阅读说明：本技术 一种抗呼吸道合胞病毒口罩及其制备方法 (Respiratory syncytial virus resistant mask and preparation method thereof ) 是由 王平 杜海涛 孙铁锋 韩莉 李玮 梁瑞雪 袁敏 李晓沫 于 2019-10-30 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种抗呼吸道合胞病毒口罩及其制备方法,口罩包含一个药物内芯夹层、两个无纺布外层和两个束紧带,药物内芯夹层上浸润有连翘花提取物,所述的药物内芯夹层是将连翘花粉末经超声提取、离心过滤制得的连翘花染料粉经染色在棉布内芯层而得。该口罩不仅能够有效阻挡空气中颗粒状物质,还能将有效隔离病毒经呼吸入体内的途径,适宜推广。(The invention relates to a respiratory syncytial virus resistant mask and a preparation method thereof, the mask comprises a drug inner core interlayer, two non-woven fabric outer layers and two tightening belts, wherein a forsythia suspensa flower extract is infiltrated on the drug inner core interlayer, and the drug inner core interlayer is obtained by dyeing forsythia suspensa flower dye powder prepared by ultrasonic extraction and centrifugal filtration of forsythia suspensa flower powder on a cotton cloth inner core layer. The mask can effectively block granular substances in the air, can effectively isolate viruses in the way of breathing into the human body, and is suitable for popularization.)

一种抗呼吸道合胞病毒口罩及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种抗呼吸道合胞病毒口罩的制备方法，属于天然药物的应用技术领域。

背景技术

呼吸道合胞病毒是引起呼吸道感染最常见的病原之一，具有高度传染性，可以通过咳嗽或打喷嚏时的飞沫传播，美国流行病学调查显示基本上所有孩子在2岁前都至少感染过一次。此病毒的易感人群为婴幼儿和老人，感染后会导致严重的肺炎和支气管炎，每年冬春季节在我国大规模流行。目前既无可靠的疫苗上市，也无专属性药物治疗，而预防方法仅仅停留在消毒、通风以及感染后的隔离上，存在着隔离病毒可能不彻底的风险，因此佩戴抗病毒口罩阻断病毒呼吸入体是简易、经济、高效的方法。

口罩有很多种，其中的药物选择和处理对其功能的实现影响很大。连翘为木犀科(Oleaceae)植物，主产于我国山西、河南、陕西、山东等地，具有清热解毒，散结消肿之功效，花期为每年3-4月，花期长、花量大，是一种来源丰富的资源。研究表明，连翘花内含丰富的连翘酯苷、连翘苷以及多种鞣制，连翘苷类化合物具有显著的抗RSV活性，鞣制具有显著的抗氧化、清除自由基的能力。因此具有制备防治RSV的潜力。药物的提取和处理方法有很多，而微波提取药物在机理和过程方面不同于传统提取方法，可归纳为三个方面：微波提取过程中，微波辐照可实现提取系统(溶剂和样品)内外同时加热，体系吸收微波能后，药物分子运动加速，温度迅速升高；同时，药物细胞内部的分子也吸收微波能，使细胞内部温度迅速升高，细胞瞬间破裂，加速药物成分溶解和扩散；另外，溶质分子也会吸收微波能，运动加速，从而迅速溶解到溶剂中。因此，微波提取具有速度快、效率高、节能环保等特点，被誉为绿色提取技术，符合绿色化学的发展方向。微波萃取的效率受多种因素的影响，主要有溶剂种类、溶剂用量、微波功率、提取温度、时间以及药物性质和粒度大小等，并且各因素之间存在相互影响。如何利用天然药物制备出具有较好的抗病毒效果的口罩才是重点。

发明内容

本发明的目的是克服上述不足而提供一种抗呼吸道合胞病毒口罩及其制备方法，该口罩不仅能够有效阻挡空气中颗粒状物质，还能将有效隔离病毒经呼吸入体内的途径，适宜推广。

本发明采取的技术方案为：

一种抗呼吸道合胞病毒口罩，包含一个药物内芯夹层、两个无纺布外层和两个束紧带，药物内芯夹层上浸润有连翘花提取物，所述的药物内芯夹层是将连翘花粉末经超声提取、离心过滤制得的连翘花染料粉经染色在棉布内芯层而得。

所述的抗呼吸道合胞病毒口罩的制备方法，包括药物内芯夹层的制备、药物内芯夹层与无纺布外层的缝合及束紧带的固定，其中药物内芯夹层的制备包括步骤如下：

(1)取连翘花粉末于烧瓶中加入乙酸乙酯与乙醇的混合物，室温下第一次超声提取20-30min；

(2)将提取液过滤，残渣再次加入乙酸乙酯与乙醇的混合物，室温下第二次超声提取20-30min；

(3)将提取液过滤，两次的滤液合并，离心取上清层；

(4)将上清层液体浓缩、灭菌、喷雾干燥制成连翘花染料粉；

(5)染色：取内芯棉布层在10-20％(owf)连翘花染料粉染浴中染色，浴比1：20-50，调节染浴pH值至4-7，始染温度30℃，升温速率保持1-3℃/min，在50-80℃下处理30-60min，染色完成后以1-5℃每分钟的速率降至室温，最后水洗晾干即得。

上述制备方法中步骤(1)所述的第一次超声提取，超声参数为250W，40kHz；连翘花粉末加入乙酸乙酯与乙醇的混合物的比例为0.1g/ml；乙酸乙酯与乙醇的体积比为1：8，乙醇优选95％乙醇。

步骤(2)所述的第二次超声提取，超声参数为250W，40kHz；第二次超声提取加入乙酸乙酯与乙醇的混合物的量为第一次用量的50％-70％，乙酸乙酯与乙醇的体积比为1：8，乙醇优选95％乙醇。

步骤(3)所述的离心离心机转速8000r/s离心10min。

步骤(5)所述的染色过程优选使用XW-ZDR-25×12型低噪震荡式染色机染色，浴比1：40，用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液柠檬酸缓冲液调节染浴pH值至5。

本发明的益效果是：

本发明制备方法采用超声提取，具有速度快、提取率高、温度低、节约溶剂等特点，不受成分极性、分子质量大小的限制，对提取物的结构、活性产生影响较小；离心处理促进有效成分发挥疗效的小分子活性物质留在离心液中，而提取原液中的大块杂质在离心后被去除，使药液治疗指数较于原液有所提高；染色中提取液属于天然色素，主要成分为黄酮类化合物，室温下为浅黄色粉末，易溶于温水(40-80℃)中，适用于药物内心夹层使用时有呼吸气流经过，可时常更换，也无需添加媒染剂。

本发明药物内芯夹层上浸润有制备的连翘花提取物，含有连翘花抗病毒有效物质芦丁、连翘酯苷、连翘苷等，该提取物具有抗呼吸道合胞病毒作用，尤其是经离心过后的提取液，对呼吸道合胞病毒的作用要明显好于提取原液和过滤膜液。本发明口罩采用夹层设计，可方便后期更换此滤层；同时弥补了现有预防呼吸道合胞病毒方法的不足，不仅能够有效阻挡空气中颗粒状物质，还能将有效隔离病毒经呼吸入体内的途径，适宜推广。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1：

一种抗呼吸道合胞病毒口罩，包含一个药物内芯夹层、两个无纺布外层和两个束紧带，其制备方法包括药物内芯夹层的制备、药物内芯夹层与无纺布外层的缝合及束紧带的固定，其中药物内芯夹层的制备包括步骤如下：

(1)取连翘花粉末30g于500ml圆底烧瓶，加入1：8的乙酸乙酯和95％乙醇300ml，250W，40kHz室温超声提取30min；

(2)将提取液过滤，残渣加入1：8的乙酸乙酯和95％乙醇200ml，250W，40kHz再次室温超声提取30min；

(3)将提取液过滤，两次滤液合并，离心取上清层；

(4)将上清层液浓缩，灭菌，喷雾干燥制成连翘花染料粉；

(5)染色：取内芯棉布层在15％(owf)连翘花染料染浴中染色，浴比1：40，调节染浴pH值至5，始染温度30℃，升温速率保持3℃/min，在80℃下处理50min，染色完成后以5℃每分钟的速率降至室温，最后水洗晾干即得。

实施例2：

一种抗呼吸道合胞病毒口罩，包含一个药物内芯夹层、两个无纺布外层和两个束紧带，其制备方法包括药物内芯夹层的制备、药物内芯夹层与无纺布外层的缝合及束紧带的固定，其中药物内芯夹层的制备包括步骤如下：

(1)取连翘花粉末30g于500ml圆底烧瓶，加入1：8的乙酸乙酯和95％乙醇300ml，250W，40kHz室温超声提取30min；

(2)将提取液过滤，残渣加入1：8的乙酸乙酯和95％乙醇200ml，250W，40kHz再次室温超声提取30min；

(3)将提取液过滤，两次滤液合并，离心取上清层；

(4)将上清层液浓缩，灭菌，喷雾干燥制成连翘花染料粉；

(5)染色：取内芯棉布层在18％(owf)连翘花染料染浴中染色，浴比1：40，调节染浴pH值至7，始染温度30℃，升温速率保持2℃/min，在85℃下处理50min，染色完成后以4℃每分钟的速率降至室温，最后水洗晾干即得。

实施例3：

一种抗呼吸道合胞病毒口罩，包含一个药物内芯夹层、两个无纺布外层和两个束紧带，其制备方法包括药物内芯夹层的制备、药物内芯夹层与无纺布外层的缝合及束紧带的固定，其中药物内芯夹层的制备包括步骤如下：

(1)取连翘花粉末30g于500ml圆底烧瓶，加入1：8的乙酸乙酯和95％乙醇300ml，250W，40kHz室温超声提取30min；

(2)将提取液过滤，残渣加入1：8的乙酸乙酯和95％乙醇200ml，250W，40kHz再次室温超声提取30min；

(3)将提取液过滤，两次滤液合并，离心取上清层；

(4)将上清层液浓缩，灭菌，喷雾干燥制成连翘花染料粉；

(5)染色：取内芯棉布层在20％(owf)连翘花染料染浴中染色，浴比1：50，调节染浴pH值至7，始染温度30℃，升温速率保持3℃/min，在90℃下处理50min，染色完成后以3℃每分钟的速率降至室温，最后水洗晾干即得。

效果试验：

抗病毒活性测试：

离心液按照本发明实施例1方法制备；原液为不进行过滤和离心处理的连翘花超声提取液；过滤膜液为过0.22μm微孔滤膜的离心液。

将各种方法处理的药液用DMEM维持液以二倍比稀释为10个浓度梯度，纵向重复4孔，每孔加入50μL，接种于A549细胞贴壁生长的96孔板上；加入50μL 100TCID50的RSV病毒液，并设两列细胞做空白对照；置于37℃、5％CO₂恒温培养箱中，连续3天观察培养板中细胞状态；吸去培养液，加入10μL MTT和50μL PBS，置于37℃、5％CO₂恒温培养箱作用4h；弃去培养板中液体，加入150μLDMSO，振摇，每孔颜色均匀后，用酶标仪在490nm处测定OD值。并采用Reed-Muench法计算TC₅₀、EC₅₀、TI值。

IC₅₀和EC₅₀采用Reed-Meuench法计算，TI值为TC₅₀与EC₅₀之比值。TC₅₀，半数中毒浓度，是指能引起50％中毒效应的浓度，是药物安全性指标。EC₅₀，半最大效应浓度，是指能引起50％最大效应的浓度。TC₅₀/EC₅₀为治疗指数，药物的安全指标，通常其值越大越安全。

表1连翘花提取物抗病毒活性测试结果表

从表1数据可以看出，本发明制备得到的连翘花提取物具有抗呼吸道合胞病毒作用，尤其是经离心过后的提取液，对呼吸道合胞病毒的作用要明显好于提取原液和过滤膜液。

从抗病毒活性测试结果来看，经离心过后的连翘花提取物，其抗呼吸道合胞病毒的能力有所提高，但过滤膜的提取物并没有得到提升，说明滤膜可能阻挡一些大分子的抗病毒活性物质。

以上是结合具体实施例对本发明的详细介绍，本发明的保护范围不限于此。