一种以滇橄榄鲜果果肉为主原料的美白淡斑复方制剂及其制备方法
阅读说明：本技术 一种以滇橄榄鲜果果肉为主原料的美白淡斑复方制剂及其制备方法 (Whitening and spot-fading compound preparation taking fresh fructus phyllanthi pulp as main raw material and preparation method thereof ) 是由 李玉叶 王睿睿 于 2021-08-11 设计创作，主要内容包括：提供了一种以滇橄榄鲜果果肉为主原料的美白淡斑的复方制剂及其制备方法,其主要活性成分由滇橄榄鲜果果肉浆和青刺果油组成。本发明提供的复方制剂以新鲜滇橄榄鲜果果肉浆为主要原料,可以有效地抑制酪氨酸酶的活性,从而抑制黑色素的形成,使其可以改善肌肤暗沉、提亮肤色,能够改善肤质、滋养肌肤。本发明可应用于色素性疾病,如：黄褐斑、黑变病、炎症后色素沉着、脂溢性角化症,黑棘皮病、雀斑、晒斑等。还可应用于日常美白护肤、日晒后皮肤发黑等。本发明提供的复方制剂成分天然健康、质地温和安全,且制备方法简单易操作,适合应用于大规模生产。(A compound preparation for whitening and removing speckle is prepared from pulp of fresh fructus Phyllanthi and Prinsepia utilis Royle oil as main active ingredients. The compound preparation provided by the invention takes the fresh fructus phyllanthi pulp as the main raw material, and can effectively inhibit the activity of tyrosinase, thereby inhibiting the formation of melanin, improving the skin darkness and brightening the skin color, improving the skin quality and nourishing the skin. The invention can be applied to pigmentary diseases, such as: chloasma, melanosis, pigmentation after inflammation, seborrheic keratosis, acanthosis nigricans, freckle, sunburn and the like. It can also be used for daily whitening and skin care, and blackening skin after sun exposure. The compound preparation provided by the invention has natural and healthy components, mild and safe texture, and the preparation method is simple and easy to operate, and is suitable for large-scale production.)
技术领域
本发明涉及美白淡斑护肤技术领域，特别涉及一种以滇橄榄鲜果果肉为主原料的复方制剂及其制备方法。
背景技术
随着化妆品市场的快速发展以及人们物质生活水平的提高，人们对美的追求也越来越强烈，化妆品已成为国民日常消费品。在化妆品市场中，护肤品所占比例最大，尤其是美白类产品。然而一些美白类化妆品存在着激素、铅、汞含量过高等安全隐患，甚至可能对皮肤造成更加严重的伤害。氢醌、曲酸等美白淡斑药品，因细胞毒性、致癌性、局部刺激反应、见光遇热易分解等问题，禁用于护肤品。本专利所保护的复方制剂，具有营养健康、温和安全、对皮肤无刺激，具有广阔的消费者市场，其开发潜力必然是很大的。
皮肤颜色主要由皮肤中黑色素的含量决定的，而酪氨酸酶是合成黑色素的主要酶，在合成过程的多个反应步骤中起关键作用。研究表明抑制酪氨酸酶的活性可以减少黑色素的生成，从而起到美白的功效。因此，本发明重点将植物原浆添加到其中，在给予皮肤长效保湿的同时，还可以抑制酪氨酸酶的活性，起到美白淡斑、抗氧化、延缓衰老等作用。
滇橄榄又名余甘子，是大戟科植物余甘子的成熟果实，为我国药食同源目录品种，云南省为主产区。新鲜果实富含酚类、生物碱类、萜类、甾醇和苷类、以及维生素、氨基酸和不饱和脂肪酸等功能活性成分，其中维生素C和超氧化物歧化酶SOD的含量和活性较高。由于维生素C、超氧化物歧化酶SOD、氨基酸等成分在晒干储存过程中易分解氧化，因此滇橄榄鲜果与干品相比，上述有效成分保存较好。市面上含有滇橄榄的护肤品均采用添加滇橄榄提取物的方法，进一步破坏了其丰富的营养物质和活性成分，且成分比较单一，提取工艺也比较复杂，在一定程度上降低了滇橄榄产品的内在品质和功能。本发明以滇橄榄鲜果果肉为主原料的美白淡斑复方制剂，不仅仅是只体现了单一提取物的营养价值，而是充分体现了其整体价值，最大限度地保留了滇橄榄中对皮肤有显著功效的天然维生素C、超氧化物歧化酶SOD、氨基酸等成分。
青刺果别名梅花刺果，打油果。为蔷薇科植物扁核木(梅花刺)Prinse piautilisRoyle的果实。主产于云南、贵州、四川、西藏。夏季采摘成熟果实，去净果肉，晾干。味苦、酸，性温。功效健脾养胃，驻颜润肤，祛风去翳。
发明内容
本发明的目的是提供一种以滇橄榄鲜果果肉为主原料的复方制剂及其制备方法，使其具有美白淡斑、抗氧化、延缓衰老等多重功效，且天然安全、无刺激性。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种以滇橄榄鲜果果肉为主原料的复方制剂，以重量计，包括以下组分：滇橄榄鲜果果肉浆5-8份，青刺果油0.5-1份以及辅料。
一种以滇橄榄鲜果果肉为主原料的复方制剂，以重量百分比计，包括以下组分：滇橄榄鲜果果肉浆50％-80％，青刺果油5％-10％，透明质酸钠0.1％-0.3％，甘油1％-4％，十六醇1％-2％，十八醇1％-2％，羊毛脂0.5％-1％，硬脂酸0.5％-2％，丁二醇2％-4％，1,2-戊二醇3％-5％，单硬脂酸甘油酯1％-2％，泊洛沙姆1881％-2％，聚二甲基硅氧烷1％-2％，黄原胶0.1％-0.5％，苯氧乙醇0.3％-1％，三乙醇胺0.05％-0.1％，上述各组分的总和为100％。
所述的滇橄榄鲜果果肉浆的制备方法如下：
取滇橄榄鲜果破碎得果肉，取果肉加入水，于破壁打浆机中打浆、过筛，即得。
作为优选，所述的滇橄榄鲜果果肉浆的制备方法如下：
取滇橄榄鲜果洗净、去核，碎成小块；取处理好的滇橄榄鲜果果肉150-250g，按1：1～1.5的料液比，加入20-30℃水，于破壁打浆机中进行打浆3-8min；用600目筛过滤，即得滇橄榄鲜果果肉浆。
本发明所述的一种以滇橄榄鲜果果肉为主原料的复方制剂及其制备方法，包括以下步骤：
(1)取青刺果油、十六醇、十八醇、硬脂酸、羊毛脂、单硬脂酸甘油酯、泊洛沙姆188、聚二甲基硅氧烷加入油相锅中，加热至70-75℃，搅拌均匀，持续0.5-1h；
(2)甘油、丁二醇、1,2-戊二醇、黄原胶、透明质酸钠、滇橄榄鲜果果肉浆加入水相锅中，加热至70-75℃，搅拌均匀，使其充分熔化混合；
(3)在搅拌状态下，将油相缓慢加入水相中，转速为400-500r/min，乳化时间为10-20min，乳化温度为65-75℃；
(4)将上述乳液降温至40℃时，加入三乙醇胺、苯氧乙醇，搅拌3-5min；
(5)利用高压均质机均质，均质压力为200bar-500bar，均质频率为20kHz，均质1-2次；
(6)陈化、灌装、包装。
一种以滇橄榄鲜果果肉为主原料的复方制剂，具有抑制酪氨酸酶的活性。
一种以滇橄榄鲜果果肉为主原料的复方制剂，具有对皮肤长效保湿的作用。
一种以滇橄榄鲜果果肉为主原料的复方制剂，具有对美白淡斑、抗氧化、延缓衰老的作用，可用于黄褐斑、黑变病、炎症后色素沉着、脂溢性角化症，黑棘皮病、雀斑、晒斑等色素增加性疾病。
一种以滇橄榄鲜果果肉为主原料的复方制剂，具有与防晒乳联合美白增效的作用，可用于日常美白护肤、日晒后皮肤发黑等。
一种滇橄榄鲜果果肉浆，具有与青刺果油联合美白增效的作用。
滇橄榄又名余甘子，是大戟科植物余甘子的成熟果实，富含超氧化物歧化酶SOD、没食子酸、柯里拉京、诃子鞣质、鞣花酸以及维生素C、维生素B、维生素E等多种维生素、微量元素、氨基酸和不饱和脂肪酸等功能活性成分，其中维生素C和超氧化物歧化酶SOD的含量和活性较高。滇橄榄可以有效地清除体内自由基，延缓皮肤衰老，增强皮肤的保湿能力，改善皮肤松弛和皱纹，防止色斑形成。
青刺果油是云南特有的高级纯天然营养植物油，含有丰富的不饱和脂肪酸，并含有维生素A、维生素D、维生素E和维生素K等多种维生素，还含有非常丰富的钙、硫、锰、镁、钾、磷、锌和铁等常量及微量元素。青刺果油具有极强的皮肤渗透能力，可以使皮肤再生修复，还具有极强的保湿作用。
与现有技术相比，本发明具有如下优势：
本发明直接添加滇橄榄鲜果果肉浆，最大限度地保留了滇橄榄的营养物质和有效成分，与添加滇橄榄干果提取物相比，效果更佳。
本发明的主要有效成分为纯天然植物，温和安全，无刺激性，不仅可以改善肤质、滋养肌肤，同时可以美白淡斑、抗氧化、延缓衰老。
本发明利用了云南省当地的特色中药资源，把自然资源的潜在优势转化成了产业经济优势，提高了云南中药资源的经济利益和综合利用率。且本发明制备工艺简单，适用于规模化、工业化生产。
附图说明
图1：对照品维生素C含量色谱图
图2：样品维生素C含量色谱图
图3：混合对照品溶液(A)滇橄榄乳液供试品溶液(B)的UPLC图谱1.没食子酸2.柯里拉京3.诃子鞣质4.鞣花酸
图4：4种酚酸类成分对DPPH自由基的清除率
从左到右依次为：没食子酸0.54，没食子酸0.27，没食子酸0.135，柯里拉京0.72，柯里拉京0.36，柯里拉京0.18，诃子鞣质0.8，诃子鞣质0.4，诃子鞣质0.2，糅花酸0.72，糅花酸0.36，糅花酸0.18
图5：样品对活性氧ROS的抑制作用
图6：乳液对人体皮肤感官作用
图7：乳液对人体皮肤弹性的作用
图8：乳液对人体皮肤油分的作用
图9：乳液对人体皮肤水分的作用
图10：VISIA检测产品使用效果图
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做出进一步的详细说明，但是不构成对本发明的任何限制，任何人在本发明权利要求范围内所做的有限次修改，仍在本发明的权利要求保护范围内。
实施例1：
一种以滇橄榄鲜果果肉为主原料的护肤乳液及其制备方法，经过下列步骤：
(1)按下列质量百分比的原料备料：青刺果油10％，滇橄榄鲜果果肉浆70.7％，透明质酸钠0.2％，甘油4％，十六醇1％，十八醇1％，羊毛脂0.5％，硬脂酸0.5％，丁二醇3％，1,2-戊二醇4％，单硬脂酸甘油酯1.5％，聚二甲基硅氧烷1％，泊洛沙姆188 1.5％，黄原胶0.3％，三乙醇胺0.5％，苯氧乙醇0.3％；
(2)取青刺果油、十六醇、十八醇、硬脂酸、羊毛脂、聚二甲基硅氧烷、单硬脂酸甘油酯、泊洛沙姆188加入油相锅中，加热至70℃，搅拌均匀，使其充分熔化混合；
(3)甘油、丁二醇、黄原胶、透明质酸钠、滇橄榄鲜果果肉浆加入水相锅中，加热至70℃，搅拌均匀，使其充分熔化混合；
(4)在搅拌状态下，将油相缓慢加入水相中，转速为400r/min，乳化时间为10min，乳化温度为65～70℃；
(5)将上述乳液降温至40℃时，加入三乙醇胺、苯氧乙醇，搅拌5min；
(6)利用高压均质机均质，均质两次，第一次均质压力为200bar，均质频率为20kHz，第二次均质压力为400bar，频率为20kHz；
(7)陈化、灌装、包装。
所述的滇橄榄鲜果果肉浆的制备方法如下：
取新鲜滇橄榄洗净、去核，碎成小块；取处理好的滇橄榄鲜果果肉200g，按1：1的料液比，加入20℃水，于破壁打浆机中进行打浆5min；用600目筛过滤，即得滇橄榄鲜果果肉浆。
实施例2：
一种以滇橄榄鲜果果肉为主原料的护肤乳液及其制备方法，经过下列步骤：
(1)按下列质量百分比的原料备料：青刺果油8％，滇橄榄鲜果果肉浆70.7％，透明质酸钠0.3％，甘油4％，十六醇2％，十八醇2％，羊毛脂0.5％，硬脂酸0.5％，丁二醇3％，1,2-戊二醇4％，单硬脂酸甘油酯1.5％，聚二甲基硅氧烷1％，泊洛沙姆188 1.5％，黄原胶0.2％，三乙醇胺0.5％，苯氧乙醇0.3％；
(2)取青刺果油、十六醇、十八醇、硬脂酸、羊毛脂、聚二甲基硅氧烷、单硬脂酸甘油酯、泊洛沙姆188加入油相锅中，加热至70℃，搅拌均匀，使其充分熔化混合；
(3)甘油、丁二醇、黄原胶、透明质酸钠、滇橄榄鲜果果肉浆加入水相锅中，加热至70℃，搅拌均匀，使其充分熔化混合；
(4)在搅拌状态下，将油相缓慢加入水相中，转速为400r/min，乳化时间为10min，乳化温度为70℃；
(5)将上述乳液降温至40℃时，加入三乙醇胺、苯氧乙醇，搅拌5min；
(6)利用高压均质机均质，均质两次，第一次均质压力为200bar，均质频率为20kHz，第二次均质压力为400bar，频率为20kHz；
(7)陈化、灌装、包装。
所述的滇橄榄鲜果果肉浆的制备方法如下：
取滇橄榄鲜果洗净、去核，碎成小块；取处理好的滇橄榄鲜果果肉200g，按1：1.5的料液比，加入50℃水，于破壁打浆机中进行打浆5min；用9号筛过滤，即得滇橄榄新鲜原浆。
实施例3：
HPLC法测定乳液中维生素C的含量：
对照品溶液的制备：
精密称取维生素C对照品(北京中科质检生物有限公司)(50-81-7)(纯度≥98％)0.0041g，加入乙腈-水(2：1)的混合溶液定容至100mL容量瓶中。
对照品溶液浓度为：样品溶液的制备：
精密称取乳液2g，置于250mL锥形瓶中，精密加入乙腈-水(2：1)的混合溶液50mL，称定重量，超声30min，再称定重量，用乙腈-水(2：1)的混合溶液补足失重，摇匀，滤过，取续滤液。
测定方法：
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.01mol/L的磷酸二氢钾水溶液(80：20)为流动相；检测波长为246nm；流速为1.0mL/min。理论塔板数按维生素C峰计算，应不低于3000。
测定结果：
表1对照品及样品的保留时间、峰面积、称样量、浓度
保留时间
峰面积
称样量
浓度
对照品
2.118
862340
0.0041g
40.18(ug/mL)
20200326
2.116
3024470
2.0758g
132.55(ug/mL)
20200406
2.117
2027540
2.0008g
88.85(ug/mL)
20200512
2.116
2523480
2.0326g
110.59(ug/mL)
乳液样品维生素C含量：
20200326批号含量为3.32mg/g20200406批号含量为2.22mg/g202004512批号含量为2.77mg/g。
实施例4：
用氨基酸分析仪测定乳液中氨基酸的含量：
对照品溶液的制备：
精密移取40uL pH氨基酸对照品(和光纯药工业株式会社)(013-08391)溶液，转移至，用0.02mol/L盐酸溶液定容至10mL容量瓶中，摇匀。
样品溶液的制备：
精密称取乳液样品2.0g，置于250mL的具塞锥形瓶中，精密加入0.02mol/L的盐酸溶液50mL，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用0.02mol/L盐酸溶液补足失重，摇匀，滤过，取续滤液。
测定方法：
采用氨基酸自动分析仪LA 8080，离子交换色谱-茚三酮柱衍生法测定样品中氨基酸种类和含量。
三批样品(20200326、2020406、20200512)结果平均值如下：
表2滇橄榄乳液中氨基酸成分含量
实施例5：
1.滇橄榄鲜果乳液SOD的提取及活力测定
1.1滇橄榄鲜果乳液中SOD的提取
称取滇橄榄鲜果乳1g置于试管中，加入7mL蒸馏水摇匀、充分溶解，移入10ml离心管，用少量水冲洗乳钵，洗涤并加入离心管中，加水至刻度，于4000r/min离心15min，取上清液1ml定容至100ml。
1.2滇橄榄乳液SOD活力测定自氧化速率的测定:在10ml比色管中依次加入下表中的试剂，于25℃保温20min，然后加入预热的邻苯三酚(3mmol/l盐酸溶液配制，对照管用HCL代替)，迅速摇匀倒入1cm比色管中，分别测定在325nm下初始值和1min后的吸光值，二者之差即为邻苯三酚自氧化速率ODA，要求自氧化速率控制在0.07OD/min左右，控制酶液的量，使抑制邻苯三酚自氧化速率为1/2ODA，为ODB。
滇橄榄乳液单位酶活力计算SOD活性单位定义:在1mL反应液中，每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率达50％时的酶量定为一个活性单位。
表3测定自氧化速率的试剂用量表
SOD活力计算公式
式中：ODA一邻苯三酚的自氧化速率；ODB一样品光密度值变化速率；D一样品稀释倍数；v一测定样品体积，mL。
表4三批滇橄榄乳液中SOD的活力(u/g)
实施例6：
(一)滇橄榄乳液中4种酚酸类成分的含量测定
1.色谱条件
采用Agilent ZORBAX SB-Aq(C18 100mm×2.1mm，1.8μm)色谱柱；流动相：0.3％甲酸溶液(A)-乙腈：甲醇(1：5)(B)，梯度洗脱(0～4min，5％～10％A；4～8min，10％～20％A；8～9min，20％～25％A；9～21min，25％～50％A；21～24min，50％～50％A；24～25min，50％～5％A；25～26min，5％A。)，流速：0.2mL/min；检测波长：254nm；柱温：30℃；进样体积：1μL。在上述色谱条件下，待测成分没食子酸、柯里拉京、诃子鞣质和鞣花酸分离良好，无干扰。
2.供试品溶液的制备
精密称取滇橄榄乳液1g，置100mL三角瓶中，加入50％甲醇50mL，称重，超声60min，冷却后补足原重量，过滤，取续滤液，用0.22μm微孔滤膜过滤，制成供试品溶液。
3.对照品溶液的制备
精密称取没食子酸、柯里拉京、诃子鞣质对照品6.40mg、6.41mg、8.81mg分别置于10mL容量瓶中，各加50％甲醇溶解并稀释至刻度，用0.22μm微孔滤膜过滤后，作为没食子酸、柯里拉京和诃子鞣质对照品溶液；精密称取鞣花酸对照品11.81mg置于5mL容量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，用0.22μm微孔滤膜过滤后，作为鞣花酸对照品溶液。精密吸取各对照品溶液1mL混合，制成没食子酸、柯里拉京、诃子鞣质和鞣花酸的混合对照品溶液。
4.测定结果
如图3所示，在上述色谱条件下，待测成分没食子酸、柯里拉京、诃子鞣质和鞣花酸分离良好，无干扰。
表5不同批次滇橄榄乳液中4种酚酸类成分的含量(mg/g)
(二)滇橄榄乳液中4种酚酸类成分的抗氧化能力评价
4种酚酸类成分对DPPH自由基清除活性的测定
在试管中加入2mL 0.0399mg/mL的DPPH溶液和2mL甲醇，混匀，反应30min，在517nm处测定吸光度，计作D0，取2mL系列浓度的对照品溶液和2mL DPPH溶液，混匀，反应30min，在517nm处测定吸光度，计为Di；取2mL系列浓度的对照品溶液和2mL甲醇，混匀，反应30min，在517nm处测定吸光度，计为Dj，按照公式计算清除率：清除率(％)＝1-(Di-Dj)/D0，以此评价自由基清除能力。
DPPH标准曲线的绘制
根据吸光度和质量浓度绘制标准曲线，得线性回归方程为Y＝28.28X+0.033(r＝0.9995)，DPPH溶液在质量浓度为0.0066～0.0528mg/mL范围内线性关系良好。
1.4种酚酸类成分对DPPH自由基清除活性的测定
结果如图所示，滇橄榄中4种酚酸类成分均有较强的抗氧化能力，并且随着浓度的增加，对DPPH自由基清除能力也增强。在高浓度时，4种酚类化合物对DPPH自由基清除能力均大于70％。相比之下，诃子鞣质在低浓度时清除DPPH自由基能力相对较弱。
(三)对酪氨酸酶的抑制实验
实验方法：
将待测药物与左旋多巴(L-Dopa)混合，加入酪氨酸酶(终浓度25U/mL)开始反应，设定3个重复孔，同时设置不含药物的空白对照和曲酸(Kojic Acid)阳性对照，室温，5min，酶标仪测定OD值，检测波长为490nm。计算得到酪氨酸酶活性抑制率。
酪氨酸酶活性抑制率(％)＝〔1–样品OD490 nm/实验对照孔OD490 nm〕×100实验结果：如表6所示滇橄榄鲜果汁具有显著的抑制酪氨酸酶的活性，效果优于阳性对照曲酸，而滇橄榄干果配置的果汁的活性明显降低。
表6样品对酪氨酸酶的抑制作用
(四)对活性氧(ROS)抑制实验
实验方法：
参考T/SHRH 032-2020化妆品紧致、抗皱
功效测试-体外角质形成细胞活性氧(ROS)抑制测试方法，向细胞悬液中加入浓度为2mg/mL的荧光探针DCFH-DA至终浓度为40ug/mL，涡旋振荡均匀。于30℃恒温箱避光孵育30min。每隔3-5min颠倒混匀一次，使探针和细胞充分接触。离心收集细胞并用PBS洗三次，细胞重悬于PBS缓冲液中。每孔100μL，每个样本设置三个复孔。置于多功能酶标仪中，激发波长488nm，发射波长525nm，扫描时间0.5s，测定每孔的荧光强度。
实验结果：滇橄榄鲜果溶液具有明显的抑制活性氧作用，说明鲜果溶液具有清除活性氧的作用，滇橄榄鲜果中的主要成分柯里拉京和没食子酸也具有一定的抑制效果。
(五)对黑色素瘤细胞(B16)中黑色素生成的抑制作用
实验方法：
参考T/ZHCA 001-2018化妆品美白祛斑功效测试方法，用待测样品处理a-促黑色素细胞激素(a-MSH)诱导的B16黑色素瘤细胞72h，MTT法检测细胞增值活性，酶标法测定黑色素含量。
样品对黑色素瘤细胞增殖的抑制结果如表7：滇橄榄鲜果溶液、干果溶液等均对B16黑色素瘤细胞无明显的抑制作用表明滇橄榄鲜果与干果及主要成分对黑色素瘤细胞的增殖均无影响。
表7样品对黑色素瘤细胞增殖的抑制作用
样品(浓度)
黑色素瘤细胞存活率(％)
曲酸(10μg/mL)
90.54±3.54
滇橄榄鲜品(10％)
98.17±6.21
滇橄榄干品(10％)
92.37±8.39
柯里拉京(0.72μg/mL)
95.78±1.28
没食子酸(0.54μg/mL)
93.68±5.77
诃子鞣质(0.8μg/mL)
89.86±9.87
(六)对黑色素含量的抑制
如表8所示，滇橄榄鲜果溶液也具有明显的黑色素产生的作用，对黑色素的抑制率可达55.60％，优于阳性对照氨甲环酸对黑色素的抑制率49.39％；而同浓度的干果溶液抑制率则仅有11.92％；而鲜果的主要成分柯里拉京和没食子酸也具有微弱的抑制效果(分别为24.52％和12.65％)。综上，滇橄榄鲜果具有更好的抑制黑色素产生的活性。
表8样品对黑色素瘤细胞黑色素的抑制作用
(七)对人体皮肤检测实验
入选标准：
12名年龄在20-40岁的健康女性，左右皮肤对称，前臂内侧毛发少者。排除标准前臂有任何皮肤疾病或近3个月接受过任何皮肤美容治疗者；长期从事户外工作者；活动性过敏性疾病或其他系统性疾病者；近1个月内使用糖皮质激素或免疫抑制剂者；近3个月内参与其他临床试验者；妊娠或哺乳者。
实验条件：房间温度20℃～24℃，湿度40％～60％，自然光线，无阳光直射。受试者暴露前臂在温控室等候30min，使皮肤血流稳定。试验开始前12h内受试者待测皮肤表面不接触水，且不能涂抹任何化妆品和药物及其他赋形剂。实验方法：前臂内侧选择8个测试区域，左右各4个，依次编号，每个区域面积为3cm×3cm，各区域间间隔1cm。8个区域随机接受4种不同处理(各处理均有两个区域)。4种处理分别为:雅诗兰黛乳液，乳液1(鲜果配方)，乳液2(鲜果配方)，乳液3(干果配方)。受试品涂抹量均为(2.0±0.1)mg/cm2。化妆品涂抹采用橡胶指套，要求尽量涂抹均匀至吸收。使用皮肤水分测试仪(Real Bubee)依次各区域水分、油分、弹性值，涂抹前及涂抹化妆品后0.5h、1h、2h、6h、24h的水分、油分、弹性值。各区域重复测量3次，取均值。
感官评价：评估指标包括产品的香味、外观、铺展性、皮肤吸收速度、皮肤清爽感、光滑感、保湿感和刺激性等。每个指标依据其程度按1分(不喜欢)～5分(非常喜欢)来进行评估，通过在使用不同产品后的感受程度(评分差值)来比较产品的保湿程度，评估标准分别为：1＝不喜欢、2＝一般、3＝喜欢、4＝很喜欢、5＝非常喜欢。
结果：如图6所示由滇橄榄鲜果配方的乳液1和乳液2从保湿度，光滑感和清爽感均优于滇橄榄干果配方乳液3，如图7所示，保湿效果和皮肤光滑感鲜果配方的乳液1和乳液2与阳性对照雅诗兰黛乳液相似。如图8所示，对皮肤油分的影响，鲜果配方的乳液1和乳液2与阳性对照雅诗兰黛乳液相似，油分较低，而干果配方的乳液3可增加皮肤油脂分泌。如图9所示，对皮肤水分的影响，鲜果配方的乳液1和乳液2与阳性对照雅诗兰黛乳液相似，水分含量较高，而干果配方的乳液3皮肤水分含量最低，与图8的保湿效果相一致。可见鲜果配方的保湿效果明显优于干果配方。
(八)产品使用效果
应用VISIA皮肤检测仪进行图像分析可以评价化妆品的淡斑美白功效。VISIA皮肤检测仪通过1200万像素的相机拍照，分别用偏振光和紫外光作为光源，对人体面部进行全方位拍摄，并运用光学成像和软件进行图像分析，所得到的图像包括斑点、紫外线色斑、棕色斑、红色区等特殊图片。主要通过对化妆品使用前和使用后的面部图像进行直观比较，以及对图像软件处理得到的分值改变进行统计分析，来表征实施例1的乳液1的美白功效(表9)。治疗后面部对比照片如图10所示。
入选标准：年龄25-50岁的患雀斑、黄褐斑、脂溢性角化症和炎症后色素沉着的女性各30名。治疗周期为3个月，每日早晚使用乳液。
结果：乳液1对雀斑、黄褐斑、脂溢性角化症和色素沉着患者治疗有效，治疗前后斑点、紫外线色斑、棕色斑、红色区分值改变有统计学意义(P＜0.05)。对黑变病、晒斑等色素性皮肤病具有类似效果。不良反应观察：所有患者均无不良反应。
表9乳液1对雀斑、黄褐斑、脂溢性角化症和炎症后色素沉着患者的治疗效果
实施例7：
一种以滇橄榄鲜果果肉果浆与青刺果油具有协同作用的检测方法，实验方法如以上黑色素瘤B16细胞增殖抑制和黑色素生成抑制实验，从表10可见，滇橄榄鲜果果肉果浆与青刺果油具有非常好的协同作用，在2％和1％含量下与4％含量的青刺果油具有明显的协同抑制黑色素分泌的作用，联合指数CI值达到0.04，属于强协同作用。而滇橄榄干果溶液则没有显示出很好的协同作用。鲜果主要成分柯里拉京也有弱的协同作用，联合指数CI可达到0.3。阳性对照氨甲环酸没有显示出与青刺果油的协同作用。表明滇橄榄鲜果果肉果浆与青刺果油具有联合应用于色素性疾病治疗的潜力，如：黄褐斑、黑变病、炎症后色素沉着、脂溢性角化症、黑棘皮病、雀斑等。
表10与青刺果油的协同作用
注：当CI≤0.5时，两药的作用方式为协同；当0.5＜CI≤4时，两药的作用方式为无关；当CI＞4时，两药的作用方式为拮抗。
实施例8：
一种以滇橄榄鲜果果肉果浆与防晒乳具有协同作用的检测方法，研究对象：招募黄褐斑女性患者60例，年龄20～40岁，随机分为对照组和实验组，均为30例患者；两组患者在年龄、病程以及皮损等一般情况上经过统计学分析，差异不明显(P＞0.05)。排除标准：所有患者治疗前排除妊娠、敏感性皮肤等不适宜做治疗的情况。
方法：实验组患者每日使用乳液1和雅思兰黛防晒霜涂擦面部皮肤，每日2次，先涂乳液1干燥后即刻涂雅思兰黛防晒霜。对照组予雅思兰黛防晒霜涂擦面部皮肤每日2次，均使用3月。治疗前及3月治疗结束使用VISIA面部分析仪(美国Canfielid公司)进行面部检测分析。
结果：乳液1联合防晒乳组治疗黄褐斑疗效优于单独使用防晒乳组，P＜0.05，差异有统计学意义(表11)。不良反应观察：所有患者均无不良反应。健康人群也有类似疗效，可作为与防晒产品配合使用的美白产品。
与氢醌霜见光分解不能白天使用不同，乳液1有很好的稳定性，可白天使用，可与防晒乳同时使用，具有联合美白增效的独特效果。
表11乳液1联合防晒乳对黄褐斑患者的治疗效果
以上实施方式对本发明的权利要求做出进一步的详细说明，但是不构成对本发明的任何限制，任何人在本发明权利要求范围内所做的有限次修改，仍在本发明的权利要求保护范围内。
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：一种嫩肤养护化妆品及其制备方法