一种平板液体培养真菌的菌丝体收集方法
阅读说明：本技术 一种平板液体培养真菌的菌丝体收集方法 (Method for collecting mycelium of flat plate liquid culture fungus ) 是由 师桂英 苏国礼 杨宏宇 李潇潇 马家易 李元鹏 于 2021-06-10 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种有效的真菌菌丝体收集方法,将液体培养液倒入平板中,在其中接入直径为5-10mm的真菌菌饼,待菌丝长满平板且液体培养液消耗殆尽时,用灭过菌载玻片将菌丝体轻轻从平板上刮下,收集真菌菌丝体。申请人发现,将菌饼接入液体培养液中,静置而不进行振荡,菌丝体会漂浮于培养液表面；且培养液的体积随着培养天数的增加逐渐,直至液体培养液消耗殆尽,可将菌丝与培养液隔离,便于收集得到菌丝体。利用本发明的平板液体培养真菌菌丝体的收集方法,不仅获得的菌丝体含水量低,并且适用范围广,对于较粘稠或较清澈的发酵液都适用,本发明提供的方法操作简单快捷、成本低、节能低碳环保。(The invention discloses an effective fungus mycelium collection method, which comprises the steps of pouring liquid culture solution into a flat plate, inoculating a fungus cake with the diameter of 5-10mm into the flat plate, and when the hyphae grow to be full of the flat plate and the liquid culture solution is used up, using a sterilized glass slide to gently scrape the hyphae from the flat plate, and collecting the fungus mycelium. The applicant finds that mycelium can float on the surface of a culture solution when the fungus cake is inoculated into the liquid culture solution and stands without shaking; and the volume of the culture solution is gradually increased along with the increase of the culture days until the liquid culture solution is completely consumed, so that the mycelium can be isolated from the culture solution, and the mycelium can be conveniently collected. The method for collecting the fungal mycelia through the plate liquid culture has the advantages that the obtained mycelia are low in water content and wide in application range, and the method is suitable for viscous or clear fermentation liquor.)
技术领域
本发明涉及真菌培养技术领域，具体为一种平板液体培养真菌的菌丝体收集方法。
背景技术
研究人员在进行真菌菌丝体的总DNA、RNA和蛋白质及相关酶的提取及参数探索等研究中，需要对菌丝体进行培养增殖。目前，真菌菌丝收集的方法一般有液体培养的菌丝体收集方法和固体培养的菌丝体收集方法两种，而液体培养的菌丝体收集方法一般采用高速离心法和过滤法两种，固体培养的菌丝体收集方法一般采用试管斜面或平板等固体培养基进行养菌后刮取表面菌丝体的方法，两种方法均可以将菌丝体分离收集。但是其分离方法都存在一定不足。
高速离心法，一方面，由于某些真菌菌种液体培养的菌丝体较为粘稠，成悬浮液大颗粒状态，因此，即使采用很高的离心速度，也难以将菌丝体完全紧凑地沉降到离心管底部，分离效果差；另一方面，菌丝球颗粒内部的水分也难以通过离心去除，并且还存在离心机成本高、操作繁琐耗时等问题。
过滤法，目前包括采用滤纸进行真空抽滤的方法、普通纱布过滤法以及借助收集装置过滤的方法。滤纸真空抽滤法，同样存在由于某些真菌菌种发酵液的浓度高且粘稠，很难得到较干燥的菌丝的问题，另一方面，由于发酵液粘稠，滤纸微孔极易被发酵液堵住，因此，后续难以过滤，必须不断更换滤纸，而且由于滤纸湿润后容易被刮破，因此吸附在滤纸上的菌丝体整取下来需要较高的技术要求。过滤法一般用纱布过滤与过滤装置过滤：纱布法过滤时，由于纱布易沾菌丝，在样品数量多的情况下易造成不同样品间的菌丝交叉污染，不可重复利用，从而造成不必要的浪费，并且在采用纱布过滤时，纱布层数少则菌丝容易漏出，层数多时，每层纱布间及纱布孔中容易残留菌丝，易造成样品的浪费和数据的误差；利用过滤装置过滤，收集菌丝时，收集的菌丝干燥度不够；另一方面，购买过滤装置需要一定的前期投入，增加了成本。
试管斜面或平板等固体培养菌丝体后刮取表面菌丝体的方法，一方面菌丝量太小难以满足实验需求，另一方面，刮取菌丝体过程中难免带入固体培养基，不仅操作麻烦繁琐，而且影响后续分子生物实验的开展及实验结果的准确性。
因此亟需设计一种平板液体培养真菌的菌丝体收集方法来解决上述问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种平板液体培养真菌的菌丝体收集方法，以解决上述背景技术中提出因素问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种平板液体培养真菌的菌丝体收集方法，包括如下结构：
且其生产工艺方法如下：
步骤一：将真菌培养平板通过清水进行清洗至洁净；
步骤二：将清洗后的真菌培养平板排布在真菌培养室内；
步骤三：将真菌菌饼接入盛有少量液体培养液的平板中，静置于适合真菌生长的环境下培养数天；
步骤四：待菌丝体长满培养基，且液体培养基消耗殆尽后收集真菌菌丝体。
优选的，在步骤四制备过程中，待菌丝体长满培养基且液体培养基消耗殆尽后，用载玻片或者手术刀刮下真菌菌丝体并将其收集。
优选的，所述在步骤四制备过程中，培养基为液体培养基。
优选的，所述在步骤三制备过程中，液体培养液是倒置在平板中的。
优选的，所述在步骤三制备过程中，真菌菌饼是接在平板中的液体培养液中。
优选的，所述在步骤二制备过程中，培养条件是静置且适合菌落生长的环境下培养。
优选的，所述在步骤三制备过程中，所述真菌菌饼为菌落直径在5-10mm之间。
优选的，所述在步骤四制备过程中，所述菌丝体用于还原糖、蛋白质及抗氧化酶的提取。
优选的，所述在步骤二制备过程中，培养室内部的培养温度在 25-33摄氏度。
优选的，所述在步骤三制备过程中，真菌培养天数为3-5天。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)、通过将菌饼接入液体培养液后，静置而不进行振荡，菌丝体会漂浮于培养液表面；且培养液的体积随着培养天数的增加逐渐，直至液体培养液消耗殆尽，可将菌丝与培养液隔离，便于收集得到菌丝体，整体的作业流程简单明了不复杂，在一定的程度上显著的降低了整体的工艺的成本，保证了整体工艺的经济效益，扩大了适用范围；
(2)、通过利用本发明的平板液体培养真菌菌丝体的收集方法，不仅获得的菌丝体含水量低，不会与传统的方法类似，更不会在获取时存在较多的水分，这样不但降低了收集的质量，同时影响到了整体的工艺价值，对此，本方法有效的避免该现象的产生，使其适用范围更广，对于较粘稠或较清澈的发酵液都适用，本发明提供的方法操作简单快捷、成本低、节能低碳环保。
(3)、通过大量实验证明，该培养收集方法收集得到的菌丝体，适合后续用于还原糖、蛋白质及各类酶的提取等，满足了整体工艺的提取价值，因此，值得推广使用。
附图1为本工艺的流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供的一种实施例：
参照附图1，具体为一种平板液体培养真菌的菌丝体收集方法，包括如下流程：
实施例1
1.一种平板液体培养真菌的菌丝体收集方法，真菌培养平板通过清水进行清洗至洁净，这样的目的是为了可以更好的保证真菌培养平板的洁净性，这样可以更好的利于真菌的培养生长，也保证了真菌在培养期间的洁净性，对接培养环境对真菌造成的污染，提高了整体的工艺效果；
2.为保证真菌在培养期间，培养条件是静置且适合菌落生长的环境下培养，则将清洗后的真菌培养平板排布在真菌培养室内，培养室内部的培养温度在25-33摄氏度，其目的是为了保证真菌在培养期间可以得到良好的温度环境，这样可以更好的有助于真菌的培养以及后期的获取；
3.将真菌菌饼接至平板中盛有的液体培养液中，真菌菌饼为菌落直径在5-10mm之间，待菌丝体长满平板且培养液被消耗殆尽，经过真菌培养天数为3-5天，将菌饼接入液体培养液后，静置而不进行振荡，菌丝体会漂浮于培养液表面，且培养液的体积随着培养天数的增加逐渐，菌丝体用于还原糖、蛋白质及抗氧化酶的提取；
4.待菌丝体长满培养基且液体培养基消耗殆尽后，用载玻片或者手术刀刮下真菌菌丝体并将其收集，不仅获得的菌丝体含水量低，并且适用范围广，对于较粘稠或较清澈的发酵液都适用，本发明提供的方法操作简单快捷、成本低、节能低碳环保。
实施例2
1.一种平板液体培养真菌的菌丝体收集方法，将培养有5-7天的菌落上打取直径为5-10mm的菌饼，将其接入平板中的液体培养基中，盖上平板盖后，正面朝上静止放置于适合菌种生长的环境中，待菌丝长满培养基且培养基消耗殆尽后；
2.利用载玻片或手术刀将菌丝轻轻刮下，并收集真菌菌丝体，同时也通过大量实验证明，该培养收集方法收集得到的菌丝体，适合后续用于还原糖、蛋白质及各类酶的提取等。
实施例3
一种平板液体培养真菌的菌丝体收集方法，将真菌菌种接入平板中适宜真菌生长的液体培养液中，从平板底部观察，待平板中的液体培养液消耗殆尽后收集真菌菌丝体。
1.本次所用培养基为常规液体培养液：马铃薯葡萄糖培养液 (PDB)
2.根据试验需求，将PDB培养液倒入适当规格的平板中；
3.用5-10mm直径的打孔器在固体培养基培养了5-7天的菌落上打下菌饼；
4.用灭过菌的镊子将菌饼轻轻取出，接入到平板中的PDB培养液中，盖上盖子，正面静置于适合真菌生长的环境中进行培养；
5.培养至菌丝体下部的培养液消耗殆尽至干燥时，用载玻片或者手术刀将菌丝轻轻刮下，收集至冷冻管中，即为纯干燥的菌丝；
实施例4
一种平板液体培养真菌的菌丝体收集方法，
1.本次所用培养基为常规液体培养液：马铃薯葡萄糖培养液 (PDB)：马铃薯20g，葡萄糖2g，100蒸馏水，搅拌后，121℃、0.1MPa 高压蒸汽灭菌20min，冷却后备用；
2.根据试验需求，将PDB培养液倒入适当规格的平板中；
3.用5-10mm直径的打孔器在固体培养基培养了5-7天的菌落上打下菌饼；
4.在无菌环境下用灭过菌的镊子将菌饼轻轻取出，接入到平板中的PDB培养液中，盖上盖子，正面静置于适合真菌生长的环境中进行培养；
5.培养至菌丝体下部的培养液消耗殆尽至干燥时，再在无菌环境下，用灭过菌地载玻片或者手术刀将菌丝轻轻刮下，收集至冷冻管中，即为纯干燥的菌丝。
基于上述实施例1、实施例2、实施例3以及实施例4，可以得到如下总结：本发明通过将菌饼接入液体培养液后，静置而不进行振荡，菌丝体会漂浮于培养液表面；且培养液的体积随着培养天数的增加逐渐，直至液体培养液消耗殆尽，可将菌丝与培养液隔离，便于收集得到菌丝体，整体的作业流程简单明了不复杂，在一定的程度上显著的降低了整体的工艺的成本，保证了整体工艺的经济效益，利用本发明的平板液体培养真菌菌丝体的收集方法，不仅获得的菌丝体含水量低，不会与传统的方法类似，更不会在获取时存在较多的水分，这样不但降低了收集的质量，同时影响到了整体的工艺价值，对此，本方法有效的避免该现象的产生，使其适用范围更广，对于较粘稠或较清澈的发酵液都适用，本发明提供的方法操作简单快捷、成本低、节能低碳环保，并且也通过大量实验证明，该培养收集方法收集得到的菌丝体，适合后续用于还原糖、蛋白质及各类酶的提取等，满足了整体工艺的提取价值，因此，值得推广使用。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。