阅读说明：本技术 抗病促生复合芽孢杆菌水分散粒剂及其制备方法和应用 (Disease-resistant growth-promoting composite bacillus water dispersible granule as well as preparation method and application thereof ) 是由 王小兵 汪晓丽 封克 董君能 王海潮 麦帕雯 于 2019-10-12 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种抗病促生复合芽孢杆菌水分散粒剂,包括复合芽孢杆菌、载体和助剂,所述复合芽孢杆菌包括同温层芽孢杆菌SC-12和解淀粉芽孢杆菌BZ6-1,所述同温层芽孢杆菌SC-12和解淀粉芽孢杆菌BZ6-1的活菌数之比为2:1。本发明还公开了一种抗病促生复合芽孢杆菌水分散粒剂的制备方法,将混合培养的解淀粉芽孢杆菌BZ6-1和同温层芽孢杆菌SC-12混合培养的母液离心,将混合母液干燥后制成菌粉,在载体、湿润剂、分散剂、崩解剂、粘结剂中加入1%的菌粉,混合均匀后加水捏合,经过造粒、筛分、烘干得到产品。本发明抗病促生复合芽孢杆菌水分散粒剂可用于植物耐盐促生和生防抗病,提高植物产量和品质。(The invention discloses a disease-resistant growth-promoting composite bacillus water dispersible granule which comprises composite bacillus, a carrier and an auxiliary agent, wherein the composite bacillus comprises stratospheric bacillus SC-12 and bacillus amyloliquefaciens BZ6-1, and the ratio of the viable count of the stratospheric bacillus SC-12 to the viable count of the bacillus amyloliquefaciens BZ6-1 is 2: 1. The invention also discloses a preparation method of the disease-resistant growth-promoting composite bacillus water dispersible granule, which comprises the steps of centrifuging mother liquor obtained by mixed culture of bacillus amyloliquefaciens BZ6-1 and bacillus stratosphericus SC-12, drying the mixed mother liquor to prepare bacterial powder, adding 1% of bacterial powder into a carrier, a wetting agent, a dispersing agent, a disintegrating agent and a binder, uniformly mixing, adding water, kneading, granulating, screening and drying to obtain the product. The disease-resistant growth-promoting composite bacillus water dispersible granule can be used for salt-resistant growth promotion, biocontrol and disease resistance of plants, and can improve the yield and quality of the plants.)

抗病促生复合芽孢杆菌水分散粒剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种抗病促生复合芽孢杆菌水分散粒剂及其制备方法和应用，属于农业微生物技术领域。

背景技术

我国是设施农业大国，农户为追求较高的经济收益，普遍依赖大肥大水提高作物产量，导致设施土壤次生盐渍化及土传病害发生严重。近年来，利用根际耐盐促生细菌和生防细菌提高作物产量，防治病害，并提高对各种环境的耐受性的研究是近年来的农业应用微生物的研究热点之一。现有的生物菌剂的作用比较单一，作用效果较差，不能满足生产的需要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种抗病促生复合芽孢杆菌水分散粒剂及其制备方法和应用，将短小芽孢杆菌SC-12菌株和解淀粉芽孢杆菌BZ6-1菌株复合培养，构建成复合菌剂协同发挥其功效，研发出一种达到耐盐促生和生防抗病的双重效果的多功能生物菌剂。

为解决上述技术问题，本发明提供一种抗病促生复合芽孢杆菌水分散粒剂，包括复合芽孢杆菌、载体和助剂，所述复合芽孢杆菌包括短小芽孢杆菌SC-12 和解淀粉芽孢杆菌BZ6-1，所述短小芽孢杆菌SC-12和解淀粉芽孢杆菌BZ6-1 的活菌数之比为2:1。

短小芽孢杆菌SC-12(Bacillus pumilus)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为2013年5月15号，保藏号为：CGMCC NO.7622。

解淀粉芽孢杆菌BZ6-1(Bacillus amyloliquefaciens)该菌株已在国家知识产权局指定的保藏单位保藏，保藏日期为2009年01月22日，保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区大屯路中国科学院微生物研究所，保藏编号：CGMCCNo.2892。

优选地，所述助剂包括润湿剂、分散剂、崩解剂和粘结剂。

优选地，所述载体为滑石粉、碳酸钙、硫酸铵、硅藻土中的一种或多种。

优选地，所述复合芽孢杆菌的含量为1％，所述润湿剂含量为6％，分散剂含量为6％，崩解剂含量为4％，粘结剂含量为4％，载体补足至100％。

优选地，所述润湿剂为十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、皂角粉中的一种或多种；所述分散剂为木质素磺酸钠、羟甲基纤维素钠、三聚磷酸钠中的一种或多种；所述崩解剂为氯化钙、硫酸铵、氯化钠中的一种或多种；所述粘结剂为聚乙烯醇、聚乙二醇、可溶性淀粉中的一种或多种。

优选地，所述载体为硅藻土，所述润湿剂为十二烷基硫酸钠，所述分散剂为羧甲基纤维素钠，所述崩解剂为硫酸铵，所述粘结剂为聚乙烯醇。

本发明还提供一种抗病促生复合芽孢杆菌水分散粒剂的制备方法，将混合培养的解淀粉芽孢杆菌BZ6-1和短小芽孢杆菌SC-12混合培养的母液离心，将混合母液干燥后制成菌粉，在载体、湿润剂、分散剂、崩解剂、粘结剂中加入1％的菌粉，混合均匀后加水捏合，经过造粒、筛分、烘干得到产品。

优选地，筛分的筛孔粒径为0.8mm，烘干温度为40℃，烘干时间为45min。

本发明还提供一种抗病促生复合芽孢杆菌水分散粒剂在植物耐盐促生和生防抗病中的应用。

本发明还提供一种抗病促生复合芽孢杆菌水分散粒剂在提高植物产量和品质中的应用。

本发明所达到的有益效果：

(1)短小芽孢杆菌SC-12菌株(Bacillus pumilus)，其ACC脱氨酶比活力达0.087U/mg，并具有较强的产铁载体能力，菌株SC-12在100mmol/L和200 mmol/L硝酸盐胁迫条件下，能显著促进植物发芽率和芽长生长；解淀粉芽孢杆菌BZ6-1菌株(Bacillusamyloliquefaciens)，对花生青枯病菌等细菌性病害和水稻纹枯病菌和稻瘟病菌等真菌性病害均有较强的抑制作用，具有较广的抗菌谱；本发明将短小芽孢杆菌SC-12菌株和解淀粉芽孢杆菌BZ6-1菌株复合培养，构建成复合菌剂协同发挥其功效，研发出一种达到耐盐促生和生防抗病的双重效果的多功能生物菌剂。

(2)水分散粒剂使用时投入水中迅速崩解分散，形成高悬浮体系，具有高分散性、高有效性、高稳定性和环境友好性的优点。

(3)本发明助剂的加入能够增强水分散粒剂的防治效果，改善水分散粒剂的理化性质及使用性能，降低水分散粒剂的用量，节约成本和保护环境。

(4)本发明制备出的复配水分散粒剂孢子含量为2.5×10⁸cfu·g^-1，悬浮率为79.3％，pH值6.8，水分含量4.5％，湿润时间为19.6s，崩解时间为86.4s，颗粒强度适中，水分散粒剂的施用提高了植物的产量和品质。

附图说明

图1是本发明抗病促生复合芽孢杆菌水分散粒剂的工艺流程图；

图2是不同储藏方式对芽孢杆菌水分散粒剂活性的影响。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。

实施例1

本发明提供一种抗病促生复合芽孢杆菌水分散粒剂，包括复合芽孢杆菌、载体和助剂，所述复合芽孢杆菌包括短小芽孢杆菌SC-12和解淀粉芽孢杆菌BZ6-1，所述短小芽孢杆菌SC-12和解淀粉芽孢杆菌BZ6-1的活菌数之比为2:1。

短小芽孢杆菌SC-12(Bacillus pumilus)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为2013年5月15号，保藏号为：CGMCC NO.7622。

解淀粉芽孢杆菌BZ6-1(Bacillus amyloliquefaciens)该菌株已在国家知识产权局指定的保藏单位保藏，保藏日期为2009年01月22日，保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区大屯路中国科学院微生物研究所，保藏编号：CGMCCNo.2892。

所述助剂包括润湿剂、分散剂、崩解剂和粘结剂。所述润湿剂可以为十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、皂角粉中的一种或多种；所述分散剂可以为木质素磺酸钠、羟甲基纤维素钠、三聚磷酸钠中的一种或多种；所述崩解剂可以为氯化钙、硫酸铵、氯化钠中的一种或多种；所述粘结剂可以为聚乙烯醇、聚乙二醇、可溶性淀粉中的一种或多种。所述载体可以为滑石粉、碳酸钙、硫酸铵、硅藻土中的一种或多种。

如图1所示，抗病促生复合芽孢杆菌水分散粒剂的制备方法为：将混合培养的解淀粉芽孢杆菌BZ6-1和短小芽孢杆菌SC-12混合培养的母液离心，将混合母液干燥后制成菌粉，在载体、湿润剂、分散剂、崩解剂、粘结剂中加入1％的菌粉，混合均匀后加水捏合，经过造粒、筛分、烘干得到产品。

本发明通过研究得出抗病促生复合芽孢杆菌水分散粒剂的最佳配方为：载体为硅藻土，润湿剂为十二烷基硫酸钠，分散剂为羧甲基纤维素钠，崩解剂为硫酸铵，粘结剂为聚乙烯醇。复合芽孢杆菌的含量为1％，润湿剂含量为6％，分散剂含量为6％，崩解剂含量为4％，粘结剂含量为4％，载体补足至100％。造粒时的最佳条件是：0.8mm的筛孔粒径，40℃的烘干温度，45min的烘干时间。在此条件下：制备的复合芽孢杆菌水分散粒剂孢子含量为2.5×10⁸cfu·g-1，悬浮率79.3％，pH值6.8，水分含量4.5％，湿润时间19.6s，崩解时间86.4s，颗粒强度适中。

制剂质量指标分析测定：参照《中华人民共和国国家标准》对制成的抗病促生复合芽孢杆菌水分散粒剂进行测定。悬浮率测定参考GB/T14825-2006，pH值测定参考GB/T1601-1993，水分测定参考GB/T1600-2001，润湿时间测定参考 GB/T5451-2001。

表1水分散粒剂质量指标的测定

从表1中可以看出，本实验所研制的复合芽孢杆菌水分散粒剂的各项指标是符合国家标准的，其湿润性、分散性和崩解性都远高于国家标准。

贮藏稳定性测定：分别取制成的水分散粒剂在冷藏4℃和室温(25℃)条件下贮存，每隔15天测定样品的含菌量，测定时长为90天，评估制剂的贮藏稳定性。

如图2所示，通过对芽孢杆菌水分散粒剂贮藏稳定性研究测定可知：当水分散粒剂保存在4℃冰箱里时菌剂的活性显著高于室温条件下的储藏，储藏90天后，在室温下，菌的存活率为29.99％；而在冷藏4℃条件下，孢子萌发率为 55.72％。因此，根据试验可知：低温有利于菌种的保存和货架期的延长，使芽孢杆菌BZ6-1和SC-12分散粒剂能更好地运用于生产中。

实施例2

试验于2019年3～8月在江苏省扬州高邮蔬菜基地塑料大棚进行。采用随机区组设计，设常规复合肥处理(CK)、复合肥+复合水分散粒剂1kg/亩(A)、复合肥+复合水分散粒剂2kg/亩(B)、复合肥+复合水分散粒剂4kg/亩(C)、有机肥(D)，辣椒于3月18日定植后进行常规管理，每处理3个重复，每重复面积为15m²。记录每个小区辣椒整个生长期的重量，在辣椒成熟后期，每个小区取三株辣椒分别测定辣椒VC、蛋白质和可溶性糖含量等品质相关指标。VC 含量定采用2，6-二氯酚靛酚滴定法，蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝法，可溶性糖含量测定采用分光光度法。

表2水分散粒剂质量指标的测定

由表2可以看出，复合水分散粒剂处理的辣椒产量显著高于单施复合肥和单施有机肥处理的产量，其中复合肥+复合水分散粒剂1kg/亩的处理比对照常规复合肥处理显著增产16.26％，比单施有机肥处理显著增产9.06％。复合芽孢杆菌水分散粒剂处理显著增加了辣椒果实的VC、可溶性糖和蛋白质含量表。其中 VC的含量随着水分散粒剂含量的增加而增加，复合肥+复合水分散粒剂1kg/亩的处理比复合肥+复合水分散粒剂2kg/亩、复合肥+复合水分散粒剂4kg/亩的处理VC含量高，差异明显；蛋白质和可溶性糖随着水分散粒剂的增加而减少，复合肥+复合水分散粒剂1kg/亩的处理比复合肥+复合水分散粒剂2kg/亩、复合肥+ 复合水分散粒剂4kg/亩的处理蛋白质和可溶性糖的含量低，但差异不明显。综合考虑，复合肥+复合水分散粒剂1kg/亩的处理是最适合的处理，有利于提高辣椒产量和品质。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变形，这些改进和变形也应视为本发明的保护范围。