阅读说明：本技术 一种活性细胞微藻修复液及其制备方法 (Active cell microalgae repairing liquid and preparation method thereof ) 是由 杨新年 段鹏程 赵杰 于 2019-10-10 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种活性细胞微藻修复液,具体涉及农业技术领域,包含多种呈活体状态的微藻,按微藻活性细胞个体数量计,添加的微藻包括有红毛藻10-50份、蓝藻5-40份、轮门藻10-30份、金鱼藻30-50份,且按质量份数计；本发明还公开了上述微藻修复液的制备方法,包括如下操作步骤：步骤一：分别扩大培植红毛藻、蓝藻、轮门藻和金鱼藻,得到四种微藻液,备用。本发明通过在微藻液中加入植物生长调节剂、藻类提取物和硒、锌、铁元素提取物,不仅能够提高土壤的肥效,并且具有杀虫、杀菌作用,可灭杀土壤内部以及表面的细菌,提高土壤的分解能力,分解出有机质,从而使得土壤修复效率高。(The invention discloses an active cell microalgae repairing liquid, which particularly relates to the technical field of agriculture, and comprises a plurality of microalgae in a living state, wherein the added microalgae comprise 10-50 parts of Haematococcus, 5-40 parts of blue algae, 10-30 parts of Phlomis verticillata and 30-50 parts of Goldfish algae according to the individual number of active cells of the microalgae, and the added microalgae comprise the following components in parts by weight; the invention also discloses a preparation method of the microalgae repairing liquid, which comprises the following operation steps: the method comprises the following steps: respectively culturing red hair algae, blue algae, stonewort and goldfish algae to obtain four kinds of microalgae solutions for later use. According to the invention, the plant growth regulator, the algae extract and the selenium, zinc and iron element extracts are added into the microalgae liquid, so that the fertilizer efficiency of the soil can be improved, the soil has the effects of killing insects and bacteria, killing bacteria in the soil and on the surface of the soil, improving the decomposition capability of the soil and decomposing organic matters, and the soil remediation efficiency is high.)

一种活性细胞微藻修复液及其制备方法

技术领域

本发明涉及农业技术领域，更具体地说，本发明涉及一种活性细胞微藻修复液及其制备方法。

背景技术

当土壤肥力水平不能达到植物生长所需养料时，需要对土壤进行施肥，化学肥料是目前广泛使用的肥料，但是，施用化学肥料带来的负面影响不容忽视：生产化学肥料的原料中含有Zn、Cu、Co和Cr等重金属，这些重金属跟随化学肥料被施入土壤，并造成土壤中重金属元素的富集，通过植物吸收进入植物体内，影响植物生长以及农产品等的品质；化学肥料会降低土壤微生物的数量和活性，由此降低土壤微生物对土壤中有机质的转化、矿物的分解以及有毒物质的降解；长期施用化学肥料会加剧土壤的酸化，加重土壤板结，抑制植物根系发育，严重降低植物抗逆性。

微藻是一类在陆地土壤及河流湖泊分布广泛、光合利用度高的自养植物，是在显微镜下才能辨别其形态的微小的藻类群体，不仅本身营养丰富，而且细胞代谢能够产生多糖、蛋白质等营养物质，在食品、医药、饲料等领域均具有较高的应用价值。

但是现有的修复液无法灭杀土壤内部以及表面的细菌，土壤修复率低。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺陷，本发明的实施例提供一种活性细胞微藻修复液及其制备方法，通过在微藻液中加入植物生长调节剂、藻类提取物和硒、锌、铁元素提取物，不仅能够提高土壤的肥效，并且具有杀虫、杀菌作用，可灭杀土壤内部以及表面的细菌，提高土壤的分解能力，分解出有机质，从而使得土壤修复效率高，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种活性细胞微藻修复液，包含多种呈活体状态的微藻，按微藻活性细胞个体数量计，添加的微藻包括有红毛藻10-50份、蓝藻5-40份、轮门藻10-30份、金鱼藻30-50份，且按质量份数计，还添加了植物生长调节剂5份。

在一个优选地实施方式中，按微藻活性细胞个体数量计，添加的微藻包括有红毛藻5-35份、蓝藻10-30份、轮门藻10-25份、金鱼藻35-50份。

在一个优选地实施方式中，上述制备原料中的植物生长调节剂包括提高氨基酸含量、提高蛋白质含量以及提高抗逆性的三类植物生长调节剂，且提高氨基酸含量类植物生长调节剂：提高蛋白质含量类植物生长调节剂：提高抗逆性类植物生长调节剂=1:1：2。

在一个优选地实施方式中，上述提高氨基酸含量类植物生长调节剂由多效唑、防落素和吲熟酯混合而成，上述提高蛋白质含量类植物生长调节剂由防落素、西玛津、莠去津和萘乙酸混合而成，上述提高抗逆性类植物生长调节剂由脱落酸、多效唑、比久和矮壮素混合而成。

在一个优选地实施方式中，上述修复液的制备原料中，还包括有藻类提取物和硒、锌、铁元素提取物，所述藻类提取物中的藻类原料为小单歧藻、小球藻和鱼腥藻，所述硒、锌、铁元素提取物的母体原料分别为平菇、牡蛎肉以及苔菜。

本发明还提供了一种活性细胞微藻修复液的制备方法，具体包括如下操作步骤：

步骤一：分别扩大培植红毛藻、蓝藻、轮门藻和金鱼藻，得到四种微藻液，备用；

步骤二：配制能够提高氨基酸含量、提高蛋白质含量和提高抗逆性的三类植物生长调节剂，备用；

步骤三：制备藻类提取物和硒、锌、铁元素提取物，备用；

步骤四：将上述步骤中的四种微藻液依次与植物生长调节剂、藻类提取物以及硒、锌、铁元素提取物进行充分混合，即得活性细胞微藻修复液。

在一个优选地实施方式中，上述步骤一中扩大培殖所用的培养基溶液包括如下浓度的组分：2-6mg/L乙二胺四乙酸二钠、5-13mg/L柠檬酸、0.05-0.15mg/L FeSO₄•7H₂O、0.15-0.35g/L NaHCO3、0.03-0.1g/L CaCl₂、0.05-0.2g/L MgSO₄•7H₂O、1-3.5g/L NaNO₃、0.05-0.15g/L K₂HPO₄、0.2-1g/L KH₂PO₄、1.5-2.5mg/L MnCl₂•4H₂O、0.02-0.05mg/L ZnSO₄•7H₂O、0.05-0.1mg/L CuSO₄•5H₂O、0.02-0.05mg/L Na₂MoO₄•2H₂O、2-4mg/L H₃BO₃。

在一个优选地实施方式中，上述步骤一中扩大培殖过程包括：选择和分离单个微藻细胞，将单个微藻细胞进行分级扩大培殖，每一级扩大培殖过程中，微藻细胞的数量≥106个/mL时，进入下一级扩大培殖过程，即单个微藻细胞于15mL培养基溶液中培殖10-15天，获得15mL藻液→转接种到85mL培养基溶液中继续培殖10-15天，获得100mL藻液→转接种到0.9L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得1L藻液→转接种到4L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得5L藻液→转接种到13L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得18L藻液→转接种到782L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得800L藻液。

在一个优选地实施方式中，上述步骤三中藻类提取物的提取过程为：将小单歧藻、小球藻和鱼腥藻分别离心收集藻细胞，用蒸馏水连续洗涤3次，经-50℃冻干处理储藏备用，并称取适量的三中藻冻干粉，加入适量pH为7.0的PBS缓冲液，即可制得藻类提取物，且该藻类提取物的密度为1.0g/L。

在一个优选地实施方式中，上述步骤三中硒、锌、铁元素提取物的提取过程为分别将平菇、牡蛎肉以及苔菜经捣碎、离心、过滤，得到的过滤液即为对应的提取物。

本发明的技术效果和优点：

本发明的微藻活性细胞营养修复液中的微藻均呈活体状态，能够进行细胞代谢等一系列的生命活动，与现有的微藻修复液相比，通过加入植物生长调节剂、藻类提取物和硒、锌、铁元素提取物，使得在实际使用时，不仅能够提高土壤的肥效，并且具有杀虫、杀菌作用，可灭杀土壤内部以及表面的细菌，提高土壤的分解能力，分解出有机质，从而使得土壤修复效率高，改善农作物的生长环境，提高产量。

具体实施方式

下面将结合本发明的实施例中，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供了一种活性细胞微藻修复液，包含多种呈活体状态的微藻，按微藻活性细胞个体数量计，添加的微藻包括有红毛藻10-50份、蓝藻5-40份、轮门藻10-30份、稻壳提取物8-10份，红薯提取物5-8份、混合菌提取物6-9份、金鱼藻30-50份，且按质量份数计，还添加了植物生长调节剂5份。

实施例1

优选的，上述制备原料中，按微藻活性细胞个体数量计，添加的微藻包括有红毛藻5份、蓝藻10份、轮门藻10份、金鱼藻35份、稻壳提取物8份，红薯提取物5份、混合菌提取物6份；

上述制备原料中的植物生长调节剂包括提高氨基酸含量、提高蛋白质含量以及提高抗逆性的三类植物生长调节剂，且提高氨基酸含量类植物生长调节剂：提高蛋白质含量类植物生长调节剂：提高抗逆性类植物生长调节剂=1:1：2；

上述提高氨基酸含量类植物生长调节剂由多效唑、防落素和吲熟酯混合而成，上述提高蛋白质含量类植物生长调节剂由防落素、西玛津、莠去津和萘乙酸混合而成，上述提高抗逆性类植物生长调节剂由脱落酸、多效唑、比久和矮壮素混合而成；

上述修复液的制备原料中，还包括有藻类提取物和硒、锌、铁元素提取物，所述藻类提取物中的藻类原料为小单歧藻、小球藻和鱼腥藻，所述硒、锌、铁元素提取物的母体原料分别为平菇、牡蛎肉以及苔菜。

本发明还提供了一种活性细胞微藻修复液的制备方法，具体包括如下操作步骤：

步骤一：分别扩大培植红毛藻、蓝藻、轮门藻和金鱼藻，得到四种微藻液，备用；

步骤二：配制能够提高氨基酸含量、提高蛋白质含量和提高抗逆性的三类植物生长调节剂，备用；

步骤三：制备藻类提取物和硒、锌、铁元素提取物，备用；

步骤四：将上述步骤中的四种微藻液依次与植物生长调节剂、藻类提取物以及硒、锌、铁元素提取物进行充分混合，即得活性细胞微藻修复液；

上述步骤一中扩大培殖所用的培养基溶液包括如下浓度的组分：2-6mg/L乙二胺四乙酸二钠、5-13mg/L柠檬酸、0.05-0.15mg/L FeSO₄•7H₂O、0.15-0.35g/L NaHCO3、0.03-0.1g/LCaCl₂、0.05-0.2g/L MgSO₄•7H₂O、1-3.5g/L NaNO₃、0.05-0.15g/L K₂HPO₄、0.2-1g/L KH₂PO₄、1.5-2.5mg/L MnCl₂•4H₂O、0.02-0.05mg/L ZnSO₄•7H₂O、0.05-0.1mg/L CuSO₄•5H₂O、0.02-0.05mg/L Na₂MoO₄•2H₂O、2-4mg/L H₃BO₃；

上述步骤一中扩大培殖过程包括：选择和分离单个微藻细胞，将单个微藻细胞进行分级扩大培殖，每一级扩大培殖过程中，微藻细胞的数量≥106个/mL时，进入下一级扩大培殖过程，即单个微藻细胞于15mL培养基溶液中培殖10-15天，获得15mL藻液→转接种到85mL培养基溶液中继续培殖10-15天，获得100mL藻液→转接种到0.9L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得1L藻液→转接种到4L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得5L藻液→转接种到13L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得18L藻液→转接种到782L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得800L藻液；

上述步骤三中藻类提取物的提取过程为：将小单歧藻、小球藻和鱼腥藻分别离心收集藻细胞，用蒸馏水连续洗涤3次，经-50℃冻干处理储藏备用，并称取适量的三中藻冻干粉，加入适量pH为7.0的PBS缓冲液，即可制得藻类提取物，且该藻类提取物的密度为1.0g/L；

上述步骤三中硒、锌、铁元素提取物的提取过程为分别将平菇、牡蛎肉以及苔菜经捣碎、离心、过滤，得到的过滤液即为对应的提取物。

实施例2

优选的，上述制备原料中，按微藻活性细胞个体数量计，添加的微藻包括有红毛藻20份、蓝藻25份、轮门藻20份、金鱼藻40份、稻壳提取物10份，红薯提取物8份、混合菌提取物9份；

上述制备原料中的植物生长调节剂包括提高氨基酸含量、提高蛋白质含量以及提高抗逆性的三类植物生长调节剂，且提高氨基酸含量类植物生长调节剂：提高蛋白质含量类植物生长调节剂：提高抗逆性类植物生长调节剂=1:1：2；

上述提高氨基酸含量类植物生长调节剂由多效唑、防落素和吲熟酯混合而成，上述提高蛋白质含量类植物生长调节剂由防落素、西玛津、莠去津和萘乙酸混合而成，上述提高抗逆性类植物生长调节剂由脱落酸、多效唑、比久和矮壮素混合而成；

上述修复液的制备原料中，还包括有藻类提取物和硒、锌、铁元素提取物，所述藻类提取物中的藻类原料为小单歧藻、小球藻和鱼腥藻，所述硒、锌、铁元素提取物的母体原料分别为平菇、牡蛎肉以及苔菜。

本发明还提供了一种活性细胞微藻修复液的制备方法，具体包括如下操作步骤：

步骤一：分别扩大培植红毛藻、蓝藻、轮门藻和金鱼藻，得到四种微藻液，备用；

步骤二：配制能够提高氨基酸含量、提高蛋白质含量和提高抗逆性的三类植物生长调节剂，备用；

步骤三：制备藻类提取物和硒、锌、铁元素提取物，备用；

步骤四：将上述步骤中的四种微藻液依次与植物生长调节剂、藻类提取物以及硒、锌、铁元素提取物进行充分混合，即得活性细胞微藻修复液；

上述步骤一中扩大培殖所用的培养基溶液包括如下浓度的组分：2-6mg/L乙二胺四乙酸二钠、5-13mg/L柠檬酸、0.05-0.15mg/L FeSO₄•7H₂O、0.15-0.35g/L NaHCO3、0.03-0.1g/LCaCl₂、0.05-0.2g/L MgSO₄•7H₂O、1-3.5g/L NaNO₃、0.05-0.15g/L K₂HPO₄、0.2-1g/L KH₂PO₄、1.5-2.5mg/L MnCl₂•4H₂O、0.02-0.05mg/L ZnSO₄•7H₂O、0.05-0.1mg/L CuSO₄•5H₂O、0.02-0.05mg/L Na₂MoO₄•2H₂O、2-4mg/L H₃BO₃；

上述步骤一中扩大培殖过程包括：选择和分离单个微藻细胞，将单个微藻细胞进行分级扩大培殖，每一级扩大培殖过程中，微藻细胞的数量≥106个/mL时，进入下一级扩大培殖过程，即单个微藻细胞于15mL培养基溶液中培殖10-15天，获得15mL藻液→转接种到85mL培养基溶液中继续培殖10-15天，获得100mL藻液→转接种到0.9L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得1L藻液→转接种到4L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得5L藻液→转接种到13L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得18L藻液→转接种到782L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得800L藻液；

上述步骤三中藻类提取物的提取过程为：将小单歧藻、小球藻和鱼腥藻分别离心收集藻细胞，用蒸馏水连续洗涤3次，经-50℃冻干处理储藏备用，并称取适量的三中藻冻干粉，加入适量pH为7.0的PBS缓冲液，即可制得藻类提取物，且该藻类提取物的密度为1.0g/L；

上述步骤三中硒、锌、铁元素提取物的提取过程为分别将平菇、牡蛎肉以及苔菜经捣碎、离心、过滤，得到的过滤液即为对应的提取物。

实施例3

优选的，上述制备原料中，按微藻活性细胞个体数量计，添加的微藻包括有红毛藻35份、蓝藻30份、轮门藻25份、金鱼藻50份、稻壳提取物9份，红薯提取物7份、混合菌提取物8份；

上述制备原料中的植物生长调节剂包括提高氨基酸含量、提高蛋白质含量以及提高抗逆性的三类植物生长调节剂，且提高氨基酸含量类植物生长调节剂：提高蛋白质含量类植物生长调节剂：提高抗逆性类植物生长调节剂=1:1：2；

上述提高氨基酸含量类植物生长调节剂由多效唑、防落素和吲熟酯混合而成，上述提高蛋白质含量类植物生长调节剂由防落素、西玛津、莠去津和萘乙酸混合而成，上述提高抗逆性类植物生长调节剂由脱落酸、多效唑、比久和矮壮素混合而成；

上述修复液的制备原料中，还包括有藻类提取物和硒、锌、铁元素提取物，所述藻类提取物中的藻类原料为小单歧藻、小球藻和鱼腥藻，所述硒、锌、铁元素提取物的母体原料分别为平菇、牡蛎肉以及苔菜。

本发明还提供了一种活性细胞微藻修复液的制备方法，具体包括如下操作步骤：

步骤一：分别扩大培植红毛藻、蓝藻、轮门藻和金鱼藻，得到四种微藻液，备用；

步骤二：配制能够提高氨基酸含量、提高蛋白质含量和提高抗逆性的三类植物生长调节剂，备用；

步骤三：制备藻类提取物和硒、锌、铁元素提取物，备用；

步骤四：将上述步骤中的四种微藻液依次与植物生长调节剂、藻类提取物以及硒、锌、铁元素提取物进行充分混合，即得活性细胞微藻修复液；

上述步骤一中扩大培殖所用的培养基溶液包括如下浓度的组分：2-6mg/L乙二胺四乙酸二钠、5-13mg/L柠檬酸、0.05-0.15mg/L FeSO₄•7H₂O、0.15-0.35g/L NaHCO3、0.03-0.1g/LCaCl₂、0.05-0.2g/L MgSO₄•7H₂O、1-3.5g/L NaNO₃、0.05-0.15g/L K₂HPO₄、0.2-1g/L KH₂PO₄、1.5-2.5mg/L MnCl₂•4H₂O、0.02-0.05mg/L ZnSO₄•7H₂O、0.05-0.1mg/L CuSO₄•5H₂O、0.02-0.05mg/L Na₂MoO₄•2H₂O、2-4mg/L H₃BO₃；

上述步骤一中扩大培殖过程包括：选择和分离单个微藻细胞，将单个微藻细胞进行分级扩大培殖，每一级扩大培殖过程中，微藻细胞的数量≥106个/mL时，进入下一级扩大培殖过程，即单个微藻细胞于15mL培养基溶液中培殖10-15天，获得15mL藻液→转接种到85mL培养基溶液中继续培殖10-15天，获得100mL藻液→转接种到0.9L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得1L藻液→转接种到4L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得5L藻液→转接种到13L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得18L藻液→转接种到782L培养基溶液中继续培殖10-15天，获得800L藻液；

上述步骤三中藻类提取物的提取过程为：将小单歧藻、小球藻和鱼腥藻分别离心收集藻细胞，用蒸馏水连续洗涤3次，经-50℃冻干处理储藏备用，并称取适量的三中藻冻干粉，加入适量pH为7.0的PBS缓冲液，即可制得藻类提取物，且该藻类提取物的密度为1.0g/L；

上述步骤三中硒、锌、铁元素提取物的提取过程为分别将平菇、牡蛎肉以及苔菜经捣碎、离心、过滤，得到的过滤液即为对应的提取物。

分别对实施例1-3中制备得到的活性细胞微藻修复液的性能参数进行检测，并与现有常用微藻修复液进行对比，测试结果如下表所示：

	固氮率（%）	杀虫、杀菌率（%）	土壤修复率（%）
				实施例1	59.03	90.12	64.34
实施例2	65.14	95.40	70.06
				实施例3	62.35	93.26	65.32
对比例	43.28	76.84	49.75

由表中数据对比可知：实施例1-3所制备的活性细胞微藻修复液在实际使用时，不仅能够提高土壤的肥效，并且具有杀虫、杀菌作用，可灭杀土壤内部以及表面的细菌，提高土壤的分解能力，分解出有机质，从而使得土壤修复效率高，改善农作物的生长环境，提高产量。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。