一种用于酒精分解的芽孢菌选育方法
阅读说明：本技术 一种用于酒精分解的芽孢菌选育方法 (Method for breeding spore bacteria for alcohol decomposition ) 是由 韦柯柯 李胜 高文功 黄时海 于 2021-08-23 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种用于酒精分解的芽孢菌选育方法,方法包括以下步骤：S1、芽孢菌的液体菌种接种至选育装置内的培养基进行培育,接种量为6-10％；培养基包括以下重量份原料：玉米粉30-50g/L,葡萄糖5-8g/L,蛋白胨5-10g/L,龙爪果粉20-40g/L,葛根粉20-30g/L,硫酸镁0.1-0.2g/L,磷酸二氢钠0.3-0.8g/L,亚硫酸钠0.1-0.3g/L；S2、步骤S1中的芽孢菌的液体菌培养24-48h,温度为35-40℃,然后培养液加入到酒精样品中,进行解酒能力筛选；S3、步骤S2中的酒精样品经离心,取上层溶液,然后再次重复根据S1和S2的步骤进行操作,至选育出适合的芽孢菌。本发明通过先培育芽孢菌,再进行解酒能力筛选,逐步选育出具有较高解酒能力的菌种,操作高效快捷；使用的选育装置能在相同环境下进行不同酒精度的分解对比筛选,提高选育效率。(The invention discloses a method for breeding spore bacteria for alcohol decomposition, which comprises the following steps: s1, inoculating the liquid strains of the spore bacteria to a culture medium in a breeding device for cultivation, wherein the inoculation amount is 6-10%; the culture medium comprises the following raw materials in parts by weight: 30-50g/L corn flour, 5-8g/L glucose, 5-10g/L peptone, 20-40g/L dragon claw fruit powder, 20-30g/L kudzu root powder, 0.1-0.2g/L magnesium sulfate, 0.3-0.8g/L sodium dihydrogen phosphate and 0.1-0.3g/L sodium sulfite; s2, culturing the liquid bacteria of the spore bacteria in the step S1 for 24-48h at 35-40 ℃, adding the culture solution into an alcohol sample, and screening the alcohol effect dispelling capacity; s3, centrifuging the alcohol sample in the step S2, taking the upper solution, and repeating the steps according to S1 and S2 again until proper spore bacteria are bred. According to the method, the spore bacteria are cultivated firstly, and then the antialcoholism capability is screened, so that the strains with high antialcoholism capability are gradually bred, and the operation is efficient and rapid; the breeding device can perform decomposition contrast screening of different alcoholic strength under the same environment, and breeding efficiency is improved.)
技术领域
本发明属于微生物选育技术领域，具体涉及一种用于酒精分解的芽孢菌选育方法。
背景技术
酒的主要成分为酒精，过量饮酒、长期饮酒不仅对人体的健康造成危害，而且酒后驾车等行为亦会对社会公众安全造成威胁。现有的解酒产品主要为中草药材，价格相对较高，而且中草药材的成分相对复杂，难以广泛应用。因此，开发一种适用人群广的解救产品显得尤为重要。
芽孢菌是一种能形成芽孢(内生孢子)的杆菌或球菌，包括芽孢杆菌属、芽孢乳杆菌属、梭菌属、脱硫肠状菌属和芽孢八叠球菌属等。它们对外界有害因子抵抗力强，分布广，存在于土壤、水、空气以及动物肠道等处。经研究发现芽孢菌能分解酒精，因此，通过选育出解酒能力较强的菌种对于解酒产品的开发有积极作用。
发明内容
本发明提供了一种用于酒精分解的芽孢菌选育方法，以解决上述技术问题。
为了解决以上技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种用于酒精分解的芽孢菌选育方法，所述方法包括以下步骤：
S1、芽孢菌的液体菌种接种至选育装置内的培养基进行培育，接种量为6-10％；所述培养基包括以下重量份原料：玉米粉30-50g/L，葡萄糖5-8g/L，蛋白胨5-10g/L，龙爪果粉20-40g/L，葛根粉20-30g/L，硫酸镁0.1-0.2g/L，磷酸二氢钠0.3-0.8g/L，亚硫酸钠0.1-0.3g/L；
S2、步骤S1培养24-48h，温度为35-40℃，然后取适量培养液加入到酒精样品中，进行解酒能力筛选；
S3、步骤S2中的酒精样品经离心，取上层溶液，再次重复S1和S2的步骤进行操作，至选育出适合的芽孢菌。
进一步地，所述步骤S1的培养基pH7-7.3，所述芽孢菌为芽孢杆菌，接种时使用的芽孢菌活菌含量超过30-60亿/mL。
进一步地，所述步骤S2的芽孢菌培养液活菌含量超过500-700亿/mL。
进一步地，所述选育装置包括罐体，所述罐体上设置有盖体；所述罐体上设置有培养管组件，所述培养管组件包括第一培养管，所述第一培养管的一侧设置有第二培养管。设置的第一培养管装载培养基，用于菌体的培养，而第二培养管则用于装载酒精样品，用于对培养的菌体进行解酒能力筛选。
进一步地，所述第一培养管和所述第二培养管之间通过管道相连，所述管道上设置有单向电磁阀以使所述第一培养管内的培养液能流入到所述第二培养管内。设置的管道有利于将已经培养的含有芽孢菌的培养液转入到酒精样品中，进行解酒能力的筛选，操作快捷；设置的单向阀保证溶液只能从第一培养管流入到第二培养管中。
进一步地，所述罐体外侧设置有壳体，所述壳体内设置有转轴，所述转轴与所述罐体卡扣相连；所述转轴与设置于所述壳体外侧的所述转动装置相连；所述壳体外侧设置有排水管。设置的转动装置及转轴运行时能带动罐体进行转动，有利于培养基与菌种的充分接触，提高繁殖效率。壳体中可以加入水以对罐体进行水浴加热，使罐体内的温度符合菌种的生长繁殖。
进一步地，所述壳体3上设置有壳盖34用以将罐体3盖于所述壳体内部。所述壳体(3)内设置有支撑板35，所述支撑板35的顶部与所述罐体1相连，以使罐体1与壳体3之间不完全接触。
进一步地，所述培养管组件设置有若干组，所述第一培养管用于装载培养基以培养芽孢菌，所述第二培养管用于装载酒精样品以测试芽孢菌分解酒精的能力。第一培养管装载培养基用于芽孢菌，而第二培养管装载酒精样品,当第一培养管内的培养的菌种活菌量达到一定浓度时,经培养液加入酒精中进行酒精分解筛选，能提高操作效率，同时操作方便快捷。
进一步地，各组所述培养管组件中的所述第二培养管装载的酒精样品的酒精度为逐渐递增趋势，酒精样品使用时根据低浓度至高浓度的顺序进行使用。选育时将酒精样品设置为递增的浓度,能使芽孢菌逐渐适应,保证其存活率,以选育出高分解酒精的菌种。
本发明的优点是：1、通过先培育芽孢菌，再进行解酒能力筛选，逐步选育出具有较高解酒能力的菌种，操作高效快捷；2、本发明使用的选育装置能在相同环境下进行不同酒精度的分解对比筛选，提高选育效率，在选育过程中通过管道自动将菌液导入酒精样品中，避免人工处理带来的外界干扰，操作高效快捷。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明的结构示意图。
图2为罐体俯视图。
图3为培养管组件结构示意图。
附图标记：1-罐体，11-盖体，12-取样口，2-培养管组件，21-第一培养管，22-第二培养管，23-管道，24-单向电磁阀，3-壳体，31-转轴，32-转动装置，33-排水管，34-壳盖，35-支撑板。
具体实施方式
为便于更好地理解本发明，结合附图通过以下实例加以说明，这些实例属于本发明的保护范围，但不限制本发明的保护范围。
实施例1
一种用于酒精分解的芽孢菌选育方法，方法包括以下步骤：
S1、芽孢菌的液体菌种接种至选育装置内的培养基进行培育，接种量为6％；培养基包括以下重量份原料：玉米粉30g/L，葡萄糖5g/L，蛋白胨5g/L，龙爪果粉20g/L，葛根粉20g/L，硫酸镁0.1g/L，磷酸二氢钠0.3g/L，亚硫酸钠0.1g/L；
S2、步骤S1培养24h，温度为35℃，然后取适量培养液加入到酒精样品中，进行解酒能力筛选；
S3、步骤S2中的酒精样品经离心，取上层溶液，再次重复S1和S2的步骤进行操作，至选育出适合的芽孢菌。
步骤S1的培养基pH7，芽孢菌为芽孢杆菌，接种时使用的芽孢菌活菌含量超过30亿/mL。
步骤S2的芽孢菌培养液活菌含量超过500亿/mL。
如图1-3所示，选育装置包括罐体1，罐体1上设置有盖体11；罐体1上设置有培养管组件2，培养管组件2包括第一培养管21，第一培养管21的一侧设置有第二培养管22；盖体11上设置有取样口12，取样口12设置有若干个，并与第一培养管21、第二培养管22相对于，设置的取样口用于取样检测活菌数量以及菌种对酒精分接的情况。取样口12上设置有盖子，使用后用盖子盖住。
如图1-3所示，第一培养管21和第二培养管22之间通过管道23相连，管道23上设置有单向电磁阀24以使第一培养管21内的培养液能流入到第二培养管22内。
如图1所示，罐体1外侧设置有壳体3，壳体3内设置有转轴31，转轴31与罐体1卡扣相连；转轴31与设置于壳体3外侧的转动装置32相连；壳体3外侧设置有排水管33。
如图1所示，壳体3上设置有壳盖34用以将罐体3盖于壳体内部。壳体(3)内设置有支撑板35，支撑板35的顶部与罐体1相连，以使罐体1与壳体3之间不完全接触。
培养管组件2设置有若干组，第一培养管21用于装载培养基以培养芽孢菌，第二培养管22用于装载酒精样品以测试芽孢菌分解酒精的能力。
各组培养管组件2中的第二培养管22装载的酒精样品的酒精度为逐渐递增趋势，酒精样品使用时根据低浓度至高浓度的顺序进行使用。
选育装置的使用方法：使用前先将培养基、罐体等进行了灭菌处理，避免杂菌影响选育；打开壳盖，再打开盖体，将培养基加入到第一培养管中，再将芽孢菌的液体菌种接种到培养基上，酒精样品加入到第二培养管中，然后盖上盖体，再盖上盖壳，根据需要向壳体内加入适宜的热水进行水浴；培育过程中，启动转动装置使得罐体进行摆动，使得菌体与培养基充分接触，提高菌体繁殖效率；当第一培养管中的活菌量达到要求时，打开单向电磁阀，使第一培养管中的培养液进入到第二培养管中，进行解酒能力筛选；在培育过程中，可以通过取样口的取样进行培养液中的菌种数量检测以及菌种的解酒能力检测。
实施例2
一种用于酒精分解的芽孢菌选育方法，方法包括以下步骤：
S1、芽孢菌的液体菌种接种至选育装置内的培养基进行培育，接种量为8％；培养基包括以下重量份原料：玉米粉40g/L，葡萄糖6g/L，蛋白胨7g/L，龙爪果粉30g/L，葛根粉25g/L，硫酸镁0.1g/L，磷酸二氢钠0.5g/L，亚硫酸钠0.2g/L；
S2、步骤S1培养35h，温度为38℃，然后取适量培养液加入到酒精样品中，进行解酒能力筛选。
S3、步骤S2中的酒精样品经离心，取上层溶液，再次重复S1和S2的步骤进行操作，至选育出适合的芽孢菌。
步骤S1的培养基pH7.2，芽孢菌为芽孢杆菌，接种时使用的芽孢菌活菌含量超过50亿/mL。
步骤S2的芽孢菌培养液活菌含量超过600亿/mL。
实施例3
一种用于酒精分解的芽孢菌选育方法，方法包括以下步骤：
S1、芽孢菌的液体菌种接种至选育装置内的培养基进行培育，接种量为10％；培养基包括以下重量份原料：玉米粉50g/L，葡萄糖8g/L，蛋白胨10g/L，龙爪果粉40g/L，葛根粉30g/L，硫酸镁0.2g/L，磷酸二氢钠0.8g/L，亚硫酸钠0.3g/L；
S2、步骤S1培养48h，温度为40℃，然后取适量培养液加入到酒精样品中，进行解酒能力筛选。
S3、步骤S2中的酒精样品经离心，取上层溶液，再次重复S1和S2的步骤进行操作，至选育出适合的芽孢菌。
步骤S1的培养基pH7.3，芽孢菌为芽孢杆菌，接种时使用的芽孢菌活菌含量超过60亿/mL。
步骤S2的芽孢菌培养液活菌含量超过700亿/mL。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个......限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素”。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
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