阅读说明：本技术 一种液基细胞保存液及其制备方法 (Liquid-based cell preservation solution and preparation method thereof ) 是由 刘益民 卞忠力 徐安双 于 2019-11-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种液基细胞保存液,其成分包括：酒精300-350ml,水600-650ml,磷酸二氢钾15g,磷酸氢二钠8g,乙二胺四乙酸二钠1.8g,二硫苏糖醇1.5g,氯化铵0.9g,叠氮钠0.2g；本发明还提供了上述液基细胞保存液的制备方法；该液基细胞保存液够快速固定细胞,稳定细胞的PH值,防止标本中血液凝结,及时裂解标本中的红细胞,溶解标本中粘液的粘蛋白,同时防腐杀菌,使标本可以长期保存。(The invention discloses a liquid-based cell preservation solution, which comprises the following components: 350ml of alcohol, 600ml of water, 650ml of monopotassium phosphate, 8g of disodium hydrogen phosphate, 1.8g of ethylene diamine tetraacetic acid, 1.5g of dithiothreitol, 0.9g of ammonium chloride and 0.2g of sodium azide; the invention also provides a preparation method of the liquid-based cell preservation liquid; the liquid-based cell preservation liquid can quickly fix cells, stabilize the pH value of the cells, prevent blood coagulation in a specimen, timely lyse red blood cells in the specimen, dissolve mucin in the specimen, and simultaneously prevent corrosion and sterilize, so that the specimen can be preserved for a long time.)

一种液基细胞保存液及其制备方法

技术领域

本发明涉及病理检验技术领域，特别涉及到人体宫颈脱落细胞病理检验时所用的一种液基细胞保存液及其制备方法。

背景技术

液基细胞学检查是采用液基薄层细胞检测系统检测宫颈细胞并进行细胞学分类诊断，它是目前国际上较先进的一种***细胞学检查技术，与传统的宫颈刮片巴氏涂片检查相比明显提高了标本的满意度及宫颈异常细胞检出率，宫颈防癌细胞学检查对***细胞的检出率为100%，同时能发现部分癌前病变，微生物感染如霉菌、滴虫、病毒、衣原体。

液基薄层细胞检测方法明显提高了宫颈细胞样本的检测质量，已经成为市场上主要的检测方法，液基细胞保存液是整个液基薄层细胞检测方法关键环节之一，细胞一旦脱离原有的生存环境，细胞的形态结构及其表面特征将会发生改变，故只有通过正确的细胞保存方法才能确保不改变原有细胞的特征，也才能排除某些重要实验中细胞不稳定这一变量，大大提高细胞相关实验的稳定性和可重复性，人体宫颈脱落细胞成分复杂，往往含有粘液，血液，细胞保存液需要对标本中有用成分进行固定，又需要对无用成分进行消除，以免对实验结果形成干扰。

目前临床应用的商品化液基细胞保存液有多种，以美国FDA1996年批准的新柏氏（Cytye公司，Boxborough，MA，现称为Hologic公司）和1999年批准的Autocyte Prep（现称为SurePath，TripPath Imaging，Burlington，NC，现属于BD诊断公司）为代表，这两种进口的细胞保存液价格昂贵，还需要和配套制片机器一起使用，对于一些中小型医院来说很难具备使用条件，细胞保存液保存之后的细胞因为使用的保存液成分不同，PH值不同，对蛋白质的处理不同，细胞对黏附玻片的黏附性，对染液的着色性都会有影响，细胞保存液与后续的标本制作息息相关，市场出现的保存液往往对标本的处理达不到后续使用要求。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种液基细胞保存液及其制备方法，能够较好地保存宫颈脱落细胞，保护细胞的完整性与固定性，避免细胞固缩、溶解和膨胀，分解红细胞，分散粘液，清除干扰成分，为后续制片染色提供良好的基础。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种液基细胞保存液，其特征在于，所述液基细胞保存液成分包括：酒精300-350ml，水600-650ml，磷酸二氢钾15g，磷酸氢二钠8g，乙二胺四乙酸二钠1.8g，二硫苏糖醇1.5g，氯化铵0.9g，叠氮钠0.2g。

进一步的，液基细胞保存液的PH值为5.2-6.3。

进一步的，酒精的纯度为99.99%。

进一步的，水为去离子水。

一种液基细胞保存液的制备方法，其步骤如下：

a.将配方量的磷酸二氢钾、磷酸氢二钠溶解于100ml的去离子水，搅拌均匀，得到缓冲液a；

b.将配方量的乙二胺四乙酸二钠、二硫苏糖醇、氯化铵、叠氮钠溶解于缓冲液a，搅拌均匀，得到溶液b；

c.将获得的溶液b中缓慢加入配方量余量的去离子水，边加边搅拌均匀，得到溶液c；

d.将配方量的酒精缓慢的加入到溶液c中，边加边搅拌均匀；

以上各步骤都在常温常压下进行。

与现有技术相比，本发明有益效果是：本发明提供的液基细胞保存液功能全面，采用酒精作为液基细胞保存液的固定剂，快速有效的固定标本中的液基细胞；采用磷酸二氢钾、磷酸氢二钠作为液基细胞保存液的酸碱缓冲液，液基细胞保存液固定细胞时，pH值过高时，多余的碱就会与磷酸二氢根离子形成磷酸氢根离子，降低溶液的pH值，当pH值过低时，磷酸氢根离子就会与酸中的氢离子形成磷酸二氢根离子，提高溶液的pH值，有助于保持溶液恒定的pH值，使细胞不会在细胞固定中因pH变化而破裂；采用乙二胺四乙酸二钠作为液基细胞保存液的抗凝血剂，避免液基细胞保存液固定细胞时，标本中的血液凝结成块；采用二硫苏糖醇作为液基细胞保存液的粘液溶解剂，溶解标本中的粘蛋白；采用氯化铵作为液基细胞保存液的溶血剂，裂解标本中的红细胞；采用叠氮钠作为液基细胞保存液的防腐剂，防止液基细胞保存液的变质；本发明提供的液基细胞保存液功能齐全，一液多用，能够快速固定细胞，稳定细胞的PH值，防止标本中血液凝结，及时裂解标本中的红细胞，溶解标本中粘液的粘蛋白，同时防腐杀菌，使标本可以长期保存，经过本发明的液基细胞保存液保存的标本，只要经过简单的过滤，就可以进行后续的染色，不需要进行其他复杂的操作和处理，降低了操作难度，节省了操作时间。

具体实施方式

下面将对本发明实施例进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护范围。

实施例一

本实例液基细胞保存液成分包括：酒精300ml，水650ml，磷酸二氢钾15g，磷酸氢二钠8g，乙二胺四乙酸二钠1.8g，二硫苏糖醇1.5g，氯化铵0.9g，叠氮钠0.2g，其中酒精的纯度为99.99%，水为去离子水，液基细胞保存液的PH值为5.2-6.3。

本实例液基细胞保存液的制备方法，其步骤如下：

a.将配方量的磷酸二氢钾、磷酸氢二钠溶解于100ml的去离子水，搅拌均匀，得到缓冲液a；

b.将配方量的乙二胺四乙酸二钠、二硫苏糖醇、氯化铵、叠氮钠溶解于缓冲液a，搅拌均匀，得到溶液b；

c.将获得的溶液b中缓慢加入配方量余量的去离子水，边加边搅拌均匀，得到溶液c；

d.将配方量的酒精缓慢的加入到溶液c中，边加边搅拌均匀；

以上各步骤都在常温常压下进行。

实施例二

本实例液基细胞保存液成分包括：酒精350ml，水600ml，磷酸二氢钾15g，磷酸氢二钠8g，乙二胺四乙酸二钠1.8g，二硫苏糖醇1.5g，氯化铵0.9g，叠氮钠0.2g，其中酒精的纯度为99.99%，水为去离子水，液基细胞保存液的PH值为5.2-6.3。

本实例液基细胞保存液的制备方法，其步骤如下：

a.将配方量的磷酸二氢钾、磷酸氢二钠溶解于100ml的去离子水，搅拌均匀，得到缓冲液a；

b.将配方量的乙二胺四乙酸二钠、二硫苏糖醇、氯化铵、叠氮钠溶解于缓冲液a，搅拌均匀，得到溶液b；

c.将获得的溶液b中缓慢加入配方量余量的去离子水，边加边搅拌均匀，得到溶液c；

d.将配方量的酒精缓慢的加入到溶液c中，边加边搅拌均匀；

以上各步骤都在常温常压下进行。

本发明的细胞保存液中各个组分配比合理，能够快速固定细胞，稳定细胞的PH值，防止标本中血液凝结，及时裂解标本中的红细胞，溶解标本中粘液的粘蛋白，同时防腐杀菌，使标本可以长期保存，经过本发明的液基细胞保存液保存的标本，充分保留了有诊断意义的细胞成分，只要经过简单的过滤，就可以进行后续的染色，不需要进行其他复杂的操作和处理，降低了操作难度，节省了操作时间；同时配置成本较低，易于推广。

尽管参照前述实例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中的部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进均应包含在本发明的保护范围之内。