一种黑牛肝菌菌株与应用
阅读说明：本技术 一种黑牛肝菌菌株与应用 (Hemicus fuliginosus strain and application thereof ) 是由 罗顺珍 纪开萍 曹旸 陈燕 纪光燕 纪光玉 刀明晶 李恒 陶玲 晏汐蓓 王秋兰 于 2021-06-03 设计创作，主要内容包括：本发明公开一种黑牛肝菌菌株与应用,该菌株是由YL1701-2自体杂交获得,已于2021年3月3日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC,保藏编号CGMCC NO.21921。本发明还公开了黑牛肝菌菌株在生产黑牛肝菌的应用。该菌株具有遗传稳定,活力强,后期出菇速度快且出菇整齐,生长速度快,耐保藏等优点,与亲本相比子实体形态上具有明显差异,产量更高,具有很高的商业价值。属于YL1701-2的纯合菌株。(The invention discloses a black boletus strain and application, wherein the strain is obtained by YL1701-2 self-hybridization and has been preserved in China general microbiological culture Collection center (CGMCC) with the preservation number of CGMCC NO.21921 at 3 months and 3 days in 2021. The invention also discloses application of the boletus nigricans strain in production of boletus nigricans. The strain has the advantages of stable heredity, strong activity, high fruiting speed in the later period, regular fruiting, high growth speed, preservation resistance and the like, and compared with parents, the strain has obvious difference in the form of fruiting bodies, higher yield and very high commercial value. A homozygous strain belonging to YL 1701-2.)
技术领域
本发明属于食用菌人工育种技术领域，具体是涉及一株经自体杂交育种选 育获得具有优良生物学特性、适应工厂化栽培条件的黑牛肝菌新菌株。
背景技术
黑牛肝菌(Phlebopus portentosus)是牛肝菌目(Boletales)小牛肝菌科(Boletinellaceae)脉柄牛肝菌属(Phlebopus)的一种大型真菌，暗褐网柄牛肝 菌的俗称。目前黑牛肝菌是一种可以离开宿主树，培养出成熟子实体，实现人 工栽培的牛肝菌种类，市场前景广阔。
优良的菌种是人工栽培黑牛肝菌获得成功的关键。目前获得优良菌种的方 式主要有野生驯化和杂交育种。其中，杂交育种是获得优良菌株最有效的途径， 具体方法包括：自体杂交、近缘杂交、异缘杂交、远缘杂交等。杂交育种工作 的过程包括选配、鉴定、筛选和扩大验证等环节，往往要对成千上万对配对进 行筛选才能得到一个具有商业价值的菌株。黑牛肝菌属于四极性交配系统，在 这种交配系统中，一个个体产生的配子在近亲交配时，有75％的概率是不亲和 的，只有25％的概率是可亲和的，因此选择近亲配子进行杂交的自体杂交手段， 所需工作量远大于远亲配子杂交。相比于其他杂交方式，自体杂交具有聚集和 纯合优良基因的优势，因此也为许多育种工作者所选用。
发明内容
有鉴于此，本发明实施例提供一种具有优良栽培性状，可用于工厂化生产 的黑牛肝菌菌株FC0580，并提供该FC0580菌株在生产黑牛肝菌中的应用。
为达到上述目的，本发明主要提供如下技术方案：
一方面，本发明的实施例提供一种黑牛肝菌菌株，由黑牛肝菌菌株YL1701-2 自体杂交而得，分类命名为：黑牛肝菌(Phlebopus portentosus)FC0580，已于2021 年3月3日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保 藏编号CGMCC NO.21921，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3 号，中国科学院微生物研究所。
本发明菌株由黑牛肝菌菌株YL1701-2单孢菌丝自体杂交获得。其子实体形 态特征包括菌盖棕褐色，菌柄黄色，酒瓶形,较长，菌孔黄色，肉质致密、紧实， 菌肉金黄，烹饪后菌肉基本无褐变，土腥味淡。经SSR标记鉴别，与菌株YL1701-2 具有一定的遗传差异，部分标记出现纯合。
另一方面，本发明的实施例提供上述黑牛肝菌FC0580菌株在产黑牛肝菌中 的应用。
本发明的优点在于：
该菌株具有遗传稳定，活力强，后期出菇速度快且出菇整齐，生长速度快， 耐保藏等优点，与目前黑牛肝菌工厂化栽培所使用的菌株YL1701-2相比， FC0580菌株栽培性状更为稳定，出菇过程中长势更壮，产量更高，抗污染能力 更强，菌柄呈酒瓶状，符合牛肝菌俗称“大脚菇”的形态特点，是可用于黑牛肝菌 工厂化生产的优良新品种，具有很高的商业价值。
附图说明
图1为实施例3所述的非加权配对算术平均法(UPGMA)聚类分析结果图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步的详细说明，但实施例并不是对本发明 技术方案的限定，所有基于本发明教导所作出的等同替换或变化，均应该属于 本发明的保护范围。
本发明中所用原料等均为可以通过市售购买获得的常规产品。
本发明所述的一种黑牛肝菌菌株，由黑牛肝菌菌株YL1701-2自体杂交而得， 分类命名为：黑牛肝菌(Phlebopus portentosus)FC0580，已于2021年3月3日保 藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号 CGMCC NO.21921。
下面将结合具体的实施例，对本发明一种黑牛肝菌菌株及应用做进一步的 详细介绍：
实施例1：
黑牛肝菌(Phlebopus portentosus)FC0580菌株的培养方法：采用自体杂交育 种选育的方法得到本发明。
1.1亲本菌株YL1701-2子实体培养及孢子收集：
将YL1701-2菌株的子实体进行培养并收集孢子。
具体地，在菇房中挑选菇型长势好的YL1701-2菌株的子实体，待子实体菌 盖完全展开，菌盖边缘菌孔明显时采下收集孢子。
1.2亲本菌株YL1701-2孢子涂布和单菌落的转接培养及鉴定：
将上述步骤获得的孢子通过涂布于培养基上并进行转接培养以获得单核菌 丝。其中，该培养基采用M1培养基较适合，培养基组成包括马铃薯200g(煮 水)、葡萄糖20g、酵母膏2g、MgSO4 1g、KH2PO4 1g、琼脂16g、定容至1000mL。
具体地，将收集好的孢子用无菌水稀释后涂布于M1培养基上，孢子萌发后， 转接M1培养基上培养，菌丝长满后进行单核菌丝的鉴定并保存。
1.3单核菌丝交配型鉴定。
1.4可亲和的孢子单核菌丝配对，镜检，培养及出菇验证：
将上述步骤获得的单核菌丝中可亲和的单核菌丝进行配对，并将配对成功 的菌丝转接至培养基培养后进行出菇验证，从而选育出黑牛肝菌FC0580菌株。
具体地，可亲的孢子单核菌丝配对后培养至菌丝相互接触时进行镜检，将 特殊情况下未形成锁状联合的菌株排除。将配对成功的菌丝转接至斜面培养基 培养。菌丝长满后即可进行出菇验证。出菇验证记录自交菌株的出菇率、出菇 整齐度、产量、产品特性等。经初筛、复筛、生产验证，筛选出菇率高，污染 率低，平均产量高，子实体形态完整无畸形，肉质硬耐保藏，土腥味淡的菌株， 最终选育得到本发明FC0580菌株。
本发明的黑牛肝菌FC0580菌株应用于生产黑牛肝菌，通过FC0580菌株产 出的黑牛肝菌产量更高，抗污染能力更强，在出菇过程中长势更壮，菌柄呈酒 瓶状，符合牛肝菌俗称“大脚菇”的形态特点，适合用于黑牛肝菌工厂化生产。 下述实施例提供了FC0580菌株在产黑牛肝菌应用中的情况。
实施例2
本发明FC0580菌株的基本情况及子实体形态特征：
2.1培养基
FC0580菌种最适培养基为M1培养基，配方如下：马铃薯200g(煮水)、 葡萄糖20g、酵母膏2g、MgSO4 1g、KH2PO4 1g、琼脂16g、定容至1000mL。
2.2菌丝生长情况
菌种FC0580在M1培养基上生长20天，菌落深黄褐色，菌丝浓密，生长 旺盛，无菌核，吐水，日生长量达：3.01mm/天,与亲本菌株YL1701-2相比快 0.48mm/天。
2.3子实体形态特征
菌株FC0580子实体形态与亲本菌株YL1701-2相比，存在以下异同点：
相同点：菌盖棕褐色，半球形，菌柄黄色，菌孔黄色，口感上无土腥味， 烹饪后基本无褐变。
差别：①FC0580菌盖直径较小，厚度较厚；②FC0580菌柄较长，成酒瓶 型，上细下粗，上部直径与下部直径差距较大(约25-30mm)，YL1701-2菌柄 成圆柱形，上部直径与下部直径差距较小(约8-16mm)。
具体数据见表1。
表1黑牛肝菌菌株FC0580与YL1701-2子实体形态特征比较
经工厂化出菇验证，菌株FC0580与YL1701-2在栽培性状上的比较如下表 所示。
表2.黑牛肝菌菌株FC0580与YL1701-2栽培性状比较
菌株FC0580与YL1701-2相比，养菌期所需时间、性状，出菇整齐度基本 相同，出菇率略低，但在覆土至出菇所需时间、养菌期污染率以及平均单瓶产 量上都优于菌株YL1701-2。由此可以判断菌株FC0580是可用于黑牛肝菌工厂 化生产的优良菌株。
实施例3
SSR分子标记鉴别。
收集菌株FC0580，YL1701-2及其他6个黑牛肝菌菌株的菌丝，提取DNA 后，以文中的21对引物对DNA样品进行PCR扩增，合成引物时在正向引物末 端加上FAM或HEX荧光标记。PCR产物使用ABI 3730测序仪进行基因分型。 使用软件Gene mapper 4.1(AppliedBiosystems Co.，Ltd.，USA)，参照引物对 应关系的核心碱基重复数进行数据准确位点的分析。采用Popgene 32计算等位 基因数、有效等位基因数、Shannon's信息指数、期望杂合度、观测杂合度。应 用NTSYSpc-2.10软件计算遗传相似系数，用非加权配对算术平均法(UPGMA) 进行聚类分析。UPGMA聚类分析结果如图1所示。
所使用的21对SSR引物信息如下表所示。
表3用于菌株鉴别的SSR引物信息
分析结果显示，菌株FC0580在用于鉴别的SSR位点上，与包括其亲本 YL1701-2在内的其他菌株均有遗传差异，是全新的菌株。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的 限制，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与 修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
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