阅读说明：本技术 一种母牛性控双胎的方法 (Cow sex-controlled double-fetus method ) 是由 甘蔗 甘甜 于 2019-11-07 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种母牛性控双胎的方法,包括：在受体母牛自然发情受精满6天后通过胚胎移植植入同性别的胚胎一枚。本发明在不增加饲养成本的条件下额外获得安全可持续繁衍的优良母牛,将极大推进我国母牛良种的改良速度和存栏量。(The invention discloses a cow sex control twins method, which comprises the following steps: one embryo of the same sex is implanted by embryo transfer 6 days after the recipient cow has naturally estrated and fertilized. The method additionally obtains excellent cows capable of safely and sustainably breeding under the condition of not increasing the breeding cost, and greatly promotes the improvement speed and the stock quantity of the improved cows in China.)

一种母牛性控双胎的方法

技术领域

本发明涉及哺乳动物繁殖技术领域，具体涉及一种母牛性控双胎的方法。

背景技术

牛是草食性单胎动物，在自然状态下的双胎率极低，仅为0.15％-2.99％，在所生异性双胎的母犊中，有91％～94％的个体不能生育。牛怀双胎会提高繁殖效率和养牛经济效益，人工诱导母牛生产双胎，可成倍地提高母牛的繁殖力，增加商品牛的数量。自本世纪30年代以来，人们利用遗传选择、药物诱导、激素免疫等方法，试图提高母牛的双胎率，取得了一定进展。

遗传选择双胎这一经济性状的遗传力很低，通过遗传选择来提高双胎率是非常困难的，业内人士想通过遗传选种来增加双胎，这种尝试目前尚未获得成功；目前，已知可利用外源***，例如PMSG(孕马血清***)、FSH(促卵泡激素)，刺激母牛卵巢上多个卵泡发育并成熟***，受精妊娠；也有利用抑制素抗血清免疫母牛的。然而，利用激素达到双胎，在未找到控制每侧卵巢各排一个卵的方法之前还不能在生产中大规模地采用，因为常发生一个子宫角有两个以上胚胎的情况，而牛的一侧子宫角对维持一个以上胚胎有明显的对抗性，牛胚胎极少能从一个子宫角迁移到另一侧子宫角的，在这种情况下，往往会发生流产、难产和胚胎死亡。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供了一种母牛性控双胎的方法，在不增加饲养成本的条件下额外获得安全可持续繁衍的优良母牛，将极大推进我国母牛良种的改良速度和存栏量。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种母牛性控双胎的方法，包括：在受体母牛自然发情受精满6天后通过胚胎移植植入同性别的胚胎一枚。

优选地，在受体母牛自然发情受精后第7天进行胚胎移植，此时最容易着床。

优选地，通过性控***分别给发情的受体母牛和胚胎供体母牛授精获得性控胚胎。

更优选地，受体母牛与胚胎供体母牛的发情同步程度在24小时以内。第一次人工授精给7天后胚胎移植创造同步生殖内环境会比人为激素处理会更匹配，最大限度提高胚胎着床率，确保性控双胎几率的提高。

优选地，受体母牛第一次发情时不授精，等下次发情时再授精。这样母牛体内的生理环境靠自身调节激素会达到最佳状态，黄体发育才会最好。

优选地，受体母牛为初产母牛时，送入雌性胚胎且初产的受体母牛超过20个月龄；雄性胚胎移植给经产受体母牛。因为大型肉牛头胎次几乎都面临着难产，为了降低难产率，最好的办法就是拖延初配种的时间，最好达到20个月之后初孕。而初产母牛产公牛犊几乎都有难产的可能，会给受体母牛和新生公牛犊构成生命威胁，造成意外损失，通过性控技术可人为干预初产母牛产母牛犊，性控母牛双胎则可以最好的避免初产母牛难产的风险，确保新生牛犊的成活率最高。

优选地，通过以下方法获得性控公牛双胎：胚胎供体母牛发情启动后27-32小时输精，或者卵泡发育如熟透葡萄状弹性、一触即破时输精，过7天后冲洗获得的胚胎再移植给同样操作(即发情启动后27-32小时输精)的受体母牛。这样的操作使着受孕着床率大大提高，为获得更多公牛育肥，提高怀孕率，降低成本摸索出一条捷径。

优选地，植入胚胎的卵子来源包括处女牛初次发情直到20个月准配怀孕期间排出的卵子。处女牛卵子的收集利用解决了***的来源，实现了良种母牛的资源整合。

优选地，通过以下方法收集可用于胚胎移植的胚胎：

1)将胚胎供体母牛投入保定架，进行站台保定，并作一次尾根麻醉；

2)掏出直肠内的粪便，并清洗好***周围；

3)将***外洗净并用酒精消毒，把宫颈通开；

4)把三路式导管冲卵器通过宫颈***子宫角，直至导管球囊部可充入7-20毫升的空气为止；

5)将导管的一根管道通过第一乳胶管接装有500-1000毫升冲洗液的玻璃瓶，将玻璃瓶悬挂在高于牛子宫水平1米以上处，导管的第二根管道通过第二乳胶管与位于地平面的采卵容器相接；

6)先夹紧第二乳胶管，开启第一乳胶管，使冲卵液靠压力自动流入子宫，然后夹紧第一乳胶管，同时开启第二乳胶管使冲卵液流入采卵容器；

7)在每一侧子宫角重复步骤4)-6)6-7次。

优选地，还包括采集完成后从采卵容器底吸出冲卵液，在立体显微镜底下检卵。因冲洗液量多而含有子宫粘液和细胞碎片，寻找胚胎要格外细心。

更优选地，为了防止胚胎供体母牛感染和由剩余胚胎造成妊娠，可灌注30毫升20％复方碘溶液。

优选地，受体母牛为奶牛，植入的胚胎为肉牛的胚胎。

本发明的有益效果如下：

目前国内奶牛场基本都是性控母牛，本发明在奶牛正常人工授精的第7天再移植一枚纯种肉牛的雌性胚胎，在不影响奶牛正常饲养条件下，额外获得一个纯种肉牛的良种母牛，用性控双胎技术解决了纯种肉牛(比如，纯种比利时蓝牛和夏洛来牛)难产的问题。

如果说人工授精技术的出现使公畜的繁殖潜力得到最大限度的发挥的话，那么胚胎移植技术的出现可以使母畜的繁殖潜力得以充分发挥，本发明则将把母畜的繁殖潜力发挥最大限度，在不增加饲养成本的条件下额外获得安全可持续繁衍的优良母牛，将极大推进我国母牛良种的改良速度和存栏量，大大增加养牛人的收入，这项技术的推广将是养牛产业的一次技术“革命”。

具体实施方式

为了更好的理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明不仅仅局限于下面的实施例。

实施例

方法实施之前，最好把供体母牛、种公牛、受体母牛彻底全面进行疾病筛查净化工作，比如布氏杆菌病、结核病、巴士杆菌、支原体病、鼻气管炎病和***病等传染病的预防，以确保本发明在健康可持续的牛群体中推广应用。

1、供体母牛处理

选择供体母牛时需要考虑三个关键因素：1)优质的遗传基因；2)强盛的繁殖能力；3)后代良好的市场前景。

大型肉牛头胎次几乎都面临着难产，为了降低难产率，最好的办法就是拖延初配种的时间，最好达到20个月之后初孕，在饲养条件好的情况下，一般处女牛在7个月左右就开始初次发情，之后每间隔21天左右反复发情直到配种怀孕。在初次发情直到20个月准配怀孕期间会多次发情***。例如，2岁母牛每个卵巢有5000个卵泡，在这10000个***中，只有5-10个能成熟能成熟并受精育成子牛，这种种卵泡大量浪费的现象太可惜了，如果把这期间的卵子和***结合再收集起来，通过超排技术和胚胎移植技术则可以利用更多的***。因此，可通过超数***受精后第7天时再冲洗回收胚胎移植到同期发情的牛群受体，这样就把良种母牛的资源充分利用起来了，想获得雌雄胚胎就可以通过性控***得到所需要的性控双胎。

具体操作要求包括以下几点：

(1)将供体牛投入保定架，进行站台保定。为防止宫颈紧缩，将作一次尾根麻醉，即把5-10毫升2％的普鲁卡因注入尾椎硬膜外。

(2)掏出直肠内的粪便，并清洗好***周围。

(3)将***外洗净并用酒精消毒。为了使导管能够顺利通过子宫颈，先导入一个粗细合适的棒状开张器，把宫颈通开。然后把三路式导管冲卵器通过宫颈***子宫角，直至球囊部可充入7-20毫升的空气为止。导管中插1根金属通杆以增加硬度，使之易于通过子宫颈。

(4)移去金属通杆。将导管的一根管道通过乳胶管接装有500-1000毫升冲卵液(PBS加4％牛血清蛋白)的玻璃瓶。将玻璃瓶悬挂在高于牛子宫水平1米以上处，导管的第二根管道也是通过乳胶管与位于地平面的采卵容器相接。圆锥形玻璃容器或1000毫升的量筒均可用作采卵容器。

(5)先夹紧导管与采卵容器之间的乳胶管(出口管)，开启导管与装有冲卵液的玻璃瓶之间的乳胶管(入口管)，使冲卵液靠压力自动流入子宫，然后夹紧入口管。同时开启出口管而使冲卵液流入采卵容器。以上过程在每一侧子宫角重复6-7次。

(6)采集后从圆锥形玻璃容器(或1000毫升的量筒)底部吸出冲卵液，在立体显微镜底下检卵。因冲卵液量多而含有子宫粘液和细胞碎片，寻找胚胎要格外细心。

(7)对处理后的供体为了防止感染和由剩余胚胎造成妊娠，可灌注30毫升20％复方碘溶液。

性控胚胎采集后，分装业内通用0.25ml的细管内可以鲜胚移植到同步发情受精的受体母牛体内即可，多余的胚胎可以冷冻备用。

2、受体母牛的处理

理想的受体牛应该是没有疾病的、具有生殖和哺乳能力的年轻母牛。一般来讲，超过10年的老牛不容易妊娠，一般不用，使用未经产的年轻母牛做受体最好超过20个月龄。

受体母牛哪侧***，触摸哪侧黄体发育是否正常？是否适合移植？当受体母牛群体数量足够多时，可以做鲜胚胎移植，鲜胚移植着床率高，成本低。因为受体母牛提供的生理环境是同步的，当鲜胚移植满足不了时再把收集起来的胚胎冷冻保存备用。这样是最佳资源整合，效益回报最高。

在实际操作中，受体母牛第一次发情时最好不受精，间隔一次，等下次发情(即第二次发情)时再受精，这样母牛体内的生理环境靠自身调节激素会达到最佳状态，黄体发育才会最好。一般用手轻轻触摸黄体如蘑菇状或如火山口状，体积达到2*2*3(cm)弹性较好，肉牛的会比奶牛的略小些，如蚕豆大小，基部发育粗状基本都适合移植条件。当所有的操作都是在清洁无菌状态下，遵循柔和快速操作着床率会大大提高。

因为初产母牛产公牛犊几乎都有难产的可能，会给受体母牛和新生公牛犊构成生命威胁，造成意外损失，通过性控技术人为干预初产母牛产母牛犊可以大大避免难产的风险，性控双胎母牛犊能最好的解决初产母牛难产的风险。性控双胎公牛则最好移植给经产母牛，主要是考虑难产概率，确保新生犊牛的成活率最高。

性控双胎公牛最佳操作：发情母牛发情启动后27-32小时输精，或者卵泡发育如熟透葡萄状弹性，一触即破的感觉时输精，在***获能后活力旺盛的大多是含y染色体的***，基本上都是怀孕的公牛胚胎，只要运用这样的输精时间操作受精，过7天后冲洗获得的胚胎基本上也都是公牛的胚胎(80％左右)，再移植给同样操作的母牛受体基本上获得的都是公牛双胎。采用上述方法和其他性控双胎公牛方法概率接近但着受孕着床率大大提高(可提高20％以上)，这样的操作为获得更多公牛育肥，提高怀孕率，降低成本摸索出一条捷径。

性控双胎技术的核心是在受体母牛正常发情受精后的第7天再次移植一枚同性别的胚胎，在确保避免难产的同时，尽量获得安全可持续繁衍后代，提高肉牛的市场需要提供行之有效的技术保障。

为获得较高的妊娠率，供受体发情的同步程度应在24小时范围内，采用“零天计算”的周期计算方法(著作权登记号：国作登字-2019-A-00715288)能准确的计算出供体和受体的起始发情时间。因为第一次人工授精给7天后胚胎移植创造同步生殖内环境这样会比人为激素处理会更匹配，鲜胚移植会最大限度提高胚胎着床率，进而确保性控双胎几率的提高。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。