一种冷冻载杆及其操作方法
阅读说明：本技术 一种冷冻载杆及其操作方法 (Freezing carrying rod and operation method thereof ) 是由 云新 于 2021-08-17 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种冷冻载杆,包括胚胎装载区、冷冻滴液区和解冻移胚胎区,胚胎装载区两侧分别与冷冻滴液区和解冻移胚胎区连通,胚胎装载区处于最低位；其操作方法包括将胚胎同培养液一起转移至胚胎装载区内；移除多余的培养液；将平衡液滴加至冷冻滴液区内；使胚胎在平衡液中静置T1分钟；移除平衡液；将冷冻保护剂滴加至冷冻滴液区内；使胚胎在冷冻保护剂中静置T2分钟；移除冷冻保护剂；将冷冻载杆浸没至液氮中。在使用本冷冻载杆进行操作时,只需要对胚胎进行一次转移操作,相较于现有冷冻操作中使用到的冷冻载杆,减少了胚胎转移次数,降低了可能因转移对胚胎造成的损伤。而且,由于只需对胚胎进行一次转移操作,所以有利于操作的自动化设计。(The invention discloses a freezing carrying rod which comprises an embryo loading area, a freezing dropping area and an unfreezing embryo-moving area, wherein two sides of the embryo loading area are respectively communicated with the freezing dropping area and the unfreezing embryo-moving area, and the embryo loading area is positioned at the lowest position; the operation method comprises transferring the embryo together with culture solution into embryo loading region; removing excess culture medium; dropwise adding the balance liquid into the freezing dropping liquid area; allowing the embryos to stand in equilibration solution for T1 minutes; removing the balance liquid; dripping the cryoprotectant into the freezing dripping area; allowing the embryos to sit in cryoprotectant for T2 minutes; removing the cryoprotectant; the freezing bar was immersed in liquid nitrogen. When the freezing carrying rod is used for operation, only one-time transfer operation is needed to be carried out on embryos, and compared with the freezing carrying rod used in the existing freezing operation, the freezing carrying rod reduces the embryo transfer times and reduces the damage possibly caused to the embryos due to transfer. Moreover, because only one transfer operation is needed for the embryo, the automatic design of the operation is facilitated.)
技术领域
本发明涉及胚胎培养技术领域，具体为一种冷冻载杆及其操作方法。
背景技术
对不孕症患者进行辅助生殖的疗程中，一般会借助促排卵药物的刺激来增加成熟卵子数，往往可使卵巢一次生长数量较多的卵子。但实际上在一次疗程中，只有1-3个胚胎移植回人体子宫腔。因为植入过多的胚胎可能增加多胞胎的危险性，剩余的胚胎可进行冷冻保存。胚胎冷冻保存是一种成熟的保存生育功能的方法。这种技术是使用平衡液、冷冻保护剂按照操作步骤对胚胎进行冷冻前的处理，使冷冻保护剂逐渐渗透入胚胎的细胞中，使胚胎能够承受即将出现的温度急剧降低的过程而不受到损伤，经过一系列的操作程序后，胚胎可达到合适冷冻的状态，即可将它们放置在-196℃的液氮环境中进行长时间的保存。如果在治疗的周期没有成功，保存的胚胎可以在以后的复苏后再移植回母体，不必再进行超排卵治疗过程，即可节省不少费用，也将增加患者的受孕的机会。
目前，在辅助生殖领域，胚胎培养过程中，使用传统的胚胎玻璃化冷冻方法较为普遍，操作流程一般为：
S1准备好平衡液和培养皿；
S2在培养皿中准备平衡液滴；
S3使用巴斯德管，将胚胎转移至平衡液滴中；
S4让胚胎在平衡液中静置5分钟；
S5在培养皿中准备冷冻保护剂滴；
S6使用巴斯德管，将胚胎转移至冷冻保护剂滴中；
S7让胚胎在冷冻保护剂中静置1分钟；
S8使用巴斯德管，将胚胎转移至冷冻载杆前端；
S9将冷冻载杆前端快速浸没至液氮中。
这种胚胎玻璃化冷冻操作流程在实际操作过程中，存在以下问题：
由于在操作过程中需要使用巴斯德管对胚胎进行多次转移，操作步骤复杂，可能对胚胎造成一定程度的损伤或胚胎丢失，从而影响胚胎的培养和辅助生殖的治疗效果。另外需要培养皿和冷冻载杆两个耗材才能完成一个冷冻过程。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种冷冻载杆及其操作方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种冷冻载杆，包括胚胎装载区、冷冻滴液区和解冻移胚胎区，所述胚胎装载区的两侧分别与所述冷冻滴液区和所述解冻移胚胎区连通，所述胚胎装载区处于最低位。通过设计三个容纳区，其中，胚胎装载区设计在最低位，其用于放置胚胎和定位胚胎，防止冷冻过程中，液体的流动，带动胚胎移动；冷冻滴液区用于平衡液和冷冻保护剂的滴加和移除，同时确保在移除时，胚胎装载区内残留更少的液体；解冻移胚胎区用于在解冻时，胚胎能更容易脱落，同时确保在冷冻过程中，胚胎装载区内残留更少的液体。
在上述方案中，所述胚胎装载区为向下的凹形结构或者倒锥形结构。
在上述方案中，所述胚胎装载区与所述冷冻滴液区相连的一侧为竖直面。通过将胚胎装载区与冷冻滴液区相连的一侧设计为竖直面，这样一方面能有效地防止胚胎在操作的过程中滑移到冷冻滴液区，从而保障了胚胎的安全；另一方面还能大大地减小胚胎装载区的容积，从而保障在液体移除时和胚胎冷冻前残留的液体尽可能的少。
在上述方案中，所述胚胎装载区与所述解冻移胚胎区相连的一侧为斜面或弧面。通过将胚胎装载区与解冻移胚胎区相连的一侧设计为斜面或弧面，这样一方面在解冻时，胚胎能更容易脱落，另一方面能使液体更容易流动，从而使胚胎装载区内残留更少的液体。
在上述方案中，所述胚胎装载区的容积为0.1-0.9ul。
在上述方案中，所述冷冻滴液区与所述胚胎装载区相连通的一侧为平面结构。使用时，冷冻滴液区的平面结构水平布置。通过将冷冻滴液区与胚胎装载区相连通的一侧设计为平面结构，这样方便了液体的滴加和移除。
在上述方案中，所述冷冻滴液区远离所述胚胎装载区的一侧为弧面结构。通过将冷冻滴液区远离胚胎装载区的一侧设计为弧面结构，这样能大大地增加滴液滴定管的操作空间，从而方便了操作。
在上述方案中，所述冷冻滴液区的平面结构与弧面结构的连接处为圆弧形。由于滴液滴定管的头部为圆形平面结构，所以通过将冷冻滴液区的平面结构与弧面结构的连接处设计为圆弧形，这样能更好地与滴液滴定管的头部接触，同时由于圆弧形的边角不易残留液体，所以便于液体的移除，而且圆弧形也有利于生产加工。
在上述方案中，所述冷冻滴液区的弧面结构远离所述胚胎装载区的一侧向外倾斜。通过将冷冻滴液区的弧面结构远离胚胎装载区的一侧设计成向外倾斜，这样能进一步地增加滴液滴定管的操作空间，从而方便了操作，同时也能防止操作时液体溢出。
在上述方案中，所述胚胎装载区的两侧分别与所述冷冻滴液区和所述解冻移胚胎区平滑过渡连接。通过将胚胎装载区与冷冻滴液区和解冻移胚胎区的连接处做平滑处理，这样一方面方便了液体的流动，使胚胎装载区内残留更少的液体；另一方面在解冻时，能使胚胎更容易脱落且不会对胚胎产生刮伤。
在上述方案中，所述解冻移胚胎区为弧面结构。通过将解冻移胚胎区设计为弧面结构，这样在解冻时，能进一步地使胚胎容易脱落，有利于胚胎快速的脱离冷冻载杆。
在上述方案中，所述解冻移胚胎区的最低高度大于或等于所述冷冻滴液区的平面结构的高度，所述冷冻滴液区的平面结构的高度大于或等于所述胚胎装载区的最高高度。通过将解冻移胚胎区的最低高度设计成大于或等于冷冻滴液区的平面结构的高度，并将冷冻滴液区的平面结构的高度设计成大于或等于胚胎装载区的最高高度，这样便于液体的移除，从而保障在胚胎冷冻前残留的液体尽可能的少。
在上述方案中，所述胚胎装载区的横向尺寸D1小于所述冷冻滴液区的横向尺寸D2，所述胚胎装载区的横向尺寸D1小于所述解冻移胚胎区的横向尺寸D3。通过胚胎装载区的横向尺寸D1设计得最小，这样能进一步地减小胚胎装载区的容积，从而进一步地保障在液体移除时和胚胎冷冻前残留的液体尽可能的少。
在上述方案中，所述解冻移胚胎区的横向尺寸D3小于所述冷冻滴液区的横向尺寸D2。通过将解冻移胚胎区的横向尺寸D3设计成小于冷冻滴液区的横向尺寸D2，这样方便将冷冻载杆快速浸没至液氮中。
在上述方案中，所述冷冻滴液区的外壁上设有操作手柄。
在上述方案中，所述冷冻滴液区的容积为8-14ul，所述解冻移胚胎区的容积为8-14ul。
一种冷冻载杆的操作方法，包括以下步骤，
S1将胚胎转移至胚胎装载区内；
S2移除多余的培养液；
S3将平衡液滴加至冷冻滴液区内，使平衡液淹没胚胎；
S4使胚胎在平衡液中静置T1分钟；
S5移除平衡液；
S6将冷冻保护剂滴加至冷冻滴液区内，使冷冻保护剂淹没胚胎；
S7使胚胎在冷冻保护剂中静置T2分钟；
S8移除冷冻保护剂；
S9将冷冻载杆浸没至液氮中。
在使用本冷冻载杆进行冷冻操作的过程中，只需要对胚胎进行一次转移操作，相较于现有冷冻操作中使用到的冷冻载杆，减少了胚胎转移次数，降低了可能因转移对胚胎造成的损伤。而且，由于只需对胚胎进行一次转移操作，所以有利于操作的自动化设计。
在上述方案中，所述胚胎在平衡液中静置5-10分钟，所述胚胎在冷冻保护剂中静置0.5-1.5分钟。
本发明提供了一种冷冻载杆及其操作方法。具备以下有益效果：
1、通过设计三个容纳区，其中，胚胎装载区设计在最低位，其用于放置胚胎和定位胚胎，防止冷冻过程中，液体的流动，带动胚胎移动；冷冻滴液区用于平衡液和冷冻保护剂的滴加和移除，同时确保在移除时，胚胎装载区内残留更少的液体；解冻移胚胎区用于在解冻时，胚胎能更容易脱落，同时确保在冷冻过程中，胚胎装载区内残留更少的液体；
2、通过将胚胎装载区与冷冻滴液区相连的一侧设计为竖直面，这样一方面能有效地防止胚胎在操作的过程中滑移到冷冻滴液区，从而保障了胚胎的安全；另一方面还能大大地减小胚胎装载区的容积，从而保障在液体移除时和胚胎冷冻前残留的液体尽可能的少；
3、通过将胚胎装载区与解冻移胚胎区相连的一侧设计为斜面或弧面，这样一方面在解冻时，胚胎能更容易脱落，另一方面能使液体更容易流动，从而使胚胎装载区内残留更少的液体；
4、使用时，冷冻滴液区的平面结构水平布置。通过将冷冻滴液区与胚胎装载区相连通的一侧设计为平面结构，这样方便了液体的滴加和移除；
5、通过将冷冻滴液区远离胚胎装载区的一侧设计为弧面结构，这样能大大地增加滴液滴定管的操作空间，从而方便了操作；
6、由于滴液滴定管的头部为圆形结构，所以通过将冷冻滴液区的平面结构与弧面结构的连接处设计为圆弧形，这样能更好地与滴液滴定管的头部适配，同时由于圆弧形的边角不易残留液体，所以便于液体的移除，而且圆弧形也有利于生产加工；
7、通过将冷冻滴液区的弧面结构远离胚胎装载区的一侧设计成向外倾斜，这样能进一步地增加滴液滴定管的操作空间，从而方便了操作，同时也能防止操作时液体溢出；
8、通过将胚胎装载区与冷冻滴液区和解冻移胚胎区的连接处做平滑处理，这样一方面方便了液体的流动，使胚胎装载区内残留更少的液体；另一方面在解冻时，能使胚胎更容易脱落且不会对胚胎产生刮伤；
9、通过将解冻移胚胎区设计为弧面结构，这样在解冻时，能进一步地使胚胎容易脱落，有利于胚胎快速的脱离冷冻载杆；
10、通过将解冻移胚胎区的最低高度设计成大于或等于冷冻滴液区的平面结构的高度，并将冷冻滴液区的平面结构的高度设计成大于或等于胚胎装载区的最高高度，这样便于液体的移除，从而保障在胚胎冷冻前残留的液体尽可能的少；
11、通过胚胎装载区的横向尺寸D1设计得最小，这样能进一步地减小胚胎装载区的容积，从而进一步地保障在液体移除时和胚胎冷冻前残留的液体尽可能的少；
12、通过将解冻移胚胎区的横向尺寸D3设计成小于冷冻滴液区的横向尺寸D2，这样方便将冷冻载杆快速浸没至液氮中；
13、在使用本冷冻载杆进行冷冻操作的过程中，只需要对胚胎进行一次转移操作，相较于现有冷冻操作中使用到的冷冻载杆，减少了胚胎转移次数，降低了可能因转移对胚胎造成的损伤，而且，由于只需对胚胎进行一次转移操作，所以有利于操作的自动化设计。
附图说明
图1为本冷冻载杆的结构示意图；
图2为图1的剖面结构示意图；
图3为图2的局部放大结构示意图；
图4为图1的局部放大结构示意图。
图中：胚胎装载区1，冷冻滴液区2，解冻移胚胎区3，操作手柄4。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
如图1-4所示，本发明提供一种技术方案：一种冷冻载杆，包括胚胎装载区1、冷冻滴液区2和解冻移胚胎区3，所述胚胎装载区1的两侧分别与所述冷冻滴液区2和所述解冻移胚胎区3连通，所述胚胎装载区1处于最低位。通过设计三个容纳区，其中，胚胎装载区1设计在最低位，其用于放置胚胎和定位胚胎，防止冷冻过程中，液体的流动，带动胚胎移动；冷冻滴液区2用于平衡液和冷冻保护剂的滴加和移除，同时确保在移除时，胚胎装载区1内残留更少的液体；解冻移胚胎区3用于在解冻时，胚胎能更容易脱落，同时确保在冷冻过程中，胚胎装载区1内残留更少的液体。
上述胚胎装载区1为向下的凹形结构或者倒锥形结构。所述胚胎装载区1与所述冷冻滴液区2相连的一侧为竖直面。通过将胚胎装载区1与冷冻滴液区2相连的一侧设计为竖直面，这样一方面能有效地防止胚胎在操作的过程中滑移到冷冻滴液区2，从而保障了胚胎的安全；另一方面还能大大地减小胚胎装载区1的容积，从而保障在液体移除时和胚胎冷冻前残留的液体尽可能的少。所述胚胎装载区1与所述解冻移胚胎区3相连的一侧为斜面或弧面。通过将胚胎装载区1与解冻移胚胎区3相连的一侧设计为斜面或弧面，这样一方面在解冻时，胚胎能更容易脱落，另一方面能使液体更容易流动，从而使胚胎装载区1内残留更少的液体。所述胚胎装载区1的容积为0.1-0.9ul。
上述冷冻滴液区2与所述胚胎装载区1相连通的一侧为平面结构。使用时，冷冻滴液区2的平面结构水平布置。通过将冷冻滴液区2与胚胎装载区1相连通的一侧设计为平面结构，这样方便了液体的滴加和移除。所述冷冻滴液区2远离所述胚胎装载区1的一侧为弧面结构。通过将冷冻滴液区2远离胚胎装载区1的一侧设计为弧面结构，这样能大大地增加滴液滴定管的操作空间，从而方便了操作。所述冷冻滴液区2的平面结构与弧面结构的连接处为圆弧形。由于滴液滴定管的头部为圆形结构，所以通过将冷冻滴液区2的平面结构与弧面结构的连接处设计为圆弧形，这样能更好地与滴液滴定管的头部适配，同时由于圆弧形的边角不易残留液体，所以便于液体的移除，而且圆弧形也有利于生产加工。所述冷冻滴液区2的弧面结构远离所述胚胎装载区1的一侧向外倾斜。通过将冷冻滴液区2的弧面结构远离胚胎装载区1的一侧设计成向外倾斜，这样能进一步地增加滴液滴定管的操作空间，从而方便了操作，同时也能防止操作时液体溢出。
上述胚胎装载区1的两侧分别与所述冷冻滴液区2和所述解冻移胚胎区3平滑过渡连接。通过将胚胎装载区1与冷冻滴液区2和解冻移胚胎区3的连接处做平滑处理，这样一方面方便了液体的流动，使胚胎装载区1内残留更少的液体；另一方面在解冻时，能使胚胎更容易脱落且不会对胚胎产生刮伤。所述解冻移胚胎区3为弧面结构。通过将解冻移胚胎区3设计为弧面结构，这样在解冻时，能进一步地使胚胎容易脱落，有利于胚胎快速的脱离冷冻载杆。
上述解冻移胚胎区3的最低高度大于或等于所述冷冻滴液区2的平面结构的高度，所述冷冻滴液区2的平面结构的高度大于或等于所述胚胎装载区1的最高高度。通过将解冻移胚胎区3的最低高度设计成大于或等于冷冻滴液区2的平面结构的高度，并将冷冻滴液区2的平面结构的高度设计成大于或等于胚胎装载区1的最高高度，这样便于液体的移除，从而保障在胚胎冷冻前残留的液体尽可能的少。
上述胚胎装载区1的横向尺寸D1小于所述冷冻滴液区2的横向尺寸D2，所述胚胎装载区1的横向尺寸D1小于所述解冻移胚胎区3的横向尺寸D3。通过胚胎装载区1的横向尺寸D1设计得最小，这样能进一步地减小胚胎装载区1的容积，从而进一步地保障在液体移除时和胚胎冷冻前残留的液体尽可能的少。所述解冻移胚胎区3的横向尺寸D3小于所述冷冻滴液区2的横向尺寸D2。通过将解冻移胚胎区3的横向尺寸D3设计成小于冷冻滴液区2的横向尺寸D2，这样方便将冷冻载杆快速浸没至液氮中。
上述冷冻滴液区2的外壁上设有操作手柄4。所述冷冻滴液区2的容积为8-14ul，所述解冻移胚胎区3的容积为8-14ul。
本实施例通过设计三个容纳区，其中，胚胎装载区1设计在最低位，其用于放置胚胎和定位胚胎，防止冷冻过程中，液体的流动，带动胚胎移动；冷冻滴液区2用于平衡液和冷冻保护剂的滴加和移除，同时确保在移除时，胚胎装载区1内残留更少的液体；解冻移胚胎区3用于在解冻时，胚胎能更容易脱落，同时确保在冷冻过程中，胚胎装载区1内残留更少的液体。
同时，本实施例通过将胚胎装载区1与冷冻滴液区2相连的一侧设计为竖直面，这样一方面能有效地防止胚胎在操作的过程中滑移到冷冻滴液区2，从而保障了胚胎的安全；另一方面还能大大地减小胚胎装载区1的容积，从而保障在液体移除时和胚胎冷冻前残留的液体尽可能的少；通过将胚胎装载区1与解冻移胚胎区3相连的一侧设计为斜面或弧面，这样一方面在解冻时，胚胎能更容易脱落，另一方面能使液体更容易流动，从而使胚胎装载区1内残留更少的液体；
而且，本实施例通过将冷冻滴液区2与胚胎装载区1相连通的一侧设计为平面结构，这样方便了液体的滴加和移除；通过将冷冻滴液区2远离胚胎装载区1的一侧设计为弧面结构，这样能大大地增加滴液滴定管的操作空间，从而方便了操作；由于滴液滴定管的头部为圆形结构，所以通过将冷冻滴液区2的平面结构与弧面结构的连接处设计为圆弧形，这样能更好地与滴液滴定管的头部适配，同时由于圆弧形的边角不易残留液体，所以便于液体的移除，而且圆弧形也有利于生产加工；通过将冷冻滴液区2的弧面结构远离胚胎装载区1的一侧设计成向外倾斜，这样能进一步地增加滴液滴定管的操作空间，从而方便了操作，同时也能防止操作时液体溢出。
另外，本实施例通过将胚胎装载区1与冷冻滴液区2和解冻移胚胎区3的连接处做平滑处理，这样一方面方便了液体的流动，使胚胎装载区1内残留更少的液体；另一方面在解冻时，能使胚胎更容易脱落且不会对胚胎产生刮伤；通过将解冻移胚胎区3设计为弧面结构，这样在解冻时，能进一步地使胚胎容易脱落，有利于胚胎快速的脱离冷冻载杆。
最后，本实施例通过将解冻移胚胎区3的最低高度设计成大于或等于冷冻滴液区2的平面结构的高度，并将冷冻滴液区2的平面结构的高度设计成大于或等于胚胎装载区1的最高高度，这样便于液体的移除，从而保障在胚胎冷冻前残留的液体尽可能的少；通过胚胎装载区1的横向尺寸D1设计得最小，这样能进一步地减小胚胎装载区1的容积，从而进一步地保障在液体移除时和胚胎冷冻前残留的液体尽可能的少；通过将解冻移胚胎区3的横向尺寸D3设计成小于冷冻滴液区2的横向尺寸D2，这样方便将冷冻载杆快速浸没至液氮中。
实施例2
如图1-4所示，本发明提供一种技术方案：一种冷冻载杆的操作方法，包括以下步骤，
S1将胚胎连同培养液一起转移至本冷冻载杆的冷冻滴液区2内；
S2使用巴斯德管移除多余的培养液；
S3使用巴斯德管吸取20ul的平衡液，滴加至冷冻滴液区2内，使平衡液能完全淹没胚胎；
S4使胚胎在平衡液中静置5分钟；
S5使用巴斯德管移除平衡液；
S6若有需要，可多次重复S3-S5；
S7使用巴斯德管吸取20ul的冷冻保护剂，滴加至冷冻滴液区2内，使冷冻保护剂能完全淹没胚胎；
S8使胚胎在冷冻保护剂中静置1分钟；
S9使用巴斯德管移除冷冻保护剂；
S10若有需要，可多次重复S6-S8；
S11将冷冻载杆快速浸没至液氮中。
从上述操作步骤可见，在使用本冷冻载杆进行冷冻操作的过程中，只需要对胚胎进行一次转移操作，相较于现有冷冻操作中使用到的冷冻载杆，减少了胚胎转移次数，降低了可能因转移对胚胎造成的损伤和胚胎丢失。而且，由于只需对胚胎进行一次转移操作，所以有利于操作的自动化设计。
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