(±)-Marinopyrrole A衍生物及其制备方法和用途
阅读说明：本技术 (±)-Marinopyrrole A衍生物及其制备方法和用途 ((+/-) -Marinopyrole A derivative and preparation method and application thereof ) 是由 秦勇 宋灏 肖玉梅 何艳 廖瑜琳 王文静 于 2021-09-16 设计创作，主要内容包括：本发明涉及式3所示的(±)-Marinopyrrole A衍生物、其旋光异构体、外消旋体或药学上可接受的盐,还涉及含有该化合物的药物组合物,制备该化合物的方法,以及该化合物在制备用于抗菌药物中的用途。(The invention relates to a (+/-) -Marinopyrole A derivative shown as a formula 3, an optical isomer, a racemate or pharmaceutically acceptable salt thereof, a pharmaceutical composition containing the compound, a method for preparing the compound and application of the compound in preparing antibacterial drugs.)
技术领域
本发明涉及(±)-marinopyrrole A的衍生物及其制备方法和用途。
背景技术
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是由金黄葡萄球菌变种而来的一种独特菌株，可引起人类表皮、软组织、黏膜、骨和关节等多种组织器官的严重感染，能抵抗包括甲氧西林及含β-内酰胺结构的头孢抗生素。自1961年英国人Jevons首次发现耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococus aureus,MRSA)以来，该菌即以惊人的速度在世界范围内蔓延，每年至少有十万人因感染MRSA而住院治疗，由于其极广的传播途径，常见院内及社区内流行性爆发感染。由于其具有不均一耐药、广谱耐药、生长特殊、固有耐药及获得性耐药的特性，MRSA感染已经与乙型肝炎、获得性免疫缺陷综合征并列成为世界范围内三大最难解决的感染性疾患，近年来还出现了社区型MRSA(Community-associated MRSA，CA-MRSA)和耐万古霉素(VRE)的相关报道，严重威胁公共卫生安全。因此，寻找开发对其具有高抗菌活性的药物成为了医疗卫生及药物开发领域的研究热点之一。
近年来，科学家们通过对MRSA的耐药机制进行的研究，发现了一些具有临床应用价值的新化合物，根据不同的抗菌机理，目前治疗MRSA感染的药物主要可分为以下几大类(Malina,S.I.；Andres,R.；Hartmut,L.Curr.Opin.Crit.Care 2005,11,481)：(一)、糖肽类抗生素。糖肽类抗生素是目前治疗MRSA感染的主要药物，其代表药物有万古霉素(vancomycin)、去甲万古霉素(norvancomycin)、替考拉宁(teicoplanin)、telavancin、oritavancin和dalbavancin；(二)、噁唑烷酮类抗生素，该类抗生素的主要代表药物是利奈唑胺(linezolid)。该药物也是首个被批准用于临床的噁唑烷酮类抗生素(Prasad,J.V.N.V.Curr.Opin.Microbiol.2007,10,454)；(三)、β-内酰胺类抗生素，该类抗生素是目前研究最多的一类抗MRSA感染药物，其代表药物包括ceftobiprole、ceftaroline等；(四)、脂肽类抗生素，其代表药物是达托霉素(daptomycin)。达托霉素独特的作用机制使得细菌对其产生耐药性的可能性大大减低(Raja,A.；LaBonte,J.；Lebbos,J.；Kirkpatrick,P.,NatureRev.Drug Discov.2003,2,943)；(五)、甘氨酰四环素类，其代表药物是替加环素(tigecycline)；(六)、复方制剂。根据美国感染病学会(Infectious Diseases Society ofAmerica，IDSA)发布的成人与儿童耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillinresistantStaphylococus aureus，MRSA)感染治疗指南，针对不同类型、不同阶段的CA-MRAS或皮肤及软组织感染(Skin and soft tissue infections，SSTI)，指南都提出了建议的治疗方案，从给药种类上可以看出，建议使用的抗生素包括万古霉素、达托霉素、利奈唑胺、克林霉素、特万拉星等药物，根据临床症状，考虑联合用药或单剂用药(Clin Infect Dis.2011,52(3):e18-55)。
虽然目前各大制药公司陆续开发出一些治疗MRSA感染的新型药物，但迄今为止，已在临床使用多年的万古霉素仍然是治疗MRSA感染的一线药物和最后防线。近年来，随着耐万古霉素MRSA个案的出现和各种药物毒副作用的逐渐显现，寻找具有新型骨架的抗MRSA活性的药物候选物是近年来抗生素研究领域的重要方向之一。
对活性天然产物进行结构改造是发现新药的重要途径之一。Marinopyrrole A是一种具有双吡咯杂环骨架的海洋天然产物，最初由William Fenical课题组于2008年从海洋放线菌CNQ-418中提取分离得到，通过其在甲苯中高温消旋，得到(±)-MarinopyrroleA，通过对其抗菌活性筛选，发现Marinopyrrole A有着非常丰富的生物活性，其抗耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)的活性十分突出，(-)-marinopyrrole A和(+)-marinopyrroleA对MRSA的MIC90的分别为0.61μM和0.31μM(万古霉素的MIC90为0.14-0.27μM)，是具有良好药物开发前景的明星分子(William Fenical et al.Organic Lett.2008,10,629)。鉴于该类天然产物具有如此重要的开发价值，自Marinopyrrole A被发现以来，它的合成以及生物活性备受关注，目前已经有许多课题组完成了对(±)-Marinopyrrole A的全合成，其中一些课题组还对其衍生物进行系列合成并完成了生物活性的进一步研究。
2013年秦勇课题组报道了以marinopyrrole A为先导化合物，成功合成了70余个衍生物，并对这些化合物都进行了抗菌活性筛选，发现多个衍生物对耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)、甲氧西林敏感菌(MSSA)和耐甲氧西林金葡菌(MRSA)等耐药菌株显示出低纳摩尔抑制活性。
aMethicillin-susceptible Staphylococcus aureus(甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌)
bMethicillin-resistant Staphylococcus aureus(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)
cMethicillin-resistant Staphylococcus epidermidis(耐甲氧苯青霉素表皮葡萄球菌)
dVancomycin-resistant Staphylococcus aureus(耐万古霉素金黄葡萄球菌)
eEnterococcus(粪肠球菌)
f相关数据由四川省抗生素研究所测试提供
其中苯环上4,4’-位具有CF3取代的化合物2对上述三种菌株的抑制活性均优于天然产物marinopyrrole A和万古霉素，抑制活性分别为万古霉素的64倍、8倍和4倍，且对耐万古霉素金黄葡萄球菌(WHO-3)也具有良好的抑制活性，是极具临床开发价值的新骨架抗生素候选物(Mar.Drugs 2013,11,2927；CN101786979B)。
发明内容
本发明的发明人合成了式3所示(±)-Marinopyrrole A的衍生物，这些化合物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)具有抗菌活性。
因此，本发明的第一方面提供通式3所示的化合物、其旋光异构体、其外消旋体或其药学上可接受的盐，
其中，
1)X是S原子或-S(O)2-，R1不存在，R2为C1-6烷基、4-10元杂芳基、4-10元杂环基、被R3取代的C1-6烷基、被R3取代的4-10元杂芳基或被R3取代的4-10元杂环基，R3为羟基、羟基取代的C1-6烷基、卤素、C1-6烷基、羧基、羧基取代的C1-6烷基、氨基或氨基取代的C1-6烷基；或者
2)X是N原子，R1和R2各自独立地为C1-6烷基，或者R1和R2与它们所连接的N原子形成4-10元杂芳基、4-10元杂环基、被R4取代的4-10元杂芳基或被R4取代的4-10元杂环基，R4为羟基、卤素、C1-6烷基、羧基、羧基取代的C1-6烷基、氨基、氨基取代的C1-6烷基、羟基取代的C1-6烷基、苄基、苯基或5-6元杂芳基。
本发明的第二方面提供药物组合物，包含至少一种本发明第一方面所述的式3所示化合物、其旋光异构体、外消旋体或药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。所述的式3所示化合物、其旋光异构体、外消旋体或药学上可接受的盐以治疗有效量(例如治疗细菌感染或由细菌感染引起的疾病的有效量)存在。
本发明的第三方面提供制备本发明第一方面所述的式3所示化合物、其旋光异构体、外消旋体或药学上可接受的盐的方法，包括：
使化合物2与式4所示的亲核试剂在非质子溶剂中反应，
其中R1和R2的定义如本发明所述。
本发明的第四方面提供本发明第一方面所述的式3所示化合物、其旋光异构体、其外消旋体或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，其中所述的药物用于抗菌或用于治疗细菌感染或细菌感染引起的疾病。
本发明的第五方面提供本发明第一方面所述的式3所示化合物、其旋光异构体、其外消旋体或其药学上可接受的盐，其用于抗菌或用于治疗细菌感染或细菌感染引起的疾病。
本发明的第六方面提供一种治疗细菌感染或细菌感染引起的疾病的方法，包括：向有需要的受试者施用有效量的本发明第一方面所述的式3所示化合物、其旋光异构体、外消旋体或药学上可接受的盐。
在某些实施方案中，式3中R3为羟基、羟基取代的C1-6烷基、卤素、C1-4烷基、羧基、羧基取代的C1-4烷基、氨基或氨基取代的C1-4烷基。
在某些实施方案中，式3中R4为羟基、卤素、C1-4烷基、羧基、羧基取代的C1-4烷基、氨基、氨基取代的C1-4烷基、羟基取代的C1-4烷基、苄基、苯基或5-6元杂芳基。
在某些实施方案中，式3中R3为羧基、氨基、羟基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、羧甲基、羧乙基、羧丙基、羟甲基、羟乙基、羟丙基。
在某些实施方案中，式3中R3为羧基或氨基。
在某些实施方案中，式3中R4为C1-4烷基、羧基取代的C1-4烷基、苄基或5-6元杂芳基。
在某些实施方案中，式3中R4为苄基、羟基、氨基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、羧甲基、羧乙基、羧丙基、羟甲基、羟乙基、羟丙基、苯基或吡啶-4-基。
在某些实施方案中，式3中R4为苄基、异丁基、甲基、羧甲基或吡啶-4-基。
在某些实施方案中，式3中X是S原子或-S(O)2-，R1不存在，R2为C1-4烷基、4-10元杂芳基、4-10元杂环基、被R3取代的C1-4烷基、被R3取代的4-10元杂芳基或被R3取代的4-10元杂环基，R3定义如本发明所述。
在某些实施方案中，式3中X是S原子或-S(O)2-，R1不存在，R2为C1-4烷基、4-10元杂芳基、4-10元杂环基或被R3取代的C1-4烷基，R3定义如本发明所述。
在某些实施方案中，式3中X是S原子或-S(O)2-，R1不存在，R2为4-10元杂芳基、4-10元杂环基或被R3取代的C1-6烷基，R3定义如本发明所述。
在某些实施方案中，式3中X是S原子或-S(O)2-，R1不存在，R2为5-10元杂芳基、5-10元杂环基或被R3取代的C1-4烷基，R3定义如本发明所述。
在某些实施方案中，式3中X是S原子或-S(O)2-，R1不存在，R2为甲基、乙基、正丙基、正丁基、5-10元杂芳基、5-10元杂环基、被R3取代的甲基、被R3取代的乙基、被R3取代的正丙基或被R3取代的正丁基，R3定义如本发明所述。
在某些实施方案中，式3中X是S原子或-S(O)2-，R1不存在，R2为5-10元杂芳基、5-10元杂环基、被R3取代的甲基、被R3取代的乙基、被R3取代的正丙基或被R3取代的正丁基，R3定义如本发明所述。
在某些实施方案中，式3中X是S原子或-S(O)2-，R1不存在，R2为吡啶并[3,2-D][1,3]噻唑-2-基、噻唑-2-基、噻吩-2-基、苯并噻唑-2-基、噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基、3-氨基丙基、2-羟基乙基、3-羟基丙基、羧甲基或羧乙基。
在某些实施方案中，式3中X是N原子，R1和R2各自独立地为C1-4烷基，或者R1和R2与它们所连接的N原子形成4-10元杂芳基、4-10元杂环基、被R4取代的4-10元杂芳基或被R4取代的4-10元杂环基，R4定义如本发明所述。
在某些实施方案中，式3中X是N原子，R1和R2各自独立地为C1-4烷基，或者R1和R2与它们所连接的N原子形成5-10元杂芳基、5-10元杂环基、被R4取代的5-10元杂芳基或被R4取代的5-10元杂环基，R4定义如本发明所述。
在某些实施方案中，式3中X是N原子，R1和R2各自独立地为甲基、乙基、正丙基、正丁基，或者R1和R2与它们所连接的N原子形成吗啉基、四氢吡咯基、硫代吗啉基、哌嗪基、1,2,4-三氮唑基、六氢吡啶基、1,5-二氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基或哌啶基，所述吗啉基、四氢吡咯基、硫代吗啉基、哌嗪基、1,2,4-三氮唑基、六氢吡啶基、4-氧代-1,5-二氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基或哌啶基任选地被R4取代，R4定义如本发明所述。
在某些实施方案中，式3中X是N原子，R1和R2各自独立地为甲基，或者R1和R2与它们所连接的N原子形成吗啉基、四氢吡咯基、硫代吗啉基、1-苄基哌嗪基、1,2,4-三氮唑-1-基、六氢吡啶基、N-异丁基哌嗪基、N-甲基哌嗪基、哌嗪基、1-(4-吡啶基)哌嗪基、4-氧代-1,5-二氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基或N-(羧甲基)哌啶基。
在某些实施方案中，式3所示化合物选自：
在某些实施方案中，本发明第三方面所述的方法中化合物2与式4所示的亲核试剂在非质子溶剂中，并且在碱的存在下反应。
在某些实施方案中，本发明所述非质子溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、二甲亚砜、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N,N-二乙基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃或其任意组合。
在某些实施方案中，本发明所述的碱为碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾、甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钾、叔丁醇钠、三乙胺或吡啶。
在某些实施方案中，本发明所述的碱为碳酸钾。
在某些实施方案中，本发明所述的式4所示亲核试剂选自：吗啉、二甲胺、2-巯基苯并噻唑、四氢吡咯、2-巯基噻唑、2-巯基噻吩、硫代吗啉、1-苄基哌嗪、六氢吡啶、N-异丁基哌嗪、N-甲基哌嗪、噻唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-硫酮、叔丁基(3-巯基丙基)氨基甲酸、哌嗪、1-(4-吡啶基)哌嗪、别嘌呤、巯基乙酸乙酯。
在某些实施方案中，本发明所述的抗菌为抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。在某些实施方案中，本发明所述的细菌感染为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染。在某些实施方案中，本发明所述的细菌感染引起的疾病为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染引起的疾病，例如皮肤感染，软组织感染等。
在某些实施方案中，本发明所述的受试者为哺乳动物受试者和人受试者，包括男性和女性受试者且包括新生儿、婴儿、少年、青少年、成人和老年受试者，并且包括各种种族和族裔，包括但不限于，白人、黑人、亚洲人、美洲印第安人和西班牙裔。
本发明化合物既可以其本身也可以其可药用盐的形式使用。式3所示化合物的药学上可接受的盐包括与药学上可接受的无机酸或有机酸、或者与药学上可接受的无机碱或有机碱形成的盐。合适的酸加成盐的例子包括与盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、高氯酸、富马酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、甲酸、乳酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、扑酸、丙二酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、羟基萘甲酸、氢碘酸、苹果酸、鞣酸等形成的盐。合适的碱加成盐的例子包括与钠、锂、钾、镁、铝、钙、锌、N,N'-二苄基乙二胺、氯代普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺和普鲁卡因等形成的盐。用于制备本发明化合物的药学上可接受的盐的方法为本领域技术人员已知的。本文中涉及到本发明化合物时，包括通式3所示化合物及其药学上可接受的盐。
本发明所述的药物组合物包含本发明所述的式3所示化合物、其旋光异构体、外消旋体或药学上可接受的盐与常规药用载体和/或赋形剂。本发明的药物组合物可按本领域常规方法制备成各种剂型，包括但不限于片剂、胶囊、溶液、悬浮液、颗粒剂或注射剂等，经例如口服或非肠道等途径给药。
另外需要指出，本发明所述式3所示化合物、其旋光异构体、外消旋体或药学上可接受的盐的使用剂量和使用方法取决于诸多因素，包括患者的年龄、体重、性别、自然健康状况、营养状况、化合物的活性强度、服用时间、代谢速率、病症的严重程度以及诊治医师的主观判断。优选的使用剂量介于0.001－1000mg/kg体重/天。
定义
在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。
本发明所用术语“任选地”是指其描述的事件或情况发生或未发生，如果取代基被描述为“任选地被…取代”，则该取代基可以被取代，也可以未被取代。
除非指明，否则如本文中所使用，取代基的连接点可来自取代基的任意适宜位置。
本发明所用术语“羟基”是指-OH。
本发明所用术语“氨基”是指-NH2。
本发明所用术语“羧基”是指-C(O)OH。
本发明所用术语“卤素”是指氟、氯、溴、碘，优选为氟、氯、溴。
本发明所用术语“C1-C6烷基”是指具有1－6个碳原子的饱和的直链或支链一价烃基，包括C1-5烷基、C1-4烷基、C1-3烷基、C1-2烷基、C2-5烷基、C2-4烷基等。“C1-C6烷基”的典型实例包括但不限于甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基，仲丁基、叔丁基，正戊基，叔戊基，新戊基，己基等。“C1-C4烷基”的典型实例包括但不限于甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基，仲丁基、叔丁基等。
本发明所用术语“4-10元杂芳基”是指具有4-10个环成员的杂芳族环基团，包括单环杂芳族环和多环芳族环，多环芳族环中单环芳族环与一个或多个其他芳族环稠合。“4-10元杂芳基”中具有一个或两个或多个选自O，S或N的杂原子，优选至少具有一个氮原子。本发明所用的术语“杂芳基”范围内还包括其中芳族环与一个或多个非芳族环(碳环或杂环)稠合的基团，其中连接基团或点位于芳族环或非芳族环上。所述“4-10元杂芳基”可以被氧代。例如，本申请所述的“4-10元杂芳基”含有1-2个杂原子，例如至少具有一个氮原子，例如含有1个氮原子、氧原子或硫原子，或含有1个氮原子和1个氧原子。所述“4-10元杂芳基”包括“5-8元杂芳基”、“5-7元杂芳基”、“5-6元杂芳基”、“5-10元含氮杂芳基”、“5-7元含氮杂芳基”、“5-8元含氮杂芳基”、“5-6元含氮杂芳基”等，其中有些含氮杂芳基中的氮原子能够被氧化形成N-氧化物。本领域技术人员能够识别这些能够形成N-氧化物的含氮杂芳环基团。所述“4-10元杂芳基”例如具有5-6个环成员。“4-10元杂芳基”的典型实例包括但不限于咪唑基，三氮唑基、四氮唑基、吡啶基，嘧啶基，吡嗪基，苯并噻唑基，嘧啶基，苯并噁唑基，噻二唑基，苯并咪唑基，咪唑并吡啶基，噻唑基，1,5-二氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶基，4-氧代-1,5-二氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基等。
本发明所用术语“4-10元杂环基”是指至少含有一个杂原子(例如，含有1个、2个、3个、4个或5个)且环原子数为4-10个的饱和或部分饱和的且不具有芳香性的单环或二环或多个稠合环的环状基团，所述杂原子为氮原子、氧原子和/或硫原子。所述“4-10元杂环基”可以被氧代。例如，本申请所述的“4-10元杂环基”含有1-2个杂原子，例如至少具有一个氮原子，例如含有1个氮原子、氧原子或硫原子，或含有1个氮原子和1个氧原子。所述“4-10元杂环基”包括“4-8元杂环基”、“4-7元杂环基”、“5-6元杂环基”、“5-10元含氮杂环基”、“5-7元含氮杂环基”、“5-8元含氮杂环基”、“5-6元含氮杂环基”等，其中有些含氮杂环基中的氮原子能够被氧化形成N-氧化物。本领域技术人员能够识别这些能够形成N-氧化物的含氮杂环基团。“4-10元杂环基”的具体实例包括但不仅限于：四氢呋喃基，四氢噻吩基，吡咯烷基，六氢吡啶基，哌嗪基，噻嗪基，哌啶基，硫代吗啉基，吗啉基等。
本发明所用术语“药学可接受的”是指其描述的物质不但是受试者生理学上可接受，而且还可指在药学上有使用价值的物质。例如在描述“药学可接受的盐”时，表示该盐其不但是受试者生理学上可接受，而且还可指在药学上有使用价值的合成物质。
本发明所用术语“药学可接受的载体和/或赋形剂”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容的载体和/或赋形剂，其是本领域公知的(参见例如Remington'sPharmaceutical Sciences.Edited by Gennaro AR,19th ed.Pennsylvania:MackPublishing Company,1995)，包括但不限于粘合剂、稀释剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、润滑剂、着色剂、调味剂、增溶剂、渗透压调节剂或其它常规添加剂。典型的药学上可接受的载体和/或赋形剂包括例如微晶纤维素、淀粉、交连聚维酮、聚维酮、聚乙烯吡咯烷酮、麦芽糖醇、柠檬酸、十二烷基磺酸钠或硬脂酸镁等。
本发明所用术语“有效量”是指能够有效实现预期目的的量。例如，治疗疾病(例如细菌感染或由细菌感染引起的疾病)有效量是指，能够减轻或消除疾病状态或病症的量。测定这样的有效量在本领域技术人员的能力范围之内。
如本文所用，术语“约”是指本领域的普通技术人员认为的在所指定数值的可接受的标准误差内，例如在指定数值的±10％、±9％、±8％、±7％、±6％、±5％、±4％、±3％、±2％、±1％、±0.5％、±0.1％、±0.05％或±0.01％以内。
本发明中所述的化合物，对于同一化合物而言，若名称与结构式不一致，以化合物结构式为准。
本发明的有益技术效果
本发明式3所示化合物对耐甲氧西林金黄色葡球菌(MRSA)等革兰氏阳性菌具有较强的抗菌活性。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
以下实施例中所用原料化合物2可参照Mar.Drugs 2013,11,2927-2948；doi:10.3390/md11082927公开的方法制备。
本发明实施例可以采用合成通法制备式3所示化合物。
通用合成法为:在氩气保护下，向试管中加入化合物2、K2CO3以及亲核试剂，加入干燥的DMF或NMP，将反应液在65-80℃(例如75℃)(DMF作溶剂)或80-120℃(例如80℃或100℃)(NMP作溶剂)下搅拌过夜，用LC-MS监测反应。反应完全后，用饱和NH4Cl水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取三次，合并有机层，用水和饱和食盐水各洗一次。有机相用无水Na2SO4干燥，并真空浓缩，得粗品。粗品经硅胶柱层析和/或制备型HPLC纯化。采集化合物谱图数据和测定纯度数据的样品经制备型HPLC(Prep Silica OBDTM 30×100mm)或重结晶纯化得到。
实施例1化合物3-4的制备
使用化合物2(30.0mg,46.4μmol,1.0eq)作为反应起始物，吗啉(80.8μL,928μmol,20.0eq)作为亲核试剂，NMP作为溶剂，参考通用合成法制备得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝8:1)纯化得淡黄色粉末化合物3-4(26.4mg,82％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(Prep Silica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，正己烷:异丙醇(v:v)＝95:5－93:7－90:10)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度＝99.7791％；IR:(neat):νmax＝3097,2971,2860,1636,1594,1481,1410,1332,1310,1170,1129,1066,948,864,737cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ12.57(s,1H),11.03(s,1H),10.89(s,1H),8.10(d,J＝8.0Hz,1H),7.83(d,J＝8.0Hz,1H),7.34(d,J＝8.4Hz,1H),7.31(s,1H),7.22(s,1H),6.99(d,J＝8.4Hz,1H),6.95(s,1H),3.49–3.38(m,4H),2.96–2.92(m,2H),2.59–2.56(m,2H)；13C NMR(150MHz,Acetone-d6)δ186.0,185.9,161.6,160.9,143.7,136.2(q,J＝39.45Hz),135.9(q,J＝39.6Hz),133.7,133.0,131.2,126.0,124.8,124.5,124.5(q,J＝270Hz),124.4,123.8,124.2(q,J＝271.5Hz),120.8,116.4,116.2,115.3,114.9,110.6,106.6,67.2,67.2,51.1,51.1；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C28H17Cl3F6N3O5 -,694.0143；found,694.0130。
实施例2化合物3-5的制备
将化合物2(200mg,310μmol,1.0eq)、二甲胺(2M四氢呋喃溶液)(0.300mL,465μmol,1.5eq)、碘化亚铜(2.95mg,15.5μmol,0.05eq)、无水磷酸钾(65.8mg,310μmol,1.0eq)和N,N'-双(2,4,6-三甲氧基苯基)草酰胺(65.2mg,15.5μmol,0.5eq)溶于20mL干燥的二甲亚砜(DMSO)中，于100℃反应过夜，次日LC-MS检测原料反应完全。反应液冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，并用饱和食盐水洗(2×20mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱层析(石油醚:丙酮(v:v)＝15:1－4:1)纯化得到橙红色粉末化合物3-5(182mg,90％,纯度＝99.3261％)。IR:(neat):νmax＝3264,2924,1636,1591,1499,1410,1335,1169,1130,965,848,927,865cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ12.52(s,1H),11.13(s,1H),10.73(s,1H),8.08(d,J＝8.0Hz,1H),7.80(d,J＝8.4Hz,1H),7.33(d,J＝8.8Hz,1H),7.30(s,1H),7.23(s,1H),6.99(d,J＝8.0Hz,1H),6.91(s,1H),2.46(s,6H)；13C NMR(150MHz,Acetone-d6)δ185.6,185.3,161.7,160.8,145.9,136.0(q,J＝29.25Hz),135.7(q,J＝29.25Hz),133.5,133.5,132.8,125.2,124.8,124.7,124.5(q,J＝270Hz),124.3(q,J＝270Hz),124.1,124.1,120.5,116.3,116.1,115.3,114.8,110.5,105.8,41.9,41.9；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C26H15Cl3F6N3O4 -,652.0038；found,652.0038。
实施例3化合物3-6的制备
使用化合物2(50.0mg,77.8μmol,1.0eq)作为反应起始物，K2CO3(108mg,0.778mmol,10.0eq)作为碱，吡啶并[3,2-D][1,3]噻唑-2-硫醇(130mg,0.778mmol,10.0eq)作为亲核试剂，DMF作为溶剂，参考通用合成法制备得到粗品。粗品用硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝10:1－3:1)纯化得淡黄色粉末化合物3-6(41.6mg,69％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(Prep Silica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，流动相:正己烷:异丙醇(v:v)＝90:10－85:15－80:20)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：96.0824％；IR:(neat):νmax＝2924,2857,1638,1605,1414,1333,1173,1136,1068,946,929,868cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ10.88(s,1H),8.19(d,J＝8.0Hz,1H),7.83(d,J＝8.0Hz,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.45–7.40(m,2H),7.36–7.31(m,2H),7.25(s,1H),7.15(s,1H),6.93(d,J＝8.0Hz,1H)；13C NMR(100MHz,Acetone-d6)δ187.2,184.2,165.1,161.7,159.2,154.5,136.6(q,J＝33Hz),136.5,135.4(q,J＝32Hz),135.0,134.1,131.8,127.3,125.9,125.7,125.6,124.8,124.7,124.4,124.3(q,J＝270Hz),124.2(q,J＝270Hz),122.9,122.9,122.2,121.1,120.5,116.6,116.3,115.6,114.6,111.2；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C31H13Cl3F6N3O4S2 -,773.9323；found,773.9315。
实施例4化合物3-7的制备
使用化合物2(50.0mg,77.8μmol,1.0eq)作为反应起始物，K2CO3(53.7mg,0.389mmol,5.0eq)作为碱，四氢吡咯(125μL,1.56mmol,20.0eq)作为亲核试剂，NMP作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝5:1)纯化得红色粉末化合物3-7(41.8mg,79％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(PrepSilica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，正己烷:异丙醇(v:v)＝90:10－85:15－80:20)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：99.3917％；IR:(neat):νmax＝3235,2962,1635,1590,1494,1478,1410,1337,1168,1127,1065,861,786,739,705,683cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ12.45(s,1H),11.28(s,1H),10.38(s,1H),7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(d,J＝8.0Hz,1H),7.25(d,J＝12.0Hz,2H),7.00(d,J＝8.0Hz 1H),6.88(s,1H),3.19–3.12(m,2H),2.88–2.84(m,2H),1.84–1.67(m,4H)；13CNMR(150MHz,Acetone-d6)δ185.0,183.3,161.7,159.7,144.9,135.5(q,J＝30Hz),135.3(q,J＝30Hz),133.1,132.1,126.2,126.1,125.2,125.0,125.0,124.5(q,J＝270Hz),124.4(q,J＝270Hz),124.1,120.9,116.3,116.1,115.1,114.4,111.5,102.4,50.9,50.9,26.3,26.3；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C29H19Cl3F6N3O4 -,692.0351；found,692.0345。
实施例5化合物3-8的制备
使用化合物2(50.0mg,77.8μmol,1.0eq)作为反应起始物，K2CO3(108mg,0.778mmol,10.0eq)作为碱，2-巯基噻唑(91.2mg,0.778mmol,10.0eq)作为亲核试剂，DMF作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品用硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝8:1－3:1)纯化得淡黄粉末化合物3-8(40.6mg,72％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(Prep Silica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，流动相:正己烷:异丙醇(v:v)＝90:10－85:15－80:20)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：99.6474％；IR:(neat):νmax＝2960,1638,1603,1506,1406,1334,1173,11301,1055,1014,946,791cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ12.59(s,1H),10.88(s,1H),10.18(s,1H),8.09(d,J＝8.0Hz,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.61(d,J＝4.0Hz,1H),7.53(d,J＝4.0Hz,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,1H),7.34(s,1H),7.19(s,1H),7.16(s,1H),7.02-6.99(m,1H)；13C NMR(150MHz,Acetone-d6)δ187.1,184.0,161.7,161.5,159.0,144.4,136.7(q,J＝33Hz),135.4(q,J＝33Hz),134.1,134.0,131.8,127.3,125.9,125.8,124.9,124.4(q,J＝270Hz),124.3,124.3(q,J＝270Hz),123.8,122.9,121.5,120.7,116.3,116.3,115.5,114.6,111.0；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C27H11Cl3F6N3O4S2 -,723.9166；found,723.9161。
实施例6化合物3-9的制备
使用化合物2(60.1mg,92.9μmol,1.0eq)作为反应起始物，K2CO3(128mg,929μmol,10.0eq)作为碱，2-巯基噻吩(108mg,929μmol,10.0eq)作为亲核试剂，DMF作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝10:1－4:1)纯化得淡黄色粉末化合物3-9(54.5mg,81％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(PrepSilica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，正己烷:异丙醇(v:v)＝95:5－93:7－90:10)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：98.6780％；IR:(neat):νmax＝3230,2972,1636,1596,1505,1406,1333,1170,1129,1066,944,866,737,701cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ12.64(s,1H),10.92(s,1H),10.18(s,1H),8.02(d,J＝8.4Hz,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.53(dd,J＝5.2,2.0Hz,1H),7.32(t,J＝2.8Hz,2H),7.18(s,1H),7.03(s,1H),6.95(s,1H),6.94(d,J＝2.8Hz,1H),6.93–6.91(m,1H)；13C NMR(100MHz,Acetone-d6)δ187.0,184.6,161.8,159.5,136.5(q,J＝32.4Hz),135.5(q,J＝32.1Hz),135.1,134.0,132.5,132.2,131.9,131.1,130.0,128.9,128.5,125.6,125.5,124.4(q,J＝270.6Hz),124.3(q,J＝270.5Hz),124.3,122.0,121.6,121.0,116.5,116.1,115.5,114.7,111.2；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C28H12Cl3F6N2O4S2 -,722.9214；found,722.9203。
实施例7化合物3-10的制备
使用化合物2(100mg,155μmol,1.0eq)作为反应起始物，硫代吗啉(0.31μL,3.1mmol,20.0eq)作为亲核试剂，NMP作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝5:1)纯化得红色粉末化合物3-10(34.0mg,31％)，取其中部分样品进一步由丙酮重结晶纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度＝99.7515％；IR:(neat):νmax＝2924,1333,2173,1134,749cm–1；1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.67(d,J＝8.0Hz,1H),7.62(d,J＝8.0Hz,1H),7.25–5.23(m,2H),7.13(s,1H),6.93(d,J＝8.0Hz,1H),6.62(s,1H),3.19-3.14(m,2H),2.95–1.90(m,2H),2.48–2.43(m,2H),2.32–2.29(m,2H)；13C NMR(100MHz,Methanol-d4)δ185.5,185.4,160.0,159.2,146.2,136.2(q,J＝30Hz),135.4(q,J＝30Hz),132.8,132.1,128.5,127.5,126.4,125.9,125.6,125.6,125.0(q,J＝270Hz),124.7(q,J＝270Hz),124.2,121.2,116.5,114.7,114.6,111.6,107.8,53.7,53.7,28.7,28.7；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C28H17Cl3F6N3O4S-,709.9915；found,709.9909。
实施例8化合物3-11的制备
使用化合物2(100mg,155μmol,1.0eq)作为反应起始物、1-苄基哌嗪(516mg,3.1mmol,20.0eq)作为亲核试剂，NMP作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝8:1)纯化得红色粉末化合物3-11(51.0mg,42％)，取其中部分样品进一步由丙酮重结晶纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：99.9052％；IR:(neat):νmax＝2904,1674,1594,11332,1310,962,740cm–1；1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.67(d,J＝8.0Hz,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.32–7.27(m,5H),7.23(d,J＝8.0Hz,2H),7.11(s,1H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),6.61(s,1H),3.52(s,2H),3.03–3.00(m,2H),2.76–2.72(m,2H),2.36–2.30(m,4H)；13C NMR(150MHz,Methanol-d4)δ185.5,185.3,160.1,159.3,145.2,137.7,136.2(q,J＝30Hz),135.4(q,J＝30Hz),132.9,132.2,130.7,129.4,128.7,128.4,127.3,126.1,126.1,125.8,125.6,125.0(q,J＝270Hz),124.8(q,J＝270Hz),124.3,121.6,121.4,116.5,116.3,114.7,114.7,111.4,107.3,63.8,54.0,54.0,50.6,50.6；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C35H24Cll3F6N4O4 -,783.0773；found,783.0775。
实施例9化合物3-12的制备
将实施例6制备的化合物3-9(40.0mg,55.2μmol,1.0eq)与间氯过氧苯甲酸(78.7mg,456μmol,8.0eq)溶于4mL干燥的二氯甲烷中，于室温(25℃)反应过夜，LC-MS显示原料反应完全，向反应液中加入饱和Na2S2O3水溶液淬灭反应，二氯甲烷萃取(4×8mL)，无水硫酸钠干燥，抽滤浓缩得到粗品，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝4:1－2:1)纯化得黄色粉末化合物3-12(33.8mg,81％)。取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(Prep Silica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，正己烷:异丙醇＝90:10－85:15－80:20)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：99.1410％；IR:(neat):νmax＝3255,1638,1605,1504,1400,1330,1127,1066,946,869,725cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ12.50(s,1H),10.74(s,1H),10.08(s,1H),8.04(dd,J＝5.2,1.6Hz,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,1H),7.78(d,J＝8.0Hz,1H),7.58(dd,J＝4.0,1.6Hz,1H),7.32(s,1H),7.30(s,1H),7.22–7.17(m,2H),7.10(s,1H),7.08(d,J＝8.0Hz,1H)；13C NMR(100MHz,Acetone-d6)δ188.0,184.6,161.4,159.5,142.4,137.0,136.8(q,J＝31.6Hz),135.4(q,J＝32.2Hz),135.4,134.3,134.2,132.0,131.9,129.0,126.8,126.0,124.8,124.4(q,J＝271Hz),124.3(q,J＝270Hz),123.8,121.7,120.9,119.6,116.6,116.3,115.6,114.8,112.5；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C28H12Cl3F6N2O6S2 -,754.9112；found,754.9102。
实施例10化合物3-13的制备
参考实施例3中化合物3-5的合成方法，将化合物2(300.0mg,464μmol,1.0eq)、1,2,4-三氮唑(641mg,9.28mmol,20.0eq)、碘化亚铜(26.5mg,139μmol,0.3eq)、无水磷酸钾(197mg,928μmol,2.0eq)和N,N'-双(2,4,6-三甲氧基苯基)草酰胺(39.0mg,92.8μmol,0.2eq)溶于25mL干燥的DMSO中，于100℃反应，得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝4:1－1:1)纯化得淡黄色粉末化合物3-13(16.0mg,25％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(Prep Silica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，正己烷:异丙醇(v:v)＝90:10－85:15－80:20)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：99.3317％；IR:(neat):νmax＝3128,1735,1637,1603,1505,1331,1170,1126,1066,1003,946,866,781cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ12.44(s,1H),10.76(s,1H),10.11(s,1H),8.62(s,1H),8.13(s,1H),7.94(d,J＝8.0Hz,1H),7.90(d,J＝8.4Hz,1H),7.33(s,1H),7.31(s,1H),7.20(s,1H),7.16(s,1H),7.10(d,J＝8.0Hz,1H)；13C NMR(100MHz,Acetone-d6)δ186.9,184.3,161.3,159.7,154.2,148.0,136.5(q,J＝32.0Hz),135.7(q,J＝33.0Hz),133.7,134.2,132.1,129.9,129.7,128.5,125.9,125.7,124.8,123.1,120.1,120.3,116.5,116.3,115.3,114.9,111.6,111.4；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C26H11Cl3F6N5O4 -,675.9786；found,675.9780。
实施例11化合物3-14的制备
使用化合物2(50.0mg,77.8μmol,1.0eq)作为反应起始物，K2CO3(53.7mg,0.389mmol,5eq)作为碱，六氢吡啶(140μL,1.56mmol,20.0eq)作为亲核试剂，NMP作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝5:1)纯化得红色粉末化合物3-14(43.1mg,80％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(PrepSilica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，正己烷:异丙醇(v:v)＝90:10－85:15－80:20)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：99.4094％；IR:(neat):νmax＝2929 1637,1593,1483,1412,1337,1177,1135.79,1068,1028,949,864,797cm–1；1HNMR(400MHz,Acetone-d6)δ12.52(s,1H),11.07(s,1H),8.09(d,J＝8.0Hz,1H),7.82(d,J＝8.0Hz,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.31(s,1H),7.23(s,1H),6.96(d,J＝8.0Hz,1H),6.96(s,1H),2.91–2.86(m,1H),2.57–2.52(m,2H),1.39–1.29(m,7H)；13C NMR(150MHz,Acetone-d6)δ186.1,185.6,161.6,161.3,145.6,136.1(q,J＝30Hz),135.8(q,J＝30Hz),133.6,133.0,125.6,124.9,124.8,124.5(q,J＝270Hz),124.4,124.3(q,J＝270Hz),124.1,123.5,120.7,116.4,116.0,115.3,114.8,110.7,106.3,52.0,52.0,26.6,26.6,24.4；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C28H17Cl3F6N3O4 -,678.0194；found,678.0181。
实施例12化合物3-15的制备
使用化合物2(200mg,311μmol,1.0eq)作为反应起始物，K2CO3(216mg,1.56mmol,5.0eq)作为碱，N-异丁基哌嗪(0.963mL,6.22mmol,20.0eq)，作为亲核试剂，NMP作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝3:1)纯化得淡黄色粉末化合物3-15(113mg，49％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(PrepSilica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，正己烷:异丙醇(v:v)＝90:10－85:15－75:25)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：98.1727％；IR:(neat):νmax＝2927,2853,1636,1593,1481,1411,1331,1171,1128,1067,863cm–1；1H NMR(600MHz,Acetone-d6)δ8.06(d,J＝8.4Hz,1H),7.99(d,J＝8.4Hz,1H),7.30(d,J＝8.4Hz,1H),7.25(s,1H),7.16(s,1H),6.97(d,J＝7.8Hz,1H),6.91(m,1H),3.19(m,2H),3.00(m,2H),2.75(m,4H),2.56(m,2H),1.98(m,1H),0.92(d,J＝6.6Hz,6H)；13C NMR(100MHz,Acetone-d6)δ185.9,184.3,161.6,160.5,144.1,136.7,135.7(q,J＝32Hz),135.3(q,J＝32Hz),135.2,133.8,133.6,126.5,124.9,124.7,124.6(q,J＝270Hz),124.5(q,J＝270Hz),122.7,121.6,116.2,116.0,115.2,115.2,110.3,106.7,66.5,54.4,54.4,49.3,25.2,25.2,20.6,20.6；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C32H26Cl3F6N4O4S-,749.0929；found,749.0933。
实施例13化合物3-16的制备
使用化合物2(50.0mg,77.8μmol,1.0eq)作为反应起始物，K2CO3(108mg,0.778mmol,10.0eq)作为碱，2-巯基苯并噻唑(130mg,0.778mmol,10.0eq)作为亲核试剂，DMF作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品用硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝10:1－3:1)纯化得淡黄色粉末化合物3-35(41.6mg,69％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(Prep Silica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，流动相:正己烷:异丙醇(v:v)＝90:10－85:15－80:20)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：96.0824％；IR:(neat):νmax＝2924,2857,1638,1605,1414,1333,1173,1136,1068,946,929,868cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ10.88(s,1H),8.19(d,J＝8.0Hz,1H),7.83(d,J＝8.0Hz,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.45–7.40(m,2H),7.36–7.31(m,2H),7.25(s,1H),7.15(s,1H),6.93(d,J＝8.0Hz,1H)；13C NMR(100MHz,Acetone-d6)δ187.2,184.2,165.1,161.7,159.2,154.5,136.6(q,J＝33Hz),136.5,135.4(q,J＝32Hz),135.0,134.1,131.8,127.3,125.9,125.7,125.6,124.8,124.7,124.4,124.3(q,J＝270Hz),124.2(q,J＝270Hz),122.9,122.9,122.2,121.1,120.5,116.6,116.3,115.6,114.6,111.2；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C31H13Cl3F6N3O4S2 -,773.9323；found,773.9315。
将化合物3-35(90.1mg,0.116mmol,1.0eq)和间氯过氧苯甲酸(201mg,1.16mmol,10.0eq)溶于10mL干燥的二氯甲烷中，于室温(25℃)反应6天，LC-MS检测显示原料反应完全，向反应液中加入饱和Na2S2O3水溶液淬灭，二氯甲烷萃取(3×20mL)，无水硫酸钠干燥，抽滤浓缩得到粗品，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝8:1－4:1)纯化得黄色粉末化合物3-16(28.1mg,30％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(Prep Silica OBDTM5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，正己烷:异丙醇(v:v)＝90:10－85:15－80:20)纯化用于采集图谱及测定纯度数据，纯度：98.4919％。
IR:(neat):νmax＝3005,1275,1261,1174,797,764,750cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ12.5(s,1H),10.71(s,1H),10.21,(s,1H),8.23–8.21(m,1H),7.99(d,J＝8.0Hz,1H),7.93–7.90(m,1H),7.74(d,J＝8.0Hz,1H),7.67–7.63(m,2H),7.32(m,2H),7.21(s,1H),7.16(s,1H),7.10(d,J＝12.0Hz,1H)；13C NMR(150MHz,Acetone-d6)δ188.0,184.7,166.8,161.5,160.0,153.4,137.8,136.9(q,J＝30Hz),136.1,135.7(q,J＝30Hz),134.4,132.3,129.3,128.8,128.5,126.5,126.0,125.3,124.7,124.4(q,J＝270Hz),124.3(q,J＝271Hz),123.9,123.8,123.4,121.3,119.5,116.7,116.3,115.6,114.9,113.1；HRMS(m/z):[M-Na]-calcd.For C31H13Cl3F6N3O6S2 -,805.9221；found,805.9214。
实施例14化合物3-17的制备
使用化合物2(100mg,155μmol,1.0eq)作为反应起始物，N-甲基哌嗪(0.35mL,3.1mol,20.0eq)作为亲核试剂，NMP作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝8:1)纯化得淡黄色粉末化合物3-17(81.3mg,74％)，取其中部分样品进一步经甲醇重结晶纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：100％；IR:(neat):νmax＝2978,1484,1316,1130,1066,861,707cm–1；1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.70(t,J＝8.0Hz,2H),7.22(d,J＝8.0Hz,2H),7.12(s,1H),6.94(d,J＝8.0Hz,1H),6.64(s,1H),3.10-3.07(m,2H),2.87-2.86(m,2H),2.45–2.40(m,4H),2.34(s,3H)；13C NMR(150MHz,Methanol-d4)δ185.5,185.2,160.0,159.4,144.8,135.9(q,J＝30Hz),134.2(q,J＝30Hz),133.1,133.1,132.3,132.3,128.3,128.3,127.5,126.7,125.7,123.9,123.9,116.4,116.4,115.1,114.7,111.3,107.4,55.8,55.8,50.1,50.1,45.7；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C29H20Cl3F6N4O4 -,707.0460；found,707.0486。
实施例15化合物3-18的制备
使用化合物2(70mg,109μmol,1.0eq)作为反应起始物，K2CO3(105mg,763μmol,7.0eq)作为碱，噻唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-硫酮(Thiazolo[4,5-b]pyridine-2-thiol)(138mg,1.09mmol,10.0eq)作为亲核试剂，DMF作溶剂，75℃反应，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝5:1)纯化后得淡黄色粉末化合物3-18(35mg，41％)，取其中15mg经制备板纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：99.3992％；IR:(neat):νmax＝2927,2856,1638,1605,1505,1414,1384,1329,1170,1129,1067,944,928,867,782cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ10.9(s,1H),8.55(dd,J＝4.4,1.2Hz,1H),8.31(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),8.18(d,J＝8.4Hz,1H),7.58(d,J＝8Hz,1H),7.39(d,J＝8.4Hz,1H),7.35(s,1H),7.33-7.29(m,1H),7.26(s,1H),7.13(s,1H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H)；13C NMR(100MHz,Acetone-d6)δ187.3,184.0,170.9,165.0,161.7,159.2,148.9,136.6(q,J＝32Hz),135.6,135.2(q,J＝32Hz),134.2,132.1,131.4,130.4,127.7(q,J＝196Hz),127.5(q,J＝195Hz),126.4,125.7,125.0,124.7,124.6,124.4,123.0,120.7,120.6,116.5,116.2,115.6,115.0,111.0；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.ForC30H12Cl3F6N4O4S2 -,774.9275；found,774.9276。
实施例16化合物3-19的制备
使用化合物2(50.0mg,77.8μmol,1.0eq)作为反应起始物，K2CO3(108mg,0.778mmol,10.0eq)作为碱，叔丁基(3-巯基丙基)氨基甲酸(149mg,0.778mmol,10.0eq)作为亲核试剂，DMF作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品用硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝8:1)纯化得淡黄色粉末化合物3-29(46.0mg,74％)；IR:(neat):νmax＝3119.39,2979.28,2934.62,1681.17,1637.17,1595.35,1505.36,1405.48,1332.02,1305.32,1230.00,1128.56,1165,41,944.45,865.73,782.53,738.33,574.78cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ12.6(s,1H),10.96(s,1H),10.1(s,1H),8.07(d,J＝8.0Hz,1H),7.64(d,J＝8.0Hz,1H),7.35-7.32(m,2H),7.16(s,1H),7.04(s,1H),6.94(d,J＝8.0Hz,1H),3.00(q,J＝20Hz,2H),2.70–2.65(m,1H),2.55–2.50(m,1H),1.56–1.46(m,2H),1.40–1.38(m,12H)；13C NMR(150MHz,Acetone-d6)δ186.7,184.6,161.7,159.3,156.7,136.3(q,J＝30Hz),135.3(q,J＝30Hz),134.0,132.4,132.4,131.9,126.0,125.8,125.6,124.5,124.4(q,J＝270Hz),124.4(q,J＝270Hz),122.4,122.0,120.7,116.4,116.0,115.4,114.5,110.8,78.6,39.5,33.7,30.9,28.6,28.6,28.6；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.ForC32H256Cl3F6N3O6S-,798.0439；found,798.0429。
将化合物3-29(140mg,0.175mmol,1.0eq)溶于13mL二氯甲烷中，向其中加入1.3mL三氟甲磺酸，于25℃反应1h，TLC检测原料反应完全，向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，用二氯甲烷萃取(3×15mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝20:1)纯化得淡黄色粉末化合物3-19(83.3mg,68％)，取部分样品进一步用正相制备型HPLC(Prep Silica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，正己烷:异丙醇(v:v)＝80:20－75:25－70:30)纯化用于采集图谱及测定纯度。纯度：100.0000％；IR:(neat):νmax＝2961,1958,1507,1407,1332,1258,1068,1014,945,867,796cm–1；1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.92(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.12–7.10(m,2H),7.07(s,1H),6.95(d,J＝8.0Hz,1H),6.85(s,1H),2.81–2.78(m,2H),2.66–2.65(m,2H),1.75–1.71,(m,2H)；13C NMR(150MHz,Methanol-d4)δ187.0,184.3,160.4,160.0,135.8(q,J＝30Hz),135.2(q,J＝30Hz),134.5,133.9,133.1,130.7,130.3,129.52,127.2,127.1,125.3,125.2(q,J＝270Hz),124.9(q,J＝270Hz),122.0,120.2,116.8,115.9,115.0,114.96,111.3,39.0,32.3,28.3；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C27H17Cl3F6N3O4S-,697.9915；found,697.9910。
实施例17化合物3-20的制备
使用化合物2(90.2mg,141μmol,1.0eq)作为反应起始物，K2CO3(39mg,282μmol,2.0eq)作为碱，2-叔丁氧羰基氨基乙硫醇(250mg,1.41mmol,10.0eq)作为亲核试剂，DMF作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品用硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝10:1－2:1)纯化得淡黄色粉末化合物3-30(80.1mg,72％)；IR:(neat):νmax＝2977,1688,1637,1600,1505,1406,1332,1168,1130,1066,944,866,738cm–1；1H NMR(600MHz,Acetone-d6)δ12.58(s,1H),10.96(s,1H),10.08(s,1H),8.05(d,J＝7.8Hz,1H),7.62(d,J＝7.8Hz,1H),7.34(d,J＝8.4Hz,1H),7.32(s,1H),7.16(s,1H),7.06(s,1H),6.96(d,J＝7.8Hz,1H),5.96(s,1H),3.09-3.00(m,2H),2.81-2.77(m,1H),2.64-2.59(m,1H),1.37(s,9H)；13C NMR(150MHz,Acetone-d6)δ186.6,184.5,161.7,159.2,156.3,136.3(q,J＝32.4Hz),135.2(q,J＝32.6Hz),133.9,132.5,131.9,131.8,127.1,126.0,125.7,124.4,124.4(q,J＝270Hz),124.3(q,J＝271.5Hz),122.3,122.0,120.7,116.4,116.1,115.5,114.5,110.9,79.0,41.0,35.8,28.5,28.5,28.5；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C31H22Cl3F6N3O6S-,784.0283；found,784.0269。
将化合物3-30(80.0mg,102μmol,1.0eq)溶于8mL二氯甲烷中，向其中加入0.8mL三氟甲磺酸，于25℃反应5h，TLC检测原料反应完全，向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，用二氯甲烷萃取(4×10mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤浓缩得到粗品，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝20:1,0.1％氨水)纯化得淡黄色粉末化合物3-20(8.99mg,13％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(Prep Silica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，正己烷:异丙醇(v:v)＝85:15－80:20－75:25)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度＝99.8986％；IR:(neat):νmax＝2936,1601,1506,1408,1331,1170,1128,944,866,738cm–1；1H NMR(600MHz,Methanol-d4)δ7.74(d,J＝8.4Hz,1H),7.67(d,J＝8.4Hz,1H),7.15(s,1H),7.14(s,1H),7.05(s,1H),6.94(d,J＝7.8Hz,1H),6.84(s,1H),2.98–2.89(m,2H),2.87–2.76(m,2H)；13C NMR(150MHz,Methanol-d4)δ186.8,184.4,160.0,159.3,135.9(q,J＝32.55Hz),135.2(q,J＝32.1Hz),134.7,133.0,132.8,129.5,129.0,127.4,126.6,125.1(q,J＝271.5Hz),124.9(q,J＝271.5Hz),124.0,122.5,121.9,120.7,116.2,115.9,115.5,114.9,111.3,40.5,33.7；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C26H15Cl3F6N3O4S-,683.9759；found,683.9748。
实施例18化合物3-21的制备
使用化合物2(50.1mg,77.8μmol,1.0eq)作为反应起始物，K2CO3(53.7mg,0.389mmol,5.0eq)作为碱，无水哌嗪(134mg,1.56mmol,20.0eq)作为亲核试剂，NMP作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝20:1)纯化得黄色粉末化合物3-21(31.2mg,58％)，取其中30mg加入5mL甲醇重结晶，得到13mg淡黄色纯品以及17mg母液，采集图谱并测定纯度数据。纯品纯度：99.2190％；IR:(neat):νmax＝2849,1595,1578,1474,1377,1342,1006,860cm–1；1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.99(d,J＝8.0Hz,1H),7.73(d,J＝8.0Hz,1H),7.17–7.15(m,2H),7.10(s,1H),6.98(d,J＝8.4Hz,1H),6.72(s,1H),3.29-3.16(m,4H),2.93–2.85(m,4H)；13C NMR(150MHz,Methanol-d4)δ185.9,184.7,160.2,159.9,144.2,135.5(q,J＝30Hz),135.4(q,J＝30Hz),134.0,132.7,132.7,129.9,128.7,127.9,126.3,125.2(q,J＝270Hz),125.0(q,J＝270Hz),124.9,122.4,116.5,116.1,115.3,114.8,110.9,107.6,48.7,48.7,45.6,45.6；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C28H18Cl3F6N4O4 -,693.0303；found,693.0301。
实施例19化合物3-22的制备
使用化合物2(200mg,311μmol,1.0eq)作为反应起始物，1-(4-吡啶基)哌嗪(295μL,4.67mmol,15.0eq)作为亲核试剂，NMP作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝30:1)纯化得淡黄色粉末化合物3-22(98mg，41％)。纯度＝99.6606％；IR:(neat):νmax＝2925,1645,1474,1331,1221,1121,941,926,873cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ8.29(d,J＝8Hz,1H),8.05(d,J＝7.6Hz,3H),7.29–7.24(m,4H),7.16(s,1H),7.09(s,1H),6.99(d,J＝8.8Hz,1H),3.79(d,J＝4.8Hz,4H),2.96(d,J＝5.2Hz,4H)；13C NMR(100MHz,Acetone-d6)δ187.8,183.0,161.5,160.0,156.8,144.01,136.4(q,J＝32Hz),134.8(q,J＝32Hz),134.7,134.7,134.2,132.3,131.5,130.3,128.7,125.0(q,J＝270Hz),124.6,124.4(q,J＝271Hz),124.2,121.4,118.4,117.1,116.2,115.3,114.3,109.8,109.67,108.4,108.4,49.5,49.5,46.3,46.3；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C33H21Cl3F6N5O4S-,770.0569；found,770.0601。
实施例20化合物3-23的制备
使用化合物2(50.0mg,77.8μmol,1.0eq)作为反应起始物，K2CO3(108mg,0.778mmol,10.0eq)作为碱，2-羟基乙硫醇(55.2μL,0.778mmol,10.0eq)作为亲核试剂，DMF作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品用硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝4:1-3:1)纯化得黄色粉末化合物3-31(40.3mg,72％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(Prep Silica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，流动相：正己烷:异丙醇(v:v)＝90:10－85:15－80:20)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：99.8935％；IR:(neat):νmax＝2924,1637,1598,1506,1407,1333,1171,1129,944,866cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ12.6(s,1H),10.96(s,1H),10.14(s,1H),8.06(d,J＝8.0Hz,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.35–7.32(m,2H),7.15(s,1H),7.04(s,1H),6.94(dd,J＝0.8,8.0Hz,1H),3.87(t,J＝5.2Hz,1H),3.49–3.43(m,2H),2.80–2.74(m,1H),2.68–2.62(m,1H)；13C NMR(150MHz,Acetone-d6)δ186.6,184.5,161.7,159.3,136.3(q,J＝30Hz),135.2(q,J＝30Hz),134.0,132.6,132.3,131.8,126.0,125.8,125.6,124.5,124.4(q,J＝270Hz),124.3(q,J＝270Hz),122.0,122.0,120.7,116.5,116.0,115.5,114.5,110.8,61.7,38.7；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C26H14Cl3F6N2O5S-,684.9599；found,684.9593。
将化合物3-31(80.2mg,0.117mmol,1.0eq)和间氯过氧苯甲酸(201mg,1.17mmol,10.0eq)溶于10mL干燥二氯甲烷中，于25℃反应24h，LC-MS检测显示原料反应完全，向反应液中加入饱和Na2S2O3水溶液淬灭，二氯甲烷萃取(3×20mL)，无水硫酸钠干燥，抽滤浓缩得到粗品，粗品经硅胶柱层析(石油醚:丙酮(v:v)＝3:1－1:1)纯化得黄色粉末化合物3-23(41.9mg,50％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(Prep Silica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，正己烷:异丙醇(v:v)＝85:15－80:20－75:25)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：99.3794％；IR:(neat):νmax＝2925,1606,1410,1331,1169,1138,1068,947,750,626cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ10.79(s,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.33–7.20(m,2H),7.18(s,1H),7.12–7.10(m,2H),4.00–3.99(m,1H),3.93(q,J＝20Hz,2H),3.51–3.416(m,2H)；13C NMR(150MHz,Acetone-d6)δ188.2,184.5,161.6,159.0,136.8(q,J＝33Hz),135.2(q,J＝31.5Hz),134.34,134.3,131.9,131.0,126.9,126.5,124.7,124.4(q,J＝271.5Hz),124.3,124.3(q,J＝271.5Hz),121.2,121.0,119.5,116.6,116.4,115.5,114.7,112.6,59.9,56.0；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C26H14Cl3F6N2O7S-,716.9597；found,716.9493。
实施例21化合物3-24的制备
使用化合物2(100mg,155μmol,1.0eq)作为反应起始物，别嘌呤(423mg,3.1mmol,20.0eq)作为亲核试剂，NMP作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚:丙酮(v:v)＝8:1–4:1/v:v)纯化得红色粉末化合物3-24(57.7mg,50％)，取其中部分样品进一步由丙酮重结晶纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：99.7027％；IR:(neat):νmax＝2925,1725,1605,1408,1333,1132cm–1；1H NMR(600MHz,Acetone-d6)δ10.81(m,2H),8.52(s,1H),8.04–8.02(m,2H),7.89(d,J＝6.0Hz,1H),7.33–7.31(m,2H),7.20(s,1H),7.15(s,1H),7.08(d,J＝6.0Hz,1H)；13C NMR(100MHz,Acetone-d6)δ186.8,184.3,161.2,161.1,159.7,158.6,149.0,136.4(q,J＝33Hz),135.5(q,J＝33Hz),134.0,133.7,132.3,132.2,129.6,126.2,126.0,124.9,124.5(q,J＝270Hz),124.4(q,J＝271Hz)；123.2,120.9,120.3,116.5,116.1,115.4,115.0,111.3,111.2,110.1；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C29H12Cl3F6N6O5 -,742.9844；found,742.9844。
实施例22化合物3-25的制备
使用化合物2(30.0mg,46.4μmol,1.0eq)作为反应起始物，K2CO3(52.1mg,464μmol,10.0eq)作为碱，3-巯基-1-丙醇(40.1μL,464μmol,10.0eq)作为亲核试剂，DMF作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝5:1－3:1)纯化得淡黄色粉末化合物3-32(20.9mg,64％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(Prep Silica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，流动相：正己烷:异丙醇(v:v)＝90:10－85:15－80:20)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：99.4647％；IR:(neat):νmax＝3132,2942,2885,1702,1636,1597,1505,1405,1332,1127,1066,944,866,738cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ12.59(s,1H),10.98(s,1H),10.15(s,1H),8.08(d,J＝8.4Hz,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.33(s,1H),7.16(s,1H),7.05(s,1H),6.93(d,J＝8.4Hz,1H),3.59(t,J＝5.2Hz,1H),3.50-3.39(m,2H),2.78-2.71(m,1H),2.61-2.54(m,1H),1.61-1.41(m,2H)；13C NMR(150MHz,Acetone-d6)δ186.7,184.7,161.7,159.5,136.3(q,J＝32.2Hz),135.3(q,J＝32.2Hz),134.0,132.5,132.3,131.9,125.9,125.8,125.4,124.4(q,J＝270Hz),124.4,123.4(q,J＝270Hz),122.4,122.1,120.8,116.5,116.0,115.5,114.5,110.7,60.1,33.3,33.0；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C27H16Cl3F6N2O5S-,698.9755；found,698.9742。
将化合物3-32(40.0mg,57.1μmol,1.0eq)和间氯过氧苯甲酸(98.4mg,571μmol,10.0eq)溶于4mL干燥二氯甲烷中，于25℃反应过夜，次日早上LC-MS检测显示原料反应完全，向反应液中加入饱和Na2S2O3水溶液淬灭，二氯甲烷萃取(4×8mL)，无水硫酸钠干燥，抽滤浓缩得到粗品，粗品经硅胶柱层析(石油醚:丙酮(v:v)＝3:1－1:1)纯化得黄色粉末化合物3-25(21.3mg,51％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(Prep Silica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，正己烷:异丙醇(v:v)＝90:10－85:15－80:20)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度＝98.6657％；IR:(neat):νmax＝3457,3057,2971,2891,1638,1607,1505,1404,1327,1157,1117,1064,944,784,735cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ12.42(s,1H),10.79(s,1H),9.97(s,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.33(s,1H),7.31(s,1H),7.18(s,1H),7.12(s,1H),7.11(d,J＝4.0Hz,1H),3.86(t,J＝4.8Hz,1H),3.61(q,J＝5.6Hz,2H),3.44–3.24(m,2H),1.94–1.83(m,2H)；13C NMR(100MHz,Acetone-d6)δ188.1,184.5,161.5,159.0,136.8(q,J＝32.4Hz),135.3(q,J＝32.3Hz),134.5,134.2,131.8,130.6,126.8,126.5,124.8,124.4(q,J＝271Hz),124.4,124.3(q,J＝271Hz),121.3,121.1,119.5,116.6,116.5,115.7,114.7,112.7,60.2,54.8,26.2；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C27H16Cl3F6N2O7S-,730.9653；found,730.9647。
实施例23化合物3-26的制备
将化合物3-21(100mg,0.144mmol,1.0eq)溶于5mL乙腈中，加入K2CO3(99.4mg,0.720mmol,5.0eq),溴乙酸乙酯(20.0μL,0.173mmol,1.2eq)，25℃搅拌4h,TLC显示反应完全，在反应液中加入饱和NH4Cl水溶液淬灭。用乙酸乙酯萃取(3×15mL)，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗品，粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝5:1)纯化得黄色粉末化合物3-33(76.5mg,68％)。IR:(neat):νmax＝2927,2854.,1747,1636,1595,1481,1334,1201,1170,1131,1067.,863,709cm–1；1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ11.01(s,1H),8.09(d,J＝8.0Hz,1H),7.83(d,J＝12.0Hz,1H),7.33(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(s,1H),7.22(s,1H),6.99–6.97(m,1H),6.94(s,1H),4.13(q,J＝8Hz,2H),3.19(s,2H),2.98-2.97(m,2H),2.65–2.62(m,2H),2.46–2.41(m,4H),1.23(t,J＝12Hz,3H)；13C NMR(150MHz,Acetone-d6)δ185.8,185.8,170.4,161.6,160.9,144.4,136.0(q,J＝30Hz),135.8(q,J＝30Hz),133.6,132.9,125.9,124.8,124.6,124.5(q,J＝270Hz),124.3(q,J＝270Hz),123.9,123.9,120.8,116.4,116.3,116.0,115.2,114.9,110.6,106.6,60.7,59.5,53.1,53.1,50.8,50.8,14.6；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C32H24Cl3F6N4O6 -,779.0671；found,779.0657。
将化合物3-33(100mg,0.128mmol,1.0eq)溶于8mL二氯甲烷中，向其中加入1.5mL1M NaOH水溶液，于25℃反应2h，LC-MS显示原料反应完全，加入稀盐酸淬灭反应,用二氯甲烷液萃取(3×15mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤浓缩得到粗品，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝10:1)纯化得黄色粉末化合物3-26(54.0mg,56％)，取其中30mg加入5mL丙酮重结晶，得到7mg淡黄色纯品化合物3-26以及22mg母液，采集图谱并测定纯度数据。纯品纯度：99.2646％；IR:(neat):νmax＝2923,2854,1600,1333,1259,1173,1020,798cm–1；1H NMR(600MHz,Methanol-d4)δ7.67(d,J＝12.0Hz,1H),7.58(d,J＝12.0Hz,1H),7.24-7.23(m,2H),7.14(s,1H),6.99(d,J＝12.0Hz,1H),6.65(s,1H),3.56(s,2H),3.31-3.28(m,2H),3.13–3.07(m,6H)；13C NMR(150MHz,Methanol-d4)δ185.6,184.8,169.7,159.2,158.8,143.2,135.8(q,J＝30Hz),135.4(q,J＝30Hz),132.5,132.2,128.4,128.1,127.3,125.8,125.2,125.0(q,J＝270Hz),124.8(q,J＝270Hz),123.7,121.3,116.8,116.5,114.7,114.4,111.5,108.0,59.8,53.9,53.9,48.6,48.6；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C30H20Cl3F6N4O6 -,751.0358；found,751.0349。
实施例24化合物3-27的制备
参照通用合成法制备化合物3-34粗品，使用化合物2(30.0mg,46.4μmol,1.0eq)作为反应起始物，K2CO3(52.0mg,464μmol,10.0eq)作为碱，巯基乙酸乙酯(152μL,1.39mmol,30.0eq)作为亲核试剂，溶于3mL干燥乙腈和0.3mL DMF的混合溶剂，先在室温搅拌过夜，再于74℃反应至反应完全。粗品经硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯(v:v)＝8:1－6:1)纯化得淡黄色粉末化合物3-34 20.6mg，61％)，取其中部分样品进一步由以正相制备型HPLC(PrepSilica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，正己烷:异丙醇(v:v)＝95:5－93:7－90:10)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：98.6505％；IR:(neat):νmax＝3210,2981,1732,1710,1637,1598,1505,1407,1333,1170,1127,1066,945,866,789cm–1；
1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ10.96(s,1H),8.05(d,J＝8.0Hz,1H),7.64(d,J＝8.0Hz,1H),7.35(d,J＝8.8Hz,1H),7.33(s,1H),7.16(s,1H),7.05(s,1H),6.96(d,J＝8.4Hz,1H),4.02(q,J＝6.8Hz,2H),3.33(q,J＝16.0Hz,2H),1.16(t,J＝7.2Hz,3H)；13C NMR(100MHz,Acetone-d6)δ186.8,184.5,168.6,161.8,159.3,136.4(q,J＝48.45Hz),135.3(q,J＝48.45Hz),134.0,132.8,131.9,130.7,125.8,125.6,122.5,124.4(q,J＝270.6Hz),124.3(q,J＝270.5Hz),124.3,122.8,121.7,120.8,116.5,116.1,115.5,114.6,110.9,62.1,37.3,14.3；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C28H16Cl3F6N2O6S-,726.9704；found,726.9692。
将化合物3-34(39.9mg,54.9μmol,1.0eq)溶于2mL二氯甲烷中，向其中加入0.3mL2N NaOH水溶液，于25℃反应2h，LC-MS显示原料反应完全，稀盐酸调节pH＝2-3，用氯仿:异丙醇＝10:1(v/v)的混合溶液萃取多次，直至TLC显示水相已萃取完全，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤浓缩得到粗品，粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝50:1－20:1)纯化得淡黄色粉末化合物3-27(13.2mg,34％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(Prep Silica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，正己烷:异丙醇(v:v)＝85:15－80:20－75:25)纯化用于采集图谱及测定纯度数据。纯度：99.2190％；IR:(neat):νmax＝3164,2974,1709,1638,1595,1505,1407,1333,1129,1066,988,866cm–1；1HNMR(600MHz,Acetone-d6)δ12.54(s,1H),10.97(s,1H),10.11(s,1H),8.03(d,J＝7.8Hz,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,1H),7.34(d,J＝8.4Hz,1H),7.32(s,1H),7.17(s,1H),7.03(s,1H),6.96(d,J＝8.4Hz,1H),3.42(dd,J＝44.4,15.0Hz,2H)；13C NMR(150MHz,Acetone-d6)δ186.8,184.4,169.5,161.8,159.2,136.4(q,J＝32.25Hz),135.2(q,J＝32.25Hz),134.0,132.7,131.8,131.2,127.1,125.9,125.7,124.4(q,J＝271.5Hz),124.4(q,J＝270Hz),124.3,122.5,121.8,120.7,116.4,116.1,115.5,114.5,111.1,37.3；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C26H12Cl3F6N2O6S-,698.9391；found,698.9344。
实施例25化合物3-28的制备
使用化合物2(20.0mg,31.0μmol,1.0eq)作为反应起始物，K2CO3(52.0mg,310μmol,10.0eq)作为碱，3-巯基丙酸(54.0μL,620μmol,20.0eq)作为亲核试剂，DMF作为溶剂，参考通用合成方法制备得到粗品。粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇(v:v)＝45:1－40:1)纯化得淡黄色粉末3-28(15.5mg,70％)，取其中部分样品进一步由正相制备型HPLC(PrepSilica OBDTM 5μm,30×100mm column,流速：25mL/min,温度：25℃，正己烷:异丙醇(v:v)＝90:10－85:15－80:20)纯化用于采集图谱及测定纯度数据，纯度：96.3462％；IR:(neat):νmax＝3245,2922,2854,1637,1599,1408,1335,1172,1133,1067,946,866,784cm–1；1H NMR(600MHz,Acetone-d6)δ10.94(s,1H),8.07(d,J＝8.4Hz,1H),7.66(d,J＝7.8Hz,1H),7.34(d,J＝8.4Hz,1H),7.31(s,1H),7.14(s,1H),7.04(s,1H),6.94(d,J＝7.8Hz,1H),2.86-2.70(m,2H),2.46-2.34(m,2H)；13C NMR(100MHz,Acetone-d6)δ186.7,184.3,172.4,161.6,159.2,136.2(q,J＝32.2Hz),135.1(q,J＝32.2Hz),134.1,132.0,131.9,128.5,126.3,126.0,125.7,124.6,123.1,122.4,121.8,120.9,120.4,116.5,115.9,115.4,114.7,110.8,34.6,31.5；HRMS(m/z):[M-H]-calcd.For C27H14Cl3F6N2O6S-,712.9548；found,712.9549。
实施例26体外抗菌活性实验
采用的实验菌株：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)8株(以上菌株均为2016-2018年成都地区收集的临床分离致病菌，在收集单位经VITEK-60自动微生物鉴定仪鉴定再经本实验室常规方法重新鉴定)；质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC29213(商购，本实验室保存)。
培养条件和菌液准备：常规MH培养基(购自北京奥博星生物技术有限责任公司，批号：20180216。配方：蛋白胨1％，牛肉粉0.3％，NaCl 0.5％，琼脂粉1.2％)，35-37℃孵育24h，每株细菌在实验前经琼脂平板划法进行单菌落分离纯化，37℃培养后挑取单菌落，用麦氏比浊法配制0.5麦氏单位左右(约108CFU/ml)的混悬菌液，再将此混悬菌液进行100倍稀释，使菌悬液最终浓度约为106CFU/ml。。
实验方法：采取美国国家临床实验室标准化委员会(Clinical and LaboratoryStandards Institute CLSI)推荐的琼脂二倍稀释法。
一般设定实验药物浓度按二倍稀释在0.008～128μg/ml范围内，根据实验结果再适当调整。本实验中供试药物包括本发明实施例1-25制备的化合物、化合物2和万古霉素。本发明实施例1-25制备的化合物和化合物2在临用前用DMSO助溶配制成1.92mg/ml浓度备用。万古霉素为注射用盐酸万古霉素(购自大连美仑生物技术有限公司，M0208A)，临用前用无菌蒸馏水配制成1.92mg/ml浓度备用。
于无菌平皿内加入1ml 1.92mg/ml供试药液，再加入融化的50℃MH培养基14ml，混匀，然后进行二倍稀释，使其每皿内所含药物终浓度依次为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03、0.015、0.008μg/ml，冷却。用多点接种仪接种稀释后的菌液于上述制备好的MH琼脂平皿上，每点接种量约104CFU，盖上皿盖，按7.3项下的培养条件，放在培养箱中培养，培养结束后，进行肉眼观察，平皿内未见细菌生长的最低样品浓度即为其最低抑菌浓度(MIC)。每次实验均用标准菌株作为质控菌，同时设立不加任何样品的空白菌对照和加DMSO的溶媒菌对照。结果见表1。
表1化合物对临床分离MRSA菌株的抗菌试验结果
结果显示，本发明实施例制备的化合物3-4至化合物3-28对耐甲氧西林金黄色葡球菌(MRSA)具有较强的抗菌活性。
最后应当说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者对部分技术特征进行等同替换；而不脱离本发明技术方案的精神，其均应涵盖在本发明请求保护的技术方案范围当中。
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