Osnop2蛋白及其编码基因关于耐逆性和产量相关的应用

文档序号:1900237 发布日期:2021-11-30 浏览:6次 >En<

阅读说明:本技术 Osnop2蛋白及其编码基因关于耐逆性和产量相关的应用 (Osnop2 protein and application of coding gene thereof in stress tolerance and yield correlation ) 是由 谷晓峰 李秀兰 王晓蕾 于 2021-09-14 设计创作,主要内容包括:本发明公开了Osnop2蛋白及其编码基因关于耐逆性和产量相关的应用。本发明保护Osnop2蛋白在调控植物的耐逆性中的应用。本发明还保护抑制Osnop2基因的物质和/或抑制Osnop2蛋白的物质在植物育种的应用,所述育种的目标为如下:培育耐逆性增强的植物。本发明还保护抑制Osnop2基因的物质和/或抑制Osnop2蛋白的物质在植物育种的应用,所述育种的目标为如下:培育产量性状增强的植物。本发明可用于植物性状改良,对于植物育种特别是水稻育种,具有重大的应用推广价值。(The invention discloses an Osnop2 protein and application of a coding gene thereof related to stress tolerance and yield. The invention protects the application of the Osnop2 protein in regulating and controlling the stress tolerance of plants. The invention also protects the application of a substance inhibiting the Osnop2 gene and/or a substance inhibiting the Osnop2 protein in plant breeding, and the breeding aims are as follows: and (5) cultivating the plants with enhanced stress tolerance. The invention also protects the application of a substance inhibiting the Osnop2 gene and/or a substance inhibiting the Osnop2 protein in plant breeding, and the breeding aims are as follows: and (5) cultivating plants with enhanced yield traits. The invention can be used for improving plant traits and has great application and popularization values for plant breeding, particularly rice breeding.)

Osnop2蛋白及其编码基因关于耐逆性和产量相关的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域,涉及Osnop2蛋白及其编码基因关于耐逆性和产量相关的应用。

背景技术

水稻原产于中国和印度。是世界主要粮食作物之一。中国水稻播种面占全国粮食作物的1/4,而产量则占一半以上。栽培历史已有14000~18000年。为重要粮食作物;除食用颖果外,可制淀粉、酿酒、制醋,米糠可制糖、榨油、提取糠醛,供工业及医药用;稻秆为良好饲料及造纸原料和编织材料,谷芽和稻根可供药用。

近年来,生物技术的迅速发展大大地推动了植物育种研究手段的革新与研究水平的不断提高,植物抗病虫、抗除草剂生物技术育种已开始进入实用化阶段。利用生物技术手段将外源杀虫、抗除草剂基因导入植物基因组内,打破了植物种属甚至物种之间难以杂交的天然屏障,实现了抗虫、抗除草剂基因的转移,从而使植物迅速地、定向地获得抗虫性及机械化除草,同时又能保留原有的良好农艺性状。由于转基因玉米的每株植株都具有相当程度的抗性,因而其抗虫、抗除草剂效果比人工防治防治效果要好且稳定,还能够节省人力和物力的投入,有效的节约社会资源。其他农艺性状改良转基因植物进展及应用不如抗虫、抗除草剂性状理想,主要是由于没有优良的性状改良基因,大多农艺性状主要是有一些微效的多基因控制所致,一直没有理想的基因进行操作。

发明内容

本发明的目的是提供Osnop2蛋白及其编码基因关于耐逆性和产量相关的应用。

本发明保护Osnop2蛋白在调控植物的耐逆性中的应用。

所述调控为负调控,即Osnop2蛋白含量增高、植物的耐逆性降低。

所述调控为负调控,即Osnop2蛋白含量降低、植物的耐逆性增强。

本发明还保护抑制Osnop2基因的物质和/或抑制Osnop2蛋白的物质在植物育种的应用,所述育种的目标为如下:培育耐逆性增强的植物。

本发明还保护一种培育耐逆性增强的植物的植物育种方法,包括如下步骤:对受体植物中的Osnop2基因进行基因编辑,得到基因编辑植株;与所述受体植物相比,所述基因编辑植株的耐逆性增强。

本发明还保护Osnop2蛋白在调控植物产量性状中的应用。

所述调控为负调控,即Osnop2蛋白含量增高、植物的产量性状降低。

所述调控为负调控,即Osnop2蛋白含量降低、植物的产量性状增强。

本发明还保护抑制Osnop2基因的物质和/或抑制Osnop2蛋白的物质在植物育种的应用,所述育种的目标为如下:培育产量性状增强的植物。

本发明还保护一种培育产量性状增强的植物的植物育种方法,包括如下步骤:对受体植物中的Osnop2基因进行基因编辑,得到基因编辑植株;与所述受体植物相比,所述基因编辑植株的产量性状增强。

以上任一所述抑制Osnop2基因为抑制Osnop2基因的活性和/或降低Osnop2基因的丰度。降低Osnop2基因的丰度可通过使RNA不能被转录实现。降低Osnop2基因的丰度可通过基因编辑实现。所述基因编辑具体可为基于Cas9系统的基因编辑。Cas9系统中,sgRNA中的靶序列结合区如序列表的序列7所示。Cas9系统中,sgRNA如序列表的序列6所示。所述基因编辑具体通过在植物中导入重组质粒SG2027实现。

以上任一所述抑制Osnop2蛋白为抑制Osnop2蛋白的活性和/或降低Osnop2蛋白的丰度。所述降低Osnop2蛋白的丰度可通过使Osnop2蛋白不能被表达实现。

以上任一所述基因编辑具体可为基于Cas9系统的基因编辑。对Osnop2基因进行基因编辑的物质具体可为sgRNA和Cas9蛋白。对Osnop2基因进行基因编辑的物质具体可为编码sgRNA的DNA分子和编码Cas9蛋白的DNA分子。对Osnop2基因进行基因编辑的物质具体可为具有编码sgRNA的DNA分子的表达载体和具有编码Cas9蛋白的DNA分子的表达载体。对Osnop2基因进行基因编辑的物质具体可为具有编码sgRNA的DNA分子和编码Cas9蛋白的DNA分子的表达载体。sgRNA中的靶序列结合区如序列表的序列7所示。sgRNA如序列表的序列6所示。编码sgRNA的DNA分子如序列表的序列5所示。对Osnop2基因进行基因编辑的物质具体为重组质粒SG2027。

本发明还保护一种制备耐逆性增强的植物的方法,包括如下步骤:用“TCGGACGACGCCTCCTTG”或“TCGGACGACGCCTCCTTTTGG”替换植物基因组DNA中的Osnop2基因中的“TCGGACGACGCCTCCTTTG”,得到耐逆性增强的植物。

所述替换为纯合型替换,即同源染色体中发生相同的替换。

本发明还保护一种制备产量性状增强的植物的方法,包括如下步骤:用“TCGGACGACGCCTCCTTG”或“TCGGACGACGCCTCCTTTTGG”替换植物基因组DNA中的Osnop2基因中的“TCGGACGACGCCTCCTTTG”,得到产量性状增强的植物。

所述替换为纯合型替换,即同源染色体中发生相同的替换。

所述耐逆性为对热胁迫的耐逆性和/或对盐胁迫的耐逆性。

所述产量性状增强体现为如下指标中的至少一种或任意组合:穗长增加、二级枝梗数量增多、穗粒数增加、粒重增加、粒长增加和粒宽增加。

以上任一所述Osnop2蛋白为如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4):

(a1)序列表中序列1所示的蛋白质;

(a2)在(a1)所述蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白;

(a3)将(a1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与植物耐逆性相关的蛋白质;

(a4)来源于水稻且与(a1)具有98%以上同一性且与植物耐逆性相关的蛋白质。

以上任一所述Osnop2基因为编码Osnop2蛋白的基因。

以上任一所述Osnop2基因为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4):

(b1)编码区如序列表中序列2所示的DNA分子;

(b2)序列表中序列3所示的DNA分子;

(b3)来源于水稻且与(b1)或(b2)具有95%以上同一性且编码所述蛋白质的DNA分子;

(b4)在严格条件下与(b1)或(b2)限定的核苷酸序列杂交且编码所述蛋白质的DNA分子。

以上任一所述Cas9蛋白为序列表的序列4中第2696-6967位核苷酸编码的蛋白质。

以上任一所述重组质粒SG2027如序列表的序列4所示。

以上任一所述植物为单子叶植物或双子叶植物。以上任一所述植物为禾本科植物。以上任一所述植物为稻属植物。以上任一所述植物为水稻,例如水稻日本晴。

本发明可用于植物性状改良,对于植物育种特别是水稻育种,具有重大的应用推广价值。

附图说明

图1为重组质粒SG2027的结构示意图。

图2为Osnop2#1植株和Osnop2#2植株突变位点及其周边核苷酸的测序结果。

图3为osnop2不同株系以及互补材料的穗部表型。

图4为osnop2不同株系以及互补材料的穗长统计。

图5为osnop2不同株系以及互补材料的一级、二级枝梗数的统计。

图6为osnop2不同株系以及互补材料的每穗粒数的统计。

图7为osnop2不同株系以及互补材料的千粒重的统计。

图8为osnop2不同株系以及互补材料的带壳粒长、粒宽的表型。

图9为osnop2不同株系以及互补材料的脱壳粒长、粒宽的表型。

图10为osnop2不同株系以及互补材料的带壳粒长、粒宽的统计。

图11为osnop2不同株系以及互补材料的脱壳粒长、粒宽的统计。

图12为osnop2不同株系的热胁迫表型及统计图。

图13为osnop2#1及其互补材料的盐胁迫表型及统计图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述,给出的实施例仅为了阐明本发明,而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南,并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。

如无特殊说明,以下实施例中的定量试验,均设置三次重复实验,结果取平均值。

实施例、

Osnop2蛋白如序列表的序列1所示。水稻日本晴的cDNA中,编码Osnop2蛋白的CDS如序列表的序列2所示。水稻日本晴的基因组DNA中,编码Osnop2蛋白的基因如序列表的序列3所示。

一、构建重组质粒

构建重组质粒SG2027。重组质粒SG2027的结构示意图见图1。经全质粒测序,重组质粒SG2027如序列表的序列4所示。序列表的序列4中,第2696-6967位核苷酸编码Cas9蛋白。重组质粒SG2027中,sgRNA的编码区如序列表的序列5所示。相应的,sgRNA如序列表的序列6所示,sgRNA中的靶序列结合区如序列表的序列7所示。

二、进行遗传转化并获得再生植株

将重组质粒SG2027导入农杆菌EHA105,得到重组农杆菌。采用农杆菌浸染法,将重组农杆菌对水稻日本晴的胚性愈伤组织进行遗传转化,然后筛选抗性愈伤组织(抗性筛选采用100mg/L潮霉素),然后进行分化再生培养,然后进行生根培养,得到再生植株。

三、获得基因编辑植株及其后代植株

将步骤二得到的再生植株进行如下鉴定:取叶片,提取基因组DNA,采用引物F1和引物R1组成的引物对进行PCR扩增,然后将PCR扩增产物进行测序。

F1:5’-GCGGGGAAGAAGGGGAAG-3’;

R1:5’-TAGCTCGCGTGAATGCTACA-3’。

通过以上鉴定,从步骤二得到的再生植株中筛选得到两个纯合突变型植株(纯合突变型即两条染色体发生的突变一致),分别命名为Osnop2#1植株和Osnop2#2植株。经测序鉴定,与水稻日本晴(用Nip表示)的基因组DNA相比,Osnop2#1植株的差异仅在于在编码Osnop2蛋白的基因中发生了一个核苷酸的缺失(引起了移码突变,并提前终止),该突变位点及其周边核苷酸的测序结果见图2。经测序鉴定,与水稻日本晴(用Nip表示)的基因组DNA相比,Osnop2#2植株的差异仅在于在编码Osnop2蛋白的基因中发生了两个核苷酸的插入(引起了移码突变,并提前终止),该突变位点及其周边核苷酸的测序结果见图2。

Osnop2#1植株自交并收获种子,将种子培育为植株,即为T1代植株。T1代植株自交并收获种子,即为T2代种子。Osnop2#1植株及其自交后代,称为Osnop2#1株系。

Osnop2#2植株自交并收获种子,将种子培育为植株,即为T1代植株。T1代植株自交并收获种子,即为T2代种子。Osnop2#2植株及其自交后代,称为Osnop2#2株系。

四、获得回补植株及其后代植株

1、构建重组质粒

重组质粒为环状双链DNA分子,如序列表的序列8所示。序列表的序列8中,第807-2296位核苷酸为启动子,第2297-4378位核苷酸编码Osnop2蛋白。

2、将步骤1构建的重组质粒导入农杆菌EHA105,得到重组农杆菌。采用农杆菌浸染法,将重组农杆菌对受体植株(受体植株即Osnop2#1植株的T2代种子长成的植株)的胚性愈伤组织进行遗传转化,然后筛选抗性愈伤组织(抗性筛选采用50mg/L潮霉素),然后进行分化再生培养,然后进行生根培养,得到再生植株。

3、将步骤2得到的再生植株进行如下鉴定:取叶片,提取基因组DNA,采用引物F2和引物R2组成的引物对进行PCR扩增,然后将PCR扩增产物进行测序。根据鉴定结果,筛选获得回补植株。测序结果表明,回补植株中同时具有序列表的序列2所示的DNA分子以及突变DNA分子(突变DNA分子即用“TCGGACGACGCCTCCTTG”替换序列2所示DNA分子中的“TCGGACGACGCCTCCTTTG”得到的DNA分子)。

F2:5’-GAGTTAGCTCACTCATTAG-3’;

R2:5’-CAACGTGCACAACAGAAT-3’。

4、步骤3得到的回补植株自交并收获种子,将种子培育为植株,即为T1代植株。T1代植株自交并收获种子,即为T2代种子。回补植株的自交后代,称为Osnop2-CP株系。

五、性状比较

供试种子为:水稻日本晴种子、Osnop2#1株系的T2代种子、Osnop2#2株系的T2代种子、Osnop2-CP株系的T2代种子。

在平行条件下培养供试植株,具体为:取种子,在温室萌发并育苗(从露白开始计时,共培养3周),得到3周幼苗;将3周幼苗移栽至河北廊坊的大田并正常栽培管理。

成熟期观察穗部表型并拍照,统计穗长。照片见图3。穗长见图4(每个株系取10株植株的平均值)。与水稻日本晴植株相比,Osnop2#1株系和Osnop2#2株系植株的穗长显著增加,增加幅度约为5.48-7.34%。与水稻日本晴植株相比,Osnop2-CP植株的穗长无显著差异。与Osnop2#1株系植株相比,Osnop2-CP植株的穗长显著减小。

成熟期观察并统计一级、二级枝梗数。结果见图5(每个株系取10株植株的平均值)。与水稻日本晴植株相比,Osnop2#1株系和Osnop2#2株系植株的二级枝梗数显著增加,增加幅度约为11.08-13.67%。与Osnop2#1株系植株相比,Osnop2-CP植株的二级枝梗数显著减少。

成熟期观察并统计每穗籽粒数。结果见图6。与水稻日本晴植株相比,Osnop2#1株系和Osnop2#2株系植株的籽粒数显著增加,增加幅度约为15.32-17.04%。与水稻日本晴植株相比,Osnop2-CP植株的籽粒数无显著差异。与Osnop2#1株系植株相比,Osnop2-CP植株的籽粒数显著减少。

成熟期收获籽粒并统计千粒重。结果见图7。与水稻日本晴植株相比,Osnop2#1株系和Osnop2#2株系植株的千粒重显著增加,增加幅度约为8.7-15.88%。与水稻日本晴植株相比,Osnop2-CP植株的千粒重无显著差异。与Osnop2#1株系植株相比,Osnop2-CP植株的千粒重显著减少。

成熟期收获籽粒,观察并统计带壳粒长和带壳粒宽以及脱壳粒长和脱壳粒宽。结果见图8、图9、图10和图11。与水稻日本晴植株相比,Osnop2#1株系和Osnop2#2株系植株的带壳粒长、带壳粒宽、脱壳粒长和脱壳粒宽均显著增加,增加幅度分别约为12.4-16.2%、22.6-23.2%、11.4-15.7%、16.1-17.9%。与水稻日本晴植株相比,Osnop2-CP植株的带壳粒长、带壳粒宽、脱壳粒长和脱壳粒宽均无显著差异。与Osnop2#1株系植株相比,Osnop2-CP植株的带壳粒长、带壳粒宽、脱壳粒长和脱壳粒宽均显著减少。

六、热胁迫试验

供试种子为:水稻日本晴种子、Osnop2#1株系的T2代种子、Osnop2#2株系的T2代种子。在平行条件下培养供试植株,具体为:取种子,在温室萌发并培养至三叶期(时间点A,拍照),然后转移到45℃培养箱中培养48小时(时间点B,拍照),然后转移回到温室并继续培养7天(时间点C,拍照),然后统计存活率(每种供试植株至少统计24株)。温室条件为:28℃,10小时光照/14小时黑暗。

植株照片见图12,左图对应时间点A,中图对应时间点B,右图对应时间点C。

存活率结果见图12。日本晴植株的存活率约为40%,Osnop2#1株系植株的存活率约为90%,Osnop2#2株系植株的存活率约为85%。与日本晴相比,Osnop2#1株系和Osnop2#2株系植株的耐热性显著升高。

七、盐胁迫试验

供试种子为:水稻日本晴种子、Osnop2#1株系的T2代种子、Osnop2-CP株系的T2代种子。在平行条件下培养供试植株,具体为:取种子,采用Hoagland营养液在温室培养至三叶期(时间点A,拍照),然后更改为采用含150mM NaCl的Hoagland营养液培养6天(时间点B,拍照),然后清洗幼苗,然后更改为采用Hoagland营养液培养7天(时间点C,拍照),最后统计存活率(每种供试植株至少统计24株)。温室条件为:28℃,10小时光照/14小时黑暗。

植株照片见图13,左图对应时间点A,中图对应时间点B,右图对应时间点C。

存活率结果见图13。日本晴植株的存活率为0,Osnop2#1株系植株的存活率约为20%,Osnop2-CP株系植株的存活率为0。与日本晴相比,Osnop2#1株系的耐盐性显著升高。Osnop2-CP株系植株的耐盐性与日本晴基本一致。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说,在不脱离本发明的宗旨和范围,以及无需进行不必要的实验情况下,可在等同参数、浓度和条件下,在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例,应该理解为,可以对本发明作进一步的改进。总之,按本发明的原理,本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进,包括脱离了本申请中已公开范围,而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围,可以进行一些基本特征的应用。

序列表

<110> 中国农业科学院生物技术研究所

<120> Osnop2蛋白及其编码基因关于耐逆性和产量相关的应用

<130> GNCYX212426

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 693

<212> PRT

<213> Oryza sativa

<400> 1

Met Ala Lys Lys Gly Ala Pro Arg Arg Gln Pro Pro Pro Pro Pro Pro

1 5 10 15

Arg Gln Leu Ala Ala Gly Lys Lys Gly Lys Ala Ser Pro Lys Ala Ala

20 25 30

Lys Arg Ala Ala Pro Lys Lys Gln Arg Leu Leu Glu Ser Ser Ser Asp

35 40 45

Asp Ser Glu Leu Glu Gln Gln Gln Gly Gln Leu Gln Glu Val Glu Ser

50 55 60

Gly Ser Asp Leu Asp Val Pro Ser Asp Ser Gly Ala Glu Glu Leu Ser

65 70 75 80

Asp Ser Asp Asp Ala Ser Phe Glu Gly Gly Asp Ser Gly Asp Glu Glu

85 90 95

Glu Glu Glu Asp Asp Glu Asp Gly Asp Asp Asp Pro Leu Ala Asp Asp

100 105 110

Phe Leu Ala Gly Ser Asp Asp Glu Ser Asp Gly Gly Asp Asp Ser Gly

115 120 125

Val Asp Ser Asp Glu Ser Asp Asp Leu Glu Ala Lys Ser Arg Ala Ile

130 135 140

Asp Glu Glu Lys Glu Lys Ala Glu Glu Glu Ala Glu Glu Glu Leu Lys

145 150 155 160

Leu Asn Ile Arg Ser Glu Ser Asp Glu Phe Arg Leu Pro Thr Lys Glu

165 170 175

Glu Leu Glu Glu Glu Ala Leu Arg Pro Pro Asn Leu Pro Asn Leu Lys

180 185 190

Arg Arg Ile Ser Glu Ile Val Arg Val Leu Ser Asn Phe Ser Lys Leu

195 200 205

Arg Gln Lys Asp Val Pro Arg Lys Asp Tyr Val Asn Gln Leu Lys Thr

210 215 220

Asp Ile Met Ser Tyr Tyr Gly Tyr Asn Asp Phe Leu Val Glu Ala Phe

225 230 235 240

Ile Glu Met Phe Pro Ala Val Glu Leu Val Glu Leu Leu Glu Ser Phe

245 250 255

Glu Lys Arg Pro Pro Glu Cys Leu Arg Thr Asn Thr Leu Lys Thr Arg

260 265 270

Arg Arg Asp Leu Ala Ala Ala Leu Ile Pro Arg Gly Phe Asn Leu Asp

275 280 285

Pro Ile Gly Lys Trp Ser Lys Val Gly Leu Val Val Tyr Asp Ser Thr

290 295 300

Ile Ser Ala Gly Ala Thr Val Glu Tyr Met Ala Gly His Tyr Met Lys

305 310 315 320

Gln Gly Ala Ser Ser Phe Leu Pro Val Met Ala Leu Ala Pro Gln Glu

325 330 335

Lys Glu Arg Ile Val Asp Met Ala Ala Ala Pro Gly Gly Lys Thr Thr

340 345 350

Tyr Ile Gly Ala Leu Met Lys Asn Thr Gly Ile Ile Tyr Ala Asn Glu

355 360 365

Phe Asn Glu Lys Arg Leu His Gly Leu Leu Gly Asn Ile His Arg Met

370 375 380

Gly Val Thr Asn Thr Ile Val Cys Asn Tyr Asp Gly Lys Glu Leu Pro

385 390 395 400

Lys Val Leu Gly Met Asn Ser Val Asp Arg Val Leu Leu Asp Ala Pro

405 410 415

Cys Thr Gly Thr Gly Thr Ile Trp Lys Asp Pro Gln Ile Lys Thr Ser

420 425 430

Lys Gly Ile Glu Asp Ile Arg Asp Cys Ala Phe Val Gln Lys Gln Leu

435 440 445

Leu Leu Ala Ala Ile Asp Leu Val Asp Ala Asn Ser Lys Thr Gly Gly

450 455 460

Tyr Ile Val Tyr Ser Thr Cys Ser Leu Met Ile Pro Glu Asn Glu Ala

465 470 475 480

Val Val Asp Tyr Ala Leu Lys Lys Arg Asn Val Lys Leu Val Pro Cys

485 490 495

Gly Leu Asp Phe Gly Arg Pro Gly Phe Ile Arg Phe Arg Glu His Arg

500 505 510

Phe His Thr Ser Leu Asp Lys Thr Arg Arg Phe Tyr Pro His Val Asn

515 520 525

Asn Met Asp Gly Phe Phe Val Ala Lys Leu Lys Lys Leu Ser Asn Thr

530 535 540

Ile Pro Val Ala Ser Glu Ser Ser Asn Val Pro Glu Glu Ala Ile Glu

545 550 555 560

Lys Ala Asp Pro Ser Ser Asp Asp Pro Gln Lys Gln Pro Ile Gln Ser

565 570 575

Lys Lys His Lys Asp Val Lys Thr Thr Asn Glu Glu Thr Ser Ile Leu

580 585 590

Asp Gly Val Thr Lys Asp Lys Arg Gln Thr His Glu Thr Leu Lys Asn

595 600 605

His Lys Lys Gly Lys Lys Arg Asn Gly Pro Glu Ser Thr Lys Ile Lys

610 615 620

Gly Asp Gln Lys Glu Thr His Asn Glu Glu Glu Pro Thr Ser Glu Lys

625 630 635 640

Lys Gln Pro Val Ser Ala Lys Ile Lys Lys Ser Val Pro Lys Arg Ile

645 650 655

Ser Gly Asn Lys Gly Lys Lys Leu Asp Thr Gly Lys Gly Glu Lys Arg

660 665 670

Lys Arg Asn Trp Met Val Arg Arg Asp Trp Glu Ala Tyr Lys Lys Ser

675 680 685

Arg Ser Lys Gln Val

690

<210> 2

<211> 2082

<212> DNA

<213> Oryza sativa

<400> 2

atggcgaaga agggcgcgcc gcgcaggcag ccgccgccgc cgccgcctcg gcaactggcc 60

gcggggaaga aggggaaggc ctccccgaag gcggcgaaga gggcggcgcc caagaagcag 120

aggctgctcg agtcgtcctc cgacgactcc gagctggagc agcagcaggg gcagcttcag 180

gaggtggagt ccgggtcaga cctcgacgtc ccctctgatt ccggcgccga ggagctctcc 240

gactcggacg acgcctcctt tgagggagga gacagcggcg acgaggagga ggaggaagac 300

gatgaggatg gcgacgacga ccccctcgct gacgacttcc tcgccggcag tgacgacgaa 360

agtgacggag gagacgactc tggtgtggac tcagatgagt ctgatgactt agaggcgaag 420

tcgcgagcga ttgatgaaga gaaagagaag gcagaagaag aggctgagga ggagctcaag 480

ctcaatatta gatcagaatc tgatgagttc cgattgccca caaaggagga gttggaggaa 540

gaggcacttc gaccaccaaa cctgccgaat cttaaaagga ggatatcaga aattgtccgg 600

gtactctcaa actttagtaa gctgaggcaa aaagatgtgc cgcgaaagga ttatgtcaat 660

cagctgaaga cagatataat gtcatactat ggatacaatg attttctcgt tgaagcattt 720

attgagatgt tcccagctgt ggagcttgtt gaactactgg aatcttttga gaaaagaccg 780

cctgaatgct tacgaacaaa tacattgaag acccggagaa gggatcttgc tgctgctctt 840

ataccaagag gatttaatct ggatccgata gggaagtggt caaaggtagg ccttgttgta 900

tacgactcca ccatttcagc tggtgccact gttgaatata tggctgggca ttacatgaaa 960

caaggtgcaa gttctttctt acctgtgatg gctcttgctc ctcaggagaa agagcgaatt 1020

gttgatatgg cggctgcccc aggtggcaag actacatata ttggagctct tatgaagaat 1080

actggaataa tttatgcaaa tgagttcaat gagaaaaggc tgcatggact tttgggcaac 1140

atacatcgca tgggtgttac caataccata gtttgtaatt atgatggtaa agagctacct 1200

aaagttcttg ggatgaattc ggttgacaga gttcttttgg atgcaccctg cacaggcaca 1260

gggaccattt ggaaggatcc acaaattaaa acgtcgaagg gcattgagga catcagagac 1320

tgtgcttttg tacaaaagca attgctatta gctgctattg atttggttga tgccaactcc 1380

aaaactggag gttacattgt ttactcaaca tgttcattga tgattccaga gaatgaagcg 1440

gttgttgact atgcccttaa aaagagaaac gtaaagcttg taccttgtgg attagatttt 1500

gggcgtccag gattcatccg gttccgagag catcgattcc atacttcttt agataaaaca 1560

aggagatttt atccccatgt aaacaacatg gatggttttt ttgttgcgaa gcttaaaaaa 1620

ttgagcaata cgatcccagt ggcatctgag tcatctaatg tgcctgaaga agcaattgag 1680

aaggctgatc ctagcagtga cgatcctcaa aaacagccca ttcagtcaaa aaaacataaa 1740

gatgtgaaga cgacgaatga agagacaagc atccttgatg gggtgactaa ggacaaaagg 1800

cagacacatg agacactcaa gaaccacaag aagggtaaga aacgcaatgg ccctgagagt 1860

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gactgggaag cttataagaa gtcgaggagt aaacaagtat ga 2082

<210> 3

<211> 5395

<212> DNA

<213> Oryza sativa

<400> 3

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catggcgaag aagggcgcgc cgcgcaggca gccgccgccg ccgccgcctc ggcaactggc 120

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cgatgaggat ggcgacgacg accccctcgc tgacgacttc ctcgccggca gtgacgacga 420

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<210> 4

<211> 15897

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta 60

aactgaaggc gggaaacgac aatctgatcc aagctcaagc tgctctagca ttcgccattc 120

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gagtgtgagc gcgagaggcg ggaggaacag tttagtacca cattgcccag ctaactcgaa 480

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ccagcgaacc agcagcgtcg cgtcgggcca agcgaagcag acggcacggc atctctgtcg 1380

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tgttagatcc gtgctgctag cgttcgtaca cggatgcgac ctgtacgtca gacacgttct 1860

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gtcttggttg tgatgatgtg gtctggttgg gcggtcgttc tagatcggag tagaattctg 2100

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caaggacttc ctggacaatg aggaaaacga ggacattctg gaagatatcg tgctgaccct 4680

gacactgttt gaggacagag agatgatcga ggaacggctg aaaacctatg cccacctgtt 4740

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ccggggcaag agcgacaacg tgccctccga agaggtcgtg aagaagatga agaactactg 5460

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ctgaccgcgc gag 5413

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