阅读说明：本技术 兴安虫实提取物在制备美白类化妆品中的应用 (Application of Xingan worm extract in preparation of whitening cosmetics ) 是由 苏红 刘志宝 文程 张晓丹 何颖 余琦 于 2019-12-13 设计创作，主要内容包括：本发明涉及兴安虫实提取物的应用方法,即利用兴安虫实提取物来制备美白类化妆品。所述兴安虫实提取物中金盏菊苷E的质量百分比含量≥50％。兴安虫实提取物对细胞酪氨酸酶活性以及黑色素合成均有明显的抑制作用,可以用作化妆品中的美白添加剂。(The invention relates to an application method of a Xingan worm seed extract, namely, the Xingan worm seed extract is used for preparing whitening cosmetics. The content of calendula glycoside E in the Xingan insect seed extract is more than or equal to 50 percent by mass. The Xingan worm extract has obvious inhibition effect on cell tyrosinase activity and melanin synthesis, and can be used as a whitening additive in cosmetics.)

兴安虫实提取物在制备美白类化妆品中的应用

技术领域

本发明涉及兴安虫实提取物在化妆品中的应用，尤其是在制备美白类化妆品中的应用。

背景技术

兴安虫实(Corispermum chinganicum Iljin)为藜科虫实属植物。植株高10-50厘米，茎直立，圆柱形，直径约2.5毫米，绿色或***；由基部分枝，下部分枝较长，上升，上部分枝较短，斜展。叶条形，长2-5厘米，宽约2毫米，先端渐尖具小尖头，基部渐狭，1脉。穗状花序顶生和侧生，细圆柱形，稍紧密，长(1.5)-4-5厘米，直径3-8毫米，通常约5毫米；苞片由披针形(少数花序基部的)至卵形和卵圆形，先端渐尖或骤尖，(1)-3脉，具较宽的膜质边缘。花被片3，近轴花被片1，宽椭圆形，顶端具不规则细齿，远轴2，小，近三角形，稀不存在；雄蕊5，稍超过花被片。果实矩圆状倒卵形或宽椭圆形，长2-4毫米，宽1.5-2毫米，顶端圆形，基部心形，背面凸起中央稍微压扁，腹面扁平，无毛；果核椭圆形，黄绿色或米黄色，光亮，有时具少数深褐色斑点；喙尖为喙长的1/3-1/4，粗短；果翅明显，浅黄色，不透明，全缘。花果期6-8月。产黑龙江、吉林、辽宁、河北、内蒙古、宁夏、甘肃。生于湖边沙丘，半固定沙丘或草原。

据《沙漠地区药用植物》记载，兴安虫草的全草可以作为中药虫实入药，味淡、微苦、性凉；具有清湿热、利小便的功效；治小便不利、热涩疼痛、黄疸。但作为一个地方用药，虫实在临床上并未得到普遍使用，现有技术中未有任何关于该植物化学成分或现代药理活性的文献报道。

兴安虫实在黑龙江和内蒙地区有着广泛的分布，资源很丰富。但在畜牧业上，虫实常常会被当作杂草而废弃，造成资源的浪费。因此，对兴安虫实进行开发利用是个亟待解决的技术问题。

金盏花苷E(Calenduloside E)，又名去葡萄糖竹节参皂苷等，CAS号26020-14-4，分子式C₃₆H₅₆O₉，结构式如下：

现代研究表明，金盏花苷E具有多种药理活性，具有广阔的临床应用前景。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种兴安虫实提取物的应用方法，即利用兴安虫实提取物来制备美白类化妆品。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

兴安虫实提取物在制备美白类化妆品中的应用。

优选的，所述兴安虫实提取物中金盏菊苷E的质量百分比含量≥50％，且采用如下方法制备：

取兴安虫实的干燥全草，以每克生药加入10mL乙醇溶液的比例加入体积百分比为85％的乙醇溶液，回流提取2次，每次1.5小时，滤过，取药液，减压回收乙醇至尽，得乙醇提取液。

取乙醇提取液，以1:6的体积比加入水饱和正丁醇，萃取8次，合并正丁醇层，回收溶剂至干，将固体添加到硅胶层析柱上，以甲醇-氯仿混合溶剂洗脱，该混合溶剂中甲醇与氯仿的体积比为2:1，洗脱液按柱体积分份收集，合并第5-8份柱体积的洗脱液，减压回收溶剂至干，即得。

进一步优选的，所述兴安虫实提取物中金盏菊苷E的质量百分比含量≥90％，且所述制备方法中还包括制备液相分离：

色谱条件：以规格为10μm，19mm×300mm的μBondapark C18柱为色谱柱；以体积比为85:15的甲醇-1％冰醋酸为流动相，流速为15mL/min，柱温为30℃；

取经硅胶柱层析柱分离所得的固体，用流动相溶解，滤过，注入制备液相色谱仪，收集出峰时间为11-14min之间的馏分，合并，减压回收溶剂、干燥即得。

兴安虫实提取物具有美白功效可以通过下述试验证明。

试验例兴安虫实提取物对小鼠B16黑色素细胞内酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响

1.材料

小鼠B16黑色素瘤细胞株；DMEM培养基；胰蛋白酶；L-DOPA。

熊果苷(98％)，外购。

兴安虫实提取物(简称XT50)，按实施例1自制。

兴安虫实提取物(简称XT90)，按实施例2自制。

酶标仪,美国BIO-RAD公司。

2.方法

2.1供试药物的制备

取XT50，分别用去离子水稀释至0.02、0.2、2mg/mL，标为XT50低、中、高剂量组。

取XT90，分别用去离子水稀释至0.01、0.1、1mg/mL，标为XT90低、中、高剂量组。

取熊果苷，用去离子水稀释至2mg/mL，标为熊果苷组。

2.2小鼠B16黑色素细胞培养

无菌条件下,将1×10⁵个/mL的小鼠B16黑色素细胞接种于含10％(体积份数)小牛血清的DMEM培养基的培养瓶中,在37℃、5％CO₂培养箱中培养,每3天用0.25％胰酶消化传代一次。

2.3细胞内酪氨酸酶活力测定

待细胞生长到对数期,用0.25％胰酶消化,调整到细胞2×10⁴个/mL,接种于96孔板中,每孔100μL。置于培养箱中培养24h后,弃上清液,添加待测药物。每一浓度设8个孔,对照组不加药物,代之同量维持液。孵育3天。药物作用3天后,弃去上清液,用pH6.8 PBS冲洗两遍,每孔加90μL含1％Triton X-100的PBS。冰浴中超声破碎,每孔加10μL 10mM的L-DOPA,37℃孵育60min,测量490nm各孔吸光度值。

抑制率＝(1-药物组平均吸光度值/对照组平均吸光度值)×100％。

2.4细胞内黑色素含量测定

将B16黑色素细胞以1×10⁵个/mL的密度接种于6孔板。每孔3mL,孵育24h后,弃上清液,添加待测药物,药物作用3d后,弃上清液,PBS洗涤,每孔加入0.5mL胰酶消化细胞3min,加2mL维持液终止消化,分别计数每组细胞。细胞悬液离心弃上清,沉淀中加入1mol/LNaOH溶液,80℃加热30min。分光光度计检测475nm的吸光度。

黑色素合成抑制率＝[1-(药物孔吸光度值/药物孔细胞数)/(对照孔吸光度值/对照孔细胞数)]×100％

2.5数据处理

数据以均值表示。

3.结果

由于高浓度药物对细胞的生长有明显影响,为了避免药物细胞毒性对酶活性作用的干扰,本实验采用了对细胞正常生理无影响的药物浓度。

由表1可见,各种兴安虫实提取物对细胞酪氨酸酶活性以及黑色素合成均有明显的抑制作用,并呈现一定的剂量-效应关系。其中,XT50高剂量组的抑制率要优于阳性对照组熊果苷。

结果还显示，相应剂量下，金盏花苷E的纯度越高，其美白效果并非越佳，因此兴安虫实提取物美白作用的物质基础可能不仅仅与金盏花苷E相关。

表1对小鼠B16黑色素细胞内酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响

	酪氨酸酶抑制率(％)	黑色素合成抑制率(％)
			XT50低剂量组	53.8	49.7
XT50中剂量组	63.4	60.6
			XT50高剂量组	87.6	84.3
XT90低剂量组	59.7	54.8
			XT90中剂量组	61.5	57.7
XT90高剂量组	81.4	76.9
			熊果苷组	83.5	78.8

根据不同的制备方式，兴安虫实提取物在化妆品中的质量百分比可以是0.01-50％。

兴安虫实提取物作为添加剂制备美白类化妆品时，可以采用粉剂、水剂、乳膏剂等形式。

为了更好的阐述技术方案，下面结合

具体实施方式

对本发明作进一步的说明，但本发明所要求的保护范围不限于下列实施例。

具体实施方式

实施例1兴安虫实提取物(XT50)的制备

取兴安虫实的干燥全草10Kg，以每克生药加入10mL乙醇溶液的比例加入体积百分比为85％的乙醇溶液，回流提取2次，每次1.5小时，滤过，取药液，减压回收乙醇至尽，得乙醇提取液。

取乙醇提取液，以1:6(乙醇提取液:水饱和正丁醇)的体积比加入水饱和正丁醇，萃取8次，取正丁醇层，回收溶剂至干，将固体添加到硅胶层析柱上，以甲醇-氯仿混合溶剂洗脱，该混合溶剂中甲醇与氯仿的体积比为2:1，洗脱液按柱体积分份收集，合并第5-8份柱体积的洗脱液，减压回收溶剂至干，得兴安虫实提取物(XT50)6.26g，其中金盏菊苷E的质量百分比含量为52.8％。

实施例2兴安虫实提取物(XT90)的制备

取4g实施例1制备的XT50，采用制备液相进一步的分离纯化，方法如下：

色谱条件：以规格为10μm，19mm×300mm的μBondapark C18柱为色谱柱；以体积比为85:15的甲醇-1％冰醋酸为流动相，流速为15mL/min，柱温为30℃；

取XT50，用流动相溶解，滤过，注入制备液相色谱仪，收集出峰时间为11-14min之间的馏分，合并，减压回收溶剂、干燥即得类白色粉末1.53g，其中金盏菊苷E的质量百分比含量为91.7％。

实施例3兴安虫实提取物水剂的制备

制法：取0.2gXT50(或XT90)，加入500mL去离子水溶解，灌装即得。

用法：直接搽在皮肤上。

实施例4兴安虫实提取物乳膏的制备

处方：硬脂酸甘油酯4g、十二烷基硫酸钠0.3g、硬脂酸3g、白凡士林7g、液体石蜡3g、丙二醇1g、甘油5g、蒸馏水25g、XT50(或XT90)0.2g。

制法：取硬脂酸甘油酯，硬脂酸、白凡士林、液体石蜡作为油相，置于一烧杯中，于水浴锅加热至熔化；另将甘油、丙二醇以及蒸馏水置于另外一个烧杯中，作为水相，加热至75摄氏度，加入十二烷基硫酸钠溶解；将水相缓缓倒入油相中，边加边搅拌，直至冷凝，即得乳剂型基质；称取上述兴安虫实提取物、香料加入上述基质中，搅拌均匀即得。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。