具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的技术方案。应理解，本发明提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容的情况下，当亦视为本发明可实施的范畴。

为了更好的理解上述技术方案，下面更详细地描述本发明的示例性实施例。虽然显示了本发明的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。

本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。

热稳定淀粉酶、木瓜蛋白酶、纤维素酶购买于美国Sigma公司；其余化学试剂均为分析纯。

下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。

实施例1

挑选新鲜紫菜和红毛藻将其洗净后分别放入烘箱，60℃下干燥至恒重。准确称取上述紫菜和红毛藻各5.0g，分别按料液比1:25(g/mL)加入蒸馏水，在水浴温度50℃条件下，分别添加1.0％的木瓜蛋白酶和0.6％的热稳定性淀粉酶进行酶解1h后，调节pH至5.5，再分别加入1.1％的纤维素酶进行酶解1.5h，酶解反应结束后，煮沸灭酶10min。将灭酶的样品4500rpm转速下离心20min后，分别收集滤液和沉淀。将沉淀干燥后分别得到酶辅助提取法制备的紫菜和红毛藻的不溶性膳食纤维(IDF)。将两种滤液分别浓缩后，分别用4倍体积的95％(v/v)乙醇醇沉12h、离心、干燥分别得到酶辅助提取法制备的紫菜和红毛藻的水溶性膳食纤维(SDF)。

实施例2

挑选新鲜紫菜和红毛藻将其洗净后分别放入烘箱，60℃下干燥至恒重后，分别与纯净水以1:50(g/mL)的比例混合得到紫菜溶液和红毛藻溶液。使用高剪切分散机对两种溶液进行前处理，分散转速为20000rpm、时间为10min，将分散后的样品在4000rpm转速下进行离心、60℃烘干至恒重，备用。

分别准确称取上述经前处理后的干燥紫菜和红毛藻样品各5.0g，分别按料液比1:25(g/mL)加入蒸馏水，在水浴温度50℃条件下，分别添加1.0％的木瓜蛋白酶和0.6％的热稳定性淀粉酶进行酶解1h后，调节pH至5.5，再加入1.1％的纤维素酶进行酶解1.5h。酶解反应结束后，煮沸灭酶10min，将灭酶的样品4500rpm转速下离心20min后，分别收集滤液和沉淀。将沉淀干燥后分别得到高速剪切分散-酶辅助联用提取法制备的紫菜和红毛藻的不溶性膳食纤维(IDF)。将两种滤液分别浓缩后，分别用4倍体积的95％(v/v)乙醇醇沉12h、离心、干燥分别得到高速剪切分散-酶辅助联用提取法制备的紫菜和红毛藻的水溶性膳食纤维(SDF)。

实施例3

挑选新鲜紫菜和红毛藻，将其洗净后分别放入烘箱，60℃下干燥至恒重。分别将紫菜和红毛藻与纯净水以1:100的料液比(g/mL)混合得到紫菜溶液和红毛藻溶液。在紫菜溶液和红毛藻溶液中分别加入2.0％的葡萄糖，然后在65℃条件下保持30min进行灭菌；之后，降温至37℃以下，再分别向紫菜溶液和红毛藻溶液中添加5.0％的德氏乳杆菌菌液或植物乳杆菌菌液作为发酵剂。在37℃下静止发酵48h后，得到四种红藻-乳杆菌发酵溶液，即紫菜-徳氏乳杆菌发酵液、紫菜-植物乳杆菌发酵液、红毛藻-徳氏乳杆菌发酵液和红毛藻-植物乳杆菌发酵液。分别将上述的四种发酵液在4000rpm转速下离心20min后，去除上清液和乳杆菌菌体，放置烘箱60℃烘干至恒重，得到四种海藻发酵固形物：紫菜-徳氏乳杆菌发酵固形物、紫菜-植物乳杆菌发酵固形物、红毛藻-徳氏乳杆菌发酵固形物和红毛藻-植物乳杆菌发酵固形物。

分别准确称取上述紫菜和红毛藻发酵固形物各5.0g，按料液比1:25(g/mL)加入纯净水，在水浴温度50℃条件下，分别添加1.0％的木瓜蛋白酶和0.6％的热稳定性淀粉酶进行酶解1h后，调节pH至5.5，再加入1.1％的纤维素酶酶解1.5h。酶解反应结束后，煮沸灭酶10min。将灭酶的样品4500rpm转速下离心20min后，分别收集滤液和沉淀。将沉淀干燥后分别得到发酵-酶辅助联用提取法制备的紫菜和红毛藻的不溶性膳食纤维(IDF)。将两种滤液分别浓缩后，分别用4倍体积的95％(v/v)乙醇醇沉12h、离心、干燥分别得到发酵-酶辅助联用提取法制备的紫菜和红毛藻的水溶性膳食纤维(SDF)。

实施例4

挑选新鲜紫菜和红毛藻，将其洗净后分别放入烘箱，60℃下干燥至恒重。分别将紫菜和红毛藻与纯净水以1:100的料液比(g/mL)混合得到紫菜溶液和红毛藻溶液。在紫菜溶液和红毛藻溶液中分别加入2.0％的葡萄糖，然后在65℃条件下保持30min进行灭菌；之后，降温至37℃以下，再分别向紫菜溶液和红毛藻溶液中添加5.0％的德氏乳杆菌菌液或植物乳杆菌菌液作为发酵剂。在37℃下静止发酵48h后，得到四种红藻-乳杆菌发酵溶液，即紫菜-徳氏乳杆菌发酵液、紫菜-植物乳杆菌发酵液、红毛藻-徳氏乳杆菌发酵液和红毛藻-植物乳杆菌发酵液。分别将上述的四种发酵液在4000rpm转速下离心20min后，去除上清液和乳杆菌菌体，放置烘箱60℃烘干至恒重，得到四种海藻发酵固形物：紫菜-徳氏乳杆菌发酵固形物、紫菜-植物乳杆菌发酵固形物、红毛藻-徳氏乳杆菌发酵固形物和红毛藻-植物乳杆菌发酵固形物。将上述紫菜和红毛藻发酵固形物分别与纯净水以1:50(g/mL)的比例混合得到四种发酵溶液。使用高剪切分散机对其进行前处理，分散转速为20000rpm、时间为10min，将分散后的样品在4000rpm转速下进行离心、60℃烘干至恒重，备用。

分别准确称取上述经剪切分散前处理后的干燥紫菜和红毛藻发酵固形物各5.0g，按料液比1:25(g/mL)加入纯净水，在水浴温度50℃条件下，分别添加1.0％的木瓜蛋白酶和0.6％的热稳定性淀粉酶进行酶解1h后，调节pH至5.5，再加入1.1％的纤维素酶进行酶解1.5h。酶解反应结束后，煮沸灭酶10min。将灭酶的样品4500rpm转速下离心20min后，分别收集滤液和沉淀。将沉淀干燥后分别得到发酵-高速剪切分散-酶辅助联用提取法制备的紫菜和红毛藻的不溶性膳食纤维(IDF)。将两种滤液分别浓缩后，分别用4倍体积的95％(v/v)乙醇醇沉12h、离心、干燥分别得到发酵-高速剪切分散-酶辅助联用提取法制备的紫菜和红毛藻的水溶性膳食纤维(SDF)。

试验例

为判定实施例1-4的四种提取方法对红藻中膳食纤维提取得率及品质的影响，现测定各提取制备方法对总膳食纤维(TDF)提取得率、溶解度和持水力的影响。

1、膳食纤维(TDF)得率计算

膳食纤维(TDF)得率＝[IDF干质量(g)+SDF干质量(g)]/海藻样品干质量(g)×100。

结果如图1所示，方法1表示海藻原料直接烘干后采用酶解辅助提取法(对应实施例1)，方法2表示海藻原料直接烘干后，采用高速剪切分散-酶辅助联用提取法(对应实施例2)，方法3-D表示德氏乳杆菌发酵-酶辅助联用提取法(对应实施例3)，方法3-P表示植物乳杆菌发酵-酶辅助联用提取法(对应实施例3)，方法4-D表示德氏乳杆菌发酵-高速剪切分散-酶辅助联用提取法(对应实施例4)，方法4-P表示植物乳杆菌发酵-高速剪切分散-酶辅助联用提取法(对应实施例4)。由图1可知，相比于其他实施例，应用实施例4中乳杆菌发酵-高速剪切分散-酶辅助联用提取法对红藻总膳食纤维提取效果最佳，该方法对紫菜总膳食纤维提取率高达46.96±0.73％(德氏乳杆菌发酵)和45.22±0.80％(植物杆菌发酵)，相较于实施例1总膳食纤维提取率提高了81.7～89.5％；对红毛藻总膳食纤维提取得率达45.22±1.67％(德氏乳杆菌发酵)和41.92±1.28％(植物杆菌发酵)，相较于实施例1总膳食纤维提取率提高了81.7～89.5％；其次为乳杆菌发酵-酶辅助联用提取法，该方法对紫菜总膳食纤维提取率高达39.13±1.57％(德氏乳杆菌发酵)和37.74±0.83％(植物杆菌发酵)，相较于实施例1总膳食纤维提取率提高了47.02～58.68％；对红毛藻总膳食纤维提取得率达40.59±1.59％(德氏乳杆菌发酵)和38.66±0.32％(植物杆菌发酵)，相较于实施例1总膳食纤维提取率提高了62.42～70.55％。

大量研究表明摄入膳食纤维对于维持消化道健康、降低血脂、降低血糖、提高免疫力、控制体重等具有积极的作用。此外，膳食纤维还可用于改善食品的感官品质和加工特性。酶辅助提取法比热水浸提制备方法的得率高。通过与酶辅助提取法的提取的率相比较，本发明所采用的方法发酵-高速剪切分散-酶辅助联用提取法可有效提高红藻总膳食纤维提取得率，在食品工业有较大的应用前景。

2、膳食纤维溶解度计算

溶解度：X(％)＝IDF干质量(g)/总膳食纤维干质量(g)×100。

结果如图2所示，实施例3能够显著提高膳食纤维的溶解度，最高可达14.50±0.56％，相较于实施例1膳食纤维的溶解度提高了19.54％。与实施例1相比，实施例2和实施例4制备的膳食纤维的溶解度相比较显著下降，由此可知高速剪切分散预处理样品会降低膳食纤维溶解度。

3、不溶性膳食纤维(IDF)持水力测定

准确称取0.5g的红藻不溶性膳食纤维，分别置于100mL离心管，加入12mL蒸馏水，搅拌均匀，置于室温下浸泡24h后将其放于离心机内，用3500r/min的速度离心30min，静置5min，将上清液倒掉，用滤纸将管内的多余水分吸干，称量管内剩余物质，重复试验3次，取平均值。

持水力计算公式如下：

持水力(％)＝[样品湿质量(g)-样品干质量(g)]/样品干质量(g)×100。

结果如图3所示，与实施例1和实施例2相比较，实施例3及实施例4的持水力都有所增加，其中实施例3所提取的膳食纤维持水力效果最佳，实施例3中的德氏乳杆菌发酵-酶辅助联用提取法提取制备的紫菜膳食纤维，持水力高达17.90±1.16g/g，相较于实施例1持水力提高了58.63％。实施例3中德氏乳杆菌发酵-酶辅助联用提取法提取制备的红毛藻膳食纤维的持水力次之，为17.48±0.69g/g。良好的持水力可防止食品脱水收缩提高产品品质，且高持水性的膳食纤维更有利于食物的膨胀，增加人体的饱腹感。

综上，根据本发明实施例的一种从海洋红藻中提取膳食纤维的方法，该方法通过乳杆菌对紫菜或红毛藻进行发酵前处理，再酶解，可有效提高红藻总膳食纤维提取得率，并且可提高膳食纤维的溶解度和持水力。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不应理解为必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例进行接合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。