一种黑果枸杞提取物的制备工艺及其用途
阅读说明：本技术 一种黑果枸杞提取物的制备工艺及其用途 (Preparation process and application of lycium ruthenicum extract ) 是由 董银卯 孟宏 刘有停 曲召辉 刘沙沙 张卫红 于 2020-06-03 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种黑果枸杞提取物的制备方法及其用途。本发明黑果枸杞提取物的制备方法包括,(1)黑果枸杞粉碎、干燥,得黑果枸杞粉末；(2)黑果枸杞粉末加入到超临界CO2流体萃取仪中进行超临界萃取,压力15-40Mpa,温度45-60℃,CO2流量为5-15 L/h的条件下,夹带剂乙酸乙酯-乙醇混合液,萃取1-2h,在分离釜中分离出蒸馏水。经实验证实,本发明黑果枸杞提取物具有良好的抗刺激、补水保湿的效果,在化妆品领域具有广阔的应用前景。(The invention relates to a preparation method and application of a lycium ruthenicum extract. The preparation method of the lycium ruthenicum extract comprises the following steps of (1) crushing and drying lycium ruthenicum to obtain lycium ruthenicum powder; (2) adding Lycium ruthenicum Murr powder into supercritical CO2 fluid extractor for supercritical extraction under the conditions of 15-40Mpa, 45-60 deg.C and CO2 flow rate of 5-15L/h, extracting with entrainer ethyl acetate-ethanol mixed solution for 1-2h, and separating distilled water in separation kettle. Experiments prove that the lycium ruthenicum extract has good effects of resisting stimulation and moisturizing, and has wide application prospects in the field of cosmetics.)
技术领域
本发明涉及一种黑果枸杞提取物的制备工艺及其用途。
背景技术
黑果枸杞味甘、性平，富含蛋白质、枸杞多糖、氨基酸、维生素、矿物质、微量元素等多种营养成分。此外，黑果枸杞中还含有丰富的花青素，是迄今为止世界上发现花青素含量最高的野生植物。花青素是一种天然的抗氧化剂，具有极强的清除自由基，抵御紫外线，促进胶原再生加快新陈代谢的功效，在化妆品中具有广泛的应用前景。多糖具有抗衰老、提高免疫力等功效，枸杞多糖是黑果枸杞另一重要活性成分，目前黑果枸杞多糖多采用热水浸提法或有机溶剂脱脂后热水浸提法等。
黑果枸杞主要活性成分的提取分离对于活性成分的充分利用、黑果枸杞护肤产品的功效发挥具有重要意义。现有对黑果枸杞的研究方法对针对单一活性物质进行提取和富集，黑果枸杞主要活性成分无法充分利用，造成了黑果枸杞的浪费。
发明内容
本发明目的是，提供一种黑果枸杞活性成分的制备方法，其可以提高黑果枸杞多糖、花青素的提取效率，使得黑果枸杞活性物质得以充分利用，并且可以直接应用于护肤产品中，发挥良好的护肤功效。
为实现上述目的，本发明第一方面提供了一种黑果枸杞提取物的制备方法，包括以下步骤：
（1）黑果枸杞粉碎、干燥，得黑果枸杞粉末；
（2） 黑果枸杞粉末加入到超临界CO2流体萃取仪中进行超临界萃取，压力15-40Mpa，温度45-60℃，CO2流量为5-15 L/h的条件下，夹带剂乙酸乙酯-乙醇混合液，萃取1-2h，在分离釜中分离出蒸馏水。
根据本发明，所述黑果枸杞粉末与夹带剂乙酸乙酯-乙醇混合液的质量体积比为1:1~1:10。
根据本发明，所述夹带剂乙酸乙酯-乙醇的体积比为1:1-3:1。
根据本发明的一些优选的实施方式，所述黑果枸杞提取物的制备方法还包括步骤（3）以50%-65%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为15-40Mpa，温度为45-60℃、CO2流量为5-15 L/h的条件下，继续萃取0.5-2h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂。
根据本发明，所述步骤（3）黑果枸杞粉末与夹带剂50%-65%乙醇-水溶液的质量体积比为1:1~1:10。
根据本发明进一步优选的实施方式，所述黑果枸杞提取物的制备方法还包括步骤（4）以70%-95%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为15-40Mpa，温度为45-60℃、CO2流量为5-15 L/h的条件下，继续萃取0.5-2h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
所述黑果枸杞粉末与夹带剂70%-95%乙醇-水溶液的质量体积比为1:1~1:10。
根据本发明进一步的实施方式，所述黑果枸杞提取物的制备方法还包括步骤（5）：将步骤（2）-（4）分离所得夹带剂合并，去除夹带剂，得黑果枸杞提取物。
根据本发明，所述步骤（2）黑果枸杞粉末与夹带剂乙酸乙酯-乙醇混合液的质量体积比为1:1~1:5。
根据本发明，所述步骤（3）黑果枸杞粉末与夹带剂50%-65%乙醇-水溶液的质量体积比为1:1~1:5。
根据本发明的一些优选的实施方式，所述步骤（3）黑果枸杞粉末与夹带剂50%-65%乙醇-水溶液的质量体积比为1:3。
根据本发明，所述步骤（4）黑果枸杞粉末与夹带剂70%-95%乙醇-水溶液的质量体积比为1:1~1:5。
根据本发明的一些优选的实施方式，所述步骤（4）黑果枸杞粉末与夹带剂70%-95%乙醇-水溶液的质量体积比为1:5。
根据本发明进一步优选的实施方式，所述步骤（3）中夹带剂为55%乙醇-水溶液。
根据本发明更进一步的实施方式，所述步骤（4）中夹带剂为95%乙醇-水溶液。
根据本发明，所述制备方法制备黑果枸杞提取物枸杞多糖的得率为0.9%~3.0%。
根据本发明，所述制备方法制备黑果枸杞提取物花青素的得率为0.7%~1.7%。
根据本发明的一些
具体实施方式
，所述步骤（1）中黑果枸杞经粉碎机粉碎，并过40-100目筛。
第二方面，本发明提供了第一方面所述制备方法得到的黑果枸杞提取物在护肤制剂中的应用。
根据本发明，所述护肤制剂包括护肤水、乳液、膏霜、面膜等。
第三方面，本发明提供了一种含有本发明第一方面所述的包含黑果枸杞提取物的护肤制剂。
根据本发明，所述包含黑果枸杞提取物的护肤制剂为护肤水。
根据本发明，所述包含黑果枸杞提取物的护肤水由本发明第一方面制备得到的黑果枸杞提取物和护肤品常规辅料组成。
根据本发明的一些具体实施方式，所述护肤水包括以下重量份的成分：
根据本发明的一些实施方式，所述护肤水通过本领域常规方法即可制得。
根据本发明的一些具体实施方式，所述护肤水通过以下步骤制备得到：
（1）将水、EDTA 二钠、双丙甘醇、丁二醇、汉生胶加入乳化罐，升温搅拌至80-85℃；
（2）搅拌降温至60℃，加入实施例9制备黑果枸杞提取物、防腐剂搅拌均匀。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：通过本发明制备工艺的优化，同时提升黑果枸杞中枸杞多糖和花青素的提取率，使得黑果枸杞活性资源得以充分利用。同时，本发明所得黑果枸杞提取物可以广泛应用于护肤制剂中，充分发挥黑果枸杞活性成分的护肤效果。经实验证实具有抗刺激以及补水保湿的效果。
附图说明
图1 为志愿者使用实施例12制备护肤水前后面部皮肤含水量。
具体实施方式
以下通过具体实施例进一步描述本发明，但以下实施例仅是为更清楚的说明本发明的技术方案的详细描述，并不构成对本发明保护范围的限定。在本发明的范围内或者在不脱离本发明的内容、精神和范围内，对本发明所述黑果枸杞的制备工艺进行适当改进，对于本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明的范围之内。
如无特殊说明，本发明所述方法均为本领域常规方法；如无特殊说明，本发明所用仪器、设备等，均为本领域常规仪器、设备。如无特殊说明，本发明所述的原料或者仪器设备均可通过市售购买得到。
实施例1
（1）黑果枸杞经粉碎机粉碎、干燥，过60目筛，得黑果枸杞粉末；
（2）称取步骤（1）黑果枸杞粉末1000g加入到超临界CO2流体萃取仪中进行超临界萃取，压力25Mpa，温度50℃，CO2流量为15L/h的条件下，夹带剂乙酸乙酯-乙醇混合液（体积比2:1）1L，萃取2h，在分离釜中分离出水，得含有黑果枸杞活性物质的水提物，旋转蒸干。
实施例2
（1）黑果枸杞经粉碎机粉碎、干燥，过60目筛，得黑果枸杞粉末；
（2）称取步骤（1）黑果枸杞粉末1000g加入到超临界CO2流体萃取仪中进行超临界萃取，压力25Mpa，温度50℃，CO2流量为15L/h的条件下，夹带剂乙酸乙酯-乙醇混合液（体积比2:1）1L，萃取2h，在分离釜中分离出蒸馏水；
（3）继续以2L 50%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为25Mpa，温度为50℃、CO2流量为15L/h的条件下，继续萃取1h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂，旋转蒸干。
实施例3
（1）黑果枸杞经粉碎机粉碎、干燥，过60目筛，得黑果枸杞粉末；
（2）称取步骤（1）黑果枸杞粉末1000g加入到超临界CO2流体萃取仪中进行超临界萃取，压力25Mpa，温度50℃，CO2流量为15L/h的条件下，夹带剂乙酸乙酯-乙醇混合液（体积比2:1）1L，萃取2h，在分离釜中分离出蒸馏水；
（3）继续以2L 50%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为25Mpa，温度为50℃、CO2流量为15L/h的条件下，继续萃取1h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（4）继续以1L 70%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为25Mpa，温度为50℃、CO2流量为15L/h的条件下，继续萃取0.5h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（5）将步骤（2）-（4）分离所得夹带剂合并，旋转蒸发去除夹带剂，得黑果枸杞提取物。
实施例4
（1）黑果枸杞经粉碎机粉碎、干燥，过40目筛，得黑果枸杞粉末；
（2）称取步骤（1）黑果枸杞粉末1000g加入到超临界CO2流体萃取仪中进行超临界萃取，压力25Mpa，温度50℃，CO2流量为15L/h的条件下，夹带剂乙酸乙酯-乙醇混合液（体积比2:1）2L，萃取1h，在分离釜中分离出蒸馏水；
（3）继续以1L 50%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为25Mpa，温度为50℃、CO2流量为15L/h的条件下，继续萃取1h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（4）继续以1L 70%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为25Mpa，温度为50℃、CO2流量为15L/h的条件下，继续萃取0.5h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（5）将步骤（2）-（4）分离所得夹带剂合并，旋转蒸发去除夹带剂，得黑果枸杞提取物。
实施例5
（1）黑果枸杞经粉碎机粉碎、干燥，过40目筛，得黑果枸杞粉末；
（2）称取步骤（1）黑果枸杞粉末1000g加入到超临界CO2流体萃取仪中进行超临界萃取，压力25Mpa，温度50℃，CO2流量为15L/h的条件下，夹带剂乙酸乙酯-乙醇混合液（体积比2:1）2L，萃取2h，在分离釜中分离出蒸馏水；
（3）继续以1.5L 50%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为25Mpa，温度为50℃、CO2流量为15 L/h的条件下，继续萃取1h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（4）继续以2L 70%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为25Mpa，温度为50℃、CO2流量为15L/h的条件下，继续萃取0.5h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（5）将步骤（2）-（4）分离所得夹带剂合并，旋转蒸发去除夹带剂，得黑果枸杞提取物。
实施例6
（1）黑果枸杞经粉碎机粉碎、干燥，过40目筛，得黑果枸杞粉末；
（2）称取步骤（1）黑果枸杞粉末1000g加入到超临界CO2流体萃取仪中进行超临界萃取，压力25Mpa，温度50℃，CO2流量为15L/h的条件下，夹带剂乙酸乙酯-乙醇混合液（体积比1:1）3L，萃取2h，在分离釜中分离出蒸馏水；
（3）继续以1.5L 60%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为25Mpa，温度为50℃、CO2流量为15 L/h的条件下，继续萃取1h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（4）继续以2L 80%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为25Mpa，温度为50℃、CO2流量为15L/h的条件下，继续萃取0.5h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（5）将步骤（2）-（4）分离所得夹带剂合并，旋转蒸发去除夹带剂，得黑果枸杞提取物。
实施例7
（1）黑果枸杞经粉碎机粉碎、干燥，过80目筛，得黑果枸杞粉末；
（2）称取步骤（1）黑果枸杞粉末1000g加入到超临界CO2流体萃取仪中进行超临界萃取，压力25Mpa，温度45℃，CO2流量为15L/h的条件下，夹带剂乙酸乙酯-乙醇混合液（体积比1:1）1L，萃取2h，在分离釜中分离出蒸馏水；
（3）继续以2L 60%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为25Mpa，温度为45℃、CO2流量为15L/h的条件下，继续萃取1h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（4）继续以1L 80%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为25Mpa，温度为45℃、CO2流量为15L/h的条件下，继续萃取0.5h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（5）将步骤（2）-（4）分离所得夹带剂合并，旋转蒸发去除夹带剂，得黑果枸杞提取物。
实施例8
（1）黑果枸杞经粉碎机粉碎、干燥，过80目筛，得黑果枸杞粉末；
（2）称取步骤（1）黑果枸杞粉末1000g加入到超临界CO2流体萃取仪中进行超临界萃取，压力25Mpa，温度55℃，CO2流量为15L/h的条件下，夹带剂乙酸乙酯-乙醇混合液（体积比3:1）1L，萃取2h，在分离釜中分离出蒸馏水；
（3）继续以2L 60%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为25Mpa，温度为55℃、CO2流量为15L/h的条件下，继续萃取1h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（4）继续以1L 80%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为25Mpa，温度为55℃、CO2流量为15L/h的条件下，继续萃取0.5h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（5）将步骤（2）-（4）分离所得夹带剂合并，旋转蒸发去除夹带剂，得黑果枸杞提取物。
实施例9
（1）黑果枸杞经粉碎机粉碎、干燥，过80目筛，得黑果枸杞粉末；
（2）称取步骤（1）黑果枸杞粉末1000g加入到超临界CO2流体萃取仪中进行超临界萃取，压力25Mpa，温度55℃，CO2流量为15L/h的条件下，夹带剂乙酸乙酯-乙醇混合液（体积比2:1）2.5L，萃取2h，在分离釜中分离出蒸馏水；
（3）继续以1.5L 55%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为25Mpa，温度为50℃、CO2流量为15 L/h的条件下，继续萃取1h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（4）继续以0.5L 95%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为25Mpa，温度为50℃、CO2流量为15L/h的条件下，继续萃取0.5h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（5）将步骤（2）-（4）分离所得夹带剂合并，旋转蒸发去除夹带剂，得黑果枸杞提取物。
实施例10
（1）黑果枸杞经粉碎机粉碎、干燥，过100目筛，得黑果枸杞粉末；
（2）称取步骤（1）黑果枸杞粉末1000g加入到超临界CO2流体萃取仪中进行超临界萃取，压力15Mpa，温度60℃，CO2流量为5L/h的条件下，夹带剂乙酸乙酯-乙醇混合液（体积比2:1）2.5L，萃取2h，在分离釜中分离出蒸馏水；
（3）继续以1.5L 40%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为15Mpa，温度为50℃、CO2流量为15 L/h的条件下，继续萃取1h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（4）继续以0.5L 95%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为15Mpa，温度为50℃、CO2流量为15L/h的条件下，继续萃取1h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（5）将步骤（2）-（4）分离所得夹带剂合并，旋转蒸发去除夹带剂，得黑果枸杞提取物。
实施例11
（1）黑果枸杞经粉碎机粉碎、干燥，过100目筛，得黑果枸杞粉末；
（2）称取步骤（1）黑果枸杞粉末1000g加入到超临界CO2流体萃取仪中进行超临界萃取，压力15Mpa，温度60℃，CO2流量为5L/h的条件下，夹带剂乙酸乙酯-乙醇混合液（体积比2:1）2.5L，萃取2h，在分离釜中分离出蒸馏水；
（3）继续以1.5L 55%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为15Mpa，温度为50℃、CO2流量为15 L/h的条件下，继续萃取1h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（4）继续以0.5L 55%乙醇-水溶液作为夹带剂，在压力为15Mpa，温度为50℃、CO2流量为15L/h的条件下，继续萃取1h，从分离釜中分离出含有黑果枸杞活性成分的夹带剂；
（5）将步骤（2）-（4）分离所得夹带剂合并，旋转蒸发去除夹带剂，得黑果枸杞提取物。
对比例1
与实施例9相比，除步骤（2）夹带剂选择无水乙醇外，其他步骤均相同。
多糖及花青素得率测试结果
采用苯酚-硫酸法测试实施例1-11及对比例1制备得到的黑果枸杞提取物多糖得率（参考行业标准：《QB/T 2488-2006 化妆品用芦荟汁、粉》），采用高效液相色谱法（NYT2640-2014）测试实施例1-11制备得到的黑果枸杞提取物花青素得率。
黑果枸杞多糖和花青素得率测试结果如下表所示：
序号
多糖得率（%）
花青素得率（%）
实施例1
0.98
0.65
实施例2
1.28
1.25
实施例3
1.89
1.40
实施例4
2.33
1.55
实施例5
2.36
1.59
实施例6
2.83
1.64
实施例7
1.78
0.98
实施例8
2.41
1.66
实施例9
2.97
1.68
实施例10
2.97
1.63
实施例11
2.55
1.36
对比例1
1.58
0.94
由测试结果可知，采用本发明超临界流体萃取方法，黑果枸杞花青素和多糖均有较高的得率，其中实施例9制备工艺下，黑果枸杞花青素和多糖的得率最高。
黑果枸杞提取物抗刺激效果评价
鸡胚绒毛尿囊膜试验（HET-CAM Test）是欧洲替代方法认证中心（ECVAM）认证的测试产品刺激性的试验方法，是目前化妆品及化学品眼刺激性体外试验的主要研究方法之一，可用来评价多种物质的刺激性。本实验采用表面活性剂SDS（十二烷基羧酸钠）作为刺激成分，利用鸡胚绒毛尿囊膜试验，测试本发明黑果枸杞提取物拮抗刺激的效果。
受试样品：实施例9黑果枸杞提取物。
测试结果如下表所示：
样品名称
样品
鸡胚绒毛尿囊膜刺激分数（ES）
刺激强度
阴性对照
0.1%SDS
25
强刺激
样品1
0.05%实施例9+0.1%SDS
15
中度刺激
样品2
0.10%实施例9+0.1%SDS
11
轻度刺激
样品3
0.25%实施例9+0.1%SDS
5
轻度刺激
样品4
0.50%实施例9+0.1%SDS
5
轻度刺激
样品5
1.00%实施例9+0.1%SDS
2
无刺激
溶剂对照
生理盐水
0
无刺激
“ES≤12，为无/轻度刺激性；12＜ES＜16，为中度刺激性；ES≥16，为强刺激性”
由鸡胚绒毛尿囊膜刺激实验可知，本发明黑果枸杞提取物具有降低SDS刺激的效果，可广泛应用于护肤品中，发挥抗刺激效果。
实施例12 本发明护肤水制备
原料及配比：
名称
标准中文名称
用量（wt%）
实施例9制备黑果枸杞提取物
——
3.0
双丙甘醇
双丙甘醇
1.5
丁二醇
丁二醇
1.5
汉生胶
黄原胶
0.1
EDTA 二钠
EDTA 二钠
0.05
防腐剂
苯氧乙醇/辛甘醇/癸二醇
0.35
水
水
余量
制备方法： （1）将水、EDTA 二钠、双丙甘醇、丁二醇、汉生胶加入乳化罐，升温搅拌至80-85℃；
（2）搅拌降温至60℃，加入实施例9制备黑果枸杞提取物、防腐剂搅拌均匀。
实施例13 本发明护肤水制备
原料及配比：
名称
标准中文名称
用量（wt%）
实施例8制备黑果枸杞提取物
——
5.0
双丙甘醇
双丙甘醇
3.0
丁二醇
丁二醇
2.5
汉生胶
黄原胶
0.05
EDTA 二钠
EDTA 二钠
0.01
防腐剂
苯氧乙醇/辛甘醇/癸二醇
0.35
水
水
余量
制备方法： （1）将水、EDTA 二钠、双丙甘醇、丁二醇、汉生胶加入乳化罐，升温搅拌至80-85℃；
（2）搅拌降温至60℃，加入实施例8制备黑果枸杞提取物、防腐剂搅拌均匀。
实施例14 本发明护肤水制备
原料及配比：
名称
标准中文名称
用量（wt%）
实施例10制备黑果枸杞提取物
——
6.0
双丙甘醇
双丙甘醇
5.0
丁二醇
丁二醇
4.5
汉生胶
黄原胶
0.01
EDTA 二钠
EDTA 二钠
0.1
防腐剂
苯氧乙醇/辛甘醇/癸二醇
0.3
水
水
余量
制备方法：（1）将水、EDTA 二钠、双丙甘醇、丁二醇、汉生胶加入乳化罐，升温搅拌至80-85℃；
（2）搅拌降温至60℃，加入实施例10制备黑果枸杞提取物、防腐剂搅拌均匀。
功效测试
随机选取30名受试者，洁面后于恒温恒湿的实验室环境静坐25min后，使用皮肤水分含量测试仪，测量受试者适用本发明实施例12制备护肤水前后面部皮肤含水量。皮肤水分含量测试结果如附图1所示。
由图1结果可知，本发明所述黑果枸杞提取物护肤水、提升皮肤水分含量，在、补水保湿方面具有很好的功效。
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