阅读说明：本技术 一种菜籽油中角鲨烯的提取方法 (Method for extracting squalene from rapeseed oil ) 是由 熊净 于 2019-10-17 设计创作，主要内容包括：本发明涉及角鲨烯提取技术领域,具体涉及一种菜籽油中角鲨烯的提取方法,包括如下步骤：(1)向菜籽油中加入含复合酶的水溶液,然后置于脉冲直流电场下处理；(2)向步骤(1)所得物中加入微晶纤维溶液混,再加入转晶剂于50-55℃条件下混合后,保温处理,过滤,去除滤液；(3)向步骤(2)所得物中加入乙醇,同时加入左旋维生素C,置于60-65℃条件下恒温水浴中回流,冷却,水洗直至洗涤液呈中性后,在真空条件下蒸馏；本发明中角鲨烯提取率高,试剂残留少,提高了角鲨烯的纯度,并且降低提取成本。(The invention relates to the technical field of squalene extraction, and particularly relates to a method for extracting squalene from rapeseed oil, which comprises the following steps: (1) adding a water solution containing a complex enzyme into the rapeseed oil, and then placing the rapeseed oil in a pulse direct current electric field for treatment; (2) adding a microcrystalline fiber solution into the product obtained in the step (1), mixing, adding a crystal modifier, mixing at 50-55 ℃, preserving heat, filtering, and removing filtrate; (3) adding ethanol and levovitamin C into the product obtained in the step (2), placing the mixture in a constant-temperature water bath at the temperature of 60-65 ℃ for reflux, cooling, washing with water until the washing liquid is neutral, and distilling under vacuum; the method has the advantages of high squalene extraction rate, less reagent residue, improvement of squalene purity and reduction of extraction cost.)

一种菜籽油中角鲨烯的提取方法

技术领域

本发明涉及角鲨烯提取技术领域，具体涉及一种菜籽油中角鲨烯的提取方法。

背景技术

菜籽油,也称油菜籽油或香菜油,在湖南部分地区又叫清油。以其色泽金黄,气味清香而广泛用于人们的日常生活中,是国内外的主要食用油脂之一。菜籽油不饱和脂肪酸含量高达85％以上，且含有丰富的油酸和亚油酸、亚麻酸和磷脂，人体对其消化吸收率高达99％，菜籽油里有丰富的维生素E、多酚、角鲨烯、甾醇等生物活性成分。

角鲨烯是一种高度不饱和烃类化合物，一种脂质不皂化物，其化学名称为2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯，是一种开链三萜类化合物，具有提高体内超氧化物歧化酶(SOD)活性、增强机体免疫能力、改善性功能、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤等多种生理功能，广泛应用于医药、食品、化妆品、化工等领域。

如专利文献CN201510956808.1公开了一种提取植物源角鲨烯组合物的方法、一种含角鲨烯的药物的制备方法以及由该方法制备得到的含角鲨烯的药物及其应用。提取植物源角鲨烯组合物的方法包括：将富含角鲨烯的原料依次进行预处理和富集分离，其中，控制所述富集分离的条件使得得到的植物源角鲨烯组合物中含有35-80重量％的角鲨烯，所述富含角鲨烯的原料中含有5-30重量％的角鲨烯和10-40重量％的甾醇。

再如专利文献CN201110027119.4公开的以油茶籽为原料提取角鲨烯的方法，其提取方法的工艺流程为：备料、粉碎、浸提、浓缩、甲酯化反应、配位剂-硼砂反应、大孔树脂色谱分离纯化、浓缩、萃取、洗涤、浓缩、得角鲨烯粗油、超临界二氧化碳萃取、即得角鲨烯含量≥80％的角鲨烯精油；其茶油角鲨烯软胶囊是由以下按重量百分比的原料制成：角鲨烯含量≥80％的角鲨烯精油87-90、聚乙二醇4003-5、蜂蜡2-3和磷脂2-5。

在文献《精炼对菜籽油品质的影响》(马齐兵等人于2018年发表)中也提及“精炼后的菜籽油酸值、过氧化值、色泽、含磷量均下降，VE、甾醇、多酚、角鲨烯含量显著降低；反式脂肪酸和3-氯丙醇含量变化不大”，所以本申请为了防止角鲨烯含量降低以及角鲨烯利用价值的降低，将角鲨烯进行提取。

发明内容

本发明为解决上述技术问题，提供了一种菜籽油中角鲨烯的提取方法。

具体是通过以下技术方案来实现的：

一种菜籽油中角鲨烯的提取方法，包括如下步骤：

(1)向菜籽油中加入含复合酶的水溶液至水油比为1：(0.2-0.5)，然后置于脉冲直流电场下处理10-20min；

(2)向步骤(1)所得物中加入微晶纤维溶液混合10-15min，再加入转晶剂于50-55℃条件下混合3-5min后，保温处理5-10min，过滤，去除滤液；

(3)向步骤(2)所得物中加入乙醇至醇油摩尔比为(5-7):1，同时加入左旋维生素C至其占体系总质量分数的2-6ppm，置于60-65℃条件下恒温水浴中回流20-30min，冷却，水洗直至洗涤液呈中性后，在70-90Pa真空条件下蒸馏。

所述脉冲直流电场的工作条件：峰值电压30-35V、脉冲频率1-2kHz、占空比0.1-0.5。

所述含复合酶的水溶液中复合酶含量为30-50ppm。

所述复合酶由磷脂酶、蛋白酶、纤维素酶按1：(0.5-1)：(0.2-0.4)的接种量比组成。

所述蒸馏的温度为220-230℃。

所述微晶纤维溶液的质量浓度为20-25％。

所述微晶纤维溶液的加入量为菜籽油质量的4-10％。

所述转晶剂为含有儿茶素的柠檬酸溶液，其质量分数为：儿茶素0.01-0.05％，柠檬酸10-15％，剩余为水。

所述转晶剂的加入量为滤液质量的15-25ppm。

有益效果：

本发明中角鲨烯提取率高，试剂残留少，提高了角鲨烯的纯度，并且降低提取成本，具体为：

首先，本发明利用含复合酶的水溶液和脉冲直流电场，促使菜籽油破乳，为充分释放有效物质提供条件。

其次，本发明利用微晶纤维以及复合酶中纤维素酶的作用，使得微晶纤维的晶体结构发生破损，再混合过程中包覆脂肪酸和杂质元素，再利用转晶剂改善晶体结构，使得角鲨烯与脂肪酸、杂质元素实现有效分离。

然后，本发明对菜籽油进行酯化处理，在酯化处理的同时加入左旋维生素C能够防止被氧化，进而提高角鲨烯的得率。

最后，本发明利用真空蒸馏，有效负极了角鲨烯，同时降低了试剂残留量，提高了角鲨烯的纯度和得率。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。

实施例1

一种菜籽油中角鲨烯的提取方法，包括如下步骤：

(1)向菜籽油中加入含复合酶的水溶液至水油比为1：0.5，然后置于脉冲直流电场下处理20min；

(2)向步骤(1)所得物中加入微晶纤维溶液混合15min，再加入转晶剂于55℃条件下混合5min后，保温处理10min，过滤，去除滤液；

(3)向步骤(2)所得物中加入乙醇至醇油摩尔比为7:1，同时加入左旋维生素C至其占体系总质量分数的6ppm，置于65℃条件下恒温水浴中回流30min，冷却，水洗直至洗涤液呈中性后，在90Pa真空条件下蒸馏1h，收集蒸馏物；

所述脉冲直流电场的工作条件：峰值电压35V、脉冲频率2kHz、占空比0.5；

所述含复合酶的水溶液中复合酶含量为50ppm；

所述复合酶由磷脂酶、蛋白酶、纤维素酶按1：1：0.4的接种量比组成；

所述蒸馏的温度为230℃；

所述微晶纤维溶液的质量浓度为25％；

所述微晶纤维溶液的加入量为菜籽油质量的10％；

所述转晶剂为含有儿茶素的柠檬酸溶液，其质量分数为：儿茶素0.05％，柠檬酸15％，剩余为水；

所述转晶剂的加入量为滤液质量的25ppm。

实施例2

一种菜籽油中角鲨烯的提取方法，包括如下步骤：

(1)向菜籽油中加入含复合酶的水溶液至水油比为1：0.2，然后置于脉冲直流电场下处理10min；

(2)向步骤(1)所得物中加入微晶纤维溶液混合10min，再加入转晶剂于50℃条件下混合3min后，保温处理5min，过滤，去除滤液；

(3)向步骤(2)所得物中加入乙醇至醇油摩尔比为5:1，同时加入左旋维生素C至其占体系总质量分数的2ppm，置于60℃条件下恒温水浴中回流20min，冷却，水洗直至洗涤液呈中性后，在70Pa真空条件下蒸馏1h，收集蒸馏物；

所述脉冲直流电场的工作条件：峰值电压30V、脉冲频率1kHz、占空比0.1；

所述含复合酶的水溶液中复合酶含量为30ppm；

所述复合酶由磷脂酶、蛋白酶、纤维素酶按1：0.5：0.2的接种量比组成；

所述蒸馏的温度为220℃；

所述微晶纤维溶液的质量浓度为20％；

所述微晶纤维溶液的加入量为菜籽油质量的4％；

所述转晶剂为含有儿茶素的柠檬酸溶液，其质量分数为：儿茶素0.01％，柠檬酸10％，剩余为水；

所述转晶剂的加入量为滤液质量的15ppm。

实施例3

一种菜籽油中角鲨烯的提取方法，包括如下步骤：

(1)向菜籽油中加入含复合酶的水溶液至水油比为1：0.3，然后置于脉冲直流电场下处理15min；

(2)向步骤(1)所得物中加入微晶纤维溶液混合12min，再加入转晶剂于53℃条件下混合4min后，保温处理8min，过滤，去除滤液；

(3)向步骤(2)所得物中加入乙醇至醇油摩尔比为6:1，同时加入左旋维生素C至其占体系总质量分数的4ppm，置于63℃条件下恒温水浴中回流25min，冷却，水洗直至洗涤液呈中性后，在80Pa真空条件下蒸馏1h，收集蒸馏物；

所述脉冲直流电场的工作条件：峰值电压32V、脉冲频率1.5kHz、占空比0.3；

所述含复合酶的水溶液中复合酶含量为40ppm；

所述复合酶由磷脂酶、蛋白酶、纤维素酶按1：0.8：0.3的接种量比组成；

所述蒸馏的温度为225℃；

所述微晶纤维溶液的质量浓度为22％；

所述微晶纤维溶液的加入量为菜籽油质量的7％；

所述转晶剂为含有儿茶素的柠檬酸溶液，其质量分数为：儿茶素0.03％，柠檬酸12％，剩余为水；

所述转晶剂的加入量为滤液质量的20ppm。

对比例1

与实施例4的区别在于：将脉冲直流电场处理替换为混合。

对比例2

与实施例4的区别在于：复合酶中未添加纤维素酶。

对比例3

与实施例4的区别在于：未添加转晶剂。

对比例4

与实施例4的区别在于：未添加左旋维生素C。

对比例5

与实施例4的区别在于：未采取步骤(2)。

本实施例及对比例中菜籽油均选用同一产品，按照《气相色谱法测定脱臭馏出物中角鲨烯的含量》(李祥清等于2017年发表)的方法对提取前菜籽油中角鲨烯进行含量测定，结果为12.5％，再利用实施例及对比例的方法进行角鲨烯提取，同样采用文献《气相色谱法测定脱臭馏出物中角鲨烯的含量》(李祥清等于2017年发表)的方法进行角鲨烯含量测定，其得率结果如表1所示：

表1

同时，本发明人分别称取实施例及对比例的蒸馏物各0.075g，采用200目硅胶对角鲨烯做进一步分离纯化，采用干法上样,洗脱剂为正己烷∶乙酸乙酯＝100∶1进行洗脱,每10mL为一管进行收集，气相进行检测,，根据标曲计算各管角鲨烯含量；

标曲的制作方法如下：准确称取20mg角鲨烯标品,用正己烷定容到10mL,得2mg/mL角鲨烯标准储备液；分别取0.05、0.25、0.50、1.00、7.50mL储备液,用正己烷定容至10mL,得到各浓度。以峰面积为纵坐标(y)，各质量浓度为横坐标(x)，绘制标准曲线。

角鲨烯纯度结果如表2所示：

表2

项目	实施例1	实施例2	实施例3	对比例1
					纯度/％	95.2	94.6	97.8	72.3
项目	对比例2	对比例3	对比例4	对比例5
					纯度/％	81.9	77.5	73.7	85.9