阅读说明：本技术 一种曲克芦丁化合物 (Troxerutin compound ) 是由 王明 于 2019-10-18 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种利用先进在线过程控制技术制备的曲克芦丁化合物。所述曲克芦丁化合物利用X射线粉末衍射测定,以2θ衍射角表示的X射线粉末衍射图谱在2θ为8.15±0.2°,9.24±0.2°,12.31±0.2°,17.10±0.2°,17.92±0.2°,18.73±0.2°,23.45±0.2°处显示特征衍射峰。该化合物具有纯度高、杂质含量低、流动性好、稳定性好的特点。(The invention discloses a troxerutin compound prepared by an advanced online process control technology. The troxerutin compound is determined by X-ray powder diffraction, and an X-ray powder diffraction pattern expressed by a 2 theta diffraction angle shows characteristic diffraction peaks at the positions of 8.15 +/-0.2 degrees, 9.24 +/-0.2 degrees, 12.31 +/-0.2 degrees, 17.10 +/-0.2 degrees, 17.92 +/-0.2 degrees, 18.73 +/-0.2 degrees and 23.45 +/-0.2 degrees of 2 theta. The compound has the characteristics of high purity, low impurity content, good fluidity and good stability.)

一种曲克芦丁化合物

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种利用先进在线过程控制技术制备的曲克芦丁化合物。

背景技术

曲克芦丁(Troxerutin)化学名称为：7，3′，4′-三羟乙基芦丁，分子式：C₃₃H₄₂O₁₉，分子量：742.69，CAS号：7085-55-4，结构式如下：

本品为曲克芦丁(7，3′，4′-三羟乙基芦丁)主的羟乙基芦丁混合物。按无水物计算，含曲克芦丁不得少于88.0％(供注射用)。本品为黄色或黄绿色粉末；无臭；有引湿性，在水中易溶，在甲醇中微溶，在乙醇中极微溶，在三氯甲烷中不溶；利用照分光光度法测定，在254nm与347nm的波长处有最大吸收，在283nm的波长处有最小吸收。

曲克芦丁别名三氧乙基芦丁、托克芦丁、维脑路通、维生素P4、羟乙基芦丁，系芦丁经羟乙基化制成的半合成黄酮化合物，本品具有抑制红细胞和血小板凝聚作用，防止血栓形成，同时能增加血中氧的含量，改善微循环，促进新血管生成以增进侧支循环。它对内皮细胞有保护作用，能对抗5-羟色胺和缓激肽引起的血管损伤，增加毛细血管的抵抗力，降低毛细血管的通透性，有防止因血管通透性升高而引起的水肿的作用，对急性缺血性脑损伤有显著的保护作用；并有抗放射性损伤、抗炎症、抗过敏、抗溃疡等作用。临床适用于脑血栓形成和脑栓塞所致的偏瘫、失语以及心肌梗塞前综合征、动脉硬化、中心性视网膜炎、血栓性静脉炎、静脉曲张、血管通透性升高引起的水肿等.本品经临床应用表明，应用范围广，疗效好，尤其对治疗闭塞性脑血管病较好。

目前曲克芦丁剂型包括颗粒、胶囊、口服液、片剂、注射液、冻干粉针剂等，其中口服制剂普遍生物利用度低，注射剂型虽然与口服制剂比较生物利用度相对比较高，但目前制备得到的注射液和冻干粉针剂稳定性依然比较差，长时间放置后曲克芦丁含量下降明显、同时由于降解导致杂质其他羟乙基芦丁衍生物显著增多从而不符合质量要求，因而现有技术注射剂型的有效期在遮光条件下定为一年半左右，由于药品生产流通环节本身需要一定时间，因此其实际能使用的时间很短，很容易就超过有效使用期，导致药品无法使用，因此有必要提高制剂的整体稳定性，以便于临床使用并利于生产储藏。

目前市场上曲克芦丁产品中主要成分三羟乙基芦丁的含量一般为80.0％(供口服用)和88.0％(供注射用)。而注射用曲克芦丁中尚有12.0％的杂质，存在的杂质给临床用药带来较大的隐患，其中已报道的曲克芦丁注射液引起的不良反应以过敏反应居多。因此提高曲克芦丁原料药的纯度，具有重要的现实意义。

由于芦丁的黄酮结构上有四个活性羟基，在碱性条件下，四个羟基均会与环氧乙烷发生Williamson醚化亲核取代反应，虽然四个羟基活性不同，但其差异较小，故在反应中很难得到单一的三羟乙基芦丁。

文献中报道的高含量曲克芦丁的制备方法一般有：(1)申请号为200610065718.4的专利中，在常压下，采用水作溶剂，氢氧化钠为催化剂，环氧乙烷为醚化试剂，反应过程中用树脂调控反应液终点的pH值为9.5～10.3，得到的产品含量大于85.0％；(2)申请号为201210443466.X的专利中，高压下，采用甲醇做溶剂，氢氧化钠为催化剂，环氧乙烷为醚化试剂，得到的产品含量为88.0～93.0％；(3)申请号为201310028281.7的专利中，以水或水醇混合物为溶剂，氢氧化钠或氢氧化钾为催化剂，环氧乙烷为醚化试剂，反应分两个阶段进行，第一阶段生成主要以二羟乙基芦丁和三羟乙基芦丁的产物，第二阶段加入硼砂保护C₅-OH，减少四羟乙基芦丁的比例，得到的曲克芦丁含量达90.0％以上；(4)江正祥等以含量81％的曲克芦丁为原料，采用优先结晶法纯化曲克芦丁，将曲克芦丁粗品在高于65℃的条件下，溶解到体积比为27:1的甲醇与异丙醇的混合溶剂中，然后降温到20～25℃，得到的曲克芦丁含量达95％以上；(5)申请号为200310104132.0的专利中，采用甲醇为溶剂，吡啶为催化剂，得到的粗品曲克芦丁用有机溶剂(甲醇、乙醇)精制，最终得到的产品含量达90.0％；(6)李军等采用C18柱，水-乙腈(体积比为83:17)为流动相，利用制备型HPLC对曲克芦丁原料进行分离纯化制得曲克芦丁对照品，纯度达99.0％(7)公开号为CN104177461A的专利中，先将芦丁制备成7-单羟乙基芦丁，然后对7-单羟乙基芦丁进行羟乙基化，将得到的粗品曲克芦丁进行精制，最终得到含量为98.0％的曲克芦丁，该方法获得含量高于98.0％的三羟乙基芦丁，成本在2000～3000元/公斤。

在已有的报道中，曲克芦丁的含量达98.0％以上的方法，仅需要色谱法，操作繁琐，成本过高，并且不适合产业化推广应用。

为解决上述问题，制备一种具有良好纯度、杂质含量低、且性质稳定的曲克芦丁化合物及其制剂显得尤为重要。

本发明主要针对以上问题，申请人充分考察起始原料的精制、精制过程中温度、pH值、反应时间、添加剂等因素，得到了一种纯度高、杂质含量低、更安全更稳定的曲克芦丁化合物，该生产过程简单，使用的原料、试剂等均为价格便宜、易获得的产品，适于工业化规模生产。

发明内容

为了克服现有技术制备的曲克芦丁纯度低、杂质含量高的缺陷，本发明提供了一种曲克芦丁化合物及其制备方法，通过利用先进在线过程控制技术对各步骤进行详细的参数控制，得到一种曲克芦丁化合物，以2θ衍射角表示的X射线粉末衍射图谱在8.15±0.2°，9.24±0.2°，12.31±0.2°，17.10±0.2°，17.92±0.2°，18.73±0.2°，23.45±0.2°处显示特征衍射峰。其显著提高了曲克芦丁的晶型、溶剂残留和杂质的控制水平，晶型唯一，溶剂残留和杂质含量远远低于现有产品。

利用本发明中所述的化合物制备成的制剂，制备过程简单，不需任何赋形剂，具有更好的稳定性且副作用小。

本发明人经过锐意研究发现，通过包括如下步骤的制备方法，优选获得具有纯度高、杂质含量低的曲克芦丁化合物，其包括以下步骤：

(1)将二甲基甲酰胺、无水碳酸钾和芦丁混合反应，加热，滴加2-溴乙醇，保温反应至芦丁消失，降温至室温，滴加乙酸乙酯，过滤，干燥，得黄色固体曲克芦丁粗品；

(2)将曲克芦丁粗品加入二甲基甲酰胺和丙酮混合液中，加热搅拌溶解，过滤，降温至室温析晶过夜，过滤，湿品用丙酮打浆，过滤，干燥，得曲克芦丁一次精制品；

(3)将曲克芦丁一次精制品加入异丙醇和纯化水混合液中，加热搅拌溶解，降温至室温，保温搅拌，过滤，无水甲醇洗涤，干燥，得曲克芦丁二次精制品。

作为本发明一优选实施方案，其中步骤(1)中加热温度80～85℃，干燥温度50～60℃；

作为本发明一优选实施方案，其中步骤(2)中加热至65～70℃搅拌溶解，干燥温度50～60℃；

作为本发明一优选实施方案，其中步骤(3)中加热至80℃搅拌溶解，降温至室温，保温搅拌6小时，干燥温度50～60℃。

本发明的发明点在于通过利用先进在线过程控制技术对各步骤进行详细的参数控制，具体参数如下：

本发明所述的步骤(1)中的具体过程为：将二甲基甲酰胺、无水碳酸钾和芦丁混合反应，加热至80～85℃，滴加2-溴乙醇，保温反应至芦丁消失，降温至室温，滴加乙酸乙酯，过滤，50～60℃干燥，得黄色固体曲克芦丁粗品；其中各个物料加入比例为二甲基甲酰胺：无水碳酸钾：芦丁：2-溴乙醇＝4.1:0.9:1:0.62。

本发明所述的步骤(2)中的具体过程为：将曲克芦丁粗品加入二甲基甲酰胺和丙酮混合液中，加热至65～70℃搅拌溶解，过滤，降温至室温析晶过夜，过滤，湿品用丙酮打浆2小时，过滤，50～60℃干燥，得曲克芦丁一次精制品；其中各个物料加入比例为曲克芦丁粗品：二甲基甲酰胺：丙酮＝1:3:5。

本发明所述的步骤(3)中的具体过程为：将曲克芦丁一次精制品加入异丙醇和纯化水混合液中，加热至80℃搅拌溶解，降温至室温，保温搅拌6小时，过滤，无水甲醇洗涤3次，50～60℃干燥，得曲克芦丁二次精制品；其中各个物料加入比例为曲克芦丁一次精制品：异丙醇：纯化水＝1:5:1.1。

本发明通过对曲克芦丁制备过程的在线过程参数控制，每一步操作都细致入微，才有了最终的产品质量。晶型唯一，溶剂残留和杂质低于现有产品，流动性更好，便于制剂的分装，稳定性更好。

本发明还提供了一种曲克芦丁注射液制剂，利用上述制备的化合物，经配制分装制备而成，规格为2ml:100mg。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1为实施例1制得的曲克芦丁化合物的X射线粉末衍射图。

图2为实施例1制得的曲克芦丁化合物进行选区电子衍射分析图。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，但绝不是对本发明范围的限制。下面参照实施例进一步详细阐述本发明，但是本领域技术人员应当理解，本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且，本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行等同替换、组合、改良或修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。

实施例1曲克芦丁化合物的制备

(1)将二甲基甲酰胺2500g、无水碳酸钾550g和芦丁610g混合反应，加热至80～85℃，滴加2-溴乙醇381g，保温反应至芦丁消失，降温至室温，滴加乙酸乙酯7500g，过滤，50～60℃干燥，得黄色固体曲克芦丁粗品684g，收率92.1％。

(2)将曲克芦丁粗品684g加入二甲基甲酰胺2052g和丙酮3420g混合液中，加热至65～70℃搅拌溶解，过滤，降温至室温析晶过夜，过滤，湿品用丙酮2280g打浆2小时，过滤，50～60℃干燥，得曲克芦丁一次精制品647.7g，收率94.7％。

(3)将曲克芦丁一次精制品647.7g加入异丙醇3239g和纯化水712.5g混合液中，加热至80℃搅拌溶解，降温至室温，保温搅拌6小时，过滤，无水甲醇洗涤3次，50～60℃干燥，得曲克芦丁二次精制品606.2g，收率93.6％；含量99.2％。

晶型测定结果：实施例1曲克芦丁的X射线粉末衍射图谱在2θ衍射角8.15±0.2°，9.24±0.2°，12.31±0.2°，17.10±0.2°，17.92±0.2°，18.73±0.2°，23.45±0.2°处显示特征衍射峰。具体参见说明书附图1。

实施例2曲克芦丁化合物的制备

(1)将二甲基甲酰胺3280g、无水碳酸钾720g和芦丁800g混合反应，加热至80～85℃，滴加2-溴乙醇496g，保温反应至芦丁消失，降温至室温，滴加乙酸乙酯10000g，过滤，50～60℃干燥，得黄色固体曲克芦丁粗品908.7g，收率93.3％。

(2)将曲克芦丁粗品908.7g加入二甲基甲酰胺2726g和丙酮4546g混合液中，加热至65～70℃搅拌溶解，过滤，降温至室温析晶过夜，过滤，湿品用丙酮3031g打浆2小时，过滤，50～60℃干燥，得曲克芦丁一次精制品865.1g，收率95.2％。

(3)将曲克芦丁一次精制品865.1g加入异丙醇4326g和纯化水951.6g混合液中，加热至80℃搅拌溶解，降温至室温，保温搅拌6小时，过滤，无水甲醇洗涤3次，50～60℃干燥，得曲克芦丁二次精制品821g，收率94.9％；含量98.9％。

实施例3曲克芦丁注射液的制备

采用实施例1制备的曲克芦丁化合物原料，制备曲克芦丁注射液，规格为2ml:100mg。

处方：(按1000支投料量计算)

制备过程：

1.配料：在配料罐中加入2/3总配量的注射用水，将曲克芦丁溶于注射用水中。另取少量注射用水，将依地酸二钠溶解，加入上述溶液中；加入药用炭(2g/2000ml)，加热搅拌溶解，补加注射用水至全量，充分搅拌至药液均匀，药液检验合格后，过滤，灌封。

2.灌装、充氮、封口并按要求检查装量。

3.灭菌、捡漏。

对比例1曲克芦丁化合物的制备

按照背景技术中提及的已有的制备方法路线(一)制备曲克芦丁。

于75℃下，将2.01Kg芦丁、2.0Kg水、1.64g氢氧化钠加入到反应釜中，通入氮气驱除氧气；然后通入环氧乙烷，监控溶液pH值，当反应液pH值为9.1时，降低反应温度至60℃，加入树脂200g，继续反应至反应液pH值为10.0时，停止加入环氧乙烷。加入1∶1盐酸水溶液调节溶液pH值约4.5，热过滤，浓缩，真空干燥，得2.41Kg曲克芦丁，其中HPLC检测3’，4’，7-三羟乙基芦丁含量为89.3％。

对比例2曲克芦丁注射液的制备

采用对比例1制备的曲克芦丁化合物原料，制备曲克芦丁注射液，规格为2ml:100mg。

处方：(按1000支投料量计算)

制备过程：

1.配料：在配料罐中加入2/3总配量的注射用水，将曲克芦丁溶于注射用水中。另取少量注射用水，将依地酸二钠溶解，加入上述溶液中；加入药用炭(2g/2000ml)，加热搅拌溶解，补加注射用水至全量，充分搅拌至药液均匀，药液检验合格后，过滤，灌封。

2.灌装、充氮、封口并按要求检查装量。

3.灭菌、捡漏。

对比例3曲克芦丁化合物的制备

根据专利CN106892950A的制备方法，但制备参数有所不同。

(1)2.5Kg(63mol)氢氧化钠加入350L蒸馏水中，搅拌溶解，再加入20.0Kg(33mol)的粗品芦丁，加热至40℃搅拌至溶解，反应3小时，加入800g活性炭，趁热抽滤，得到澄清的滤液。将该滤液用盐酸调节pH至3.0。缓慢降温至室温，降温时间控制在1h，室温下静置1小时，抽滤，滤饼用50L水淋洗，收率82.7％，纯度90.1％。

(2)取(1)中所得的2.1Kg芦丁和112g天然高分子海藻酸钠加入到8.5Kg无水甲醇中，再通入850g环氧乙烷，密封高压釜，开始加热及搅拌，加热至50℃后，保温反应3h，HPLC检测三羟乙基芦丁比例达88％时，迅速降温，终止反应，用盐酸调节反应液pH值至3，静置析晶8h后，抽滤、干燥，得到晶体1.0Kg，收率47.6％。

(3)向(2)中所得的晶体0.9Kg加入18L无水甲醇，加热至完全溶解，回流温度：60℃、回流：30分钟，加入针用活性炭30g，趁热抽滤，将滤液降至28℃养晶7小时。抽滤、干燥，得到曲克芦丁0.66Kg，收率73.3％，总收率31.4％，含量72.5％。

对比例4曲克芦丁注射液的制备

采用对比例3制备的曲克芦丁化合物原料，制备曲克芦丁注射液，规格为2ml:100mg。

处方：(按1000支投料量计算)

制备过程：

1.配料：在配料罐中加入2/3总配量的注射用水，将曲克芦丁溶于注射用水中。另取少量注射用水，将依地酸二钠溶解，加入上述溶液中；加入药用炭(2g/2000ml)，加热搅拌溶解，补加注射用水至全量，充分搅拌至药液均匀，药液检验合格后，过滤，灌封。

2.灌装、充氮、封口并按要求检查装量。

3.灭菌、捡漏。

试验例1纯度检测

本发明人对本发明实施例1和对比例1、对比例3进行了纯度检测。

纯度检测结果：

实施例	纯度(％)
		实施例1	99.2
对比例1	89.3
		对比例3	72.5

结论：本发明制备的曲克芦丁化合物纯度明显高于对比例制备的曲克芦丁，说明了杂质含量远远低于同类产品。

试验例2稳定性试验

本发明人对本发明实施例3和对比例2、对比例4所制备的曲克芦丁注射液进行了加速稳定性考察试验。考察条件为温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％。放置6个月，分别于0、1、2、3、6月末取样。考察指标为性状、澄清度与溶液颜色、pH值、有关物质、可见异物及含量。

结论：由上述结果可知，通过6个月加速试验，本发明实施例3制备的样品各项检测指标明显优于对比例2、对比例4制备的产品，充分说明了本发明采用在线过程控制技术制备的曲克芦丁化合物制剂稳定性更好，质量优于同类产品。

试验例3溶剂残留

本发明人对本发明实施例1和对比例1、对比例3中的溶剂残留进行检查。

实施例	环氧乙烷	甲醇
			实施例1	1ppm	未检出
对比例1	4ppm	未检出
			对比例3	6ppm	未检出

结论：本发明实施例1制备的曲克芦丁化合物中的溶剂残留低于对比例1、对比例3中的溶剂残留。

试验例4选区电子衍射分析

通过对本发明实施例1的化合物进行选区电子衍射分析，低倍形貌给出规则的晶体外形，衍射点斑点规则排列，判定为单晶，说明本产品晶型唯一。

具体参见说明书附图2。