阅读说明：本技术 防脱发或毛发生长促进用组合物 (Composition for preventing alopecia or promoting hair growth ) 是由 申载永 李相和 于 2019-07-05 设计创作，主要内容包括：本发明涉及防脱发或生发促进用组合物,其包含诱导生发或促进毛发生长的成分,用于促进毛发生长。本发明的防脱发及毛发生长促进用组合物缩短在毛发的生长周期中从休止期转移到生长期的周期,从而促进毛发的生长,延缓向退行期的转换,防脱发及毛发生长促进效果优异。另外,本发明的组合物对人体安全且无副作用,并具有优异的促进毛乳头细胞增殖,增强毛发弹性的效果。(The present invention relates to a composition for preventing hair loss or promoting hair growth, which contains a component for inducing hair growth or promoting hair growth, and is used for promoting hair growth. The composition for preventing hair loss and promoting hair growth of the present invention has excellent effects of preventing hair loss and promoting hair growth by shortening the period from the telogen phase to the anagen phase in the growth cycle of hair, thereby promoting hair growth and delaying the transition to the catagen phase. In addition, the composition of the present invention is safe to the human body without side effects, and has excellent effects of promoting proliferation of hair papilla cells and enhancing elasticity of hair.)

防脱发或毛发生长促进用组合物

技术领域

本申请主张2018年7月9日申请的韩国专利申请第10-2018-0079534号及韩国专利申请第10-2018-0126283号的优先权，该申请的说明书及附图中公开的所有内容均援用于本申请中。

本发明涉及用于促进毛发生长的组合物，涉及包含诱导生发或促进毛发生长的成分的用于促进毛发生长的防脱发及生发促进用组合物。

背景技术

在随着时代的改变而对美容的关注越来越高的过程中，毛发占据着重要的一部分。毛发是在皮肤表面生出的细且被角质化的结构。其具有对外部冲击的缓冲作用，且保护人体不受直射光线、寒冷、摩擦、危险等外部刺激，执行将对身体有害的砷、汞、锌等重金属排出到体外的功能，近来还被强调装饰上的美容效果。但是，因饮食习惯的改变或内外压力的增加等各种原因，受到脱发困扰的人越来越多。

人的毛发约为10万-15万根左右，各个毛发具备彼此不同的生长周期。毛发生长周期构成为3个阶段，被划分成毛发生长最为活跃的生长期(anagen stage)、毛发开始退化的退化期(catagen stage)及停止毛发的生长或进入休息阶段的休止期(telogen stage)。

在对这样的毛发的生长周期进行调节时，起到重要的作用是包含构成毛囊的毛***细胞及毛囊干细胞的外毛根鞘细胞(outer root sheath cell)的活性和在这些细胞中生出的多种细胞因子(cytokine)及生长因子。例如DKK-1(Dickkopf-1)对阻碍和杀灭毛囊生长起到重要作用(J Invest.Dermatol，2008：128(2))。另一方面，为了周期性的毛发生长，需要形成毛囊的再生及干细胞的激活，而这是通过Wnt/β-连环蛋白的生成及激活而实现的(Nature2007：447(7142))。

在一般情况下，脱发症是指如下情况：在这样的周期中生长期的毛发比率变小，退行期或休止期的毛发变多，由此毛发脱落的数量异常增多。相对于正常人的生长期状态的毛发多的情况，患有脱发症(Alopecia)的人是休止期状态的毛发多，因此出现肉眼可见的脱发现象。出现脱发症的人群的特征在于毛发的小型化。越出现脱发，生长期的期限越短，促进向退行期及休止期的转移，之后毛***的体积变小，毛囊逐渐被小型化。因此，为了治疗脱发，重要的是将休止期状态的毛囊快速恢复为生长期，将被缩短的生长期延长。

作为脱发的原因，提出了雄性荷尔蒙作用过度的说法、皮脂分泌过度的说法、血液循环不良的说法、由过氧化物、细菌等引起的头皮功能下降的说法、遗传性因素、老化、压力等说法，但目前为止脱发的确切原因尚未被揭开。

在毛囊的生长和脱落中，雄性荷尔蒙起到非常重要的作用，在通过雄性荷尔蒙而在毛囊中被调节的因子中，TGF-β对由雄性荷尔蒙导致的毛囊生长的阻碍和毛囊周期中的向退行期的诱导起到重要的作用(Tsuji Y，Denda S，Soma T，Raftery L，Momoi T，HibinoT，A potential suppressor of TGF-beta delays catagen progression in hairfollicles，J Investig Dermatol Symp Proc，2003：8(1)：65-68)。即，根据雄性荷尔蒙而在毛囊的毛***细胞中表达而引起毛囊的基质细胞和外根鞘角质细胞的细胞凋亡，将生长期的毛囊诱导至退行期，从而当TGF-β的数量增加时，诱导毛母质细胞(hairmatrix cell)和外根鞘细胞的细胞凋亡，由此休止期的毛囊增加且生长期的毛囊转换为退行期的毛囊而容易脱落，从而生成又细又短的毛发(李英珠

李珠英

男性的雄激素性脱发者的临床诊断和管理，韩国美容协会杂志，2007：13(2)：799-810)。因此，公知为TGF-β抑制毛囊生长。

七叶皂素(escin)是大量包含在七叶树提取物中的皂素系列的物质，其主要被用作抗炎作用、血管收缩剂或血管保护剂。而在本发明之前，从未公开七叶皂素的改善脱发并促进生发的效果。

目前为止所研发的脱发症的治疗或预防用制剂有将用于促进血液循环，强化发根功能，保湿头皮及抑制雄性荷尔蒙的女性荷尔蒙为主成分的制剂或含有米诺地尔(minoxidil)、非那雄胺(Finasteride)、粘多醣生长素(trichosaccharide)的制剂等。代表性的涂布用脱发治疗剂即米诺地尔(2,4-diamino-6-piperidinopyrimidine-3-oxide)增加流向头皮的血流量，口服用脱发治疗剂即非那雄胺起到抑制5α-reductase的活性而减少活性型雄性荷尔蒙即DHT的生成的功能。但是，上述制剂因副作用或使用上的注意事项而在使用上存在诸多限制。

发明内容

发明要解决的课题

本发明要解决的课题在于提供一种防脱发或毛发生长促进用组合物。

另外，本发明要解决的课题在于提供包含上述防脱发或毛发生长促进用组合物的头发或头皮用产品。

用于解决课题的手段

本发明人为了研制出改善以往的脱发治疗剂的副作用及使用上的注意事项等问题并克服了防脱发/养发剂的生发促进效果微弱等的缺点且对人体安全且能够有效地促进毛发生长及生发的组合物而不懈努力，其结果发现七叶皂素对防脱发及促进毛发生长具有显著的优异效果，从而完成了本发明。

具体地，本发明的发明人确认到七叶皂素在毛***细胞中促进Wnt/β-连环蛋白信号传送系统的活性，促进毛***细胞的增殖，增加β-连环蛋白的表达量。即，通过体外(in-vitro)实验而确认了七叶皂素的如下的重要作用：放大毛***细胞的Wnt/β-连环蛋白信号传送，从而将毛发的生理周期从退行期转移到活性期。另外，本发明的发明人确认了在将包含七叶皂素的脱发治疗用组合物使用于脱发症患者时，对改善毛发的粗细、茂密程度及弹性具有显著的优异效果。另外，与市场上销售的产品即米诺地尔比较而进行实验的结果，确认了本发明的包含七叶皂素的脱发治疗用组合物与米诺地尔相比，具备类似或更加优异的防脱发及生发效果。

本发明提供作为有效成分而包含七叶皂素的防脱发或毛发生长促进用组合物。

在一个实施例中，作为本发明的防脱发或毛发生长促进用组合物的有效成分而包含的七叶皂素的含量相对于组合物总重量为0.001重量％至10重量％，优选为0.01重量％至5重量％，更优选为0.1重量％至2重量％。在本发明中，上述七叶皂素相对于组合物总重量为0.001重量％至10重量％的情况下，体外(in-vitro)或临床上显示出对防脱发及促进毛发生长具有优异的效果。在上述七叶皂素低于0.001重量％的情况下，毛发生长的诱导促进效果微弱，在超过10重量％的情况下，可能出现阻碍剂型的安全性的问题和皮肤刺激。更优选为，上述七叶皂素的含量相对于组合物的总重量为0.5重量％至2重量％，最优选为1至2重量％。在本发明中，通过实验而确认了七叶皂素在上述含量范围内时，促进生发及防脱发效果显著。

本发明的七叶皂素可作为防脱发剂或毛发生长促进剂而包含在上述组合物或剂型。

另外，本发明的一个观点提供一种作为有效成分包含选自由土大黄苷(Rhaponticin)、大黄酸(Rhein)、大黄酚(Chrysophanol)及大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷(Physicon-8-O-d-glucopy ranoside)构成的组的1种以上的化合物或其盐、水合物或溶剂化物的防脱发或毛发生长促进用组合物。

土大黄苷作为二苯基葡萄糖苷化合物，治疗糖尿病及阿尔茨海默病潜力巨大，可表示为下述化学式

大黄酸(Rhein)作为又被称作山扁豆酸的蒽醌组的化合物，具备抗菌及抗生特性，可表示为下述化学式

大黄酚(Chrysophanol)作为从菌类分离出的天然的蒽醌组的化合物，可表示为下述化学式

大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷(Physicon-8-O-d-glucopyranoside)作为天然蒽醌衍生物，可表示为下述化学式

在一个实施例中，本发明的有效成分含有选自上述化合物的1种以上化合物，优选为含有2种以上化合物，在将2种以上化合物组合使用的情况下，对防脱发及促进毛发生长显示出最佳效果。

在一个实施例中，本发明的有效成分含有2种以上的化合物，上述2种以上的化合物可以是选自(i)大黄酚及以及(ii)土大黄苷、大黄酸及大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷的任意一个组合。

在另一个体现例中，上述2种以上的化合物可以是选自(i)土大黄苷及(ii)蒽醌衍生化合物(大黄酸、大黄酚及大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷)的任意一个组合。

在又一个体现例中，上述2种以上的化合物是土大黄苷、大黄酸、大黄酚及大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷这4种化合物的组合。

另外，在本发明的组合物中，用作有效成分的不仅是上述化合物本身，还可以是其盐、水合物或溶剂化物。

上述盐可利用盐酸盐、氢溴酸盐或氢碘酸盐这样的无机酸和如下的有机酸而形成：醋酸盐、己二酸盐、藻朊酸盐、天冬氨酸盐、甲苯酸盐、苯磺酸盐、p-甲苯磺酸盐、硫酸氢盐、氨基磺酸盐、硫酸盐、萘酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊丙酸睾酮、双葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、甲苯磺酸盐或十一烷酸盐。

水合物是指，在上述化合物中添加了水或水进入到分子的结构物质的物质，溶剂化物是指，溶质的分子或离子与溶剂的分子或离子之间产生的高阶化合物。上述水合物或溶剂化物可利用上述的酸而制得。

本发明的组合物包括上述1种以上的化合物或其盐、溶剂化物或水合物的有效量，因此可实现促进毛***细胞的增殖和/或增强毛发的弹性的效果。

上述有效量是指，足以预防、改善及治疗脱发的量。上述有效量可以根据疾病的症状程度、患者的年龄、体重、健康状态、性别、投给途径及治疗期限等而适当改变。

具体地，在本发明的组合物中，上述有效量可以为0.00001重量％至50重量％。具体地，本发明包含0.00001重量％至50重量％的土大黄苷，优选包含0.0001重量％至0.1重量％的土大黄苷，或包含0.00001重量％至50重量％的大黄酸，优选包含0.0001重量％至0.1重量％的大黄酸，或包含0.000001重量％至50重量％的大黄酚，优选包含0.0001重量％至0.01重量％的大黄酚，或包含0.00001重量％至50重量％的大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷，优选包含0.0001重量％至0.1重量％的大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷。

这是因为，当土大黄苷(Rhaponticin)、大黄酸(Rhein)、大黄酚(Chrysophanol)及大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷(Physicon-8-O-d-glucopyranoside)的组成物质低于0.00001重量％时，毛发的生长诱导促进效果微弱，在超过50重量％的浓度下，剂型的安全性下降而不优选。

在一个实施例中，可将本发明的防脱发或毛发生长促进用组合物用作医药组合物、医药外品用组合物或化妆料组合物。可将本发明的组合物剂型化为通常可适用于皮肤的任何形态，但优选剂型化为皮肤外用剂的形态。可将本发明的组合物制造成例如液态、乳状、膏状或固体状等适用于皮肤的剂型。

作为本发明的一个形态，上述组合物可以是用于预防或治疗脱发的医药组合物。在该情况下，防脱发或毛发生长促进用组合物包含上述的1种以上的化合物、其盐、水合物或溶剂化物的有效量及一个以上的药学上允许的载体、赋形剂或稀释剂。

上述说明中“药学上允许”是指，在生理学上允许且在投入到人体时，通常不引起胃肠功能紊乱、眩晕这样的过敏反应或与此类似的反应的组合物。

作为上述载体、赋形剂及稀释剂的例子，可例举乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、***树胶、藻蛋白酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟苯甲酯、羟苯丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油。另外，还可进一步包含填充剂、抗凝剂、润滑剂、湿润剂、香料、乳浊剂及防腐剂等。

作为本发明的另一形态，上述组合物可以是医药外品用组合物。在该情况下，可将本发明的有效成分直接添加或与其他医药外品成分一起使用，并且可通过通常的方法而适当地使用。关于这样的其他成分，可根据医药外品的剂型或使用目的等而任意地选择来进行配合。例如，可包含增稠剂、稳定剂、溶解剂、维生素、颜料及香料这样的通常的辅助剂及载体等。

作为本发明的又一形态，上述组合物可以是用于防止、改善脱发或促进毛发生长的化妆料组合物。

在本发明的剂型为液态的情况下，作为载体成分，可使用溶剂、溶解剂或乳浊剂等，例如可使用水、乙醇、异丙醇、乙基碳酸酯、乙基醋酸盐、苄醇、甲苯酸盐苄酯、丙二醇、1，3-丁基乙二醇油、甘油脂肪族酯、聚乙二醇或山梨糖醇的脂肪酸酯等。

在本发明的剂型为膏、霜或胶的情况下，作为载体成分可使用动物性油、植物性油、蜡、石蜡、淀粉、西黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅、皂粘土、二氧化硅、滑石或氧化锌等。

在本发明的剂型为粉末或喷雾的情况下，作为载体成分可利用乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末等。特别地，在喷雾剂型的情况下，可进一步包含氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚等这样的推进剂。

关于包含在本发明的组合物中的成分，除了上述有效成分之外，还可包含适用于皮肤的外用剂中通常利用的成分。例如可追加包含选自由水、表面活性剂、保湿剂、低级醇、螯合剂、杀菌剂、防氧化剂、防腐剂、色素、香料、增稠剂、研磨剂、甜味剂、pH调节剂、结合剂、发泡剂、溶解剂、维生素及颜料等构成的组的一个以上的添加剂。

另外，本发明提供包含上述防脱发或毛发生长促进用组合物的头发或头皮用产品。上述头发或头皮用产品可以是选自由生发剂、头皮护理剂、头皮清洁剂、头皮按摩剂、头皮保养剂、清洗剂、洗发水、滋润剂、护发素、发乳、胶、发膜、霜、精华、粉末、喷雾、油、皂、软膏、头发造型剂、染发剂及烫剂等构成的组的任意一个，但不限于此。

在本发明的一个实施例中，将上述防脱发或毛发生长促进用组合物制造成头发滋润剂或发乳的剂型(实施例1至13)。

优选为，通过直接涂布或喷洒到皮肤等经皮投给的方法来使用本发明的毛发生长促进用组合物。

本发明中使用的用语“投给”是指，通过某种适当的方法来导入本发明的组合物。关于本发明的组合物的投给途径，只要能够达到目标组织，可通过任意的一般路径而投给。优选为，可经皮投给，其中最优选为局部涂布。本发明的组合物的适用次数可根据处方、需要或期望而决定。

关于本发明的组合物的使用量，可根据年龄、病变的程度等个人差异或剂型而适当调节，通常优选以1天1次至数次地将适当量涂布到头皮的方式使用一周至数月。在本发明的实施例中，将脱发治疗用组合物1以1周适用5次的方式使用了6个月，其结果确认到优异的毛发生长促进效果(实验例4及8)。

发明效果

本发明的防脱发及毛发生长促进用组合物缩短毛发的生长周期中从休止期转移到生长期的周期，从而促进毛发的生长，延缓向退行期的转换，由此实现优异的防脱发及促进毛发生长的效果。

另外，本发明的组合物对人体安全无副作用且实现优异的防脱发及促进毛发生长的效果。另外，本发明的防脱发或毛发生长促进用组合物对促进毛***细胞的增殖，增强毛发弹性方面起到非常显著的作用。

附图说明

图1示出对毛***细胞中的七叶皂素的Wnt/β-连环蛋白启动子活性度放大效果的分析结果。

图2示出确认毛***细胞中的由七叶皂素实现的β-连环蛋白的表达量的增加的实验结果。

具体实施方式

下面，为了帮助理解本发明，通过实施例等而进行详细说明。但是，本发明的实施例可变形为各种其他形态，本发明的范围不应仅限于下述实施例而解释。本发明的实施例是为了向本领域技术人员更完整地说明本发明而提供的。

制造例1：脱发治疗/生发用组合物1(头发滋润剂)

按照下述表1所示的处方，通过通常的方法制造了包含七叶皂素的实施例及比较例的头发滋润剂。

【表1】

制造例2：脱发治疗/生发用组合物2(发乳)

按照下述表2所述的处方，通过通常的方法制造了包含七叶皂素的发乳(实施例7)。

【表2】

配合成分	重量比(％)
		十八十六醇	2
硬脂基三乙基氯化铵	2
		羟乙基纤维素	0.5
七叶皂素	2
		香料及色素	适量
纯净水	余量(共计100)

实验例1：毛***细胞活性信号(Wnt/β-连环蛋白)调节效果

在一般情况下，在毛***中被激活的wnt/β-连环蛋白信号在毛发的生长周期中从退行期过度到活性期时，即从毛发开始生出到发生毛发生长的活性期内发生。另外，在休止期及退行期，wnt/β-连环蛋白信号变弱或消失，由此出现毛囊退化而毛发脱落的现象。在本实验例中确认了七叶皂素对wnt/β-连环蛋白信号放大起到多大的作用。

作为放大Wnt/β-连环蛋白信号的阳性对照群使用了wnt3a蛋白质，并作为阴性对照群使用了DMSO。在培养96-孔板中，将约3x10⁴的Wnt报告HEK293A细胞播种(seeding)到各个孔中，然后对七叶皂素分别进行了5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml的浓度处理。之后利用Promega公司的荧光素酶分析试剂盒(Luciferase assay kit)(E1960)，按照制造公司的实验方法而进行了报告分析。利用Luminometer Victor (PerkinElmer，Waltham，Massachusetts，USA)检测了Wnt/β-连环蛋白启动子的活性度，分析结果如图1所示。

从实验结果来看，七叶皂素将相对无处理群即阴性对照群的Wnt/β-连环蛋白信号放大了11倍左右。包含七叶皂素的实验群未显示出依赖于浓度的状况，但在20μg/ml的浓度附近反复确认到了可靠的效果。特别地，七叶皂素比结合到Wnt/β-连环蛋白的直接的收纳体的阳性对照群即wnt3a蛋白质显示出了优异的效果。因此，确认到七叶皂素大大促进毛囊干细胞的毛发生长促进信号即Wnt/β-连环蛋白信号传送系统的活性，从而具备显著的生发促进效果。

实验例2：毛***细胞增殖促进效果

从PromoCell公司购买了源自人体的毛***细胞(dermal papilla cells，DPCs)。使用由PromoCell公司推荐的毛囊真皮***细胞生长培养基(Follicle Dermal PapillaCellGrowth Medium)及补充剂混合物(supplement mix)，在37℃及5％的CO₂条件下培养了上述DPCs。将所培养的3,000cells/well的DPCs分注到96-孔板，然后在0.1％血清条件下培养了24小时。之后，将在所培养的细胞的无血清DMEM中按照1:1000进行稀释的DMSO(vehicle)作为对照群，对七叶皂素分别按照0.2μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml及5μg/ml进行1天的处理并进行了孵化。孵化之后利用CCK方法对细胞的增殖程度进行了评价。将CCK-8在培养液中按照1:10进行处理并进行了1小时的孵化。在1小时之后，检测各个孔的吸光度(absorbance)为450nm。所有实验反复进行了3次，并计算了吸光度值的平均值。关于上述结果，在将对照群设为100的情况下，表现为处理群对其的百分比。实验结果，在处理了七叶皂素的情况下，显示出DPCs增殖效果，确认到毛***细胞增殖效果优异。

【表3】

实验例3：毛***细胞β-连环蛋白的表达增加

在Wnt信号被抑制的休止期及退行期的毛***细胞中β-连环蛋白被GSK3-β而分解。但在Wnt信号被放大的活性期毛***细胞中GSK3-β的活性被抑制，因此β-连环蛋白不被分解，因此β-连环蛋白的表达量增加。将人体毛***细胞分注到约500,000cell/well的6个孔板，然后对七叶皂素分别按照0.2μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml及5μg/ml进行1天的处理并进行了孵化。在孵化之后利用M-PER溶解缓冲液而溶解细胞，将相同量的细胞溶解物加入到SDS-PAGE胶。将加入到SDS-PAGE胶的细胞溶解物移送到硝化纤维素膜，然后将抗-β-连环蛋白抗体粘贴到硝化纤维素膜，检测了蛋白质。将GAPDH用作校正蛋白质量的控制器(control)。确认了通过七叶皂素增加的β-连环蛋白的量，并将其结果显示于图2。

实验结果确认到与无处理群相比，在处理了七叶皂素的组中β-连环蛋白的量得到很显著的增加，这表示毛***细胞的Wnt/β-连环蛋白信号得到增强。

实验例4：脱发治疗/生发用组合物1(头发滋润剂)的生发效果确认

以毛发的数量比正常情况明显少或具有脱发症状的毛发不好的共计105名的男女为对象，对本发明的脱发治疗/生发用组合物1(头发滋润剂)的生发效果进行了实验。将上述共计105名的男女按照15名分为7组而使用了比较例1及实施例1至6，一周5次地对毛发及头皮使用了6个月。在使用之后，关于毛发的粗细、茂密程度、弹性及整体评价项目，分别分成5阶段而评价了改善程度或损伤程度(改善程度：+5，+4，+3，+2，+1，无改善：0，损伤程度：-1，-2，-3，-4，-5)。上述评价是在开始使用起6个月之后根据使用者的问诊结果的平均值而进行判定的，其结果如表4所示。

【表4】

试样	毛发的粗细	茂密程度	弹性	整体评价
					比较例1	-0.5±0.2	0.1±0.2	-0.1±0.2	-0.21±0.2
实施例1	2.1±0.2	1.5±0.2	2.5±0.2	2.0±0.2
					实施例2	3.2±0.1	2.6±0.2	2.6±0.5	2.8±0.2
实施例3	4.5±0.3	4.3±0.2	3.8±0.3	4.2±0.1
					实施例4	4.6±0.2	4.3±0.1	4.8±0.3	4.6±0.2
实施例5	4.8±0.2	4.6±0.1	4.3±0.2	4.6±0.1
					实施例6	3.1±0.4	2.1±0.3	2.3±0.6	2.5±0.2

从上述结果可确认，在包含七叶皂素的实施例1至6中显示出较高的防脱发及毛发生长效果。由此，证明了作为有效成分包含七叶皂素的本发明的防脱发及毛发生长促进用组合物可非常有效地使用于脱发治疗。

实验例5：脱发治疗/生发用组合物1(头发滋润剂)的生发效果确认

以毛发的数量比正常情况明显少或具有脱发症状的毛发不好的共计105名的男女为对象对本发明的脱发治疗/生发用组合物1(头发滋润剂)的生发效果进行了实验。将上述共计105名的男女按照15名分为7组而使用了比较例1及实施例1至6，1周5次地对毛发及头皮使用了6个月。在使用之后通过临床照片拍摄进行了研究者评价，并通过头皮毛发图像分析而进行了评价。关于通过临床照片进行的研究者评价，在涂布2个月、4个月、6个月之后对比较例和实验例进行了‘良好(good)’、‘微好(slight)’‘无变化(nochange)’这3个项目的评价(Good：好转50％～75％，Slight：好转25％～50％，no change：无变化)。在涂布4个月、6个月之后通过头皮毛发图像分析而对比较例及实施例检测每单位面积的毛发的数量和平均毛发的厚度并进行了评价，其结果如表5所示。

【表5】

从上述结果可确认，在包含七叶皂素的实施例1至6中显示出较高的防脱发及毛发生长效果。由此，证明了作为有效成分包含七叶皂素的本发明的防脱发及毛发生长促进用组合物可非常有效地使用于脱发治疗。

上述头发滋润剂或发乳这样的剂型例仅为本发明的毛发生长促进用组合物的例示，本领域技术人员显然应该明白本发明的组合物的范围不限于这些剂型。

制造例3：脱发治疗用组合物3(头发滋润剂)

按照下述表6所述的处方，通过通常的方法利用土大黄苷(Rhaponticin)、大黄酸(Rhein)、大黄酚(Chrysophanol)及大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷(Physicon-8-O-d-glucopy ranoside)中的1种以上而制造了头发滋润剂。

【表6】

制造例4：脱发治疗用组合物4(发乳)

按照下述表7所示的处方，通过通常的方法利用土大黄苷、大黄酸、大黄酚及大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷中的1种以上而制造了发乳(实施例13)。

【表7】

配合成分	重量比(％)
		十八十六醇	2
硬脂基三乙基氯化铵	2
		羟乙基纤维素	0.5
土大黄苷、大黄酸、大黄酚或大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷	0.001
		香料及色素	适量
纯净水	余量(共计100)

实验例6：毛***细胞增殖促进效果

从PromoCell公司购买了源自人体的毛***细胞(dermal papilla cells，DPCs)。在包含5％的胎牛血清(FBS；Gibco，NY，USA)、100unit/mL的青霉素及100μg/mL的链霉素的DMEM(Hyclone Inc，UT，USA)中在37℃及5％的CO²的条件下培养了上述DPCs。将培养的3,000cells/well的DPCs分注到96-孔板，然后在0.1％血清条件下培养了24小时。之后，将在所培养的细胞的无血清DMEM中按照1:1000稀释的DMSO(vehicle)作为对照群，将2μg/ml的米诺地尔作为阳性对照群，对将各个10μg/ml的土大黄苷、大黄酸、大黄酚及大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷及表8所示的单一物质组合而成的试样进行1天的处理并进行了孵化。在孵化之后利用CCK方法对细胞的增殖程度进行了评价。在培养液中将CCK-8按照1:10进行处理而孵化了1小时。在1小时之后，检测各个孔的吸光度(absorbance)为450nm。将所有实验分别反复进行3次，计算了吸光度值的平均值。关于上述结果，在将对照群设为100的情况下，表现为处理群对其的百分比。

其结果，在对土大黄苷、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷进行处理的情况下，关于DPCs增殖促进效果表示出了优异的毛***细胞增殖效果(表8)。

【表8】

实验例7：毛***细胞活性信号调节效果

在一般情况下，在毛***中分泌的VEGF、IGF-1、FGF等诱导毛发的生长期，Versican被公知为毛发生长期的标志，DKK-1被公知为毛发的退行期的标志。因此，对本发明的土大黄苷、大黄酸、大黄酚及大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷的物质在毛***细胞中对生长期促进信号和退行期诱导信号产生的影响进行了调查。

在培养6-孔板中，将毛***细胞1x10⁵分别播种(seeding)到各个孔之后，对将各个10μg/ml的本发明的土大黄苷、大黄酸、大黄酚及大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷的物质及表10所示的单一物质组合而成的试样进行处理，然后利用实时PCR方法，并利用下述表9的

探针(Thermo Fisher，Massachusetts，USA)而对VEGF，versican(多功能蛋白聚糖)及DKK-1的表达量进行了调查，其结果如表10所示。

【表9】

其结果，土大黄苷、大黄酸、大黄酚及大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷的物质中增加了毛发生长期诱导生长因子即VEGF和生长期标志即Versican的表达，降低了毛发的退行期诱导因子DKK-1的表达(表10)。

【表10】

如以上所记载，确认到土大黄苷、大黄酸、大黄酚及大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷的物质具备优异的毛发生长诱导及脱发抑制效果，并将本发明的防脱发及毛发生长促进用组合物制造成了各种剂型。下述记载中对其剂型例进行了具体说明。但是，这些剂型例仅为本发明的毛发生长促进用组合物的例示，本领域技术人员显然应该明白本发明的组合物的范围不限于这些剂型。

实验例8：脱发治疗用组合物3(头发滋润剂)的生发效果确认实验

关于上述制造例3中制造的本发明的脱发治疗用组合物3(头发滋润剂)，以毛发的数量比正常情况明显少或出现脱发症状的毛发不好的共计40名的男女为对象，按照10名分为4组，将比较例2、3及实施例8至12，1周5次地对毛发及头皮使用了6个月。在使用6个月之后，关于毛发的粗细、茂密程度、弹性及整体评价项目，通过对使用者进行问诊而得到的平均值来判定了改善程度(变得非常好；+3，变好；+2，稍微变好；+1，无变化；0，稍微变坏；-1，变坏；-2，变得非常不好；-3)，其结果如表11所示。

【表11】

试样	毛发的粗细	茂密程度	弹性	整体评价
					比较例2	-0.5±0.2	0.1±0.2	-0.1±0.2	-0.2.1±0.2
比较例3	2.1±0.2	2.3±0.1	2.1±0.3	2.1±0.2
					实施例8	2.8±0.3	2.7±0.1	2.5±0.4	2.8±0.1
实施例9	2.6±0.1	2.8±0.2	2.4±0.3	2.7±0.2
					实施例10	1.9±0.1	2.6±0.3	2.0±0.2	2.3±0.1
实施例11	2.6±0.3	2.1±0.1	2.4±0.1	2.6±0.1
					实施例12	2.7±0.3	2.9±0.3	2.7±0.3	2.8±0.3

从结果可知，在适用了土大黄苷、大黄酸、大黄酚及大黄素甲醚-8-O-d-吡喃葡萄糖苷的物质的实施例中显示出了较高的防脱发及毛发生长效果，由此证明了本发明能够非常有效地使用于脱发治疗。