阅读说明：本技术 一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法 (Modeling method of bile reflux gastric injury animal model ) 是由 韩小东 黄勇攀 张炯怡 于 2019-09-24 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法,包括以下步骤：步骤1：对实验小鼠其禁食8～15小时、禁饮3～6小时,并保持其活性；步骤2：使用1％～8％的水合氯醛,注射剂量为0.1ml～1.0ml/100g,实验小鼠进行腹腔注射；步骤3：将实验小鼠仰卧位固定,上腹部脱毛,剑突下前正中线切口1～3cm,打开腹腔,暴露肠管,用镊子轻提右侧胃,使其高于皮肤,找到幽门狭窄处,并在狭窄处沿肠管走行切0.5～1.0cm的造口,完全离断幽门括约肌,纵向吻合切口,然后对切口进行缝合消毒；步骤4：对实验小鼠以正常喂养,自由饮水20～40天后得到胆汁反流性胃损伤动物模型。本发明手术创伤小,动物死亡率低,提高了模拟人体胆汁反流性胃损伤发病机制的准确性。(The invention provides a modeling method of a bile reflux gastric injury animal model, which comprises the following steps: step 1: fasting the experimental mouse for 8-15 hours and drinking prohibition for 3-6 hours, and keeping the activity of the experimental mouse; step 2: 1 to 8 percent of chloral hydrate is used, the injection dosage is 0.1 to 1.0ml/100g, and the experimental mouse is injected into the abdominal cavity; and step 3: fixing the experimental mouse in a supine position, unhairing the upper abdomen, cutting a 1-3 cm incision on the front median line of the xiphoid process, opening the abdominal cavity, exposing an intestinal canal, slightly lifting the right stomach with forceps to enable the right stomach to be higher than the skin, finding a pyloric stenosis, cutting a 0.5-1.0 cm stoma at the stenosis along the intestinal canal, completely disconnecting the pyloric sphincter, longitudinally anastomosing the incision, and then suturing and disinfecting the incision; and 4, step 4: the experimental mice are fed normally and are drunk freely for 20-40 days to obtain the bile reflux gastric injury animal model. The invention has small operation wound and low animal mortality, and improves the accuracy of simulating human bile reflux gastric injury pathogenesis.)

一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法

技术领域

本发明属于医学实验技术领域，具体涉及一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法。

背景技术

胆汁反流可以导致上溃疡消、化道炎症和肿瘤，也就是说长期胆汁反流可以导致增生性、活动性炎症、食管炎、胃黏膜糜烂性、胃溃疡、甚至促使发生胃癌。与溃疡、上消化道炎症、肿瘤的发生都有重要关系；

胆汁反流性胃损伤的患者胃部饱胀感或不适，往往饭后加重，或有胃痛，或胃部发凉，可伴腹胀、嗳气、反酸、烧心、恶心、呕吐、胃振水音、肠鸣、排便不畅、食欲减退和消瘦等；严重的还可有胃出血，表现为呕血或排黑便(柏油样便)以及大便潜血试验呈阳性等；

目前慢性胃炎、胃溃疡的造模方法有：酸制剂诱发急性胃炎模型，胆汁、去氧胆酸、氨水灌胃等胃炎模型；应激性胃溃疡模型、幽门结扎法、乙醇诱发模型。但是目前的造模方法普遍存在动物模型的操作较复杂，死亡率较高；且动物模型对于临床指标及病理特征的反映不够理想的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法，解决了目前的造模方法普遍存在的动物模型的操作较复杂，死亡率较高；且动物模型对于临床指标及病理特征的反映不够理想的问题。

本发明所采用的技术方案是，

本发明提供一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法，包括以下步骤：

步骤1：取合适的实验小鼠并对其禁食8～15小时、禁饮3～6小时，并保持其活性；

步骤2：使用1％～8％的水合氯醛，注射剂量为0.1ml～1.0ml/100g，对步骤1中的实验小鼠进行腹腔注射；

步骤3：将步骤2中的实验小鼠仰卧位固定，上腹部脱毛，剑突下前正中线切口1～3cm，打开腹腔，暴露肠管，用镊子轻提右侧胃，使其高于皮肤，找到幽门狭窄处，并在狭窄处沿肠管走行切0.5～1.0cm的造口，完全离断幽门***，纵向吻合切口，然后对切口进行缝合消毒；

步骤4：对步骤3中的实验小鼠以正常喂养，自由饮水20～40天后得到胆汁反流性胃损伤动物模型。

本发明的特点还在于，

实验小鼠的体重为150～250g，雌雄不拘，禁食时间是12小时，禁饮时间是4小时。

采用1％～8％的水合氯醛，注射剂量为0.4ml～1.0ml/100g对实验小鼠进行腹腔注射。

采用5％水合氯醛，注射剂量为0.6ml/100g，对实验小鼠进行腹腔注射。

剑突下前正中线的切口为1cm，在狭窄处沿肠管走行切0.5cm的造口。

步骤3中，纵向吻合切口具体为切口近端肠壁与切口远端肠壁对接。

步骤4中，进入15天后对实验小鼠进行每日检查和数据记录。

本发明的有益效果是，一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法，通过模拟胃炎、胃溃疡的发病机制及原因，利用新的手术方式成功做出胃损伤动物模型，使得本发明一种胆汁反流性胃损伤动物模型能够较准确地反映临床指标及病理特征，胃损伤发生率高，且重复性好、成本低且动物的死亡率低。

附图说明

图1是本发明一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法中胃幽门处沿肠管长轴切开及肠管肌层示意图；

图2是本发明一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法中胃幽门处沿肠管长轴切开的示意图；

图3是本发明一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法中切口近端肠壁缘与切口远端肠壁远端缘对接缝合示意图。

图中，1.胃，2.十二指肠腔，3.幽门管腔，4.幽门***，5.幽门粘膜下层，6.环形肌，7.纵行肌，8.粘膜层，9.浆膜层。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。

本发明提供一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法，包括以下步骤：

步骤1：取合适的实验小鼠并对其禁食8～15小时、禁饮3～6小时，并保持其活性；

步骤2：使用1％～8％的水合氯醛，注射剂量为0.1ml～1.0ml/100g，对步骤1中的实验小鼠进行腹腔注射；

步骤3：将步骤2中的实验小鼠仰卧位固定，上腹部脱毛，剑突下前正中线切口1～3cm，打开腹腔，暴露肠管，用镊子轻提右侧胃，使其高于皮肤，找到幽门狭窄处，并在狭窄处沿肠管走行切0.5～1.0cm的造口，完全离断幽门***，纵向吻合切口，然后对切口进行缝合消毒；

步骤4：对步骤3中的实验小鼠以正常喂养，自由饮水20～40天后得到胆汁反流性胃损伤动物模型。

实验小鼠的体重为150～250g，雌雄不拘，禁食时间是12小时，禁饮时间是4小时。

采用1％～8％的水合氯醛，注射剂量为0.4ml～1.0ml/100g对实验小鼠进行腹腔注射。

采用5％水合氯醛，注射剂量为0.6ml/100g，对实验小鼠进行腹腔注射。

剑突下前正中线的切口为1cm，在狭窄处沿肠管走行切0.5cm的造口。

步骤3中，纵向吻合切口具体为切口近端肠壁与切口远端肠壁对接。

步骤4中，进入15天后对实验小鼠进行每日检查和数据记录。

实施例1

本实施例公开了一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法，包括以下步骤：

步骤1：选取昆明种实验小鼠，禁食12小时，禁饮4小时，并保持其活性；

步骤2：使用5％的水合氯醛，注射剂量为0.6ml/100g，对步骤1中的实验小鼠进行腹腔注射；

水合氯醛作为一种镇静催眠药和抗惊厥药，对呼吸中枢和心血管中枢抑制作用弱，对小鼠、大鼠心脏指标影响小，用水合氯醛麻醉，麻醉深度适宜，动物死亡率低。

步骤3：将步骤2中的实验小鼠仰卧位固定，上腹部脱毛，剑突下前正中线切口1cm，打开腹腔，暴露肠管，用镊子轻提右侧胃，使其高于皮肤，找到幽门狭窄处，并在狭窄处沿肠管走行切0.5cm的造口，肠管长轴，如图1和图2所示。完全离断幽门***，纵向吻合切口，即切口近端肠壁与切口远端肠壁对接，如图3所示。然后对切口进行缝合消毒；

步骤4：对步骤3中的实验小鼠以正常喂养，自由饮水，进入15天后对实验小鼠进行每日检查和数据记录。30天后得到胆汁反流性胃损伤动物模型。

上述操作使得幽门***失去原有功能，十二指肠降部胆汁可逆行进入胃内，在较短时间内造成慢性胃炎胃溃疡。

实施例2

本实施例公开了一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法，包括以下步骤：

步骤1：选取昆明种实验小鼠，禁食8小时，禁饮3小时，并保持其活性；

步骤2：使用8％的水合氯醛，注射剂量为1.0ml/100g，对步骤1中的实验小鼠进行腹腔注射；

水合氯醛作为一种镇静催眠药和抗惊厥药，对呼吸中枢和心血管中枢抑制作用弱，对小鼠、大鼠心脏指标影响小，用水合氯醛麻醉，麻醉深度适宜，动物死亡率低。本实施例通过调整减少禁食。禁水的时间，加大水合氯醛的量，可以保证实验小鼠达到所预期的状态。

步骤3：将步骤2中的实验小鼠仰卧位固定，上腹部脱毛，剑突下前正中线切口3cm，打开腹腔，暴露肠管，用镊子轻提右侧胃，使其高于皮肤，找到幽门狭窄处，并在狭窄处沿肠管走行切1.0cm的造口，肠管长轴，如图1和图2所示。完全离断幽门***，纵向吻合切口，即切口近端肠壁与切口远端肠壁对接，如图3所示。然后对切口进行缝合消毒；

步骤4：对步骤3中的实验小鼠以正常喂养，自由饮水，进入15天后对实验小鼠进行每日检查和数据记录。20天后得到胆汁反流性胃损伤动物模型。

上述操作使得幽门***失去原有功能，十二指肠降部胆汁可逆行进入胃内，在较短时间内造成慢性胃炎胃溃疡。

实施例3

本实施例公开了一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法，包括以下步骤：

步骤1：选取昆明种实验小鼠，禁食15小时，禁饮6小时，并保持其活性；

步骤2：使用1％的水合氯醛，注射剂量为0.1ml/100g，对步骤1中的实验小鼠进行腹腔注射；

水合氯醛作为一种镇静催眠药和抗惊厥药，对呼吸中枢和心血管中枢抑制作用弱，对小鼠、大鼠心脏指标影响小，用水合氯醛麻醉，麻醉深度适宜，动物死亡率低。本实施例通过调整减少禁食。禁水的时间，加大水合氯醛的量，可以保证实验小鼠达到所预期的状态。

步骤3：将步骤2中的实验小鼠仰卧位固定，上腹部脱毛，剑突下前正中线切口1cm，打开腹腔，暴露肠管，用镊子轻提右侧胃，使其高于皮肤，找到幽门狭窄处，并在狭窄处沿肠管走行切0.5cm的造口，肠管长轴，如图1和图2所示。完全离断幽门***，纵向吻合切口，即切口近端肠壁与切口远端肠壁对接，如图3所示。然后对切口进行缝合消毒；

步骤4：对步骤3中的实验小鼠以正常喂养，自由饮水，进入15天后对实验小鼠进行每日检查和数据记录。40天后得到胆汁反流性胃损伤动物模型。

上述操作使得幽门***失去原有功能，十二指肠降部胆汁可逆行进入胃内，在较短时间内造成慢性胃炎胃溃疡。

实施例4

本实施例公开了一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法，包括以下步骤：

步骤1：选取昆明种实验小鼠，禁食10小时，禁饮5小时，并保持其活性；

步骤2：使用3％的水合氯醛，注射剂量为0.4ml/100g，对步骤1中的实验小鼠进行腹腔注射；

水合氯醛作为一种镇静催眠药和抗惊厥药，对呼吸中枢和心血管中枢抑制作用弱，对小鼠、大鼠心脏指标影响小，用水合氯醛麻醉，麻醉深度适宜，动物死亡率低。本实施例通过调整减少禁食。禁水的时间，加大水合氯醛的量，可以保证实验小鼠达到所预期的状态。

步骤3：将步骤2中的实验小鼠仰卧位固定，上腹部脱毛，剑突下前正中线切口2cm，打开腹腔，暴露肠管，用镊子轻提右侧胃，使其高于皮肤，找到幽门狭窄处，并在狭窄处沿肠管走行切0.7cm的造口，肠管长轴，如图1和图2所示。完全离断幽门***，纵向吻合切口，即切口近端肠壁与切口远端肠壁对接，如图3所示。然后对切口进行缝合消毒；

步骤4：对步骤3中的实验小鼠以正常喂养，自由饮水，进入15天后对实验小鼠进行每日检查和数据记录。28天后得到胆汁反流性胃损伤动物模型。

上述操作使得幽门***失去原有功能，十二指肠降部胆汁可逆行进入胃内，在较短时间内造成慢性胃炎胃溃疡。

实施例5

本实施例公开了一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法，包括以下步骤：

步骤1：选取昆明种实验小鼠，禁食9小时，禁饮5小时，并保持其活性；

步骤2：使用6％的水合氯醛，注射剂量为0.5ml/100g，对步骤1中的实验小鼠进行腹腔注射；

水合氯醛作为一种镇静催眠药和抗惊厥药，对呼吸中枢和心血管中枢抑制作用弱，对小鼠、大鼠心脏指标影响小，用水合氯醛麻醉，麻醉深度适宜，动物死亡率低。本实施例通过调整减少禁食、禁水的时间，加大水合氯醛的量，可以保证实验小鼠达到所预期的状态。

步骤3：将步骤2中的实验小鼠仰卧位固定，上腹部脱毛，剑突下前正中线切口1.5cm，打开腹腔，暴露肠管，用镊子轻提右侧胃，使其高于皮肤，找到幽门狭窄处，并在狭窄处沿肠管走行切0.8cm的造口，肠管长轴，如图1和图2所示。完全离断幽门***，纵向吻合切口，即切口近端肠壁与切口远端肠壁对接，如图3所示。然后对切口进行缝合消毒；

步骤4：对步骤3中的实验小鼠以正常喂养，自由饮水，进入15天后对实验小鼠进行每日检查和数据记录。32天后得到胆汁反流性胃损伤动物模型。

上述操作使得幽门***失去原有功能，十二指肠降部胆汁可逆行进入胃内，最后造成慢性胃炎胃溃疡。

本发明一种胆汁反流性胃损伤动物模型的建模方法，通过破坏幽门***，使其失去原有的收缩舒张功能，不能自主调节，更加仿真地模拟了人体胆汁反流性胃损伤(胃炎、胃溃疡)的发病机制，能够较准确地反映临床指标及病理特征，提高了实验的准确性；此外，本发明手术创伤小，动物死亡率低，模型建立的成功率较高。