阅读说明：本技术 人心果萃取物用于制备调控基因表现量的医药组合物的用途 (Application of human heart fruit extract in preparing medicine composition for regulating gene expression amount ) 是由 林咏翔 林于婷 于 2018-08-06 设计创作，主要内容包括：本发明涉及人心果萃取物的用途,尤其是人心果萃取物用于制备调控基因表现量的组合物的用途。本发明提供一种人心果萃取物用于调控NOS基因、EDN基因、IL基因、VCAM基因、CASP基因、PDGF基因、FGF基因、IGF2BP3基因、IGF1R基因、凝血因子基因、及SERPINE基因表现量的医药组合物的用途,能有效改善血压的调控、降低血管的发炎、减少血管的增生、及预防血栓的形成,以达到心血管保健的功效。其中该人心果萃取物,是人心果以水、醇、或醇水混合物的溶剂所萃取而得。(The invention relates to application of a human heart fruit extract, in particular to application of the human heart fruit extract in preparing a composition for regulating and controlling gene expression amount. The invention provides application of a human heart fruit extract in a medicinal composition for regulating and controlling the expression quantity of NOS (nitric oxide synthase) gene, EDN (adenosine triphosphate) gene, IL (insulin-derived growth factor) gene, VCAM (VCAM) gene, CASP (cysteine-related protein) gene, PDGF (PDGF) gene, FGF (fibroblast growth factor) gene, IGF2BP3 gene, IGF1R gene, blood coagulation factor gene and SERPINE (serine-serine) gene, which can effectively improve the regulation and control of blood pressure, reduce inflammation of blood vessels, reduce the hyperplasia of the blood vessels and prevent the formation of thrombus so as to achieve. Wherein the extract of human heart fruit is obtained by extracting human heart fruit with a solvent selected from water, alcohol, or a mixture of alcohol and water.)

人心果萃取物用于制备调控基因表现量的医药组合物的用途

技术领域

本发明是关于一人心果萃取物的用途，尤其是一种人心果萃取物用于调控NNOS基因、EDN基因、IL基因、VCAM基因、CASP基因、PDGF基因、FGF基因、IGF2BP3基因、IGF1R基因、凝血因子基因、及SERPINE基因表现量的医药组合物的用途。

背景技术

相关文献统计显示，全球约有三分之一人口死于心血管疾病(Cardiovasculardisease，CVD)，心血管疾病又称为循环系统疾病，是指人体内运送血液的器官和组织所产生的疾病，因此所有心脏及血管的病变都可称为心血管疾病，如中风、心肌梗塞等。

现今治疗心血管疾病的药物主要为化学合成而得，且可分为两大类：一是预防血栓、抗血小板凝结的药物，二是控制高血压、胆固醇、糖尿病的药物，然而这两类药物常伴随着较强的副作用。例如血管紧张素相关的拮抗药可能会引起高血钾，使肌肉出现无力或心跳过慢等症状；或是强效降胆固醇药物的Statins类药物(HMG-CoA reductaseinhibitors)可能会使肝功能指数上升、或有头痛、恶心、疲倦等副作用。且这些药物必须长期服用以控制病情，然而长期服用药物对于个体所造成的副作用更无法自根本改善个体身体健康。

综合上面所述，因应心血管疾病的高发生率，且基于现代人生活水平提高且对于保健概念提高，研发一种能有效预防心血管疾病，且避免合成药物对于人体产生副作用的由天然植物的有效成分组成的医药组合物，着实有其必要性。

发明内容

缘此，本发明的一目的在提供一种人心果萃取物用于制备调控一氧化氮合成酶(Nitric oxide synthase，NOS)基因、内皮素(Endothelin，EDN)基因、介白素(Interleukin，IL)基因、血管细胞黏附分子(Vascular cell adhesion protein，VCAM)基因、凋亡蛋白酶(Caspase，CASP)基因、血小板衍生因子(Platelet-derived growthfactor，PDGF)基因、纤维母细胞生长因子(Fibroblast growth factor，FGF)基因、胰岛素生长因子2mRNA结合蛋白3(Insulin-like growth factor 2mRNA-binding protein 3，IGF2BP3)基因、类胰岛素生长因子1受体(insulin like growth factor 1 receptor，IGF1R)基因、凝血因子(Coagulation factor)基因、及丝氨酸蛋白酶抑制剂E家族(Serpinfamily E member，SERPINE)基因表现量的医药组合物的用途，其中该人心果萃取物是以一溶剂萃取一人心果所获得，该溶剂为水、醇、或醇水混合物，该溶剂与该人心果的液固比为2～10∶1～5，且该萃取步骤是在75℃～95℃进行0.5～2小时。

在本发明的一实施例中，其中该NOS基因为一氧化氮合成酶3(Nitric oxidesynthase 3，NOS3)基因、该EDN基因为内皮素1(Endothelin 1，EDN1)基因、该IL基因包含介白素6(Interleukin 6，IL-6)基因及介白素8(Interleukin 8，IL-8)基因、该VCAM基因为血管细胞黏附分子-1(Vascular cell adhesion protein-1，VCAM-1)基因、该CASP基因为凋亡蛋白酶8(Caspase 8，CASP8)基因、该PDGF基因为血小板衍生因子C(Platelet-derivedgrowth factor C，PDGFC)基因、该FGF基因为纤维母细胞生长因子2(Fibroblast growthfactor 2，FGF2)基因、该Coagulation factor基因为凝血因子3(Coagulation factorIII，F3)基因、及该SERPINE基因为丝氨酸蛋白酶抑制剂E家族1(Serpin family E member1，SERPINE1)基因。

在本发明的一实施例中，其中该NOS3基因是向上调控，且该EDN1基因、IL-8基因、IL-6基因、VCAM-1基因、CASP8基因、PDGFC基因、FGF2基因、IGF2BP3基因、IGF1R基因、F3基因及SERPINE1基因是向下调控。

在本发明的一实施例中，其中该人心果萃取物的浓度至少为0.0078125mg/mL，且该医药组合物具有促进血管舒张及抑制血管收缩的调节血压、抑制血管内皮细胞发炎、抑制血管增生、及抑制血栓形成的功能。

同时，本发明用于调控NOS3基因、EDN1基因、IL-8基因、IL-6基因、VCAM-1基因、CASP8基因、PDGFC基因、FGF2基因、IGF2BP3基因、IGF1R基因、F3基因及SERPINE1基因表现量的医药组合物，亦可包含一有效量的人心果萃取物及一医药上可接受的载体，该组合物是以粉末状、颗粒状、液状、胶状或膏状的剂型。

因此，本发明的人心果萃取物能有效改善血压的调控、降低血管发炎的发生、减少血管的增生、及预防血栓的形成，因此，本发明人心果萃取物可作为心血管保健品的原料，对于潜在风险的人可达到改善血压调控、降低血管发炎、减少血管增生、降低血栓形成的功效，全面性预防动脉粥状硬化的发生，以达到心血管保健的功效。

以下将配合图式进一步说明本发明的实施方式，下述所列举的实施例是用以阐明本发明，并非用以限定本发明的范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。

附图说明

图1为本发明实施例的人心果萃取物于提升NOS3基因及降低EDN1基因表现量的直方图，*p值＜0.05；***p值＜0.001；

图2为本发明实施例的人心果萃取物于降低IL-8基因、IL-6基因、VCAM-1基因、CASP8基因表现量的直方图，**p值＜0.01；***p值＜0.001；

图3为本发明实施例的人心果萃取物于降低PDGFC基因、FGF2基因、IGF2BP3基因、IGF1R基因表现量的直方图，*p值＜0.05；**p值＜0.01；***p值＜0.001；

图4为本发明实施例的人心果萃取物于降低F3基因及SERPINE1基因表现量的直方图，***p值＜0.001。

具体实施方式

本文中所使用数值为近似值，所有实验数据皆表示在20％的范围内，较佳为在10％的范围内，最佳为在5％的范围内。

实施例1 本发明的人心果萃取物的制备方法

人心果(Manilkara zapota)为山榄科(Sapotaceae)人心果属(Achras)常绿乔木植物，原产于热带美洲，在热带国家多栽培作庭园树，中国台湾于1902年引进，零星栽培于云林、嘉义的平地和浅山坡地。人心果皮薄呈绣褐色，果肉黄褐，含有胶质和砂细胞，含约14％的极高糖分，吃起来润滑甜蜜，风味特殊，而未成熟的果实富含单宁，可治疗腹泻，粉碎的种子亦有利尿、镇静及催眠的功效。

在本发明一实施例中，将人心果整颗清洗，取洗净后的人心果整颗与水的萃取溶剂以2～10∶1～5的液固比混合，在溶剂中以75℃～95℃进行萃取0.5～2小时。萃取后冷却至室温，将该粗萃取物经由0.45～0.2micron的滤网过滤以获得滤液。最后，将该滤液进行减压浓缩，得到本发明的人心果萃取物。

实施例2 本发明人心果萃取物调控人类血管内皮细胞中NOS3基因、EDN1基因、IL-8基因、IL-6基因、VCAM-I基因、CASP8基因、PDGFC基因、FGF2基因、IGF2BP3基因、IGF1R基因、F3基因及SERPINE1的基因表现量

本发明以人类脐带血管内皮细胞(human umbilical vascular endothelialcell，HUVEC)进行本发明的人心果萃取物对NOS3基因、EDN1基因、IL-8基因、IL-6基因、VCAM-1基因、CASP8基因、PDGFC基因、FGF2基因、IGF2BP3基因、IGF1R基因、F3基因及SERPINE1基因表现的测试。该人类脐带血管内皮细胞是购自生物资源保存及研究中心(中国台湾)，编号No.H-UV001。将该细胞培养于含有10％的胎牛血清(Fetal Bovine Serum)以及90％的M200培养基(购自Gibco，产品编号M-200-500)并加入10％LSGS(Low SerumGrowth Supplement，购自Gibco，产品编号S-003-10)。

将人类血管内皮细胞分成两组：(1)加入0.0078125mg/mL的本发明的人心果萃取物的实验组，以及(2)仅含培养液的控制组各处理24小时后，将血管内皮细胞以细胞裂解液(购自Geanaid公司，中国台湾)回收细胞后，使用RNA萃取试剂套组(购自Geneaid公司，中国台湾)分别收集两组血管内皮细胞内的RNA，接着利用 III反转录酶(购自Invitrogene公司，美国，编号18080-051)以2000ng的萃取RNA为模板以引子黏合进行反转录作用产生相应的cDNA，接着利用ABI StepOnePlus^TMReal-Time PCR system(ThermoFisher Scientific公司，美国)，以及KAPA SYBR FAST(购自Sigma公司，美国，编号38220000000)将三组反转录后产物分别以表一的组合引子进行定量实时反转录聚合酶连锁反应(quantitative real-time reverse transcription polymerase chainreaction)试验，用以定量NOS3基因、EDN1基因、IL-8基因、IL-6基因、VCAM-1基因、CASP8基因、PDGFC基因、FGF2基因、IGF2BP3基因、IGF1R基因、F3基因及SERPINE基因的mRNA表现量，其中定量数值是取由阈值循环数(Ct)，而目标基因的mRNA相对量是推导自方程式其中ΔCt＝Ct_目标基因-Ct_ACTB(β-肌动蛋白，beta-actin)，再利用Excel软件进行非成对单尾student t-test以决定变异系数与是否在统计上具有显着差异(*p值＜0.05；**p值＜0.01；***p值＜0.001)。

表一、定量实时反转录聚合酶连锁反应的组合引子

先前研究指出NOS3会合成一氧化氮，并促进血管舒张，而EDN1则会合成内皮素，促进血管的收缩，此二基因的表现与血压的调节相关；IL-8、IL-6、VCAM-1基因表现与细胞发炎反应有关，而CASP基因表现与细胞凋亡有关，因此当细胞发炎时，此四种基因的表现量会上升；PDGFC、FGF2、IGF2BP3、IGF1R会促进血管内皮生长因子(Vascular endothelialgrowth factor，VEGF)的表现，VEGF会促进血管新生，且与癌症、心肌梗塞、脑中风及老人退化性黄斑等疾病相关；SERPINE1会促使纤维溶酶原激活物抑制剂1(Plasminogenactivator inhibitor-1，PAI-1)的合成，PAI-1表现过量与肥胖、第二型糖尿病及心血管疾病有关，且特别与血栓形成密切相关，而F3为凝血因子，也与血栓形成相关。

本发明实施例的人心果萃取物于调控NOS3基因及EDN1基因表现量的结果如图1所示，血管内皮细胞经本案的人心果萃取物处理后，NOS3基因的表现量高出控制组的0.32，而EDN1基因比控制组降低了0.54。调控IL-8基因、IL-6基因、VCAM-1基因、CASP8基因表现量的结果如图2所示，经的人心果萃取物处理后，IL-8基因、IL-6基因、VCAM-1基因、CASP8基因的表现量分别比控制组降低了0.81、0.66、0.55、0.57。调控PDGFC基因、FGF2基因、IGF2BP3基因、IGF1R基因表现量的结果如图3所示，经人心果萃取物处理后，PDGFC基因、FGF2基因、IGF2BP3基因、IGF1R基因表现量分别比控制组降低了0.89、0.58、0.66、0.49。调控F3基因及SERPINE1基因表现量的结果如图4所示，经之人心果萃取物处理后，F3基因及SERPINE1基因的表现量，分别比控制组降低了0.79、0.52。此结果显示本发明的人心果萃取物具有优异的提升NOS3基因，及降低EDN1基因、IL-8基因、IL-6基因、VCAM-1基因、CASP8基因、PDGFC基因、FGF2基因、IGF2BP3基因、IGF1R基因、F3基因及SERPINE1基因表现量的能力，能有效改善血压调控、降低血管发炎、减少血管增生、及预防血栓形成。

综上所述，本发明以水、醇类、或醇水混合物为溶剂所萃取得的人心果萃取物可做为一创新性的心血管保健原料，能有效提升血管舒张相关基因的表现，以及降低血管收缩、血管发炎、血管增生以及血栓形成相关基因的表现，能有效改善血压的调控、降低血管发炎的发生、减少血管的增生、及预防血栓的形成，并能全面性地预防动脉粥状硬化的发生，以达到心血管保健的功效。