一种高提取率的黄芪甲苷提取方法
阅读说明：本技术 一种高提取率的黄芪甲苷提取方法 (Method for extracting astragaloside with high extraction rate ) 是由 岳露凯 张元坤 于 2021-07-13 设计创作，主要内容包括：发明公开了一种高提取率的黄芪甲苷提取方法,包括如下步骤：将冷冻后的黄芪超微粉与碱性甲醇水溶液混匀,加压浸透,然后加水,减压提取得到提取液,纯化得到黄芪甲苷。本发明黄芪甲苷的提取率高,黄芪甲苷的纯度高。(The invention discloses a method for extracting astragaloside with high extraction rate, which comprises the following steps: mixing the frozen radix astragali superfine powder with alkaline methanol aqueous solution, pressurizing and soaking, adding water, extracting under reduced pressure to obtain extractive solution, and purifying to obtain astragaloside IV. The method has high extraction rate of the astragaloside and high purity of the astragaloside.)
技术领域
本发明涉及中药提取技术领域，尤其涉及一种高提取率的黄芪甲苷提取方法。
背景技术
黄芪是属于豆科黄芪属植物，其分类有蒙古黄芪和膜荚黄芪，主要在黑龙江、吉林、内蒙古等省区分布，被称为药中之上品。黄茂微温，性甘，脾经，归肺，有利于利尿托毒、补气固表、排脓、敛疮生肌。
黄芪中含有黄芪多糖、皂苷类(黄芪皂苷I-VIII)、黄酮类(山奈酚、鼠李柠檬素、棚皮素、黄酮苷等)、氨基酸类(天冬氨酸、刀豆氨酸、丙氨酸、脯氨酸、r-氨基丁酸、精氨酸等)及其他微量元素(铁、锰、锌等)。黄芪多糖和皂苷类是黄芪中的主要活性物质，黄芪皂苷(I-VIII)是黄芪中主要皂苷类物质。黄芪中黄芪甲苷的含量是药材质量控制的重要指标。黄芪甲苷有利于心脏正性肌力作用，也是降压重要有效成分之一。
黄芪甲苷是黄芪三萜皂苷中的黄芪皂苷IV，黄芪中含量黄芪甲苷极低，一般在0.04-0.14％，黄芪药材中成分较多，分离、提取非常困难。目前，黄芪甲苷的提取方法一般以水提法得到黄芪提取液，然后再通过正丁醇萃取法、大孔法吸附树脂等方法纯化分离皂苷单体，但该方法周期长、操作复杂，生产成本较高，且收率较低。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种高提取率的黄芪甲苷提取方法，本发明黄芪甲苷的提取率高，黄芪甲苷的纯度高。
本发明提出了一种高提取率的黄芪甲苷提取方法，包括如下步骤：将冷冻后的黄芪超微粉与碱性甲醇水溶液混匀，加压浸透，然后加水，减压提取得到提取液，纯化得到黄芪甲苷。
优选地，黄芪超微粉的粒径为300-400目。
优选地，冷冻温度≤-20℃，冷冻时间为8-12h。
优选地，碱性甲醇水溶液的温度为40-50℃。
优选地，碱性甲醇水溶液的pH＝10-11。
可以用氢氧化钠等物质调节pH。
优选地，碱性甲醇水溶液中，甲醇的体积分数为75-80％。
优选地，黄芪超微粉与碱性甲醇水溶液的重量体积(g/ml)比为1:3-5。
优选地，加压浸透的压力为11-13MPa。
优选地，加压浸透的时间为60-90min。
优选地，加压浸透的温度为40-50℃。
优选地，水的温度为70-80℃。
优选地，黄芪超微粉与水的重量比为1:10-12。
优选地，减压提取的压力为0.03-0.04MPa。
优选地，减压提取时间为20-25min。
优选地，减压提取1-3次。
优选地，纯化方法的具体步骤包括：用HPD300树脂柱洗脱提取液得到洗脱液，浓缩洗脱液得到黄芪甲苷粗品，重结晶得到黄芪甲苷。
优选地，用体积分数为68-72％的乙醇水溶液进行柱洗脱，乙醇水溶液的用量为4-5倍柱体积。
优选地，重结晶溶液为甲醇。
有益效果：
本发明将黄芪超微粉在低温下冷冻后，再与40-50℃的碱性甲醇水溶液混匀，黄芪中的纤维、细胞壁等经过温差极大的骤热处理，会发生断裂、破碎，然后再加压浸透，会使得细胞壁进一步破碎，促进碱性甲醇水溶液进入细胞内部，从而促进有效成分的提取，另外碱性环境浸透，可以促进黄芪皂苷I-II，脱乙酰基转变成黄芪甲苷，从而提高黄芪甲苷的含量；然后加入一定温度的水，立即减压使得溶液沸腾，从而提取获得黄芪甲苷；经之前的骤热和加压浸透处理，从破碎细胞中可以更加容易、也能更加完全的提取黄芪甲苷，从而提高其提取率；然后经HPD300树脂柱洗脱、重结晶获得高纯度的黄芪甲苷；且本发明提取用的碱性甲醇水溶液和水的用量较少，可以大幅减少柱洗脱时，溶剂的用量，缩短纯化时间，减少溶剂用量，从而节约成本。
具体实施方式
下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
以下实施例1-3和对比例1-2的黄芪粉是从同一厂家购买的同一批次的产品，其粒径为60目。
实施例1
一种高提取率的黄芪甲苷提取方法，包括如下步骤：
称取黄芪粉进行超微粉碎得到粒径为320目的黄芪超微粉，称取5g黄芪超微粉，置于-20℃冷冻10h，然后取出立即与pH＝10.5、温度为45℃、体积分数为77％甲醇水溶液20ml混匀，然后转移至反应釜，调节压力为12Mpa，于45℃浸透80min，然后加入温度为75℃的水，立即减压至0.03MPa提取2次(每次水用量均为55ml，每次减压提取的时间均为23min)，合并提取液；
用HPD300树脂柱洗脱(用体积分数为70％的乙醇水溶液进行柱洗脱，乙醇水溶液的用量为5倍柱体积)提取液得到洗脱液，然后减压浓缩洗脱液得到黄芪甲苷粗品，最后用甲醇重结晶得到黄芪甲苷。
实施例2
一种高提取率的黄芪甲苷提取方法，包括如下步骤：
称取黄芪粉进行超微粉碎得到粒径为300目的黄芪超微粉，称取5g黄芪超微粉，置于-20℃冷冻12h，然后取出立即与pH＝10、温度为50℃、体积分数为75％甲醇水溶液25ml混匀，然后转移至反应釜，调节压力为11Mpa，于50℃浸透60min，然后加入温度为80℃的水50ml，立即减压至0.04MPa提取1次，每次减压提取的时间均为25min，合并提取液；
用HPD300树脂柱洗脱(用体积分数为68％的乙醇水溶液进行柱洗脱，乙醇水溶液的用量为5倍柱体积)提取液得到洗脱液，然后减压浓缩洗脱液得到黄芪甲苷粗品，最后用甲醇重结晶得到黄芪甲苷。
实施例3
一种高提取率的黄芪甲苷提取方法，包括如下步骤：
称取黄芪粉进行超微粉碎得到粒径为400目的黄芪超微粉，称取5g黄芪超微粉，置于-20℃冷冻8h，然后取出立即与pH＝11、温度为40℃、体积分数为80％甲醇水溶液15ml混匀，然后转移至反应釜，调节压力为13Mpa，于40℃浸透90min，然后加入温度为70℃的水，立即减压至0.03MPa提取3次(每次水用量均为60ml，每次减压提取的时间均为20min)，合并提取液；
用HPD300树脂柱洗脱(用体积分数为72％的乙醇水溶液进行柱洗脱，乙醇水溶液的用量为4倍柱体积)提取液得到洗脱液，然后减压浓缩洗脱液得到黄芪甲苷粗品，最后用甲醇重结晶得到黄芪甲苷。
对比例1(水提法)
一种黄芪甲苷提取方法，包括如下步骤：
称取5g粒径为60目的黄芪粉末，加入水煎煮2次(每次用水55ml，每次煎煮时间为1.5h)，过滤得到提取液；
用HPD300树脂柱洗脱(用体积分数为70％的乙醇水溶液进行柱洗脱，乙醇水溶液的用量为5倍柱体积)提取液得到洗脱液，然后减压浓缩洗脱液得到黄芪甲苷粗品，最后用甲醇重结晶得到黄芪甲苷。
对比例2(减压内部提取法)
一种黄芪甲苷提取方法，包括如下步骤：
称取黄芪粉进行超微粉碎得到粒径为320目的黄芪超微粉，称取5g黄芪超微粉，与体积分数为77％甲醇水溶液20ml混匀浸透80min，然后转移至反应釜，然后加入温度为75℃的水，立即减压至0.03MPa提取2次(每次水用量均为55ml，每次减压提取的时间均为23min)，合并提取液；
称取5g粒径为60目的黄芪粉末，加入水煎煮2次(每次用水55ml，每次煎煮时间为1.5h)，过滤得到提取液；
用HPD300树脂柱洗脱(用体积分数为70％的乙醇水溶液进行柱洗脱，乙醇水溶液的用量为5倍柱体积)提取液得到洗脱液，然后减压浓缩洗脱液得到黄芪甲苷粗品，最后用甲醇重结晶得到黄芪甲苷。
实验
按照对照品外标法检测提取液中的黄芪甲苷含量，并检测最终获得的黄芪甲苷的纯度，计算提取液中黄芪甲苷的提取率和最终获得黄芪甲苷成品的收率。
检测方法为：
高效液相色谱仪(Agilent1200，美国)，蒸发光散射检测器ELSD(2000ES，美国，Alltech)，旋转蒸发仪(RE-52AA，上海)；
色谱柱：Agilent XDB-C18(150mm×4.6mm，5μm)，流动相：乙腈-水＝32:68(v/v)，流速＝1.0ml/min，柱温＝30℃，进样量＝5μL，ELSD参数：漂移管温度为105℃，N2流速为2.9mL/min。
检测结果如表1所示。
表1检测结果
由上表可以看出，本发明对黄芪甲苷提取率高，且制得的黄芪甲苷纯度高。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。