阅读说明：本技术 一种复合微生物菌剂提高土壤肥力的方法 (Method for improving soil fertility by using compound microbial agent ) 是由 李辉 王廉馨 林丹妮 韩昀穌 纪月 陈俊良 白若彤 于 2019-11-25 设计创作，主要内容包括：本发明涉及土壤修复技术领域,具体涉及一种复合微生物菌剂提高土壤肥力的方法,方法如下：将醋酸菌接入醋酸菌液体培养基中,在30℃、120r/min摇床中培养18h,得到醋酸菌种子液；将假单胞菌接入营养肉汤液体培养基中,在30℃、120r/min摇床中培养18h,得到假单胞菌种子液。按体积比为1:1,将醋酸菌种子液和假单胞菌种子液在30℃、120r/min摇床中共同培养,发酵液培养至第8小时,取0.1ml发酵液分梯度进行平板涂布,并在30℃恒温培养箱中培养48h；发酵液培养至第40小时,取0.1ml发酵液分梯度进行平板涂布,并在30℃恒温培养箱中培养48h,48小时终止发酵；每亩土地喷施500mL复合菌剂的稀释液后种植植物。(The invention relates to the technical field of soil remediation, in particular to a method for improving soil fertility by using a compound microbial agent, which comprises the following steps: inoculating acetic acid bacteria into an acetic acid bacteria liquid culture medium, and culturing for 18h in a shaking table at 30 ℃ and 120r/min to obtain an acetic acid bacteria seed liquid; inoculating Pseudomonas into nutrient broth liquid culture medium, and culturing in shaking table at 30 deg.C and 120r/min for 18h to obtain Pseudomonas seed liquid. Co-culturing acetic acid bacteria seed liquid and pseudomonas seed liquid in a shaking table at 30 ℃ and 120r/min according to the volume ratio of 1:1, culturing fermentation liquor for 8 hours, taking 0.1ml of fermentation liquor to perform plate coating in a gradient manner, and culturing for 48 hours in a constant-temperature incubator at 30 ℃; culturing the fermentation liquid for 40 hours, taking 0.1ml of fermentation liquid for plate coating in a gradient manner, culturing for 48 hours in a constant-temperature incubator at 30 ℃, and stopping fermentation for 48 hours; and (3) spraying 500mL of the diluent of the compound microbial inoculum on each mu of land, and then planting the plants.)

一种复合微生物菌剂提高土壤肥力的方法

技术领域

本发明涉及土壤修复技术领域，具体涉及一种复合微生物菌剂提高土壤肥力的方法。

背景技术

微生物菌剂是根据土壤微生态学原理、植物营养学原理、以及现代"有机农业"的基本概念而研制出来的。微生物菌剂是以微生物的生命活动导致作物得到所需养分(肥料)的一种新型肥料生物制品，是农业生产中肥料的一种(也称第三代肥料)。

微生物菌剂，含有高效活性有益微生物，适用于作物使用，提高养分利用率，打破了普通生物肥的"专一性""局限性""专用肥"的固有弱点，这是其它生物肥料无法比拟的。可适用于各种类型的土壤，帮助降解土壤、水和大气中的污染物质。

在现代农业发展中，微生物菌剂将得到越来越广泛的使用，现阶段对微生物菌剂的研究也越来越重视。微生物菌剂不仅可以促进作物的生长，提高产量，还具有增加土壤中有益微生物数量及活性，提高土壤保肥、保水、抗病能力。

发明内容

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种复合微生物菌剂提高土壤肥力的方法，包括步骤如下：

1)醋酸菌种子液的培养：将醋酸菌接入醋酸菌液体培养基中，在30℃、120r/min摇床中培养18h，得到醋酸菌种子液；

2)假单胞菌种子液的培养：将假单胞菌接入营养肉汤液体培养基中，在30℃、120r/min 摇床中培养18h，得到假单胞菌种子液。

3)复合微生物菌剂的培养：按体积比为1:1，将醋酸菌种子液和假单胞菌种子液在30℃、 120r/min摇床中培养，发酵液培养至第8小时，取0.1ml发酵液分梯度在醋酸菌固体培养基和营养肉汤固体培养基中进行平板涂布，并在30℃恒温培养箱中培养48h；发酵液培养至第 40小时，取0.1ml发酵液分梯度在醋酸菌固体培养基和营养肉汤固体培养基中进行平板涂布，并在30℃恒温培养箱中培养48h，48小时终止发酵；

4)喷施或滴灌：每亩土地喷施500mL复合菌剂的稀释液后种植植物。

优选地，上述的复合微生物菌剂提高土壤肥力的方法，步骤1)中所述的，醋酸菌培养基为：酵母膏10-20g，葡萄糖10-20g，碳酸钙20-30g，蒸馏水1000ml，调pH至6.8。

优选地，上述的复合微生物菌剂提高土壤肥力的方法，步骤1)中，按质量比，醋酸菌：醋酸菌培养基＝1：100-500。

优选地，上述的复合微生物菌剂提高土壤肥力的方法，步骤2)中，所述的营养肉汤培养基：牛肉膏3-5g，蛋白胨10-20g，氯化钠5-10g，蒸馏水1000ml，调pH至7.2～7.4。

优选地，上述的复合微生物菌剂提高土壤肥力的方法，步骤2)中，按质量比，假单胞菌：营养肉汤培养基＝1：100-500。

优选地，上述的复合微生物菌剂提高土壤肥力的方法，步骤4)中，所述的复合菌剂的稀释液是将复合微生物菌剂稀释100-1000倍。

本发明的有益效果是：

1.本发明中，醋酸菌可以在糖源充足时直接将葡萄糖转变为醋酸，或在缺少糖源时将乙醇变成乙醛，再变成醋酸，有利于作物生长。假单胞菌可用于生物防治和促植物生长，还可用于生物杀虫，生物防治主要作用的对象是植物病原真菌，如镰刀菌，雪霉叶枯菌等。

2.增产效果好，增产率高。向翻过的田地采用喷施或滴灌的方法每亩喷施500ml复合菌剂的稀释液，土豆平均增产600到1400斤，增产率达到20％-25％左右。

3.本发明无毒无害无污染，可以有效改善土壤结构，增强土壤的物理性能，明显提高土壤肥力，减少化肥用量。微生物菌剂的大量使用，还可以减少温室气体的排放，真正做到了无污染。

4.经本发明的方法处理后的土壤，无化肥残留，可有效改善土壤结构，明显提高土壤肥力，适于农作物的生长，并且提高农作物的产量与品质。

附图说明

图1是采用实施例1中所制备的微生物复合菌剂所种植出的土豆的图片。

图中第一行土豆是使用微生物复合菌剂所种植出的土豆，第二行是未使用微生物复合菌剂所种植出的土豆。

图2是采用实施例2中所制备的微生物复合菌剂所种植出的土豆的图片。

图中第一行土豆是使用微生物复合菌剂所种植出的土豆，第二行是未使用微生物复合菌剂所种植出的土豆。

图3是采用实施例3中所制备的微生物复合菌剂所种植出的土豆的图片。

图中第一行土豆是使用微生物复合菌剂所种植出的土豆，第二行是未使用微生物复合菌剂所种植出的土豆。

图4是醋酸菌和假单胞菌分别在各自培养基中以30℃，120r/min培养所得的生长曲线。

具体实施方式

下面通过实例对本发明做进一步详细说明。

材料：本发明选择长势好的水稻表面的土壤筛选的醋酸菌和假单胞菌。

实施例1

1.醋酸菌种子液的培养：挑取一个醋酸菌的单菌落接入100mL醋酸菌培养基中，在30℃、 120r/min摇床中培养18h，得到醋酸菌种子液。所述培养基为：酵母膏10g，葡萄糖10g，碳酸钙20g，蒸馏水1000ml，调pH至6.8。

2.醋酸菌生长曲线的测定：取醋酸菌种子液4ml接入100ml醋酸菌培养基中，即接种量为4％。在30℃、120r/min摇床中培养48h，每隔两小时测量一次OD值，得到该菌的生长曲线。结果如图4。

3.假单胞菌种子液的培养：挑取一个假单胞菌的单菌落接入100mL假单胞菌培养基中，在30℃、120r/min摇床中培养18h，得到假单胞菌种子液。所述假单胞菌培养基为：牛肉膏 3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml，调pH至7.2～7.4。

4.假单胞菌生长曲线的测定：取假单胞菌种子液5ml接入100ml假单胞菌培养基中，即接种量为5％。在30℃、120r/min摇床中培养48h，每隔两小时测量一次OD值，得到该菌的生长曲线。结果如图4。

5.在营养肉汤液体培养基中醋酸菌和假单胞菌种子液按1:1的比例同时接入，即4ml醋酸菌和4ml假单胞菌接入100ml培养基中。在30℃、120r/min摇床中培养，发酵液培养至第8 小时，取0.1ml发酵液分梯度在醋酸菌固体培养基和营养肉汤固体培养基中进行平板涂布，并在30℃恒温培养箱中培养48h；发酵液培养至第40小时，取0.1ml发酵液分梯度在醋酸菌固体培养基和营养肉汤固体培养基中进行平板涂布，并在30℃恒温培养箱中培养48h，48小时终止发酵。

4.测定醋酸菌和假单胞菌的活菌数，为7.9亿/ml，结果见表1。

表1单位cfu/ml

	10<sup>-5</sup>	10<sup>-6</sup>	10<sup>-7</sup>	10<sup>-8</sup>
					醋酸菌	无法计数	无法计数	44	7
假单胞菌	无法计数	无法计数	35	3

5.选取一片翻过的田地采用喷施或滴灌的方法每亩喷施500ml复合菌剂的稀释液(复合菌剂稀释100-1000倍)，一片土地不喷洒复合菌剂的稀释液作为对照组，在两片土地上种植土豆，使用结果如图1。使用微生物复合菌剂的田地种植的土豆较大。该田地平均增产800-1400 斤，增产率达25％左右。

实施例2

1.在营养肉汤液体培养基中醋酸菌种子液和假单胞菌种子液按1：2的比例同时接入，即 4ml醋酸菌种子液和8ml假单胞菌种子液接入100ml培养基中。在30℃、120r/min摇床中培养，发酵液培养至第8小时，取0.1ml发酵液分梯度在醋酸菌固体培养基和营养肉汤固体培养基中进行平板涂布，并在30℃恒温培养箱中培养48h；发酵液培养至第40小时，取0.1ml 发酵液分梯度在醋酸菌固体培养基和营养肉汤固体培养基中进行平板涂布，并在30℃恒温培养箱中培养48h，48小时终止发酵。

2.测定醋酸菌和假单胞菌的活菌数，为0.48亿/ml，结果见表2。

表2单位cfu/ml

	10<sup>-5</sup>	10<sup>-6</sup>	10<sup>-7</sup>	10<sup>-8</sup>
					醋酸菌	无法计数	44	3	1
假单胞菌	38	4	0	0

3.选取一片翻过的田地采用喷施或滴灌的方法每亩喷施500ml复合菌剂的稀释液(复合菌剂稀释100-1000倍)，一片土地不喷洒复合菌剂的稀释液作为对照组，在两片土地上种植土豆，使用结果如图2。使用微生物复合菌剂的田地种植的土豆较大。该田地平均增产600-800 斤，增产率达20％左右。

实施例3

1.在营养肉汤液体培养基中醋酸菌种子液和假单胞菌种子液按2：3的比例同时接入，即 4ml醋酸菌和6ml假单胞菌接入100ml培养基中。在30℃、120r/min摇床中培养，发酵液培养至第8小时，取0.1ml发酵液分梯度在醋酸菌固体培养基和营养肉汤固体培养基中进行平板涂布，并在30℃恒温培养箱中培养48h；发酵液培养至第40小时，取0.1ml发酵液分梯度在醋酸菌固体培养基和营养肉汤固体培养基中进行平板涂布，并在30℃恒温培养箱中培养 48h，48小时终止发酵。

2.测定醋酸菌和假单胞菌的活菌数，为1.76亿/ml，结果见表3；

表3单位cfu/ml

	10<sup>-5</sup>	10<sup>-6</sup>	10<sup>-7</sup>	10<sup>-8</sup>
					醋酸菌	无法计数	162	20	0
假单胞菌	156	14	10	1

3.选取一片翻过的田地采用喷施或滴灌的方法每亩喷施500ml复合菌剂的稀释液(复合菌剂稀释100-1000倍)，一片土地不喷洒复合菌剂的稀释液作为对照组，在两片土地上种植土豆，使用结果如图3。使用微生物复合菌剂的田地种植的土豆较大。该田地平均增产600-1000 斤，增产率达20％左右。