一种用于治疗银屑病植物提取物的试验方法及应用
阅读说明：本技术 一种用于治疗银屑病植物提取物的试验方法及应用 (Test method and application of plant extract for treating psoriasis ) 是由 陈�光 于 2021-08-03 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种用于治疗银屑病植物提取物的试验方法及应用,包括以下步骤：试验动物的选取；试验动物的分组,试验动物随机分为五组,正常对照组雌性小鼠、银屑病模型组雌性小鼠、德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组雌性小鼠、德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组雌性小鼠、德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组雌性小鼠；试验动物的模型制备；银屑病小鼠模型鉴定。本发明通过使用德国洋甘菊脂溶性提取物和德国洋甘菊水溶性提取物的试验方式,与模型组小鼠相比,德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组小鼠、德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组小鼠、德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组小鼠临床症状均有明显改善。(The invention discloses a test method and application of a plant extract for treating psoriasis, which comprises the following steps: selecting a test animal; grouping test animals, wherein the test animals are randomly divided into five groups, namely female mice in a normal control group, female mice in a psoriasis model group, female mice in a German chamomile fat-soluble extract external coating group, female mice in a German chamomile stomach-irrigation group and female mice in a German chamomile fat-soluble and water-soluble extract combined treatment group; preparing a model of a test animal; and identifying a psoriasis mouse model. According to the invention, through a test mode of using the German chamomile fat-soluble extract and the German chamomile water-soluble extract, compared with a model group mouse, the clinical symptoms of the German chamomile fat-soluble extract external application group mouse, the German chamomile water-soluble extract intragastric group mouse and the German chamomile fat-soluble and water-soluble extract combined treatment group mouse are obviously improved.)
技术领域
本发明涉及银屑病领域，特别涉及一种用于治疗银屑病植物提取物的试验方法及应用。
背景技术
银屑病与大多数自身免疫性疾病一样，是一种受遗传和表观遗传修饰影响的免疫性皮肤病，临床上表现为慢性、炎症性、易复发，患者的皮损常表现为红斑基础上的鳞屑，伴严重瘙痒，极大地损害患者的身心健康。银屑病是一种非常常见的疾病，患病率约占世界人口的2%-4%，银屑病的治疗十分困难，患者病情常迁延不愈，且常因瘙痒难忍、容貌受损等而导致身心健康受到损害，生活质量严重下降，并因长期治疗导致沉重的经济负担，因此进一步深入研究银屑病炎症反应形成和维持的具体分子机制，有利于发现更多潜在的治疗靶点，以帮助开发更多具有针对性的分子靶向药物，解决银屑病的临床治疗难题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于治疗银屑病植物提取物的试验方法及应用，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于治疗银屑病植物提取物的试验方法及应用，包括以下步骤：
步骤一：试验动物的选取，动物选取雌性BALB/c小鼠；
步骤二：试验动物的分组，试验动物随机分为五组，正常对照组雌性小鼠、银屑病模型组雌性小鼠、德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组雌性小鼠、德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组雌性小鼠、德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组雌性小鼠；
步骤三：试验动物的模型制备，对试验动物进行剃毛、药物处理步骤；
步骤四：银屑病小鼠模型鉴定，对试验动物进行相关指标的对比，得出试验结果。
优选的，步骤一中，试验动物选取10周龄的雌性BALB/c小鼠，准备IMQ乳膏、德国洋甘菊脂溶性提取物和德国洋甘菊水溶性提取物、凡士林备用，且试验器具使用前需经过无菌处理。
优选的，步骤二中，将试验老鼠分为正常对照组10只；
银屑病模型组12只；
德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组10只；
德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组10只；
德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组10只。
优选的，步骤三中，对实验动物处理，对银屑病模型组和药物处理组雌性小鼠42只进行背部剃毛，并涂抹IMQ乳膏，雌性小鼠背部剃毛是用电推剪将小鼠背部2×3cm区域的毛剔除，细小绒毛用单头电动剃须刀剔除，剃毛后的小鼠不做任何处理饲养3天，以消除剃毛对背部皮肤的损伤和影响，小鼠给予 5%的IMQ乳膏 62.5mg/只，1次/天，连续处理7天，IMQ均匀涂抹在小鼠背部裸露区域，上覆3×3cm的保鲜膜，手指连续轻轻按压60次，每天中午十二点处理，每次给药前均进行拍照记录，新生细小绒毛用单头电动剃须刀剔除，始终保持小鼠背部裸露区域为无毛状态；
对德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组雌性小鼠10只进行药物处理：外涂IMQ乳膏的模型小鼠，同天同时进行如下处理：早上八点和晚上六点对模型小鼠外涂德国洋甘菊脂溶性提取物 200μL/次，2次/天，连续处理7天，同时灌胃生理盐水200µl/10g；
对德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组雌性小鼠10只进行药物处理：模型制备前7天，每天早上八点和晚上六点用德国洋甘菊水溶性提取物灌胃处理，7天后小鼠外涂IMQ乳膏制备模型同时，继续给予德国洋甘菊水溶性提取物灌胃7天，2次/天，200µl/10g，连续处理14天，连续外涂凡士林7天；
对德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组的雌性小鼠10只进行药物处理时，对其按照德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组小鼠的处理方法和德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组小鼠的处理方法叠加进行处理；
对正常对照组雌性小鼠按照银屑病模型组雌性小鼠的处理方法进行剃毛，涂抹凡士林。
优选的，步骤四中，为了评价背部皮肤炎症的严重程度，参照文献以临床 PASI 评分为基础，建立评分系统；
按照红斑、鳞屑和增厚程度0-4 分进行独立评分，评分规则如下：
0=没有，1=轻度，2=中度，3=明显，4=非常明显，用于表示皮肤炎症的程度；
皮肤组织病理学检测：模型制备后第8天小鼠脱颈处死，取0.5×1cm 大小的皮损组织剔除皮下脂肪置于福尔马林固定液中，行HE染色后观察皮损程度并检测棘层厚度。
优选的，一种治疗银屑病的植物提取物应用于德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物对银屑病疗效的测试。
附图说明
图1为本发明银屑病小鼠的临床表现示意图。
图2为本发明银屑病小鼠皮肤HE染色观察示意图。
图3为本发明银屑病小鼠皮肤棘层厚度示意图。
本发明的技术效果和优点：
本发明通过使用德国洋甘菊脂溶性提取物和德国洋甘菊水溶性提取物的试验方式，与模型组小鼠相比，德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组小鼠、德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组小鼠、德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组小鼠临床症状均有明显改善。与模型组相比，德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组小鼠、德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组小鼠、德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组小鼠处理后明显降低了小鼠皮损程度；颗粒层、棘层和基质层结构较完整；角质层增厚、角化不全及角化过度现象明显改善。与德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组小鼠相比，德国洋甘菊水溶性提取物灌胃处理组和德国洋甘菊脂溶性提取物和水溶性提取物联合处理组效果更佳。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了如图1-3所示的一种用于治疗银屑病植物提取物的试验方法及应用，包括以下步骤：
步骤一：试验动物的选取，动物选取雌性BALB/c小鼠；
步骤二：试验动物的分组，试验动物随机分为五组，正常对照组雌性小鼠、银屑病模型组雌性小鼠、德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组雌性小鼠、德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组雌性小鼠、德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组雌性小鼠；
步骤三：试验动物的模型制备，对试验动物进行剃毛、药物处理步骤；
步骤四：银屑病小鼠模型鉴定，对试验动物进行相关指标的对比，得出试验结果。
步骤一中，试验动物选取10周龄的雌性BALB/c小鼠，准备IMQ乳膏、德国洋甘菊脂溶性提取物和德国洋甘菊水溶性提取物、凡士林备用，且试验器具使用前需经过无菌处理。
步骤二中，将试验老鼠分为正常对照组10只；
银屑病模型组12只；
德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组10只；
德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组10只；
德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组10只。
步骤三中，对实验动物处理，对银屑病模型组和药物处理组雌性小鼠42只进行背部剃毛，并涂抹IMQ乳膏，雌性小鼠背部剃毛是用电推剪将小鼠背部2×3cm区域的毛剔除，细小绒毛用单头电动剃须刀剔除，剃毛后的小鼠不做任何处理饲养3天，以消除剃毛对背部皮肤的损伤和影响，小鼠给予 5%的IMQ乳膏 62.5mg/只，1次/天，连续处理7天，IMQ均匀涂抹在小鼠背部裸露区域，上覆3×3cm的保鲜膜，手指连续轻轻按压60次，每天中午十二点处理，每次给药前均进行拍照记录，新生细小绒毛用单头电动剃须刀剔除，始终保持小鼠背部裸露区域为无毛状态；
对德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组雌性小鼠10只进行药物处理：外涂IMQ乳膏的模型小鼠，同天同时进行如下处理：早上八点和晚上六点对模型小鼠外涂德国洋甘菊脂溶性提取物 200μL/次，2次/天，连续处理7天，同时灌胃生理盐水200µl/10g；
对德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组雌性小鼠10只进行药物处理：模型制备前7天，每天早上八点和晚上六点用德国洋甘菊水溶性提取物灌胃处理，7天后小鼠外涂IMQ乳膏制备模型同时，继续给予德国洋甘菊水溶性提取物灌胃7天，2次/天，200µl/10g，连续处理14天，连续外涂凡士林7天；
对德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组的雌性小鼠10只进行药物处理时，对其按照德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组小鼠的处理方法和德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组小鼠的处理方法叠加进行处理；
对正常对照组雌性小鼠按照银屑病模型组雌性小鼠的处理方法进行剃毛，涂抹凡士林。
步骤四中，为了评价背部皮肤炎症的严重程度，参照文献以临床 PASI 评分为基础，建立评分系统；
按照红斑、鳞屑和增厚程度0-4 分进行独立评分，评分规则如下：
0=没有，1=轻度，2=中度，3=明显，4=非常明显，用于表示皮肤炎症的程度；
皮肤组织病理学检测：模型制备后第8天小鼠脱颈处死，取0.5×1cm 大小的皮损组织剔除皮下脂肪置于福尔马林固定液中，行HE染色后观察皮损程度并检测棘层厚度。
一种治疗银屑病的植物提取物应用于德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物对银屑病疗效的测试。
图1中是银屑病小鼠的临床表现观察示意图，A是正常对照组，B是银屑病模型组，C是德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组，D是德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组，E是德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组,0d是试验之前雌性BALB/c小鼠状态，7d是试验后雌性BALB/c小鼠的状态，由此可以直观的观察出，与正常对照组相比，模型组小鼠可明显观察到背部皮损出现明显红斑、鳞屑和银屑样病变。与模型组小鼠相比，德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组小鼠、德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组小鼠、德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组小鼠背部皮损明显改善，红斑、鳞屑和银屑病样病变显著减少。与德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组小鼠相比，德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组、德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组小鼠背部皮损改善程度更明显。
图2中是银屑病小鼠皮肤HE染色观察，A是正常对照组，B是银屑病模型组，C是德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组，D是德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组，E是德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组，可得出，HE 染色镜下可见：空白对照组小鼠皮肤表皮完整，角质层薄约 2层、细胞结构正常，颗粒层、棘层以及基质层可见完整结构，其分界清晰，基质层中可见明显的单层柱状细胞无明显淋巴细胞浸润。银屑病模型组小鼠表皮向下突出，角质层增厚、部分细胞角化过度、角化不全，无明显的颗粒层，棘层可见显著的增厚，真皮层可见中性粒细胞和淋巴细胞浸润。与模型组相比，德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组小鼠、德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组小鼠、德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组小鼠处理后明显降低了小鼠皮损程度,颗粒层、棘层和基质层结构较完整，角质层增厚、角化不全及角化过度现象明显改善。与德国洋甘菊脂溶性提取物处理组相比，德国洋甘菊水溶性提取物处理组小鼠皮损改善程度更明显。棘层厚度略有增加，基底层结构完整，其分界线清晰。
图3中是银屑病小鼠皮肤HE染色后对棘层厚度的检测，A是正常对照组，B是银屑病模型组，C是德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组，D是德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组，E是德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组，可得出，与正常对照组相比，模型组小鼠背部皮肤棘层厚度明显增加（P< 0.0001）。与模型组相比，德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组小鼠、德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组小鼠、德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组小鼠处理后明显降低了小鼠皮肤的棘层厚度（P< 0.01）。三个药物处理组小鼠背部皮肤棘层厚度无显著性差异。
表中是银屑病小鼠皮损PASI评分表（`X±S）。可得出：与正常对照组相比，模型对照组较正常对照组皮损 PASI 评分显著增加。与模型组相比，德国洋甘菊脂溶性提取物外涂组小鼠、德国洋甘菊水溶性提取物灌胃组小鼠、德国洋甘菊脂溶性和水溶性提取物联合处理组小鼠评分显著降低，差异具有统计学意义（P< 0.05）。三个药物处理组小鼠皮损PASI 评分无显著性差异。
组别
例数（n）
PASI评分
A组
10
0
B组
12
6.4±0.79
C组
10
4.3±0.43<sup>*</sup>
D组
10
3.31±0.35<sup>*</sup>
E组
10
3.94±0.44<sup>*</sup>
注：模型组与三个药物处理组比较，* P< 0.05。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。