阅读说明：本技术 一种免疫细胞的冻存液及冻存方法 (Frozen stock solution and frozen stock method for immune cells ) 是由 赵辉 高萧芳 孙宪凯 段书娇 王艳琦 于 2021-08-27 设计创作，主要内容包括：本发明涉及免疫细胞的冻存液及冻存方法,尤其涉及本发明的一种免疫细胞的冻存液及冻存方法,包括FBS、DMSO、1640培养液、低分子肝素钙和抗氧化；一种免疫细胞的冻存液的冻存方法,包括以下步骤：步骤一、存放；把免疫细胞放入冷冻管中,然后加入冻存液,缓慢吹打混匀,把冷冻管放入降温室；步骤二、第一次降温；先降至3°且温度保持4min；然后以-2℃/min的速度降温至-3℃；最后以-11℃/min的速度降温至-40℃；步骤三、第一次升温先以-16℃/min的速度升温至-30℃；第四步、第二次降温；先以-30℃保持4min；然后以-2℃/min的速度降温至-50℃；最后先以-10℃/min的速度降温至-80℃；-80℃保持5d；第五步、存储；最后存入液氮罐中冻存。(The invention relates to a frozen stock solution and a frozen stock method of immune cells, in particular to a frozen stock solution and a frozen stock method of immune cells, which comprise FBS, DMSO, 1640 culture solution, low molecular heparin calcium and antioxidation; a cryopreservation method of immune cell cryopreservation liquid comprises the following steps: step one, storing; placing the immune cells into a freezing tube, then adding the freezing solution, slowly blowing and uniformly mixing, and placing the freezing tube into a cooling chamber; step two, cooling for the first time; firstly reducing the temperature to 3 ℃ and keeping the temperature for 4 min; then cooling to-3 ℃ at the speed of-2 ℃/min; finally, cooling to-40 ℃ at the speed of-11 ℃/min; step three, firstly heating up to-30 ℃ at the speed of-16 ℃/min for the first time; fourthly, cooling for the second time; keeping at-30 deg.C for 4 min; then cooling to-50 ℃ at the speed of-2 ℃/min; finally, the temperature is reduced to minus 80 ℃ at the speed of minus 10 ℃/min; -80 ℃ for 5 days; fifthly, storing; and finally storing the mixture in a liquid nitrogen tank for freezing.)

一种免疫细胞的冻存液及冻存方法

技术领域

本发明涉及苗药蕲艾艾灸条的制作，尤其涉及一种免疫细胞的冻存液及冻存方法。

背景技术

胞冻存是将细胞放在低温环境，减缓细胞代谢，以达到长期储存的一种技术。其原理是将细胞置于-196℃液氮中超低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将细胞特性保存起来，在需要的时候通过复苏细胞即可使用。细胞冻存时向细胞悬液中加入保护剂，可使溶液冰点降低，在缓慢冻结的条件下，细胞内水分渗透出细胞外，减少细胞内冰晶形成，从而避免细胞在冰冻过程中的损伤。目前，细胞冻存主要是采取-196℃液氮超低温条件下保存，细胞在超低温条件下，代谢功能停滞，细胞可长时间保存，当需要用细胞时，取出冻存的细胞在37℃水浴中快速解冻，即可恢复细胞的活性及功能。但是现有的免疫细胞冻存方法中，只解决了干细胞和肿瘤细胞的冻存，而免疫细胞冻存方法还未能很好地解决。由于免疫细胞的细胞结构和细胞特性，用以往的细胞冻存液及冻存方法冻存免疫细胞时，免疫细胞易受到冰晶损伤，复苏后细胞活率低，细胞增殖数量不足，细胞易老化，效率低下，冻存质量不高、细胞复苏后活性差以及成活率不高等问题。

发明内容

本发明提供一种免疫细胞的冻存液及冻存方法。

为了解决上述问题，本发明提供，一种免疫细胞的冻存液及冻存方法包括FBS、DMSO、1640培养液、低分子肝素钙和抗氧化。

本发明提供的一种免疫细胞的冻存液及冻存方法，还具有以下技术特征：

进一步，所述FBS的体积份数为10-20。更优选地FBS的体积份数为11、12、13、14、15、16、17、18、19。

进一步，所述DMSO 的体积份数为10-20。更优选地DMSO 的体积份数为11、12、13、14、15、16、17、18、19。

进一步，所述1640培养液的体积份数为40-60。更优选地1640培养液份数为41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59。

进一步，所述低分子肝素钙的体积份数为8-5。更优选地1640培养液的体积份数为7、6。

进一步，所述抗氧化剂的体积份数为2-5。更优选地抗氧化剂的体积份数为3、4。

进一步，所述抗氧化剂为维生素C注射液。

进一步，按照以下比例进行冻存液的配制：按照体积份数，FBS的体积份数为10-20份、DMSO 的体积份数为10-20份、1640培养液的体积份数为40-60份、浓度为1500-12000IU/ml的低分子肝素钙的体积份数为8-5份、维生素C注射液2-5份混合均匀，获得免疫细胞的冻存液。

进一步，一种免疫细胞的冻存液的冻存方法，包括以下步骤：

步骤一、存放

把免疫细胞放入冷冻管中，然后加入冻存液，缓慢吹打混匀，把冷冻管放入降温室；

步骤二、第一次降温

先降至3°且温度保持4min；

然后以-2℃/min的速度降温至-3℃；

最后以-11℃/min 的速度降温至-40℃；

步骤三、第一次升温

先以-16℃/min 的速度升温至-30℃；

第四步、第二次降温

先以-30℃保持4min；

然后以-2℃/min的速度降温至-50℃；

最后先以-10℃/min 的速度降温至-80℃；

-80℃保持5d；

第五步、存储

最后存入液氮罐中冻存。

本发明的有益效果是：本发明一种免疫细胞的冻存液及冻存方法配方简单，各个成分有各自的功能，并且相互配合、协同作用，可以明显提高免疫细胞冻存效果，保证细胞在接近冰点时细胞内水分不会结晶，保证复苏后细胞的活性和细胞增殖能力不受影响。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明的一种免疫细胞的冻存液成分占比分布图；

图2为本发明的一种免疫细胞的冻存液的冻存方法流程图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明的一种免疫细胞的冻存液及冻存方法，一种免疫细胞的冻存液及冻存方法，包括FBS、DMSO、1640培养液、低分子肝素钙和抗氧化剂。

所述FBS的体积份数为10-20。

所述DMSO 的体积份数为10-20。

所述1640培养液的体积份数为40-60。

所述低分子肝素钙的体积份数为8-5。

所述抗氧化剂的体积份数为2-5。

所述抗氧化剂为维生素C注射液。

按照以下比例进行冻存液的配制：按照体积份数，FBS的体积份数为10-20份、DMSO的体积份数为10-20份、1640培养液的体积份数为40-60份、浓度为1500-12000IU/ml的低分子肝素钙的体积份数为8-5份、维生素C注射液2-5份混合均匀，获得免疫细胞的冻存液。

一种免疫细胞的冻存液的冻存方法，包括以下步骤：

步骤一、存放

把免疫细胞放入冷冻管中，然后加入冻存液，缓慢吹打混匀，把冷冻管放入降温室；

步骤二、第一次降温

先降至3°且温度保持4min；

然后以-2℃/min的速度降温至-3℃；

最后以-11℃/min 的速度降温至-40℃；

步骤三、第一次升温

先以-16℃/min 的速度升温至-30℃；

第四步、第二次降温

先以-30℃保持4min；

然后以-2℃/min的速度降温至-50℃；

最后先以-10℃/min 的速度降温至-80℃；

-80℃保持5d；

第五步、存储

最后存入液氮罐中冻存。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。