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 43

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 43

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Ser

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly Gly

85 90 95

Thr Asp Asn Asp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 44

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 44

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Asp Gly Asn

20 25 30

Asn Leu Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Ser Tyr Tyr Ser

85 90 95

Ser Ser Trp Tyr Asn Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 45

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 45

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Phe

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asp Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Asn Tyr Ile Ile Asp Tyr

85 90 95

Gly Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105

<210> 46

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 46

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Tyr Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Asn Ser Asp Ser

85 90 95

Asp Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105

<210> 47

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 47

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ile Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Thr Glu Asp Asn

85 90 95

Ile Asp Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 48

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 48

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Leu Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Ala Val Tyr Ser Gly Asn

85 90 95

Thr Glu Trp Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 49

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 49

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Ser

20 25 30

Asn His Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Glu Phe Ser Cys

85 90 95

Val Ser Ala Asp Cys Ile Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Ile

100 105 110

Lys

<210> 50

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 50

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Tyr Asp Asn Asn

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Tyr Gly Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 51

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 51

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Ala Asn

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Ser Trp Tyr Tyr Ser Gly

85 90 95

Ser Gly Ser Tyr His Ser Trp Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val

100 105 110

Ile Lys

<210> 52

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 52

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Trp Trp Val Ile Glu His

85 90 95

Asn Gly Ala Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 53

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 53

Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Leu Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Ser Tyr Ser Thr Gly

85 90 95

Pro Asp Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 54

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 54

Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ile Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ala Thr Thr Tyr Asn

85 90 95

Val Asp Asn Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 55

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 55

Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asn Ile Gly Asn Gly

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Trp Asn Pro Asp

85 90 95

Tyr Ile Gly Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 56

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 56

Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly

20 25 30

Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Asn

85 90 95

Thr Gly Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 57

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 57

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Val Cys Thr Asp Ile Ser

85 90 95

Thr Asp Asp Leu Tyr Asn Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile

100 105 110

Lys

<210> 58

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 58

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Val Tyr Thr Tyr Ser Thr

85 90 95

Asp Ile His Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 59

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 59

Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Val Tyr Thr His Ile Ser

85 90 95

Ala Asp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 60

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 60

Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Ser

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly Gly

85 90 95

Thr Asp Asn Asp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 61

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 61

Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Asp Gly Asn

20 25 30

Asn Leu Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Ser Tyr Tyr Ser

85 90 95

Ser Ser Trp Tyr Asn Val Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 62

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 62

Asp Val Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Phe

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asp Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Asn Tyr Ile Ile Asp Tyr

85 90 95

Gly Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105

<210> 63

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 63

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Tyr Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Asn Ser Asp Ser

85 90 95

Asp Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105

<210> 64

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 64

Ala Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ile Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Thr Glu Asp Asn

85 90 95

Ile Asp Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 65

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 65

Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Leu Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Ala Val Tyr Ser Gly Asn

85 90 95

Thr Glu Trp Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105 110

<210> 66

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 66

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Ser

20 25 30

Asn His Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Glu Phe Ser Cys

85 90 95

Val Ser Ala Asp Cys Ile Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Val Ile

100 105 110

Lys

<210> 67

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 67

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Tyr Asp Asn Asn

85 90 95

Tyr Gly Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 68

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 68

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Ala Asn

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Ser Trp Tyr Tyr Ser Gly

85 90 95

Ser Gly Ser Tyr His Ser Trp Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val

100 105 110

Ile Lys

<210> 69

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 69

Ser Ser Tyr Trp Ile Cys

1 5

<210> 70

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 70

Ser Ser His Tyr Met Cys

1 5

<210> 71

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 71

Ser Tyr Ala Met Gly

1 5

<210> 72

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 72

Asn Tyr Ala Met Gly

1 5

<210> 73

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 73

Ser Tyr Tyr Met Ser

1 5

<210> 74

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 74

Ser Asn Tyr Trp Ile Cys

1 5

<210> 75

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 75

Ser Ser Tyr Tyr Met Cys

1 5

<210> 76

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 76

Thr Ser Tyr Trp Arg Cys

1 5

<210> 77

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 77

Ser Tyr Tyr Tyr Met Cys

1 5

<210> 78

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 78

Ser Tyr Trp Met Ser

1 5

<210> 79

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 79

Ser Tyr Asp Met Ser

1 5

<210> 80

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 80

Ser Asn Tyr Tyr Met Cys

1 5

<210> 81

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 81

Phe Gly Tyr Tyr Met Cys

1 5

<210> 82

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 82

Ser Thr Tyr Tyr Met Cys

1 5

<210> 83

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 83

Ser Ser Asp Phe Met Cys

1 5

<210> 84

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 84

Ser Ile Tyr Tyr Met Cys

1 5

<210> 85

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 85

Ser Gly Tyr Asp Met Cys

1 5

<210> 86

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 86

Cys Ile Tyr Thr Gly Ser Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Glu Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 87

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 87

Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 88

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 88

Val Ile Thr Ser Ser Ala Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 89

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 89

Val Ile Ser Ser Asp Gly Phe Phe Tyr Asp Ala Ser Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 90

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 90

Ile Ile Ser Gly Ser Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 91

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 91

Cys Ile Tyr Thr Ser Thr Gly Asn Thr Trp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 92

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 92

Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Val Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 93

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 93

Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Gly Asp Val Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Val

1 5 10 15

Asn Gly

<210> 94

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 94

Cys Ile Phe Ile Gly Tyr Gly Asp Val Thr Trp Tyr Ala Ser Trp Ala

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 95

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 95

Met Ile Tyr Gly Ser Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly

1 5 10 15

<210> 96

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 96

Thr Ile Tyr Ile Gly Gly Thr Thr Ala Tyr Ala Ser Trp Pro Lys Gly

1 5 10 15

<210> 97

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 97

Cys Ile Tyr Thr Asn Ser Gly Asn Thr Trp Ser Ala Ser Trp Ala Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 98

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 98

Cys Ile Tyr Gly Asp Ser Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asn Trp Ala Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 99

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 99

Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 100

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 100

Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Val Ser Ile Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 101

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 101

Cys Ile Tyr Thr Gly Asn Ser Asp Phe Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 102

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 102

Cys Ile Tyr Thr Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 103

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 103

Asp Pro Gly Tyr Ser Ser Trp Leu

1 5

<210> 104

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 104

Val Asp Ala Ser Ser Ser Gly Ser Trp Asp Leu

1 5 10

<210> 105

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 105

Gly Gly Pro Gly Tyr Ser Thr Asn Thr His Tyr Ala Phe Asp Pro

1 5 10 15

<210> 106

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 106

Asp Arg Gly Thr Ser Thr Gly Ser Leu Asp Leu

1 5 10

<210> 107

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 107

Thr His Tyr Ala Ala Val Ala Gly Tyr Gly Tyr Ala Ser Arg Leu Asp

1 5 10 15

Leu

<210> 108

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 108

Asp Leu Leu Val Val Thr Ser Phe Asn Leu

1 5 10

<210> 109

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 109

Glu Thr Asp Gly Asn Tyr Phe Asn Leu

1 5

<210> 110

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 110

Gly Val Gly Phe Gly Tyr Phe Asn Leu

1 5

<210> 111

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 111

Ala Leu Gly Ser Ser Gly Tyr Arg Val Asn Leu

1 5 10

<210> 112

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 112

Asp Pro Gln Tyr Phe Ile Leu

1 5

<210> 113

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 113

Leu Gln Gly Ala Asn Tyr Tyr Asn Ser Leu Ala Leu

1 5 10

<210> 114

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 114

Asp Leu Asn Tyr Pro Asp Thr Ser Asn Leu

1 5 10

<210> 115

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 115

Tyr Pro Gly Gly Ser Tyr Tyr Asn Leu

1 5

<210> 116

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 116

Val Asp Gly Ser Ser Ser Gly Ser Trp Asp Leu

1 5 10

<210> 117

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 117

Ser Thr Gly Ser Val Gly Arg Gly Phe Asn Leu

1 5 10

<210> 118

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 118

Phe Arg Asp Asp Tyr Ala Ser Leu Lys Leu

1 5 10

<210> 119

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 119

Asn Ser Asn Asp Trp Met Tyr Phe Asn Leu

1 5 10

<210> 120

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 120

Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Tyr Leu Ser

1 5 10

<210> 121

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 121

Gln Ala Ser Glu Ser Ile Tyr Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 122

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 122

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ile Tyr Leu Ser

1 5 10

<210> 123

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 123

Gln Ala Ser Glu Asn Ile Gly Asn Gly Leu Ala

1 5 10

<210> 124

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 124

Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly Ile Ser

1 5 10

<210> 125

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 125

Gln Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 126

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 126

Gln Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 127

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 127

Gln Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 128

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 128

Gln Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Ser Leu Ala

1 5 10

<210> 129

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 129

Gln Ser Ser Gln Ser Val Asp Gly Asn Asn Leu Leu Ser

1 5 10

<210> 130

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 130

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Phe Leu Ser

1 5 10

<210> 131

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 131

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Tyr Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 132

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 132

Gln Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ile Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 133

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 133

Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 134

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 134

Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Ser Asn His Leu Ser

1 5 10

<210> 135

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 135

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ser

1 5 10

<210> 136

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 136

Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Ala Asn Tyr Trp Ser

1 5 10

<210> 137

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 137

Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 138

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 138

Ala Ala Ser Leu Leu Ala Ser

1 5

<210> 139

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 139

Asp Ala Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

<210> 140

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 140

Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 141

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 141

Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 142

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 142

Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 143

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 143

Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 144

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 144

Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 145

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 145

Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser

1 5

<210> 146

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 146

Asp Ala Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 147

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 147

Ala Ala Ser Asp Leu Glu Ser

1 5

<210> 148

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 148

Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 149

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 149

Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 150

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 150

Ala Ala Ser Leu Leu Ala Ser

1 5

<210> 151

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 151

Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 152

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 152

Gly Ala Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 153

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 153

Gly Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 154

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 154

Gln Asn Trp Trp Val Ile Glu His Asn Gly Ala Ala

1 5 10

<210> 155

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 155

Gln Ser Ala Ser Tyr Ser Thr Gly Pro Asp Trp Thr

1 5 10

<210> 156

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 156

Gln Gln Gly Ala Thr Thr Tyr Asn Val Asp Asn Val

1 5 10

<210> 157

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 157

Gln Cys Thr Tyr Trp Asn Pro Asp Tyr Ile Gly Gly Ala

1 5 10

<210> 158

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 158

Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Asn Thr Gly Pro Thr

1 5 10

<210> 159

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 159

Leu Gly Val Cys Thr Asp Ile Ser Thr Asp Asp Leu Tyr Asn Ala

1 5 10 15

<210> 160

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 160

Leu Gly Val Tyr Thr Tyr Ser Thr Asp Ile His Ala

1 5 10

<210> 161

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 161

Leu Gly Val Tyr Thr His Ile Ser Ala Asp Asn Ala

1 5 10

<210> 162

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 162

Gln Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly Gly Thr Asp Asn Asp Val

1 5 10

<210> 163

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 163

Gln Gly Ser Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Asn Val

1 5 10

<210> 164

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 164

Gln Cys Asn Tyr Ile Ile Asp Tyr Gly Ala

1 5 10

<210> 165

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 165

Gln Ser Tyr Tyr Asn Ser Asp Ser Asp Ala

1 5 10

<210> 166

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 166

Gln Gln Gly Tyr Thr Glu Asp Asn Ile Asp Asn Thr

1 5 10

<210> 167

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 167

Gln Gly Ala Val Tyr Ser Gly Asn Thr Glu Trp Ala

1 5 10

<210> 168

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 168

Gln Gly Glu Phe Ser Cys Val Ser Ala Asp Cys Ile Ala

1 5 10

<210> 169

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 169

Gln Cys Thr Tyr Tyr Asp Asn Asn Tyr Gly Gly Ala

1 5 10

<210> 170

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 170

Gln Ser Trp Tyr Tyr Ser Gly Ser Gly Ser Tyr His Ser Trp Ala

1 5 10 15

<210> 171

<211> 107

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 171

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 172

<211> 329

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 172

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

325

<210> 173

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 173

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Gln Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val

35 40 45

Gly Val Ile Thr Ser Ser Ala Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Gly Pro Gly Tyr Ser Thr Asn Thr His Tyr Ala Phe Asp Pro

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 174

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 174

Asp Val Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Phe

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asp Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Asn Tyr Ile Ile Asp Tyr

85 90 95

Gly Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys

100 105

<210> 175

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体

<400> 175

Gln Ser Asn Tyr Ile Ile Asp Tyr Gly Ala

1 5 10

<210> 176

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VR

<400> 176

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Glu Gly Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Gln Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Cys Ile Tyr Thr Gly Asn Asp Ile Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu

65 70 75 80

Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Gly Gly Ala Asn Tyr Tyr Phe Lys Phe Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 177

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VR

<400> 177

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Leu

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Gly Ser

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Tyr Ala Tyr Ser Ser Gly

85 90 95

Ser Trp Tyr Ser Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys

100 105 110

<210> 178

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR

<400> 178

Gln Asp Tyr Tyr Met Cys

1 5

<210> 179

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR

<400> 179

Cys Ile Tyr Thr Gly Asn Asp Ile Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 180

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR

<400> 180

Asp Gly Gly Ala Asn Tyr Tyr Phe Lys Phe

1 5 10

<210> 181

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR

<400> 181

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Leu Leu Ala

1 5 10

<210> 182

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR

<400> 182

Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser

1 5

<210> 183

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CDR

<400> 183

Gln Asn Tyr Ala Tyr Ser Ser Gly Ser Trp Tyr Ser

1 5 10